Способ получения гликозидов

Способ получения гликозидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Э (51) М. Кл.

С 07 Н 15/24//

А 61 К 31/70 (22) Заявлено 28. 04 . 79 (21) 2353457/

/2759004/23-04 (23) Приоритет260476 (32) 30.04.75 (З1) 18098/75 (ЗЗ) Италия

Государстеенный комнтет

СССР

Опубликовано 30 . 09 82.Бюллетень М 36

Дата опубликования описания 30.09.82 по делам нзебретеннй н открытий (53) УДК 547. 455. . 07(088 ° 8) Иностранцы

Федерико Аркамоне, Альберто Барджотти, Аурелио ди Марко и Серджо Пенко (Италия) Иностранная фирма 1

"Сочиета фармасьютичи Италиа С.п.А (Италия) (72) Авторы изобретения о (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛИКОЗИДО8

HQ HQ еОН Е>

Q ОН 0-бНз он нс1 ф

Q OHO со-бн,— ок

2о где R и Х имеют приведенные значения. HC1(I) растеореиимй е смеси диоксаи - оеаводный метанол в объемном соотношении 4: 1, взаимодействует с раствором брома в хлороформе в присутствии этилортоформиата при комнатной тем-.

Изобретение относится к способу получения новых гликозидов - производных доксорубицина, обладающих ценными фармакологическими свойствами.

Цель изобретения — получение новых соединений, расширяющих арсенал средств воздействия на живой организм с улучшенными фармакологическими свойствами.

Поставленная цель достигается to. синтезом целевых соединений, основанным на известных реакциях переведения производных 4 -эпидаунорубицина в докI сорубициновый аналог через 14-бром- производное (1).

l5

Согласно способу получения гликозидов общей формулы где Х представляет группу формулы

i3 б МН.р у

R — водород или метоксирадикал, (когда Х - группа формулы а или б, R — метоксирадикал, когда Х - группа формулы в,- R — водород), гликозид общей формулы

3 963471 пературе для получения 14-бромпроиз- водного, которое затем подвергают контролируемому гидролизу водным раствором формиата натрия при комнатной температуре в течение 2-4 сут с последующим выделением целевого, продукта в виде гидрохлорида. л

Пример 1. 3,4 -Эпи-6 -оксидоксорубицин гидрохлорид (Ia). Раствор 0,3 г 3,4 -эпи-6 -окси- 1р дауномицин гидрохлорида в смеси

4,2 мл безводного метанола и 12 мл диоксана смешивают с 0,3 мл этилортоформиата и 1,1 мл раствора брома в хлороформе (0,93 r в 10 мл). Спустя

1 ч реакционную смесь при комнатной температуре выливают в 60 мл диэтилового эфира и 30 мл петролейного эфира (т. кип. 40-70 С). Образовавшийся красный осадок отфильтровывают, промывают несколько раз диэтиловым эфи ром до полного удаления кислотности и растворяют в смеси 6 мл ацетона и

6 му 0,25 н.водного раствора бромистого ведорода. Через 15 ч смесь сме- д5 шивают при комнатной температуре с

6 мл воды и экстрагируют (неоднократно) хлороформом для удаления агликонов. Водную фазу экстрагируют н-бутанолом пока экстракты не обесцвечивают-Зв ся. Органический растворитель отгоняют под вакуумом до небольшого объема (около 5 мл) и получают 0,26 г 14-бромпроизводного в виде красного кристаллического продукта. Полученные 0,26 r

14-бромпроизводного растворяют в Ь мл

0,25 н. водного раствора бромистого водорода и смешивают с 0,45 г формиата натрия в воде (4,5 мл). Реакционную смесь перемешивают 100 ч при комнатной температуре и упаривают досуха под вакуумом. Остаток растворяют в

120 мл смеси хлороформ - метанол (2:1 по объему), промывают 2,Я-ным раствором бикарбоната натрия (дважды 50 мл), 45

Водную фазу экстрагируют хлороформом, пока экстракты не обесцвечивается.

Органическую фазу объединяют с хлороформными экстрактами, сушат над безводным карбонатом натрия и упаривают под вакуумом до небольшого объема (30 мл). Красный раствор доводят до рН 3,5 (на конго-рот) при помощи безводного метанольного раствора хлористого водорода, смешивают с избытком диэтилового эфира и получают

0,12 г 3,4 -эпи-6 -оксидоксорубици1 1 на (T,а) в виде гидрохлорида. T. пл.

° 158-160 С (разл. ), ЬЕ) Я = + 178 С

4 (С = 0,01 в МеОН). Тонкослойная хро. матограмма на силикагеле Мерк, буферированном до рН 7/И/15-фосфатом, с применением системы хлороформ - метанол - вода (13:6-1) по объему, Rf

0 32.

