Способ определения элеутерозидов а,в @ ,в,д,е (его варианты)

Способ определения элеутерозидов а,в @ ,в,д,е (его варианты)

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ к автои:ком свидитильствю

< )976354

Союз Советски к

Социаяистичесиик

Республик (6l ) Дополните*ьное к авт. саид-ву (22) а "члено 19 ° 01 ° 81 (21) 3225656/18-25 с присоелиненнем заявки М (23) Приоритет (53)M. Кл.

G 01 М 21/63

3Ъоударстееииый комитет

СССР

"ублнковано 23. 11. 82. Бюллетень М 43

Дата опубликования описания 25. 11 82 ио делом изобретений и открытий (») УД.К535.37 (088. 8) А.В. Баевский, Г.М. Баренбойм и Л.Л. Пирузян

1- -:

1 -

Научно-исследовательский институт по биологич ским,",:(72). Авторы изобретения (7! ) Заявитель испытаниям химических соединении (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭЛЕУТЕРОЭИДОВ

A. 8л, В, Д, Е (ЕГО ВАРИАНТЫ ) Изобретение относится к медицине.. и <фармакологии, конкретно к йизикохимическим методам количественного анализа лекарственных препаратов, получаемых в виде экстрактов из расти5 тельных .обьектов, и может быть использовано для определения качества экстракта элеутерококка при его получении и использовании в качестве лекарства, пищевой или кор<ловой добавки, для определения содержания биоло. гически активных веществ (элеутерози дов) в исходном сырье и в процессе производства, а также для выявления

:возможной Фальсификации этого пре- <5 парата.

Элеутерококк колючий (Fle

cus .>еп 1сосвв Иа;in.) представляет собой кустарник из семейства аралиевых и является близким родственником известного восточного лекарственного растения и<еньшенл. Вместе с х<еньшенем, родиолой.розовой, пантакрином и другими ле«арственными средствами из группы природных адаптогенов элеутерококк повышает неспецибическую резистентность, адаптацию организмов к различного рода неблагоприят ным внешним воздействия<л. Благодаря широкому спектру действия, этот лекарственный препарат назначается при очень многих заболеваниях и предболезненных состояниях, связанных с повышенной йизичес«ой нагрузкой, понижением выносливости организма, B послеоперационный период, при общей слабости организма и во многих других случаях. Элеутерококк имеет очень аиро«ое применение в медицине, а также в пищевой промышленности и сельском хозяйстве и считается массовым лекарственным средством. Поэтому определение качества вып <скаеного экстракта элеутерококка име< т очень важное значение, так как возможная передозировка его или отсутствие в про"

976354 ф дукте каких-либо компонентов может не только не принести пользу, а даже оказаться болезиетвориым.

Среди вецеств, составляющих действующее начало элеутерококка, выделяют 5 индивидуальных химических веществ, которые e химии природных соединений принято называть элеутероэидами А, В, В, Д, Е, в сумме по массе составляющих до 903 всех эле- 10 утерозидов. Элеутерозид А " это даукостерии, В„ - 7- -глюкозид изофраксидина, В - 4-р-глюкозид синаптового спирта, D u E - диглюкозиды сирингареэинола, различающиеся конформацией. В 15 экстрактах элеутерококка соотношение между элеутерозидами варьирует .

1 незначительно и почти не зависит от периода вегетации, от органов расте, ния и составляет A:В„ :B:Ý:E = 4:5:15: 20

:12:1.

Известен способ количественного определения элеутерозидов А, В1, В, 3., f, основанный на выделении из экстракта элеутерококка отдельно каждо - 25 го элеутероэида в кристаллическом виде, методом многократного последовательного хроматографического разделения экстракта на колонке с последую,щим гравиметрическим определением ко- 50 личества элеутерозидов. Особенностью данного способа является возможность раздельного определения всех элеутерозидов, что позволяет применять этот способ для количественного анализа смесей с произвольным соотношением элеутерозидов (1).

