Способ количественного определения ванилилминдальной кислоты в моче

Способ количественного определения ванилилминдальной кислоты в моче

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О Il И С А Н И Е 940О69

ИЗОБРЕТЕН Ия

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскик

Социалистическик

Респубттии (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 09. 01. 81. (21) 3236714/28-13 с присоединением заявки И

{23) Приоритет—

Опубликовано 30.06.82. Бюллетень №24

Дата опубликования описания 30 ° 06 ° 82 (51) M. Кл.

G 01 М 33/48 фюударствеаый квинтет

СССР во ааим нзобретеннй н открытий (53) УДК543. 54 (088.8) (72) Авторы изобретения

В. A. Деев и Н. М. Покрасен

9

Киевский научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной хирургии (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ВАНИЛИЛ-МИНДАЛЬНОЙ КИСЛОТЫ В МОЧЕ

Изобретение относится к биохимии конкретно к способам определения ванилил -миндальной кислоты в моче, и может быть использовано в медицине для оценки состояния симпатоадренало вой системы и диагностики опухолей симпатической нервной системы.

Известен способ определения ванилил-миндальной кислоты (ВМК ) в моче.путем ионообменной хроматографии этилацетатного экстракта мочи на колонке, заполненной ионообменной смолой - амберлитом или дауэксом с элюцией уксуснои кислотой, повторной экстракции этилацетатом, деметилирования ванилил-миндальной кислоты с целью перевода ее в 3,4-дигидрооксиминдальную кислоту, повторной экстракции хроматографией на колонке, заполненной окисью алюминия, с использованием в качестве элюента серной кислоты. Для определения количества ВМК к последующему,элюату добавляют молибдат-нитратный реа2 гент с образованием окрашенного про дукта и измеряют оптическую плотность fl).

Однако способ является длительным и трудоемким в связи с много5 стадийностью процесса.

Цель изобретения - упрощение способа количественного определения ванилил-миндальной кислоты в моче.

Поставленная цель достигается способом количественного определения

ВМК в моче путем хроматографии этил» ацетатного экстракта мочи и перевода ВМК в окрашенное соединение, о6работкой анализируемой фракции реагентом с последующим определением оптической плотности получаемого окрашенного соединения, flo которой определяют количество исследуемого

2о вещества, причем этилацетатный экс" тракт подвергают тонкослойной хроматографии на диэтиламиноэтилцеллю лозе с использованием в качестве под вижной фазы 0,4-0,6 М глицин-соляноческими заболеваниями печени, же; уд. ка и поджелудочной железы. Содержа" ние ВМК в суточяом количестве мочи у здоровых людей от 1,3 до 7,6 мг, в среднем 3,97+0,33 мг, у больных от

l 2 до 27,3 мг,в среднем 5,43+0,89 мг, Технико-экономическая эффективность предлагаемого способа заключается е более простом и удобном определении ВМК в моче в серийных клинических исследованиях.

Формула изобретения

Способ количественного определения ванилил-миндальной кислоты в моче путем хроматографии этилацетатного экстракта мочи и перевода ванилил-мин— дальной кислоты в окрашенное соединение обработкой анализируемой фракции реагентом с последующим определением оптической плотности окрашенно о соединения, по которой определяют количество ванилил-миндальной кислоты, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса— этилацетатный экстракт подвергают тон-кослойной хроматографии на диэтиламиноэтилцеллюлозе с использованием в качестве подвижной фазы 0,4-0,6 М глицин-солянокислого буфера с рН 3,053,2, а перевод ванилил-миндальной кислоты в окрашенное соединение осуществляют с помощью диазотированного паранитроанилина непосредственно е слое сорбента.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Takahashi E. Experimental and

clinical studies on catecholamine

metabolism. Report 1. Estimation of

homovanillic acid and чап111у1-mandeilc acid in urine. Folia endocrino1ogica Japonica, 1970, 46, N 5, рр,539-558.

Составитель О. Скородумова

Редактор С. Юско Техред М.Гергель Корректор М. Демчик

Заказ 4659/66 Тираж 887 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, > -35, Раушская наб., д. 4/5

Ужгород, ул. Проектная, 4

Филиал ПГ1Г1 "Патент", г.

3 940069 ф кислого буфера рН 3,05-3,2 а перевод ванилил"миндальной кислоты в окрашенное соединение осуществляют с помощью диазотированного парвнитроанилина непосредственно в слое 5 сорбента.

Предлагаемое изобретение позволяет значительно упростить процесс и представляет возможность серийного определения ванилил-миндальной кисло->о ты в моче для клинических целей.

Пример. Упаренный досуха этилацетатный экстракт из 1 мл мочи растворяют в О, 1 мл абсолютного эти лового спирта, 0,01 мл раствора наносят капиллярным аппликатором на стеклянную пластинку размером 5х20 или 20х20 см с тонким слоем ДБАЕцеллюлозы. На ту же пластину в качестве "свидетеля" наносят 5 мкл раствора ВМК с концентрацией 100 мкг в 1 мл.

Пластину устанавливают в хроматографическую камеру, заполненную на

1 см по высоте 0,45 М глицин-солянокислым буфером с рН 3,05. Разрешение хроматограмиы осуществляется в течение часа, По окончании разрешения пластину высушивают феном и опрыскивают свежеприготовленным раствором диазотированного паранитроанилина. ВМК проявляется е виде фиолетового пятна на расст ячии 6-7 см от старта.{R =0,40). После высушивания соскабливают е пробирку участок цел35 люлозы с пятном ВМК и заливают необходимым для фотометрии объемом метанольной щелочи. 3лмирование окрашенного вещества с периодическим встряхиванием длится 30 мин, после

4в чего пробирку с элюатом центрифугируют в течение 10 мин при !000 об/мин и фотометрируют супернатант при длине волны 520.нм.

Данным способом исследовано 25

45 здоровых лиц и 37 больных с хирурги"