Пример 2. 3,4 -Эпиадриами4ии (16 .

3 -4 -Эпидаунорубицин гидрохлорид (0,5 r) переводят аналогично примеру 1 в его доксорубициновый аналог (соединение формулы T6) (0,28 г); т. пл. 168-170 С, (с ) = +284 С (С

- 0,044, MeOH1 Ht: О,т, е системе хлороформ-метанол-вода (14:6:1) по ъ объему.

Пример 3. 4-Деметокси-4 -эпидоксорубицин гидрохлорид.

Раствор 0,35 г 4-деметокси-4 -эпи( даунорубицин гидрохлорида формулы (1в) в смеси из 5 мл безводного метанола, 14 мл диоксана и 0,35 мл этилортоформиата обрабатывают 1,4 мл раствора брома в хлороформе (0,93 r брома в 10 мл хлороформа). Через

0,5 ч реакционную смесь при комнатной температуре выливают B смесь 70 мл этилового эфира и 35 мл петролейного эфира. Выпавший осадок красного цвета отфильтровывают и промывают несколько раз этиловым эфиром до полного удаления кислотности, затем его растворяют в смеси из 7 мл ацетона и 6 мл

0,.25 н. водного раствора бромистого водорода. Через 15 ч при комнатной температуре в смесь приливают 6 мл воды и несколько раз экстрагируют хлороформом для удаления агликонов.

Затем водную фазу экстрагируют н-бутанолом до получения бесцветных экстрактов. Органический растворитель отгоняют под вакуумом до небольшого объема (около 6 мл) и получают 0,26 r

14-бромпроизводного, который растворяют в 6,7 мл 0,25 н. водного раствора бромистого водорода и обрабатывают раствором .0,5 г формиата натрия в

5 мл воды. Реакционную смесь перемешивают 48 ч при комнатной температуре, затем упаривают досуха под вакуумом.

Остаток растворяют в 120 мл смеси хлороформ-метанол 2:1 по объему, промывают 2,5i-ным водным раствором бикарбоната натрия (2 х 50 мл). Водную фазу зкстрагируют хлороформом до получения бесцветных экстрактов, сушат над сульфатом натрия, упаривают до небольшого объема (30 мл) под вакуумом ° Доводят рН красного раствора

; Таблица 1

Доза, мг/кг Т/С, Количество животных продолжительного выживания

Соединение

1/10

123

226

2/10

138

6,7

138

10,5

4,5

1/10

250

5 9634 до 3,5 (на конго-рот) при помощи безводного метанольного хлористого водорода, приливают избыток этилового эфира и получают 0,17 г 4-деметокси-4 -эпидоксорубицина (формула le) в виде 5 гидрохлорида,,который очищают хроматографией в колонне с порошкообразной целлюлозой, применяя в качестве элюента хлороформ-метанол-воду (140:

:20:2 по объему). Чистый продукт пла- М вится при 178О С (разл.). Тонкослойная хроматограмма на силикагеле Мерк

254, буферированном до рН 7 при помощи И/15-фосфатного буфера, с применением системы хлороформ-метанол-вода (130:60: 10 по объему), Rf 0,54.

3,4 -Эпи-6 -оксидоксорубицин гидI I рохлорида активен при экспериментальных опухолях. В табл. 1 приведены сведения об активности при асцитной 2о саркоме L80 у мышей. Тест проводили на группах по 10 мышей (Swiss CDI).

Соединение вводили внутрибрюшинно в различной дозировке испытуемым животным через день после внутрибрюшинной 25 инокуляции 1 10 клетками опухоли мышей.

Средняя продолжительность выживания дана в процентах от продолжительности выживания необработанных живот- 3в ных, которая (условно)принята за 1004.

4-Деметокси-4 -эпидоксорубицин ис" пытывали, сравнивая с доксорубицином нг

I 1

3,4 -Эпи-6 -оксидоксоруби- 3 цин гидрохлорида

4,5

Доксорубицин гидрохлорида

71 6 нескольких системах in vitro, при экспериментальных опухолях у мышей.

Результаты опытов in vitro приведены в табл. 2. Это соединение активнее, чем доксорубицин. Результаты, полученные при экспериментальных опухолях у мышей, представлены в табл. 3-5. Во всех испытанных системах 4-деметокси-4 -эпидоксорубицин проявил противо/ опухолевое действие при дозе в 10 раз меньшей, чем доза доксорубицина.