К недостаткам данного способа следует отнести его трудоемкость и длительность (на анализ требуется 7"10 дней), невысокую точность (трудно оце. нить потери веществ в процессе разделения1, низкую чувствительность (для анализа, требуется несколько граммов сухого остатка экстракта), а для про-„ ведения анализа требуются квалифицированные химики-аналитики.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности является способ определения элеутерозидов А, В1, В, 3, Е путем разбавления или упаривания анализируемой смеси до требуемой оптической плотности и определения концентраций по оптическим характеристикам.

Анализируемая смесь в известном способе представляет собой элеутероэидную фракцию, полученную в результате хроматограаического разделения на колонке исходного экстракта с использованием системы растворителей метанол, хлороформ в соотношении 1:4.

Анализируемую смесь доводят до оптической плотности 0,1- 1,4 разбавлением ее метанолом или упариванием. В качестве оптического параметра используют величину оптической плотности при длине волны 270 нм. Способ определяет суммарную концентрацию элеутероэидов В, Э, Е, а их индивидуальные количества и содержание в смеси остальных элеутерозидов.расчитывают пользуясь известным соотношением между ними.

Преимуществами известного способа определения по сравнению с описанным

;:выше. являются большая точность опревыделения, простота и сокращение времени анализа $ 2).

К недостаткам известного способа следует отнести то, что данным методом непосредственно определяется только сумма элеутерозидов В, l3, Е и об индивидуальных количествах каждого эле" утерозида в отдельности можно судить только косвенно, используя известное соотношение между этими компонентами в природных смесях.

Кроме того, поскольку действие каждого элеутерозида индивидуально и, по-видимому, механизм действия каждого из них различен, то для оценки качества экстракта совершенно необходимо знать содержание каждого элеутерозида в отдельности. Кроме этого, точность метода снижается в связи с невозможностью достаточно полно разде.". лить исходную смесь элеутерозидов от примесей методом однократного хроматогрж)ирования на колонке (сопутст-; вуюцие примеси имеют близкие значе" ния Rg j. Известный способ является также достаточно длительным. с

Целью изобретения является расширение функциональных возможностей способа, повышение чувствительности и точности анализа.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения элеутерозидов А, Вл, В, 3, E путем разбавления или упаривания анализируемой смеси до требуемой оптической плотности и определения концентраций по оптическим характеристикам, два образца анализируемой смеси раэбав" ляют или упаривают до оптической плотности 0,08-0,1,.один - для onПолуширина полосы лю ми не сценции (нм ) Положение максимума люминес ценции ныл

Обозначение элеутерозида

492, 90

508

345

60

335

Смесь элеутерозидов В,, Е в соотношении

15:12:1

5 9763 ределения элеутерозидов В, 1), Е на длине волны в диапазоне 270;300 нм, а другой - для определения элеутерозида Вл на длине волны в диапазоне

360-380 нм, возбуждают люминесценцию 5 анализируемых образцов на затих же длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определяют концентрации суммы элеутерозидов В,2), Е по величине интенсивности люминесценции на длине волны 345 нм и концентрацию элеутерозида Вл по величине интенсивности люминесценции на длине волны

500 нм, а концентрацию элеутерозида

А определяют по известному соотношению между элеутерозидами в их природной смеси по найденным значениям концентраций элеутерозида Вл и суммы элеутерозидов В,Т), Е.

Во втором варианте способа цель 2î достигается тем, что согласно спосо. бу определения элеутерозидов А, В,, . В, 3, Е, включающем хроматографическое разделение анализируемой смеси, четыре образца анализируемой смеси, полученные хро латограйическим путем, содержащие в отдельности элеутерозиды А, В1, В, и сумму элеутерозидов

Д и Е, разбавляют или упаривают до величины оптической плотности 0,08- Зо

0,1 при длине волны в диапазоне 270300 нм. для анализируемых образцов, содержацих элеутерозиды В и сумму Д и Е, и при длине волны в диапазоне

1360"380 нм для образца, содержащего

Ьлеутероэид В1, проводят качественные реакции в соответствующих образцах на наличие элеутерозидов В„ и А и, в случае их присутствия, возбуждают . люминесценцию образцов на тех же длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определяют концентрации элеутерозидов В и суммы Д и F по величине интенсивности люминесценции при 345 нм и концентрацию элеутерозида В по величине интенсивности люминесценции при 500 нм, концентрацию элеутерозида А определяют расчетным путем, сравнивая найденные соотношения между элеутерозидами В<, В, Д и Е с их известным соотношением в природных с)лесях элеутерозидов.

