Способ получения убихинона

Способ получения убихинона

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Г. В.Донченко, Л.M.Ýïøòåéí, В.Н.Акули г;". 4ъ430алищук, И.Ф.Ииаунин и В.А.Богуславский г-.,*;,.-д ... (1

° I (72) Авторы изобретения

1 "" - ::- Институт биохимии им. A.В.Палладина 1ийрркеанский - научно-исследовательский институт р кого..хозяйства ьй ..! к:; и океанографии (7! ) Заявители (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УБИХИНОНА

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается технологии получения биологически активных веществ из сырья животного происхождения.

Известен способ получения убихинона из сердца лошади, включающий измельчение ткани, гидролиз ее в .кипящем растворе метанола, содержащем щелочь и антиоксидант, экстрак" цию диэтилоловым эфиром, дальнейшую обработку полученного экстракта для отделения сопутствующих линидов, хроматографическую очистку на колонке с окисью алюминия и последующее выделение и кристаллизацию целевого продукта $1).

Однако известный способ не обеспечивает достаточно высокого выхода целевого продукта (95 мг убихинона из 1 кг сырья) 1 а сырьевая база для его получения является ограниченной.

Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и расширение сырьевой базы.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения уби" з хинона из сырья животного происхождения, включающему измельчение исходного сырья, его гидролиз раство" ром щелочи в метаноле в присутствии антиоксиданта, экстракцию органическим растворителем, обработку полученного экстракта для отделения сопутствующих липидов, последующую хроматографическую очистку, выделе" ние и кристаллизацию целевого продукта, в качестве исходного сырья используют непищевые и малоценные виды морепродуктов и отходы переработки пищевых видов, гидролиз растко вором щелочи в метаноле проводят с одновременной экст ра кц ией .т рихлорэтиленом, полученный экстракт упаривают, обрабатывают его смесью метанол - вода при соотношении раство950394 4

Пример 1. В качест ве сырья используют рыбную мелочь (несортовую скумбрию) . Рыбную мелочь целиком перерабатывают на мясорубке.

Навеску 5 кг рыбного фарша помещают в реактор на 20 л, приливают 4 л трихлорэтилена, 3,5 л 15 -ного раствора КОН в метаноле (вес/объем), содержащего 50 г пирогаллола, и содержимое непрерывно перемешивают мешалкой 45 мин при 25ОС. После отстаивания нижний слой трихлорэтилена сливают в отстойник на 30 л и проводят дважды повторную экстракцию 4,0 л трихлорэтилена при непрерывном перемешивании содержимого реактора 30 мин. Собранные вместе э кст ра кты (11, 2 л ) промы вают при плавном перемешивании 4 л воды, а затем дважды проводят нейтрализацию 2,5 л 2,53-ного раствора HCE в воде. После тщательного отделения водного раствора проводят вакуумную отгонку растворителя до 1/10 первоначального объема — 1200 мл. Концентрированный липидный экстракт однократно промывают 500 мл метанолводного раствора (4:1) для удаления поверхностно-активных веществ, а затем полностью удаляют растворитель на вакуумном испарителе. Получают 143 г суммарных липидов и растворяют их в трехкратном объеме (430 мл) метанол-ацетонового раствора (1: 1) при +45 С и оставляют на ночь при - 15 С ° Полученный осадок отфильтровывают и промывают двумя объемами охлажденного до (-15) о (-20) С метанол-ацетонового раствора (300 мл), выпаривают под вакуумом и получают 100 г сопутствующих липидов. Экстракт, содержащий убихинон, упаривают под вакуумом и получают на этом этапе 40,7 r липидного остатка, содержащего убихинон. Наносят указанный липидный остаток в минимальном объеме гексана на колонку с кремниевой водной кислотой предварительно отмыf той перегнанным метанолом и активированной при 120 С в течение 5 ч. о

3 рит елей 4: 1, затем охлажденной смесью ацетон - метанол при соотношении растворителей 1: 1, а хроматографическую очистку осуществляют на кремнийсодержащем сорбенте с последующей последовательной элюцией гексаном и бензолом.

Сорбент берут в 10-кратном по весу к липиду количестве (240 r кремниевой водной кислоты 510 и H 0).

Соотношение диаметра столба колонки к его высоте 1:4-1:5. Элюирование проводят десятикратным объемом (объем/вес) гексана, а затем бензола. Собирают фракции по 250-500 мл элюатов. Убихинон выходит с первой половиной порции бензола. Упаренные фракции объединяют, удаляют растворитель в вакууме и получают суммарный препарат убихинона 9,5 г. После повторной хроматографической очистки и двухкратной кристаллизации из абсолютного этанола получают 17,90 мг убихинона, в том числе 6,8 мг кристаллического вещества, или на 1 кг навески ткани 3,58 мл убихинона, в том числе 1,36 мг кристаллического вещества (383 от общего выделенного убихинона).

Пример 2. В качестве сырья используют печень сельдевой акулы.