При лейкемиях L1210 и Р 388 проти воопухолевое действие при оптимальной (не токсической) дозе сравнимо с дей" ствием доксорубицина. При распростра" ненной саркоме L 80 ингибирующее действие на рост опухоли на 11 день несколько слабее, чем у доксорубицина, при эквитоксических дозах. При лейкемии Гросса (системная опухоль, прививаемая внутривенно), увеличение продолжительности жизни у мышей, обработанных двумя соединениями в эквитоксических дозах, одинаково.

Таким образом, 4-деметокси-4 -эпидоксорубицин проявляет сильное противоопухолевое действие на мышах, аналогичное доксорубицину, но доза его в десять раз меньше.

Действие 4-метокси-4 -эпидоксорубицина на асцитную лейкемию. Лечение внутрибрюшинно. в 1 день. Данные приведены в табл. 3.

963471

Таблица 2

Действие Ill Yt го 4-деметокси-4 -эпиадриамицина в сравнении с адриамицином, LD (мкг/мл) 3

MEF

t Г 1 2

Соединение

2 8 24

72

125 28 12,5 0,01

0,026

Доксорубицин гидрохлорида

4-Деметокси-4 -эпидоксорубицин гидрохлорида

0,35 О,1 0,03 <0,003 с0,003

П р и м е ч а н и е. Клоновая эффективность клеток HeLa. л 2.

Ингибирование образования очагов у MSV.

Ингибирование пролиферации фибропластов у эмбрионов мышей.

Таблица 3

LTS Гибель токсин.

Т/С

Доза, мг/кг

Соединение

Лейкемия

Доксорубицин

155 4/11 О/ll

166 1/11 1/11

155 3/11 7/11

155 0/11 О/11 . 166 2/11 О/11

133 О/11 11/11

1 50 О/10 0/10

162 О/1 0 0/10

200 l /10 О/10

2 5

L 1210 гидрохлорида

0,25

4-Деметокси-4

-эпидоксорубицин 0 5 гидрохлорида

Доксорубицин

Р 388

2 5 гидрохлорида

10 !

4-Деметокси-4

0,25 143 О/10 О/10

162 1/10 1/!0

162 О/10 8/10

-эпидоксорубицин 0,5 гидрохлорида л

П р и м е ч а н и е. Средняя продолжительность выживания, 3 против необработанных контрольных.

Продолжительность выживания до 60 дн. (см. табл. 4).

963471

Таблица

Действие 4-деметокси-4 -эпидоксорубицина на распространенную саркому L80 при лечении внутривенно в 1-5 день (среднее от двух экспериментов).

«» ««

Соединение . Доза, мг/кг Т/С, 3 Гибель токсич.

М

«»» «»»» 3,19

22,2

11/18

2 5

13 5

0,6

87 3

О/10

85,1

2/16

0,12

4l,9

4/19 . гидрохлорид

0,25

9/9

0 5

П р и м е ч а н и е. Вес опухоли на 11 день, Ф против необработанных контрольных (см. табл 5). таблица 5

Действие 4-деметокси-4 -зпидоксорубицина на лейкемию

Гросса при лечении внутривенно на 1-3 день (среднее от двух экспериментов) «

Соединение Доза, Т/С,, LTS мг/кг

Гибель токсич.

О/20

3,5 . 164 О/20

Доксорубицин гидрохлорида

О/20

4,5 182

О/20

1/10

1/10

О/1 0

3/10

4-Деметокси-4

О/10

2/20

О/20

О/20

-эпидоксорубицин

О/10

О/10 гидрохлорида

О/1D

О/10

О/10

О/10

См. примечание к табл. 3.

Доксорубицин гидрохлорид

1 4-Деметокси-4 -эпидоксорубицин

5,5 200

6 214 .D,35 153

0,45 196

0,55 186

0,6 214

0,65 207

1l

Формула изобретения

963471 12 козид общей формулы II

О Он бо-бн

ОН

S бо-бн,- ок

ОН Нб1

НО (О 0!HO OH Къ

ЖН2 в

R — водород или метоксирадикал .(когда Х - группа формулы а или б, R — метоксирадикал, а когда Х - группа формулы в, .R - водород),. отличающийся тем, что гли1

Составитель Г. Коннова

Редактор Ю. Ковач Техред Т.фанта Корректор И. Демчик

Заказ 7548/80

Тираж 388 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ получения гликозидов общей формулы где Х представляет группу формулы

0 ОНО

Х где R и Х имеют приведенные значения, растворенный в смеси диоксан-безводный метанол в объемном соотношении

4: 1, подвергают взаимодействию с раствором брома в хлороформе в присут- ствии этилортоформиата при комнатной температуре, полученное !4-бромпроизводное подвергают контролируемому гидролизу водным раствором фррмиата натрия при комнатной температуре в течение 2-4 сут с последующим выделением целевого продукта в виде гидрохлорида.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США У 3803124, кл. 260-210, опублик. 1974.