Второй вариант способа позволяет работать с любыми смесями, содержащими элеутерозиды. Качественную реакцию на элеутерозид А осуществляют путем растворения соответствуюцего анализируемого образца в хлороформе и обработки его раствором серной кислоты в уксусном ангидриде. По появлению интенсивного красного окрашивания судят о присутствии элеутерозида Л.

Причем качественную реакцию на элеутерозид Вл осуществляют путем растворения соответствующего образца в воде и обработки полученного раствора солью Со, и наличие элеутеаг розида D устанавливают по появлению в спектре поглощения раствора новой полосы с слаксииумом 400 нм (постепен. ное покраснение раствора).

С целью noâìèåíéÿ точности определения злеутерозида В возбуждение люминесценции и измерение концентрации элеутерозида В л проводят в среде с рН = 12- 13.

В способе анализируемой смесью является исходный экстракт элеутеро- . кокка. 11з анализируемого экстракта разбавлением водно-спиртовой смесью. или водой., либо упариванием готовят два образца с оптической плотностью

0,08-0,1 при длинах волн 270-300 нм (образец для определения элеутерозидов В, О, Е ) и 360-380 нм (образец для определения элеутерозида Вл). Регистрируют спектры люминесценцйи перaoro и второго образцов при возбужде" нии "h-светом соответственно 270300 нм и 360-380 нм, контролируя при этом соответствие параметров этих спектров спектрам чистых элеутерозидов Вл, R, D, Е и смеси элеутерозидов В, ), Г. Параметры спектров люминесценции элеутерозидов (положение ! максимума и полуширина полосы) пред-: ставлены в табл.

Таблица 1

7 9763

В качестве контроля на точность определения элеутерозида В следует пропйсать спектр его люминесценции при значении рН раствора в области

2-3 и 12-13. При это л интенсивность люминесценции во втором случае должна быть в 3,8-4,2 раза больше, чем в кислой среде. Концентрации суммы элеутерозидов B,ф, Е, а также элеутерозида В> находят по формуле где С - искомая концентрация элеутерозида, моль/л;

- интенсивность лю линесценции, измеренная в максимуме полосы люиинесценции; п - разбавление измеряемого раствора по сравнению с исходным экстрактом. 20

К вЂ” -- - константа, не зависящая

ting

tgQ от прибора, где tg dL и йу4- танген"

Э сы углов наклона линейных участков кривых зависимости интенсивности люминесценции соответствующего элеутерозида или их смеси и эталонного ве ества соответственно, снятые в ода время, на одном приборе, 8 одинако" вых условиях.,36

В качестве люминесценции эталонных веществ в предлагаемом способе исполь зуются аминокислота триптойан (длина волны возбуждения 290 нм и люминесценции 345 нм) для определения концентраций элеутерозидов В, Ъ, E и их, суммы и 1"анилинонаоталин-8-сульфонат длина волны возбуждения 370 нм и люминесценции 500 нм) для определения концентрации элеутерозида В . Величи-,!л ны констант Y. в случае возбуждения люминесценции УФ-светом 290 нм и 370 нм для элеутерозидов В, D, F. и В.. соответственно и измерения люминесценции соответственно при 345 нм и 500 нм при ведены в табл. 2 . 3 на ч ение коэффициента К в случае элеутерозида В приведено для его люминесценции при рН 12-13.

