Среда для отбора продуцентов фибринолитических ферментов

Среда для отбора продуцентов фибринолитических ферментов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик »973609 (61) Дополнительное к авт. свнд-ву (22) Заявлено 12.12..80 (21) 3217470/28-13 (51)M. Кл, С 12 N 1/00

С 12 N 9/68 с присоединением заявки М

Государстоснный комитет (23) Приоритет

СССР оо делам изобретений н открытий

Опубликовано 15.11.82. Бюллетень ply 42

Дата опубликовання описания 15.11.82 (53) УДК 577.15 . (088.8) (72) Авторы изобретения

М. А. Аль-Нури, Н. И. Прянишникова и Н. С. Егоров"

Московский ордена Ленина, ордена Октябрьской Революции и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. М. Р. Ломоносова (7l ) Заявитель (54) СРЕДА ДЛЯ ОТБОРА ПРОДУЦЕНТОВ ФИБРИНОЛИТИЧЕСКИХ

ФЕРМЕНТОВ

1О

Поставленная цель достигается тем, что среда, содержащая источник углерода, источник азота, агар и воду, содержит в качестве единственного источника утлерода и азота фибрин и дополнительно минеральные соли — однозамещенный фосфат калия. сернокислый магний, сернокислый цинк и сернокислое железо при следующем соотношении компонентов, вес.%:

Изобретение относится к микробиологии, а именно к питательным средам для культивирования микробиологических объектов, и может быть использовано в микробиологической и медицинской промышленности, а также в селекции и биохимии.

Известна среда для отбора активных продуцентов протеолитических ферментов (11, содержащая в качестве единственного источника углерода и азота казеинат натрия, минеральные соли, агар и воду.

Недостатками являются неэкономичность среды, содержащей пищевой продукт — белок молока казеин; неспецифичность при отборе и селекции продуцентов фибринолитических ферментов. Среда позволяет отбирать продуценты протеолитических ферментов, но затрудняет отбор продуцентов фибринолитических ферментов.

Известна среда ° для отбора продуцентов протеолитических ферментов с фибриноли- тической активностью, содержащая снятое молоко, 2,3,5- трифенил тетразолий хлористый, агар и воду (2).

Недостатками являются неэкономичность среды, содержащей пищевой продукт; неспецифичность при отборе продуцентов фибринолитических ферментов. Среда позволяет отбирать продуценты протеолитических ферментов, однако требует последующей проверки продуцентов на фибринолитическую активность, так как не всякая протеаза, гидролизующая казеин, обладает высокой фибринолитической активностью.

Цель изобретения — повышение специфичности среды и повышение активности отобранных продуктов.

973609 4 сев суспензией спор Actinomyces sphегоides штамм 35. Через 5 дней измеряют диаметр зон гидролиза фибрина вокруг выросших ко лоний. Они равны 8 — 10 мм.

Пример 2. Берут, вес.%:

Фи брин 1,0

Однозамещенный фосфат калия

Сернокислый магний

10 Сернокислый цинк

Сернокислое железо

Агар

Вода

Фибрин

Однозамещенный фосфат калия

Сернокислый магний

Сернокислый цинк

Сернокислое железо

Агар

Вода

0,5-1,0

0,1 0,3

0,4-0,6

0,0005 — 0,0015

0,0015-0,0025

1,5-2,0

Остальное до вес.%:

0,5

0,3

0,6

0,0015

0,0025

2,0

Остальное до 100 мл

100 мл

0,1

0,4

0,0005

0,0015

1,5

Остальное до 100 мл

Используется фибрин бычий Олайненского

20 завода химических реактивов, отмытый многократно большим количеством воды до удаления аминокислот и пептидов и двукрат,но обработанный ацетоном для удаления липи25 дов и высушивания. Перед внесением в среду фибрин тщательно растереть для получения однородной суспензии, что необходимо для приготовления твердых питательных сред с равномерным слоем субстрата на чашках

Петри. Стерилизуют при 0,5 атм, разливают в стерильные чашки Петри.. Производят по1 Г

Я,иаметр зон гидролиза фибрина вокруг колоний на предлагаемой среде, мм

Увеличение фибрин литической активности на известной. синтетической среде

Продуцент

Исходный штамм

8 — 10

23 — 24

Мутант 8

4-4,4 раза

20-21

19-20

1,8-2,0 раза

1,4-1,5 раза

Мутант 23 — 2

Мутант 20 — 2

Как видно из таблицы, увеличение зон гид- лерода, источник азота, агар и воду, о тролиза фибрина вокруг колоний продуцентов л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью на предлагаемой среде коррелирует с увели- повышения специфичности среды и повышечением фибринолитической активности.

50 ния активности отобранных продуцентов, поТаким образом, реализация изобретения следняя содержит в качестве единственного позволяет повысить специфичность среды для источника углерода и азота фибрин и дополотбора продуцентов фибринолитических фермен- кительно минеральные соли — однозамещенный тов. фосфат калйя, сернокислый магний, сернокислый цинк и сернокислое железо при сле55 дующем соотношении компонентов, вес.%:

Фи брин 0,5 — 1,0

Однозамещенный фосфат калия 0,1-0,3

Среда лля отбора продуцентов фибринолигических ферментов, содержашая источник угПример 1. Берут

Фи брин

Однозамещенный фосфат калия

Сернокислый магний

Сернокислый цинк

Сернокислое железо

Агар

Вода

Остальные операции проводят аналогично примеру 1.

Производят посев суспензией опор Act.

sphегоides штамм 35, облученной УФ вЂ” лучами. Через 5 дней измеряют диаметр зон гидролиза фибрина. вокруг выросших колоний.

Отбирают колонии мутантов с зонами гидролиза, превышающими 8 — 10 мм, пересевают их на среду того же состава и выращивают в течение 7 дней в пробирках.

Известную синтетическую среду засевают отобранными культурами и проверяют на фибринолитическую активность. Отобранные на предлагаемой среде три мутанта с фибринолитической активностью, превышают активность исходного штамма. Результаты исследований представлены в таблице.

5 магний 0,4 — 0,6 цинк 0,0005 — 0,0015

973609

0,0015 — 0,0025 .1,5-2,0

Остальное до 100 мл

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

Составитель Е. Воробьева

Редактор И. Митровка Техред Е.Харнгончик Корректор У. Пономаренко

Заказ 8617/29 Тираж 505 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Сернокислый

Сернокислый

Сернокислое железо

Агар

Вода

1. Klingenberg P., Zickler F., Lecehtenberg А., und Ruttloff Н. Gewinnung und charak—

terisierung чоп proteasen aus Thermoactino

eyces vulgaris Zeitschrift fUr allgemeine

3 Mikrobiologie, 1979, v. 19, п. 1, 17 — 25.

2. Касаткина И. Д., Имшенецкий А. А., Броцкая С. 3., Желтова E. Г. Мутанты

Aspergillus тегпсо! а„обоазующие протезы с фибринолитическим действием, — "Микробиоло1О гия",1969, т.38, вып. 5, с. 766 — 774 (прототип) .