Среда для получения протеолитических ферментов

Среда для получения протеолитических ферментов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

?1877

М. Кл.

С 12 1:2О

12 N 9/48 Иввз

1:-:,088.8) (72) Авторы изобретения

Н. С. Егоров, Н. С. Ландау, B. И. Гешева к B. H. Макс.--:,:. a

Московский ордена Ленина, ордена Октябрьской Революции и ордена Трудового Kpac»ohio Знамени государственный университет име М, В Ломонос@В (71) Заявитель у е ..; 11-L-.f--,.с (54) СРЕДА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ j:"ñ

ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

Е :;

Изобретение относится к получению препаратов протеолитических ферментов и может быть применено в микробиологи . ческой промышленности, биохимии микрооргайизмов,, медицине и гематологии.

Известна среда для получения при выращивании на ней АСОистп СЕя SpbeтО1Д 5 . штамм 35 протеаз казеинолитического и фибринолитического действия, Среда содержит глюкозу (6-7%), цитрат натРиЯ, (йй4) 604, Х РО4, Мф6Я, ХИ5О4.7Е О4 11) .

Недостатком является многокомпонентность состава среды, использование в ней дорогостоящих и дефицитных соединений, причем некоторых в больших количествах, длительность выращивания посевного материала и недостаточно высокий выход целевого продукта.

Известна также среда для получения протеолитических ферментов путем культивирования продуцента ACgiYi() &JCeS

Y m05US и микроорганизма-стимулятора

A inO CeS Viо ОСЕО, содержащая в качестве источника углерода глюкозу, а также минеральные соли (ЙН4 ) е04, KH P04, СаСО>, SO4, Fe SO4, 2и 604

На этой среде осуществляют еовместное культивирование двух актиномицетов

Ас лиОтпмсбъ HYnosUs - продуцента протеаз и Ас иоюзсе:ъ Yi0EoceUs Б Г неактивного в отношении синтеза секретируемых протеаз организма E 2 ) .

Недостатками известной среды являются использование в среде дорогостоящих продуктов в больших количествах (глюкоза 4%), недостаточно высокий выход целевого продукта, многокомпонентность состава среды и длительность выращивания. посевного материала.

Цель изобретения - упрощение состава среды, снижение ее себестоимости и увело личение выхода протеаз с повышенной специфичностью к фибрину.

Поставленная цель достигается тем, что среда для получения протеолитических

3 971 ферментов путем культивирования продуцента Pcginow ce6 Г тпоъиьи микроорганизма — стимулятора PC4$ QYH÷CÅ y v)QKDcev6 5 Г, содержашая источник углерода и минеральные соли, в том числе углекислый кальций и двузамешенный фосфорнокислый калий и воду, согласно изобретению содержит в качестве источника углерода глицерин в количестве 1-1,2% и минеральные соли хлористый аммоний и азотнокислый натрий, при следуюшем соотношении, вес.%, Глицерин 1-1,2

Хлористый аммоний 0,00.;. .-0,,003

Азотнокислый натрий 0,002-0, 02

Двузамешенный фосфорнокислый калий 0,011-0,02

Углекислый KGJlh» ций 0,3-0„4.

Водопроводная вода Остальное

Пример 1. В предлагаемую среду

> гр/л: глицерин — 1 1 М Н, С С вЂ” О, 02;

К НРΠ— 0,2; hlaHOy — 0,2; СаСΠ— 4 после стерилизации вносят для культивирования монокультуры ДС л ИООтМс89 à —

A>Q6u6 5% двухсуточно го жидкого посев- ного материала или для смешанного культивирования 5% по объему двухсуточного жидкого посевного материала AC%.rim05v g и 1,25;, по обьему двухсуточного посевного материала Act, VIOL CB Q g 5Г, вырашенных на среде, гр/л: соевая мука—

ЗО; глюкоза — 40; lCH

2,5; Са ÑÎ - 6. Культивирование продуцента йротеаз. или смеси продуцента с Actayja—

wJCe 5 440ВО С60В 5Г осуществляют глубинным способом в колбах на 750 мл со 100 мл среды в качалках (220 об/мин) Ц) в течение 96 ч при 28 С. По истечении этого времени культуральная жидкость

Дс11иО1 п1С89 Г1ФмОЬОЬ содержит

2268 усл.ед/мл фибринолитической активности, 42 каз. ед/мл казеинолитической активности, авсмеси - 4480 усл. ед/мл ед/мл фиоринолитическоя активности и

68,4 каз. ед/мл казеинолитической активности. Йелевой продукт получают из культуральной жидкости после отделения центрифугированием клеток методом высаливания сернокислым аммонием 0,8 насьпцения.