Т абли ца 2 месь, спектр люминесценции которой близок к элеутерозиду В„ . Предполо жив, что спектр люминесценции этой примеси не зависит от рН, значение интенсивности люминесценции для вычисления концентрации элеутерозида

В„, находят по соотношению (!„- ), (2) где и - соответственно интен2. сивности люминесценции образца при значениях pl! 12- 13 и 2-3, В способе укаэанные интервалы длин волн возбуждения люминесценции и значение оптической плотности об-. разцов являются существенными, так как осуществление операций способа вне указанных пределов снижает точность определения ввиду уменьшения интенсивности люминесценции элеуте, розидов и увеличения люминесценции примесей, а также появпения нелинейности в зависимости интенсивности люС целью непосредтвенного, более точного определения элеутерозидов А, ! В, В,Э, Е исходный экстракт хроматограйируют в тонком слое в системе растворителей хлороформ, метанол, вода в соотношении 40:10:1. Местоположение элеутерозидов определяют по значениям К, а также, вырезая полосы шириной 0,5-0,8 см с боков и из середины пластинки (обнаружение при нагревании до 700-250 С по характерной окраске пятен: сине-фиолетовое - элеутерозид В; оранжевое - Д, Е; элеутерозиды А и В на хроматограмме отчетливо не определяются ввиду их низкой концентрации и наличия близко расположенных примесей. Установлено экспериментальным путем, что область расположения элеутерозида В! непосредственно граничит в областью элеутерозида В находится над ией и имеет ту же ширину, а элеутерозид А аналогичным образом располагается над элеутерози, дом В„ . Компоненты смеси разделяют, вырезая из непроявленной части пластинки полосы, соответствующие обнару3 59

Значение коэффициента К О, 3 О, 09 0, 17

54 8

В том случае, если отношение интенсивностей люминесценции смеси в областях рН раствора 2-3 и 12- 13 при длине волны возбуждающего света 360380 нм значительно отличается от 4, в исследуемой смеси присутствует приминесценции от концентрации элеутерозидов.

- 9?6354 10 женным элеутерозидам и элюируют" их затем водным этанолом или водой. Доводя оптические плотности образцов до

0,08-0,1 упариванием или разбавлением бидистиллятом, регистрируют их спект. 3 ры люминесценции при возбуждении в

270- 300 нм для элеутерозидов В, Д, И и в 360-380 нм для элеутерозида В, (при. значениях рН 2-3 и 11-12), прокалибровав предварительно спектрофлуориметр эталонными веществами (для получения значений сПК). Параметры полученных спектров люминесценции сравнивают с табличными (табл. 1), Затем измеряют интенсивность люминесценции фракций, содержащих элеутерозиды В, Д, Е при 345 нм и элеутерозид В при

500 нм.

Использование в качестве предварительной операции тонкослойной хрома- 20 тографии позволяет быстро и достаточно полно разделить и очистить элеутерозиды.

Так как о наличии элеутерозида А в смеси невозможно судить flo люминес- 25 ценции и поглощению, и это вещество трудно различимо на хроматограмме, то его присутствие о экстракте элеутерококка устанавливают по качественной реакции на агликоновую часть молекулы 36 (реакция Либермана" Бурхарда), заключающейся в добавлении к хлороформному раствору анализируемого вещества (в данном случае вещество, элюированное .из соответствующей области хроматогра фической пластинки) одного миллилитра свежеприготовленного раствора нескольких капель концентрированной сер ной кислоты в 5 мл охлажденного льдом уксусного ангидрида. При этом через несколько секунд должно появиться постепенное покраснение раствора. Количество элеутерозида А в случае положи тельной качественной реакции можно оценить по количеству элеутерозида В при совпадении количественного соотношения для элеутерозидов В„, В, Д, Е в анализируемом экстракте и в природной смеси. Поскольку концентрация эЛеутерозида А в анализируемом экстЮ ракте расчитывается из концентрации элеутерозида В, точное и достоверное определение последнего является для этого необходимым условием. Поэтому, определяя содержание элеутерозида Вл в исходном экстракте и после хромато55 графического разделения, необходимо проверить зависимость спектра люминесценции при длине волны возбуждения 360-380 нм от рН раствора (при этом люминесценция образца при рН 12 в 3,8-4,2 раза интенсивнее, чем при нейтральных и кислых рН), а также появление новой полосы с максимумом

400 нм в спектре поглощения элеутеро. зида В, через несколько минут после добавления к нему соли Со . В том

Я л. случае, если соотношение интенсивностей люминесценции при различных значениях рН не попадает в указанную область, для .определения значения пользуются соотношением (2)... Пример. Проанализирован водноспиртовый экстракт элеутерококка выпуска химико-фармацевтического завода Санитас" (г. Каунас1, ноябрь 1980 года.

