Способ получения аденозин-5-трифосфата

Способ получения аденозин-5-трифосфата

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е ()941384

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Совветеиик

Сециавеетичееиии

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6t ) Дополнительное к авт. саид-ву (22) ЗаЯвлено 30.05.79 (2t ) 2775197/23 04 с присоединением заявки М (23) Приоритет

Опубликовано 07.07.82. Бюллетень № 25

Дата опубликования описания 09.07,82 (5t)M. р(л.

С 07 Н 19/16//

А 61 К 31/495 фнударетвапый комитет

СССР во делан кзобретеннй и открытий (5З) УДК547.963.

32 547 857 .07(088. 8) (72) Авторы изобретения

H И, Epoll В. p. K epe и М. Р. Шнитко (7() Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДЕНОЗИН-5 -ТРИФОСФАТА

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения аденожн-5-трифосфата (АТФ), который находит широкое применение в биохимии, косметике и медхщине.

Известен способ псцтучения АТФ, за - .

5 ключаюшийся в ферментативном фосфорилировании аденозина в присутствии неорганических фосфатов, углеводов, пивных дрожжей, топуопа, калия хлористого и магния хлористого, подкисления до рН 4,5-4,8 в сорбции аденозин-5фосфатов на сильноосновной ионообменной смоле с последующим элкированием аденозин-5-монофоОрата (АМФ} и аде 15 нозин-5 -дифосфата (АДФ) 0,02 н. раст- . вором хлористого натрия в 0,01 н. раст воре соляной кислоты, в десорбпнн АТФ

0,5 н. раствором хлористого натрия в

0,02 н. растворе соляной кислоты и осаждения целевого продукта этвтовым спиртом (1) .

Недостатком известного способа получения АТФ является высокий расход

2 исходного сырья, так как образующиеся при очистке разбавленные элюаты АМФ и АДФ не испопьзутотся и направляются в производственные отходы.

Белью изобретения является утилизация отходов производства. Бель достигается тем, что согласно способу получения АТФ, заключающемуся в ферментативном фосфорилировании аденозина в ттрисутствии неорганических фосфатов, углеводов, пивных; дрож жей, топуола, калия хлористого и мат ния хлористого, в подкислении до рН

4,5-4, 8 в сорбции аденозин-5- фосфатов на сильноосновной ионообменной смоле с последуюпакм элюированием АМФ и

АДФ 0,02 н. раствором хлористого натрия в 0,01 н. растворе соляной кислоты в десорбции АТФ 0,5 н. раствором хлористого натрия в 0,02 н. растворе соляной кислоты, в осаждении целевого продукта этиловым спиртом, подвергакл хроматографнческому конпентрированию элюаты, содержащие АМФ и АДФ, 3 . 94138 на сяльноосновной йонообменной смоле до концентрации 2-3%, в качестве элюента чспользуют 0,14-0,16 н. раствор хлористого капая и 0,04-0,06 н. раствор хлористого магния в 0,05-0,1 н.

5 растворе соляной кислоты и концентрат вводят в среду фосфолироваиия .как ио точншк аденоэРна, ионов калия и магния

Пример 1. Берут 25 r аденожна в 1 л деминерализованной воды. К раствору добавляют 108 г МанРС,,-х

XL2 Н О, 25,2 1 КН РО, 1,8 г КСР, 50 г сахароэы, 1,8 r AQCO < 6 HgO, 1,3 л пивных дрожжей, 37„5 mr толуола. Реакщм протекает 2-4 ч при рН

6,2-7,0 и 37Е laÑ. По окончании, реакции фосфорплпрования подкисляют до рН .

4,5-4,8, охлаждают до 4оС, отфильтро- вывают дрожжевой шламм, и раствор аденозинфосфатов наносят на колонку с сильноосновной анионообмешюй смелой.

После сорбцпн колошсу промывают во;-. дой, элюируют фракпгпо АМФ и ЛДФ

0,02 . раствором МаСЧ в 0,01 н. НСР, десорбируют фра цжо ЛТФ 0,5 н. раствором NaCQ в 0,02 í. ICE. Из фракции

АТФ выделяют 30 г продукта — аденожн5-трифосфат чистотой 99"/о.

9 л элюата, содержашего смесь АМФ и АДФ, нейтрализуют раствором NaCH до рН 6,8-7,5 разбавляют равным количеством воды и пропускают через колонку, содержащую 60 мл сильноосновной аннонообменной смолы ЛРА-5П (в

С1 форме). После сорб|пщ колонку промывают 300 мл воды, затем сорбируюшие3S ся АМФ и АДФ элюируют раствором

О, 14 и. KCR +. 0,04 í. MqCP.g в 0,05 н. растворе соляной кислоты. Первые 180мл элюата отбрасывают, последуюшне 220 мл содержат основное количество смеси аденозинфосфатов.

