Способ определения наличия спермы при судебно-медицинской экспертизе

Способ определения наличия спермы при судебно-медицинской экспертизе

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

< >946549 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 11. 03. 80 (21) 2894533/28-13 (51) М.Кл з с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет—

A 61 К 39/00

//А 61 В .10/00

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий

Опубликовано 3007.82. Бюллетень ¹ 28 (5З) УДК М16-07 (088. 8) Дата опубликования описания 30.0782 (72) Авторы изобретения

А.В. Афанасьева, А.A Николаев, В.А. Сунду ов тс:;тЖ5 .:.фЦ ьдман (71) Заявитель

Астраханский государственный медицинский и ститттйоЛИОТЕЫй ич. A.Â. Луначарского (54 ) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ СПЕРМЫ

ПРИ СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЙ ЭКСПЕРТИЗЕ

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунохимии, и может быть использовано в судебной медицине.

Известен способ определения наличия спермы при судебно-медицинской экспертизе путем экстракции содержимого исследуемых пятен с последующим анализом полученного экстракта $1j.

Однако известный способ не обладает высокой точностью из-за низкой специфичности: содержание кислой фосфатазы в сыворотке крови, лейкоцитах, соке, некоторых растениях.

Цель изобретения — повышение точt5 ности способа.

Поставленная цель достигается тем, что в способе определения наличия спермы при судебно-медицинской экспертизе путем экстракции содер- 2( жимого исследуемых пятен с последующим анализом полученного экстракта, экстракцию проводят буфером, содер.жащим 0,1-0,5Ъ тритона Х-100 в течение 18-24 ч при 18-20 С, в экстракте. выявляют простатический (5 -глобут лин в реакции иммунэдифузии в агаре и при положительной реакции определяют наличие спермы.

Способ осуществляют следующим образом.

О наличии спермы в пятнах судят по выявленному простатическому бетаглобулину. Простатический бета-глобулин (ПБГ) выявляют в составе тканевых экстрактов предстательной железы человека и в сперме иммунохимическими методами с помощью кроличиьих антисывороток, полученных иммунизацией кроликов тканевыми. экстрактами предстательной железы по общепринятым схемам с применением полного Адьюванта Фрейнда. Перед . применением антисыворотки абсорбируют . сывороткой крови и смесью экстрактов органов (печень, почка, селезенка, мозг, легкое ) взрослого человека. Получив моноспецифическую тестсистему на ПБГ, проводят анализ распространения этого антигена в тканях человеческого организма. Этот антиген постоянно выявляется в экстрактах предстательной железы и семенной плазме. Определение физико-хими- ческих свойств ПБГ показывает, что это белковый антиген с относительной электрофоретической подвижностью

0,36, обладающий молекулярным весом

31700 2200 (по данным гельхроматографии на сефадексе ф-200) и коэффициентом диффузии 1,06х10 смас ПБГ

946549

Формула изобретения

Составитель Т. Журавкина

Редактор Н. Кешеля Техред М. Рейвес . Корректор A. Гриценко

Заказ 5388/7 Тираж 714 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул.Проектная, 4 высаливается сульфатом аммония при

50%-ном насыщении, не осаждается

0,4%-ном раствором риванола, устойчив к воздействию хлорной кислоты, трихлоруксусной (частично осаждается), устойчив к воздействию темпера- 5 туры (при -65 Св течение 30 мин не обладает фосфатазной, эстеразной и протеазной активностью.

Выявляют следующие этапы очистки.

1. Приготовление экстрактов ткани 10 на дистиллированной водев соотношении вес/объем 1:3.

2. Осаждение ПБГ сульфатом аммония при 50%-ном насыщении.

3 ° Гель-фильтрация на колонке сефадекса 9 -200, уравновешенной

0,5 М раствором НаСЯ на фосфатном буфере рН=7,4.

4. Фракции, содержащие ПБГ, сливают и после диализа подвергают ион- 20 нообменной хроматографии на. сефадексе A-50 триссолянокислый буфер рН—

=8,0) 0,01 М,ПБГ при этих условиях не связывается с ионообменником и выходит в объеме стартового буфера.

Чистоту препарата проверяют в опытах иммуноэлектрофореза и дискэлектрофореза.

Пример. Поступивший íà qcследование в судебно-медицинскую экспертизу материал в виде кусочков ткани с пятнами белесого цвета помещают в пробирки и вносят по

1,0 мл трис-глициринового буфера рЙ-806, содержащего 0,1Ъ тритона

Х-100. Экстракция продолжается 18 ч О при комнатной температуре 18 С. Затем полученные вытяжки из пятен отделяют от ткани-носителя пятна центрифугированием 1000 об/мин в течение

10 мин и используют для исследования 40 в реакции преципитации. Для этого на предметных стеклах, залитых 1%-ным раствором агара на 0,85%-ном хлориде натрия пробивают штампом "семерка".

В центральнУю лунку наливают моно- 45 ,специфическую кроличью антисыворотку к простатическому бета-глобулину.

В две диаметрально противоположные периферические лунки вносят препарат простатического бета-глобулина, кото- рый служит тест-антигеном, В оставшиеся периферические лунки .вносят три исследуемые пробы и одну лунку заполняют контрольным раствором. Таким образом заполняют три штампа, поставив в реакцию одновременно все 9 исследуемых проб. На другой день оценивают результаты реакции. Оценку проверяют по подгибу линии прецнпитации сформировавшейся тест-системы.

Предлагаемый способ определения наличия спермы в исследуемых пятнах обладает высокой точностью. При положительном результате реакции судят о наличии спермы в пятне. Способ не требует для своего осуществления морфологических методов окраски полученных отпечатков. Способ значительно прост по сравнению с ранее известными и сокращает затраты времени. При осуществлении способа не требуется дополнительных затрат на реактивы и оборудование. Белок, проба на который положена в основу реакции, устойчив к действию органических кислот, этанола, высокой температуры, т.е. тех воздействий, которые могут разрушать сперматозоиды. Длительное хранение высушенных пятен не изменяет результатов реакции. Предлагаемым способом можно исследовать одновременно несколько проб.

Способ определения наличия спермы при судебно-медицинской экспертизе путем экстракции содержимого исследуемых пятен с последующим анализом полученного экстракта, о т л и ч а ю щ и и с ÿ тем, что, с целью повышения точности способа, экстракцию проводят буфером, содержащим 0,1 — :

0,5В тритона Х-100, в течение 1824 ч при 18-20 С в экстракте выявляют простатический р -глобулин в реакции иммунодифузии в arape u при положительной реакции определяют наличие спермы.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Чарный В.И. О примеНении количественной реакции на кислую фосфатазу при исследовании семенных пятен,В кн.Актуальные вопросы судебной медицины и криминалистики.

Л-, "Медицина", 1966, с.141-142.