Полученные результаты показывают, что 55 на предлагаемой среде происходит образование протеаэ фибринолитического и казеинолитического действия для подуцен877 ф та протеаз в 3 раза больше, чем в иэ»вестном и для смеси актиномицетовв 2,4 раза. Специфичность к фибрину в предлагаемом способе возрастает в 2 раза, в то время как в известном она падает.

Пример 2. В предлагаемую среду следуюшего состава, гр/л; глицерин—

10; ИН4СР -0,02; Нс МО . 0,02; K+HPqÎÄ11Ä CHICO - 4 после стерилизации вноvëò для культивирования монокультуры

ЖЫио посев " нпо5us5% двухсуточного

:жидкого посевного материала или для смешанного культивирования 5% по объему двухсуточного жидкого посевного материала Ac+inorn cee wioEoceus5 Г, вырашенных на среде, гр/л: соевая мука—

30; глюкоза — 40; КВАДРО, - О,э; ИОСГ—

2,5; Сд Π— 6,0. Культивирование продуцента протеаз в монокультуре и смеси продуцента с Actino ces ч оСасеоь5. Г осуществляют как указывалось выше. По истечении 96 ч ферментативная активность составляет 2073 усл. ед/мл по фибринолизу и 36,5 каз. ед/мл по казеинолизу. Пелевой продукт получают из культуральной жидкости после отделения центрифугированием клеток методом высаливания сернокислым аммонием О, 6 насышения.

Предлагаемая среда более экономична по сравнению с известной, таК как не содержит дефицитных пишевых компонентов. Процесс культивирования на предлагаемой среде занимает меньше времени, чем в известной, так как выращивание посевного материала требует 2 сут вместо 3 сут в известном.

В таблице представлены преимушества предлагаемой среды

Из данных, приведенных в таблице, видно, что на предлагаемой среде в моно- ° культуре актиномицета фибринолитическая активность в 3 раза, а казеинолитическая - в 2 раза выше, чем в известном.

При смешанном культивировании на новой среде фибринолиз возрастает в 6 раз по сравнению с чистой культурой известного способа, а казеинолиз только - в 3,7 раза, что приводит к увеличению в 2 раза специфичности к фибрину. Специфичность к фибрину — важное свойство подобного рода ферментов, так какобеспечивает преимушественный гидролиз фибрина беэ воздействия на белки крови, играюшие большую роль в гемостазе.

Известный

748 100

Actinovnsces

Г 1 1т1050 6

18,5 100

44,3

Ас лиои се

vio6aceus 5Г

Следы Следы

Следы Следы

Асбио п сеь

Г НОБОБ бо/о

АсОиоючсе . vRaceus 5Г

25%

1901 254

56,0 302

33,9

Предлагаемый

Act1nomy ce s

Г1AlosUs

227

54,0

42,0

2268 303

АсОиою се

Ч1О аСЕО 5Г

0 0

Act nomsces г1юОБся S lo

АсО лов се s ч1о1асЕоь 5Г

1,25

65, 6

369

68,4

4490 602

Формула изобретения

Среда для получения протеолитических ферментов культивирования продуценTa AcOnovnwces готнсмъ и микроорганизма-стимулятора Act,ivor>Ces vio6aceus

5Г, содержашая источник углерода и.ми- 45 неральные соли, в том числе и двузамешенный фосфорнокислый калий и воду, ут . лекислый кальций, о т л и ч а ю ш а я с я тем, что, с целью упрощения состава среды, снижения ее себестоимости и 50 увеличения выхода протеаз с повышенной специфичностью к фибрину, среда содержит в качестве источника углерода глицерин в количестве 1-1,2% и минеральные соли - хлористый аммоний и азотнокислый 55 натрий при следуюшем соотношении, вес.%:.

ВНИИПИ Заказ 8479/9

1-1,2

0,002-0,003

Глицерин

Хлористый аммоний .Азотнокислый натрий

Двузамешенный фосфорнокислый калий

Углекислый кальций

Водопроводная вода

0,002-0,02

0,01 1-0,02

0,3-0,4

Остальное

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

4 .579305, кл. С 12 М 1/20, 1977.

2, Авторское свидетельство СССР № 436086, кл. С 12 Й 9/48, 1972 (прототип) .

Тираж 505 Подписное °

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 971877 4

Таким образом,реализация изобретения себестоимость и увеличить выход протеаз позволяетупроститьсоставсреды,снизить с повышенной специфичностью к фибрину.