Получают 220 мл раствора, содержащего 5 г АМФ и АДФ, 2,3 г КС1, 1,8 н. МссСД .6Н О.

К полученному раствору добавляют деминералиэованную воду до 1 л, 20 r аденожна, 108 г Ма,1НРО4 .12НдО, 25,2 r KH(PO4 50 г сахапоэы. 1,3 г пивных дрожжей, 37,5 мл толуола и ведут фосфоркпхфование как ранее, Проводят очистку аденожнфосфатов на колонке с аниоцообменной смолой как описано выше. Выход 32 г аденозин-5 трифосфата (92%) Чистота 97 %

Пример 2.. Готовят среду для проведения фосфорилирования, состоящую из воды, 25 r аденожна, 108 г

НауНРО4.12Н О, 25,2 г КН1РО4, 1,8 г.ф

КС6, 1,8 г МЕСМ ".6Н О, 50 г сахарозы,,1,3 л пивных дрсакжей, 37,5 мп толуола и ведут фосфорипирование по примеру 1.

Состав аденожнфосфатов после фосфоре лирования, %: АТФ 78, ЛДФ 17, АМФ 2, Лденоэин 3.

Проводят очистку аденоэинфосфатов на колонке с ан. ионосфменной смолой.

АТФ выделяют из элюата и перекристаллиэовывают динатриевую coro аденоэип 5 грифосфата. Выход 30 г. Чистота 99%.

9 л элюата, содержащего смесь АМФ и

ЛДФ, нейтрализуют до рН 7,5, разбав;ййют равным объемом воды и сопбитпют

1 аденожнфосфаты на колонке с 50 мл анионнта ЛРА-5П, Колонку промывают

300 mr воды и десорбируют смесь АМФ и ЛДФ 0,16 н, раствором KCB и 0,06н. раствором CO@ в 0,1 í. HCP. Первые

150 ьщ элюата отбрасывают, последуюшие 160 мл основное количество аденозинфосфатов.

Получают 160 мл раствора, содержащего 5 г АМФ и АДФ, 1,9 r KCP, 19 Э 1 Мс(Се .6HQO

К полученному раствору добавляют деминералиэованную воду до 1 л, 20 г аденозина, 108 г Ма НРО4с12Н О, 25,2 г КН РО4, 50 r сахарозы, 1,3 г пивных дрожжей, 37,5, мл толуола и ведут фосфорилирование как ранее. Состав аденозинфосфа".-ов после фосфорилирования, %: АТФ 84, АДФ 10, АМФ 3

Лденоэин 3.

Проводят очистку аденозинфосфатов на колонке с анионообменной смсщой по примеру 1. Выход 33 r динатриевой соли АТФ. Чистота 96%.

Формула изобретения

C

Способ получения аденозин-5-трифос фата путем ферментатпвного фосфорилирования аденожна в присутствии неорганических фосфатов, углеводов, пивных дрожжей, толуола, калия хлористого и магния хлористого, подкисления до рН

4,5-4, 8, сорбц:ии аденоэин-5 -фосфатов на сильноосновной анионообменной смсь. пе с последующим элюированием аденозин-5- монофосфата и аденоэин-5 -дифоофата 0,02 н. раствором хлористого натряя в 0,01 н. растворе соляной кислоты, десорбции аденозин-5-трифосфата 0,5 н. раствором хлористого натрия в 0,02 н. растворе соляной кислоты и осаждения целевого продукта этиловым спиртом, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с

5 041384 6 йелью утнлизапии отхойов производства, растворе соляной кислоты и концентрат эшоаты, содержащие аденозин- 3-моно»

I вводят в среду фосфорилироваюя как фосфат и аденозин-5-дифосфат, подверга- исто пик адено:-щи, ионов калия и на сильноосновной ионообменной смоле % Источники информапии, до концентрахщи 2-3 %, в качестве элю- принятые во внимание щж экспертизе анта используют О, 14-0, 16 н. раствора 1. Авторское свидетельство СССР хлористого калия z Оэ04-Ов06 s. раст - я 722920в кл. С 07 Н 19/16, вор хлористого магния в 0,05-0, 10 z. 18 04 78 (прототип) Составитель Л. Никулина

Редактор М. Недолуженко Техред С.Мыгунова Корректор У. ПономаР ко

Заказ 4759/8 Тираж 388 Подписное °

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж35, Раушская наб., д, 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4