Готовили разбавления бидистиллятом анализируемого экстракта в 20, 50, 100, 200 и т.д. раз, используя для каждой пробы 0,1 мл исходной смеси. Измеряли оптическую плотность каждого образца при длинах волн 370 и ?90 нм при помощи двухлучевого дифперенциаль" . ного спектрофотометра, отбирая из проб те, оптическая плотность которых при одной из указанных длин волн была в пределах 0,08-0,1. Такому требованию удовлетворили образцы, полученные от разбавления исходного экстракта в 500 раз, - оптическая плотность

0,097 при 290 нм (образец Р 1), и в

200 раз - оптическая плотность 0,093 при 370 нм (образец Г 2). Прокалибро" вали спектрофлуориметр двумя эталонами: триптофан — при длине волны воз" буждения 290 нм и люминесценции.

345 нм и 1-анилинонайталин-8-сульфонат " при длине волны возбуждения

370 нм и люминесценции 500 нм, получив значения tg 4 з(фиг. 1 и ?), кото ; рые оказались равными 4,8 10 и

8.10 соот ветст венно. Ре гистрирова" ли спектры люминесценции образцов

l.и N 2 при возбуждении Уф-светом

290 нм и 370 нм соответственно, добавив::к образцу 2 одну каплю 0,1 н раствора соляной кислоты, а затем после добавления к нему трех капель

0,1 н. раствора едкого натра. Параметры полученных спектров совпали с данными табл. 1, а соотношение между интенсивностями люминесценции при кислых и щелочных значениях рН среды в случаях возбуждения УО"светом

370 нм оказалось равным 3,9. Измеряли интенс вность люминесценции (I) 976354

11 для образцов 1." 1 и Г 2 при 345 нм и 500 нм соответственно. Найденные по соотношению (1) концентрации элеутерозидов оказались равными, мг/мл.

Элеутерозид В 0,7-0,8

Элеутерозид В 2,3"2,5

Элеутерозид Д 1,9-2,1

Элеутерозид Е 0, l5-0,25> а найденная по содержанию элеутерози.да В» концентрация элеутерозида А в 1в исследуемом экстракте оказалась равной 0,55-0,65 мг/ял.

Для непосредственного и более точного определения элеутерозидов хроматографировали 0,5 мл анализируемо- 15 го экстракта в тонком слое, используя пластинки фирмы "Stlufol" (ЧССР), в системе растворителей хлороформ, метанол, вода в соотношении 40 10 1. От хроматографической пластинки с обоих 20 боков и в середине отрезали полоски шириной по 0,5> см, i àæäóþ из трех по" лосок проявляли нагреванием на электроплитке в течение 2 мин при 250 С. о

По значениям Р у, характерной окраске25 пятен идентифицировали элеутерозиды:

В - сине"фиолетовое пятно, Д и Еоран><евое пятно. Зона элеутерозида 6> располагается непосредственно над В и имеет ту же ширину. Зона элеутера- 30 зида A находится выше элеутерозида

:В . Используя проявленные полоски в качестве маркера, вырезали из непроявленной основной части пластинки об.ласти, соответствующие индивидуальным элеутерозидам, элюировали их бидистиллятом 1,4 мл на каждую пробу), счищая слой силикагеля, и доводили„ оптическую плотность до 0,08-0,1 при соответствующих длинах волн (370 нм 4а для элеутерозида В1 и 290 нм для элеутерозидов В, Д и Е). Регистрировали спектры люминесценции образцов, содержащих элеутерозиды В, Д и F. npu возбуждении Уф-светом длины волны

290 нм, которые по параметрам совпа" ли с данными табл. 2, По интенсивности люминесценции 345 нм, калибровочным прямым для элеутерозидов, построенным по калибровке эталонным вещест" вом и значением коэМ>ициентов К (табл. 2), используя соотношение (1) нашли концентрации элеутерозидов В и суммы Д, Е, которые оказались рав" ными (учитывая потери вещества при .