Навеску 25 кг измельченной печени акулы помещают в реактор на 106 л, приливают 20 л трихлорэтилена, 17,5 л 16 -ного раствора КОН в метаноле, содержащего 250 г пирогдллола. Проводят аналогично примеру 1 одновременно гидролиз и экстракцию материала, обработку экстракта соответствующимии коли чест вами воды, 2,54-ного раствора НС9 в воде, упаривание до 1/10 (5,0 л) первоначального объема (56 л), промывание 2,5 л метанолводным раствором (4;1), удаление растворителя на вакуумном испарителе. Получают 950 г суммарных липидов, отделяют 352 r сопутствующих липидов и 590 г липидного остатка наносят в гексане на колонку с 3 кг кремниевой водной кислоты. Элюируют последовательно 30 л гексана и

20 г бензола. Получают 35,4 г суммарного препарата убихинона. После повторной хроматографической очистки и двухразовой кристаллизации из абсолютного этанола получают 165,2 мг убихинона, в том числе 5 1 мг кристаллического вещества, или на 1 кг навески печени 6,6 мг убихинона, в том числе 2,04 мг кристаллического вещества (30,91 от общего выделенного убихинона).

Эффективность извлечения убихи— нона по предла гаемому с пос обу в да нформула изобретения

5 95039 ном примере 67,3i, в том числе выход кристаллического вещества 20,8ь.

Пример 3. В качестве сырья используют печень морзверя (сивуча).

Навеску 10 кг измельченной печени морзверя помещают в реактор на 50 л.

Аналогично примеру 1 получают 302 г суммарного липида, отделяют 161 г сопутствующих липидов. Из 139 г липидного остатка после первой хрома- 10 тографической очистки получают 15,2 г суммарного препарата убихинона, из которого после дальнейшей очистки получают 102 мг убихинона, в том числе 75 мг кристаллического вещества (73,5Ж от общего выделенного убихинона).

Эффективность выделения убихинона1О в этом сырье 86,4i, в том числе выход кристаллического вещества 63,68 20

Пример 4. В качестве сырья используют печень руветты. Навеску

5 кг измельченной печени рыбы руветты помещают в реактор на 20 л. Аналогично примеру 1 получают 192 г сум- zs марных липидов, отделяют 125 г сопутствующих липидов. Из 64,5 г липидного остатка после первой хроматографической очистки получают 10,2 г суммарного препарата убихинона из которого после дальнейшей очистки получают 136,15 мг убихинона, в том числе 56,8 мг кристаллического вещества или на 1 кг навески печени руветты

27,2 мг убихинона, в том числе 11,36мг кристаллического вещества (41,83 от общего выделенного убихинона) °

Эффективность выделения убихино" на в этом сырье 69,9/, в том числе выход кристаллического вещества 29,21.

Пример 5. B качестве сырья используют целиком мовроликус. Навес" ку 2,5 кг измельченной массы мовроликуса помещают в реактор на 10 л.

Аналогично примеру 1 получают 70 г суммарного липида, отделяют 35 г сопутствукщих липидов. Из 32,5 г липидного остатка после первой хроматографической очистки получают

4,5 r суммарного препарата убихи50 нона, из которого после дальнейшей очистки получают 100,8 мг убихинона, в том числе 68,7 мг кристаллического вещества, или на 1 кг навески измельченной массы мовроликуса

40,32 мг убихинона, в том числе

ВНИИПИ Заказ 5801/10 Тира

4 6

27,48 мг кристаллического вещества (68,2i от общего выделенного убихинона) .

Эффективность выделения убихинона по предлагаемому способу в данном примере 70, в том числе выход кристаллического вещества 47,73.

Предлагаемый способ обеспечивает высокий выход целевого продукта, утилизирует непищевые виды морепродуктов животного происхождения и отходы промышленной обработки рыбы.

Кроме того, способ применим при выделении убихинона из морепродуктов при низком его содержании в исходном сырье.

Способ .получения убихинона из сырья животного происхождения, включающий измельчение исходного сырья, его гидролиз раствором щелочи в метаноле в присутствии антиоксиданта, экстракцию органическим растворителем, обработку полученного экстракта для отделения сопутствующих липидов, последующую хроматографическую очистку, выделение и кристаллизацию целевого продукта, о т л,и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и расширения сырьевой базы, в качестве исходного о сырья используют непищевые и малоценные виды морепродуктов и отходы переработки пищевых видов, гидролиз раствором щелочи в метаноле проводят с одновременной экстракцией трихпорэтиленом, полученный экстракт упаривают, обрабатывают его смесью мета нол - вода при соотношении растворителей 4:1, затем охлажденной смесью ацетон - метанол при соотношении растворителей 1: 1, а хроматографическую очистку осуществляют.на кремнийсодержащем сорбенте с последующей последовательной элюцией гексаном и бензолом.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Liks.i. О. Foi. Some chemical

reacticus of ubiguinone including

its co uversion into the isomeric

ubichromenof, 8ioch. et Вiophys.

Acta, 8 63, ч. 73, ii 3, р. 349-366. ж 714 Подписное

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4