Питательная среда для культивирования целлюлозолитических микроорганизмов

Питательная среда для культивирования целлюлозолитических микроорганизмов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советскик

Социалистические

Республик

ОП ИСАНИ Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

/30-15 с присоединением заявки № (23) Приоритет (51) М. Кл.

С 12 и 1/00

С 12 N 1/20

С 12 N 1/22 Ьеударстеенный квмнтет

СССР

Опубликовано 15.12.82. Бюллетень № 46

Дата опубликования описания 17 . 12 .82 ао делам нзовретеннй н отерытнй (53) УДК 576.8 ° .093.1(088.8) И.A. Долгов.....,1

) Всесоюзный научно-исследовательскйй. институт- физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животн™ых (72) Автор изобретения (7I ) Заявитель (54) ПИТАТЕЛЬНАЛ СРЕДА дЛя КуЛЬТИВИРОВАНИя

ЦЕЛЛИЛОЗОЛИТИЧЕСКИХ МИКРООРГАНИЗМОВ (NH 4I 2 S04

Е2НР04

КН2Р04

СаГ Р2

М(15 04

МаГF

Измельченная с>ильт— ровальная бумага

Рубцовая жидкость

Агар-агар

Солянокислый цистеин

0,2

0,2

0,08

0,02

0,02

0,4 го

12

ЗОО мл

Изобретение относится к микробиологии, а именно к питательным средам для культивирования целлюлозолитических микроорганизмов, и может быть применено в практике кормления жвачных животных для контроля использования

5 ими грубых кормов. рациона.

Известна питательная среда Хангейта для культивирования целлюлозолити—

1О ческих микроорганизмов (! > следующе— го состава, г:

ИаНСО 5

/Дистиллированная вода До 1 л

Наиболее близкой по набору ингредиентов к предложенной является питательная среда (2 ) следующего состава, мг:

МаН Р0 2041,6

Иа Г0з 2041,6

КГ т. 262,4

КЛ 28,03

NàÑ Р 262,4 мс} 04 87,5

Ее50 -,!Н20 31,2

t1nS0 15,6

1,6

2п50 7Н20 0,47

Г. 0 0,7

N 12Р40 . 1 ОН 0 0,07

С> (. F2 5Н2 О О,!6

К2С г04 0,08

И;>ЛАЛО 0,13

Глюкоза 500

Мочевина 840

Концентрация, мг/л

1!нгредиенты

Минималь- Оптимальная ная

Максимальная

1837,4

1837,4

2041,6

2041,6

2245,8

2245,6

Натрий двууглекислый

236,2

262,4

288,4

Калий хлористый

28,03

262,4

Калий йодигтый

30,83

25,23

236,2

3 1 4,9

105,0

Натрий хлористый

87,5

Магний сернокислый

70,0

Железо сернокислое эакисное

31,2

28,08

14,04

34,32

17,16

Марганец сернокислый

15,0

3 98

Основным недостатком ее является то, что ке полностью учитывается потребность целого ряда микроорганизмов в азотистом питании, что отрицательно сказывается на интенсивности их роста и развития. Так, например, в этих условиях не могут развиваться представители вида Butyrivibrio fibri.soPverts, для роста которых необходимы ряд аминокислот, входящих в пентон.

Не удовлетворяются потребности

Ractегоicfes Sucunogenes в источниках азота, поскольку культуры данного ви" да растут при наличии в питательной среде солей аммония и цистейна. Куль" тура руминококков могут использовать аммоний при наличии в среде аминокислот и азотистых оснований, Не развиваются в этой среде также некоторые штаммы целлюлозолитических микроорганизмов С Postr idium Fnchеад1 обладающие протеазной активностью.

Наличие в среде глюкозы ингибиру" ет образование целлюлоз у иикроорг низмов, что в свою очередь выражается в задержке их размножения. Кроме того, глюкоза стимулирует развитие нецеллюлозолитических микроорганизмов (молочнокислых, амилолити ческих и др.), использующих азотистые и другие питательные вещества среды, тогда как целлюлозолитические бактерии, испытывая в них недостаток, снйНатрий йосоорнокислый однозамещенный

1357 4 жают интенсивность роста и свою ферментативную активность.