5 проявлении полосок хроматограммы), мг/мл:

Элеутерозид В 2,0-2,2

Элеутерозйдь> Д,F. 1,8-2,0

Образец, содержащий элеутерозид В

Э после элюирования разделили на две равные части. К одной иэ них добавили

0,1 нл 0>1 И р-ра СоС1 в Н 0 и через

Я.

5 мин увидели постепенное покраснение раствора. Через 30 мин был прописан спектр поглощения образца, который соответствовал спектру поглощения комплекса элеутерозид R — Го и имел

2.4полосу поглощения с максимумом 400 нм.

Ко второй части образца последователь" но добавляли 1 каплю 0,1 н. раствора соляной кислоты и 3 капли 0,1 н. раствора едкого натра, регистрируя после обеих операций спектр люминесценции при возбуждении 370 нм. Параметры обоих спектров, соотношение их интенсивностей (в щелочной среде интенсивность в 4 раза больше) полностью соответствовали оптическим характеристикам элеутерозида В (табл. 1), По интенсив1 ности люминесцеНции этого образца при щелочном значении рН при длине волны

500 нм, калибровочной зависимости (фиг. 2), значению коэффициента К (табл. 2), используя соотношение (I), нашли концентрацию элеутерозида В„, которая составила (учитывая потери ве щества при проявлении полосок хроматограммы) 0,7-0,8 мг/мл. Пробу, содержащую вещество, элюированное из о6ласти, соответствующей расположению элеутерозида А, упарили, перерастворили в хлороформе, добавили 1 мл свежеприготовленного раствора 1 капли концентрированной серной кислоты а

1 мл охлажденного льдом уксусного ангидрида. Через несколько секунд раст" вор окрасился в бледно-розовый цвет, что говорит о присутствии в нем элеутерозида А. Соотношение между количествами непосредственно определенных элеутерозидов 01, В, Д и Е составляет 8:21:19 и несущественно отличается от литературных данных. Есть все 1 основания полагать, что это касается, >> элеутерозида А, наличие которого в смеси было установлено качественно.

Его количественное содержание в ис. следуемом, экстракте, оцененное по концентрации элеутерозида В„, и их соотношению в природных смесях, окаЬалось равным 0,6-0,7 мг/мл.

Аналогично проводится количественное определение элеутероэйдоо при других длинах волн возбуждения люминесценции в диапазонаМ 270-300 нм (для элеутерозидов l3, Д, F) и 360 380 нм (для элеутерозида В. ).

13

9763

Предлагаемый способ позволяет определить непосредственно раздельно содержание основных элеутерозидов в экстракте элеутерококка. В то пе время он достаточно прост, не требует вы-3 сококвалифицированных исполнителей, быстр в осуществлении { 2-3 ч). Поэтому, с одной стороны, он удовлетворяет всем современным требованиям фармакологии, фармацевтики и медицины, à >0 с другой « для внедрения его в промыш. ленность не требуются дополнительные технологические разработки. Предложен ный способ повышает точность и чувствительность определения, позволяет достоверно судить о присутствии о экстракте элеутерококка биологически активных веществ. Способ позволяет более точно использовать сырье и значительно снизить отходы производ- 20 ства. Разработанный способ позволит значительно повысить конкурентоспособ ность отечественного элеутерококка, продаваемого за рубеж, продавать его как лекарственное средство ) о насто- 25 ящее время элеутерококк продается за рубеп как пищевая добавка), что принесет дополнительные прибыли государству за счет повышения рыночной цены.

В конечном итоге внедрение предлага- 30 емого метода в производство позволяет увеличить объем продаж элеутерококка за границу в 2-2,5 раза.

