Среда для культивирования продуцента @ -амилазы aspergillus cryzae 3-9-15

Патент 948999

Авторы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

О П И С А Н И Е,948999

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советск их

Социапистическик

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6I ) Дополнительное к авт. сеид-ву (22) Заявлено 15.0 1.8 1 (21 ) 3236914/28 13 (53)М. Кл.

С 12 8 9/22

С 12l4 9/32 с присоединением заявки №

1ЬвуАарстванны11 комитет

СССР ае делам взабретеиик и еткрмтив (23) Приоритет

ОпУбликовано 07.08.82. Бюллетень № 29 (53) УДК 663.15 (088.8) Дата опубликования описания 10.08.82

А. Ф. Лидере, В. Э. Шкинке, 3. А. Виестуфе и Г., И. Квебнтадэе., "- i-. )g l) "> l ( (72) Авторы изобретения (7l ) Заявитель (54) СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПРД1УБЕНТА

oL-АМИЛАЗЫ Мрещ4 Иов or М zae 3-9-15

Изобретение относится к микробиоло- гической промышленности, а именно касает ся состава питательных сред для культивирования продуцентов ферментов п,-амилаэы и нуклеазы, применяемых в спиртовом, космическом, химическом производ5 стве, в медицине и в молекулярной биологии, для расщепления полисахаридов в биологическом материале (d-.-амилаза) и для изучения структур нуклеиновых кислот, 1О получения 5-нуклеотидов и лечения рака (нуклеаза 9„).

Известен способ получения al-амилазы, предусматривающий культивирование про дуцента Аврегср Всоэ orSzae 3-9-15 в

15 течение 72ч при 30оС на птттательной среде, содержащей крахмал, как источник углерода, .биостимулятор - солодовый экстракт, минеральные соли, микроэлемент и воду при следующем соотношении компо- го нентов: крахмал 8,0; солодовый экстакт

1,0; фосфорнокислый одноэамещенный калий 0,01%, магний азотнокислый 0,08; натрий азотнокислый 1,2; калий хлорис2 алый 0,05; магний фосфорнокислый 0,07; магний сернокислый 0,1; железо сернокислое 0,003. Выход активности сС-амиBBGbI Q культу ийтной жидкости 2 0 .BQ/Mo фильтрата 1 ) .

Недостатками известного способа являются высокий расход сырья и сложный состав питательной среды при возможности получения только одного фермента, сравнительно низкая активность cL-амилазы.

Бель изобретения - повышение gL-амилазной активности продуцента и одновременно продуцирование нуклеазы S„: .

Поставленная целЬ достигается тем, что известная среда для культивирования продуцента d.-амилаэы hsperqitPUS огМс1Е

3-9-15, содержащая источник углеродакрахмал, биостимулятор вЂ” солодовый эксч ракт, минеральные соли: натрий азотнокислый, однозамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний, микроэлемент и воду, в качестве микроэлемента содержит индуктор нуклеаэы S< - цинк серноl

0,05

0,8-1,0

0,8

0,06

0,8

3 9489 кислый, при следующем соотношении ком понентов, вес. %:

Крахмал 5,5 -6,0

Солодовый экстракт

Калий фосфорнок ислый одноэа м ешенный О, 1-0,2

Натрий азотнокислый 0,8-1,0

Калий хлористый 0,04-0,06

Магний сернокислый 0,05-0,06

Е1инк сернокислый 0 005-0,007

Вода талъное 15

Ионы цинка играют существенную роль в активировании различных энзиматических процессов метаболизма клетки, стимулируя образование нуклеаэ. Косвенно, через оксидативное фосфорирование обеспечивается zo полноценный обмен веществ, присутствие ионов и:инка положительно влияет также на образование с -амилазы. Соотношение в среде источников углерода, азота и фос-.. фора обеспечивает оптимальное развитие zs культуры и биосинтез с(-амилазы ж нуаяеазы S Максимум биосинтеза о -амилазы и нуклеазы S< достигается к 72ч культи вированмя при 30оС в аэробных условиях., 36

Результаты культивирования:

Активность, ед/мл фильтрата с -амилаэы

25-30, нуклеазы S BO - 100.

Пример 1. Культура ЛВ ВГс 1ИОЬ ог Хс е 3-9-15 поддерживается на сусло-агаре, пересевается 1 раз за три месяца.

1. Инокуляция посевного материала.

Для подмолаживания культуры готовят косяки, которые выращивают в термостате

40 при 30оС 7сут, после чего выдерживают при комнатной температуре 3 сут, затем ставятся в холодильник при +4ОС. Белесообразен возраст используемых культур

10- 20сут. Культуру с косяка смывают 4 стерильной деминералиэованной водой и засевают rio 1 мл в колбах с питательной средой и размножают на качалке при ЗО С

24ч. Питательная среда содержит, вес.%:

Крахмал 5,5

Солодовый акс тракт 1,0

Калий фосфорнокислый одноэамешен- 5$ ный 0,1

Натрий азотно кислый

99 4

Калий хлористый 0,04

Магний сернокислый

Ibm< серно кислый 0,05

2. Ферментация культуры. Ферментация культуры производится после добавления инокулята с расчетом 1 мл культуральной суспенэии на 200мл питательной среды. Ферментацию производят в 20 мл ферментера при 30 С в условиях принудительной аарации. Во время ферментации контролируется однородность культуры, рН, температура, степень аарации, сверхдавление в аппарате и динамика накопления ферментов. После ферментации на

72 ч отфильтровывают мицелий. Активность -амилазы в фильтрате составляет 25ед/

/мл, нуклеазы Sq 100 ед/мл.

Пример 2. Питательная среда со держит, вес.%:

Крахмал 6,0

Солодовый акс тракт

Калий фосфорнокислый одноэамешенный 0,2

Натрий азотнокислый 1,0

Калий хлористый

Магний сер нокислый 0,06

Пинк сернокислый 0,007

Инокуляшпо посевного материала и ферментацию культуры производят аналогично примеру 1. Активность с -амилаэы в филь трате 30 ед/мл и нуклеазы 5< 80 ед/мл.

Таким образом, реализация предложенного изобретения позволяет повысить

d -амилаэную активность продуцента на 30% и добиться одновременного синтеза нуклеазы 9 .

Формула изобретения

Среда для культивирования продуцента

aL-амилаэы Aspect Caus, ог:паа 3-9-15, содержащая источник углерода - крахмал, биостимулятор - солодовый экстракт, минеральные соли: натрий азотнокислый, калий фосфорнокислый одноэамешенный, магний сернокислый, микроэлемент и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения е -амилаэной актив948999

0,04-0,06

О, 1-0,2 ности продуцента и одновременного продуцирования нукелазы 5,, питательная среда в качестве микроэлемента содержит индуктор нуклеазы 9 ««цинк сернокислый и дополнительно включает калий хлорис- .- тый, при следующем соотношении компонентов, вес. 7:

Крахмал 5,5-6,0

Солодовый экстракт 0,8- 1,0 . 10

Калий фосфорнокислый однозамещенный

Натрий азотнокислый 0,8-1,0

Калий хлористый

Магний сернокислый 0,05-0 6

Пинк сернокислый, 0,005,007

Вода Остальное

Источники информапии, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

% 328746, кл. С 12 8 9/28, 1970 (прототип) .

Составитель Е. Воробьева

Редактор К. Валощук Техред Л.Пекарь Корректор А. Гриценко

Заказ 5699/7 Тираж 505 П одписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-З5, Раушская наб., д. 3/5

Филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4