В данной среде рост культур целлюлозолитических бактерий крайне эамедлен ввиду отсутствия в ней витаминов группы В (рибофлавин, пиридоксин, биотин, парааминобензойная кислота, йолиевая кислота и витамин R„ ), оказывающих стимулирующее влияние на

1О рост и активность целлюлозолитической микрофлоры. Поэтому среда Чюрлиса не обеспечивает роста и развития целлюлозолитических микроорганизмов, Целью изобретения является ускореИ ние роста целлюлоэолитических микроорганизмов и повышение их активности.

Укаэанная цель достигается тем, что питательная среда для культивирования целлюлозолитических микроорга2Е низмов, содержащая натрий йос орнокислый одноэамещенный, натрий двууглекислый, калий хлористый,калий йодистый, натрий хлористый, магний сернокислый, железо сернокислое закислое, 25 марганец сернокислый, медь cepнокислую, цинк сернокислый, кобальт сернокислый,натрий борнокислый, стронций хлористый, калий хромовокислый, натрий мышьяковистокислый, целлюлозу, ур мочевину и воду дополнительно содержит пептон, дрожжевой экстракт и солянокислый цистеин при следующем соотношении ингредиентов, мг/л:

Т а б л и ц а 1

981357

Продолжение табл. 1

Концентрация, мг/л

Ингредиенты

Минималь- Оптималь- Максимальная ная ная

1,57

1,68

1,6

Медь сернокислая

Цинк сернокислый

Кобальт сернокислый

0,47

0,42

0,52

0,63

0,77

0 7

Натрий борнакислый

0,08

0,06

0,07

Стронций хлористый

0,18

0,14

0,16

Калий хромовокислый

0,08

0,09

0,07

0,14

0,12

0,13

1992,0

700,0

1500,0

6000,0

1500,0

756,0

840,0

500,0

1000,0

5000,0

1000,0

Мочевина

200,0

500,0

4000,0

Пептон

Целлюлоза

500,0

Вода дистиллированная Остальное

Предлагаемая среда более полно удовлетворяет потребности рубцовых микроорганизмов в аминокислотах и витаминах, что способствует ускорению интенсивности роста целлюлозолитических бактерий и повышению их активности, Пример. Исследования проводятся в условиях вивария института на девя- <> ти ягнятах цигайской породы. В трехмесячном возрасте их отделяют от матерей и содержат в течение 25 дней (предварительный период ) на сбалансированном по всем питательным ве- О ществам рационе. Уровень фосфора у ягнят в рационе балансируется до нормы за счет однозамещенного фосфата натрия и составляет 3 4 г на голову в сутки. Содержание кальция в кор- 1 мах (8,9 г ) достаточное для ягнят данного возраста. Затем животные раз"деляют по принципу аналогов на три

Натрий мышьяковистокислый

Солянокислый цистеин

Дрожжевой экстракт группы по три головы в каждой, В опытный период ягнят 1 группы содержат на. рационе предварительного периода (основной рацион - ОР), животные 2 группы получают OP + дополнительно 30> от нормы фосфора, в виде однозамещенного фосфорнокислого натрия, животные

3 группы - OP + 603 от нормы фосфора в виде этой же соли фосфата. Опытный период длится 30 дней. Содержимое рурубца для исследования берут в конце опыта.

Об эффективности предлагаемой среды судят по целлюлоэолитической активности микроорганизмов рубца (табл. 2 ).

В табл. 2 даны результаты сравни" тельной оценки эфоективности исследований целлюлоэолитической активности микроорганизмов рубца ягнят при культивировании на испытуемых средах.

981357

72,25+3э29 119,1

91,1l5+4,20 122,3

81,f :+3,9»16 7, 60,66+ 3,92

74,77у4,58

70,14+4,1?