Формула изобретения

1. Способ определения элеутерозидов А, Вл, В, Д, Е путем разбавления или упариванил анализируемой смеси до требуемой оптической плотности и определения концентраций по оптическим

40 характеристикам, о т л и ч à l0 щ и йс:я тем, что, с целью расширения функциональных возможностей, повышения чувствительности и точности анализа, два образца анализируемои смеси раз4$ бавллют или упаривают до оптической плотности 0,08-0,1, один - для опре 1еления элеутероэидов В, Д, Р на длийе. волны в диапазоне ?700-300 нм, а другой - для определения элеутероэи-. 30 да Вл на длине волны в диапазоне

360-380 нм, возбуждают люминесценцию образцов анализируемой смеси на этих же длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определяют концентра- 55 цию суммы элеутерозилов В, Д, Е по величине интенсивности люминесценции на длине волнtl 34$ нм и концентрацию

Я 14 элеутерозида Вл, по величине интенсивности люминесценции на длине волны

500 нм, а концентрацию элеутерозида

А определяют по известному соотношению между элеутероэидами в их природных смесях по найденным значениям концентраций элеутерозида В< и суммы элеутерозидов, В, Д, E.

2. Способ определения элеутерозидов А, В„, В, Д, Е путем хроматографического разделения анализируемой смеси, разбавления или упаривания получаемых образцов до требуемой. on" тической плотности и определения концентраций элеутерозидов по оптическим характеристикам, о т л и ч а ющ и Й с я тем, что, с целью расширения йункциональных возможностей cnoco" ба, повышения чувствительности и точности анализа, Полученные хроматогра" фическим путем четыре образца анализируемой смеси, содержащие в отдель" ности элеутерозиды А, Вл, В и сумму элеутерозидов Д и Е, разбавляют или упаривают до величины оптической плотности 0,08-0,1 при длине волны в диапазоне 270-300 нм для анализируемых образцов, содержащих элеутерозиды В и сумму Д и F, и при длине волны в диапазоне 360-380 нм для образца, содержащего элеутерозид В„, проводят качественные реакции в соответствующих образцах на наличие элеутерозидов В„ и А и, .в случае их присутствия, возбуждают люминесценцию образ" цоо на тех же длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определяют концентрации элеутерозидов В и суммы Д и F no величине интенсивности люминесценции при 345 нм и концентрацию элеутерозида В по величине интен-

° сивности люминесценции при 500 нм, концентрацию элеутерозида А определя« ют расчетным путем, сравнивая найденные cooTHQGsHHR между элеутерозидами В4, Й, Д и Г с их известным соотношением в природных смесях элеутерози;дов.

3. Способ по и. 2, о т л и ч а ющ и Й с я тем, что качественную ре" ацию на элеутерозид Л осуществляют путем растворения соответствующего анализируемого образца в хлороформе и обработки его раствором серной кислоты в уксусном ангидриде, и наличие элеутерозида А устанавлиоают по появ" лению интенсивного красного окрашиванир, 976354

4. Способ по и. 2, о т л и ч аю шийся тем, что качественную реакцию на элеутерозид В осуществляют путем растворения соответствующего образца в воде и обоаботки полу- з ченного раствора солью Со+ и наличие элеутерозида В устанавливают по покраснению раствора, 5. Способ по пп. 1 и 2, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью 10 повыеения точности определения элеутерозида В1, возбуждение люминесценции .и измерение концентрации элеутерозида В„ проводлт в среде с рН 12-13 ° !5

Источники индюрмации, принлтые во внимание при экспертизе

1. Оводов Ю.С. и др. Гликозиды элеутерококка колючего (Eleutегоcoccus Santlcocus), Выделение и некоторые свойства элеутерозидов В и Е. нХимия природных соединений", 1965, М 1, с. 3" 7.

2. Лапчик В.Ф., фролова Г.Н., Оводов Ю.С. )(оличественное определение гликозидов элеутерококка колючего. Методика исследований. - "Растительные ресурсы", 1968, т. У, вып. 3, с. 455 (прототип).

976354

Составитель С. Соколова

Редактор Л. Гратилло Техреду T.Ìàòî÷êà Корректор Е. Ронко

Заказ 8995/71 ТиРаж 867 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва Ж-35 Рамаская наб. и. 4/5 ю веют ° э А» 1 ы филиал ППП "Патент", г. ужгород, ул. Проектная, 4