Способ определения глюкозы

Способ определения глюкозы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(ii)953564

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН Ия

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ .

Союз Советски к

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22)Заявлено 07.08.80 (21) 2980918/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 23. 08. 82 Бюллетень № 31

Дата опубликования описания 25.08.82 (5 3 ) M. Кл.

G 01 N 33/48

3Ьаудвретееиь и комитет

СССР

10 делам изо4ретеиий. и OTNpblTNll (53) УДК 621.122.. 1: 543. 257. 2 (088. 8) С.О. Бачурин, С.Д. Варфоломеев и И.В. Берез ,.<

Московский ордена Ленина, ордена Октябрьск Революции и ордена Трудового Красного Знамени госуда ствейный университет им. И.В. Ломоносова (72) Авторы изобретения (7l) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ

Изобретение относится к медицине, а именно к методам биохимического анализа биологических жидкостей и предназначено для определения глюкозы ферментативным методом.

Известен способ определения глю5 козы путем окисления ее в анаэробных условиях глюкоэоксидазой, иммобилизованной на электроде 11).

Однако известный способ отличается крайне низкой чувствительностью.

Величина плотности тока, снимаемого с такого электрода составляет

9,5 мкА/см . Причиной низкой чувствительности анализа является небольшая емкость электрода по ферменту и отсутствие хорошего электронного контакта между активным центром фермента и электродом.

Цель изобретения - повышение чув- gp ствительности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения глюкозы путем окисления ее в анаэробных условиях глюкозоксидазой, иммобилизованной на электроде, глюкозоксидазу иммобилизуют на электроде, приготовленном из полимерного материала на основе комплекса полипропаргилпиридила с тетрацианхинодиметаном.

Способ осуществляется следующим образом.

Проводят анаэробное окисление глюкозы глюкозооксидаэой, иммобилизованной на электроде, приготовленном из полимерного материала на основе комплекса тетрацианхинодиметана с полипропаргилпиридином.

Иммобилизацию глюкозооксидазы проводят с осаждением фермента с осад" ком комплексной соли полипропаргилпиридиния с тетрацианхинодиметаном

TCMQ. При этом получают препарат иммобилизованной глюкозооксидазы, содержащей 350 мг белка/г носителя.

Полимер с включенными в него молекулами фермента наносят на платиновую

953564

Формула изобретения

Составитель B. Арцатбанов

Редактор А. Козориз Техред М. Рейвес Корректор И Иуска

Заказ 2 9/73 Тираж 7 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент, r. Ужгород, ул. Проек сетку и используют в качестве электрода.

Пример . Изготовление электрода. Предварительную иммобилизацию глюкозооксидазы и в комплекс полимера s поли-1-пропаргилпиридила (P-1-PP) с тетрацианхинодиметаном (ТСН0) проводят по следующей методике: к раствору

60 мг бромида P-1-PP в 3 мл дистиллированной воды добавляют 4 мл водного раствора глюкозооксидазы (6,25 мл сухого препарата/мл раствора). При пос". тоянном перемешивании к полученному раствору добавляют 8 мл водного раствора LITCNQ концентрацией 10 мг 15

Е ТСИО. мл раствора. Смесь перемешивают в течение 1 r, и образующийся осадок P-1-PP TCNQ с соосажденным ферментом отделяют от супернатанта на центрифуге при 6 тыс. об/мин в тече- щ ние 30 мин. Полученный препарат дважды промывают дистиллированной водой, вновь отделяют на центрифуге и сушат при комнатной температуре. Содержа-, ние фермента в препарате. составляет д

350 мг/г носителя.

Для изготовления ферментного электрода берут платиновую сетку, на которую ровным слоем наносят препарат иммобилизованной глюкозооксидазы и помещают под пресс (150 кг/см ) на

15 мин.

Определение глюкозы. В электрохи-, мическую ячейку, допускающую продувку раствора газом, помещают 50 мл исследуемого раствора глюкозы в буфере (фосфаты=1,5 И, рН 7,35, 30 С). В качестве рабочего электрода используют электрод с иммобилизованной глюкозооксидазой, в качестве электрода сравнения - нормальный каломельный электрод. Ячейку с раствором глюкозы в течение 30 мин продувают аргоном и задают на рабочем электроде потенциал +Е=140 мВнкэ. 3a" висимость плотности тока, снимаемого с такого электрода, от концентрации глюкозы в растворе является линейной. Хорошие электропроводящие свойства носителя и высокое содержание глюкозооксидазы позволяют получить ток в 110 мкА/см, что обеспечивает в 12 раз увеличение чувствительности определения глюкозы.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает возможность определения концентрации глюкозы в анаэробных условиях, т.е. без специальной продувки проб кислородом; зна- чительное повышение чувствительности ферментного электрода по отношению к глюкозе, что расширит область применения ферментных методов анализа на глюкозу и повысит их чувствительность.

Способ определения глюкозы путем окисления ее в анаэробных условиях глюкозоксидазой, иммобилизованной на электроде, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, глюкозоксидазу иммобилизуют на электроде, приготовленном из полимерного материала на основе комплекса полипропаргилпиридила с тетрацианхинодиметаном.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Lahoda Е.J. (1 in С. С. апд

WIngard L.Â. — "Electrochemical

Evaluation of Glucose 0xidase Immobilized by Different Methods

"Biotechnology and BIoeng, XVII, 1975 413-422.