?

П р и и е ч а н и е. Метод основан ip н» определении разницы в весе целлюлозы до и после инкубации ее в среде с содержимым рубца.

Таблица 3

Испытуемые концентрации ингредиентов

1 I

Группы животных

Минимальные Оптимальные Максимальные г +5у38 72125 -4,29 58,17 4,47

83,52+ ">,78 91,45+4,20 71,85+5,01

77,44+4,92 81,85+ 3,91 69,27+6;47

Предлагаемая среда дает возможность получить объективную оценку одного из наиболее важных биохимических процессов, осуществляемых бактериями рубца - расщепление клетчатки, которая является одной из основных

35 частей кормов для жвачных животных.

Применение этой среды ускоряет изучение влияния современных способов заготовки грубых кормов и их обработки (*иэические, химические и био.ю логические способы ),разного уровня и соотношения питательных веществ в рационе, скармливания кормов с разной растворимостью протеина, различных добавок на коэффициент использования

i5 клетчатки грубых кормов жвачными животными, что позволяет найти наиболее эффективные факторы воздействия на повышение расщепления клетчатки в желудочно-кишечном тракте жвачных живот50 ных и, следовательно, на увеличение прод Jêòèâíoñòè _#_(HBQTHblx.

Питательная среда для культивирования целлюлозолитических микроорганизмов, содержащая натрий йосфорнокислый

14,04-17,16

1, 57-1,68

0,42-0,52 формула изобретения

При использовании в исследованиях предлагаемой среды целлюлоэолитическая активность микроорганизмов рубца ягнят во всех опытных группах на

16,7-22,84 выше, чем на среде Чюрли са.

Данные по испытанию целлюлозолитической активности микроорганизмов рубца ягнят на средах (мг ) с различными концентрациями компонентов представлены в табл. 3. однозамещенный, натрий двууглекислый, калий хлористый, калий йодистый, натрий хлористый, магний сернокислый, железо сернокислое эакисное, марганец сернокислый, медь сернокислую, цинк сернокислый, кобальт сернокислый, натрий борнокислый, стронций хлористый, калий хромовокислый, натрий мышьяко-. вистокислый, целлюлозу, мочевину и воду, отличающаяся тем, что, с целью ускорения роста целпюлозолитических микроорганизмов и повышения их активности, она дополнительно содержит пептон, дрожжевой экстракт и солянокислый цистеин при следующем соотношении ингредиентов, мг/л:

Натрий йосфорнокислый однозамещенный 1837,4-2245,8

Натрий двууглекислый 1837,4-2245,8

Калий хлористый 236,2-288,4

Калий йодистый 25,23-30,83

Натрий хлористый 236,2-314,9

Магний сернокислый 70,0- 105,0

Железо сернокислое закисное 28,08-34,32

Марганец сернокислый

Медь сернокислая

Цинк сернокислый

Кобальт сернокислый

Натрий борнокислый

Стронций хлористый

Калий хромовокислый

Натрий мыиьяковистокислый

Мочевина

Солянокислый цистеин

Дрожжевой экстракт

Пептон

981357 10

0,63-0,77 Целлюлоза 500,0-1500,0

0,06-0,08 Вода дистиллирован0,14-0,18 ная Остальное

0,07-0,09 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

0,12-0,14 1. Hungate R., 0act. Rev. 1950, 756 0-1992,0 ч, 14, р, 1-50.

2. Чюрлис Г.К. Кормление сельско"

200,0-700,0 хозяйственных животных. Сб. работ под

500,0-1500,0 ред. А.П. Диитроченко. M."Ë., 1958, 4000,0-6000,0 с. 470-475 прототип Р.

Составитель В. Романова

Редактор А.Гулько Техред О.Неце Корректор С. Пекмар

Заказ 9633/36 тираж 505 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1130 5 Москва И-Я Рачшская наб. а. 4/5.Я y . «a» 5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, ч