Способ получения токсинов клостридий

Способ получения токсинов клостридий

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТОКСИНОВ КЛОСТРИДИЙ путем внесения посевного материала в питательную среду, последующей инкубации и вьщеления целевого продукта, отличаюшийс я тем, что, с целью увеличения целевого продукта выхсда посевной материал прбпварительно обрабатывают специфической к нетоксигенньм схзобям иймунной сывороткой. S а 00 af

СОКИ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЯИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19 (И) 3(5П С 12 К 1 3

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ГЮ ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 2816459/28-13 (22) 20.08.79 (46) 23.12.83. Бюл. 9 47 (72) Н.Ф.Калиниченко, С.В.Бирюкова, З.Р.Старобинец и С.Я.Исаева (71) Харьковский научно-исследовательский институт микробиологии, вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (53) 576.8.093.36 (088.8) (56) 1. Ту. 42.КВС В 330-69 на химическую сорбнрованную брюшнотифоэную вакцину с концентрированньи очищеннык сорбированным секста/

/тетра-/анатоксином (прототип). (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТОКСИНОВ

КЛОС 1 РИДИИ путем внесения посевного материала в питательную среду, последующей инкубации и выделения целевого продукта, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью увеличения целевого прсдукта выхсда посевной материал предварительно обрабатывают специфической к нетоксигенныа особям иммунной сывороткой.

986100

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в прои зводс тв е против or àнгреноз ных сывороток и анатоксинов,. == также в клинической микробиологии при диагностике клостридиозон.

Клостридии — токсигенные микроорганизмы, обусловливающие тяя<елые заболевания с высокой летальностью.

Клостридии подвержены высокой степени изменчивости, зависящей как

DT состава искусстненнсй питательной "ðåäû,. На которой их культивируют, так и от других внешних факторов. В этой связи внутри популяции образуются особи, которые не )5 продуци руют ни токсинов, ни э н зимов, присущих каждому виду.

В популяции, обра зов авшейс я даже из единичной клетки, специфические мутанты могут возникать с час татой 1 на 10<) родительсКих, клеток после небольшого по продолжительности периода размножения и могут достичь такой плотности, что потомство мутантов будет сос — àâëÿòü значительную часть популяции . Этому может способствовать старение культуры, различная скорость роста родительских клеток и мутантов, состав питательной среды и другие селек тинные факторы. Популяции производственных штаммон — продуцен тон токсинов основных видов клсстридий в отношении токснгенности и энзиматической активное ти Tãетеос1 esíû.

Известен способ получения токсинов путем посева возбудителей анаэробньн< r<ÿôeêöèé — продуцентов ток— синов на мясные или казеиноные питательные среды, заключающийся н том, что в связи с изменчивостью штаммон продуцентов подбирают культуры по высшему уровню продукции токсина: иэ нескольких посевов отбирают такой, который дает наибольшие титры токсина (при титрации на лабораторньг< жи- 4S нотных), и используют в качестве матсчной культуры (1) . При этом не учитывают наличие в ней нетоксигенных ос об ей .

Недостатком известного способа является низкий выход целевого продукта — токсина.

Цель изобретения — увеличить выход целевого продукта.

Цель достигается тем, что н способе получения токсинов клостридий путем внесения посевного материала в питательную среду, последующей инкубации и выделения целевого продук— та посевной материал предварительно обрабатывают специфической к нетоксигенным особям иммунной сывороткой.

Авторы установили, что нетоксигенные особи внутри популяции существенно влияют на токсинообраэующую 65 функцию токсигенных особей и резко снижают содержание токсинов и энзиМоВ н конечйом продукте. Это явлее снижает возможность быстро и четко проводить лабораторную диагностику кгостридий, а также мешает в производственной практике получать вьсокоактивные анатоксины и антитоксические сыворотки. Низкий выход токсинов, получаемых известным способом, является следствием того, что извес тный способ не устраняет угнетающeãî влияния нетоксигенных особей на продукц.по токсина токсиген. ными особями в гетерогенной популяции маточной культуры.

П р и м e p 1. Во флаконы или бутыли с мартеновским или казеиновым бульоном добавляют 0,5: глюкозы, среду прогревают при 80 20 мин и остуживают до 40-45 . Маточную культуо ру производственного штамма CI

perf ringer. s 28 (типа А) центрифугируют при 5000-6000 оборотах 15-20 мин.

В остуженный до указанной температуры бульон вносят осадок .<ультуры производственного штамма, предварительно обработанный в течение 60-90 мин при 37 раьным объемом агглютинио рукщей сыноротки к нетоксигенным особям производственного штамма 28 или к э талонному нетокс и:.-енному штамму CI. per frinaer, s 27 (титр сыворотки 1: 32), BblxQp агьфа. токсина (лецитиназы) в 4-8 раз превышает выход по известному способу, в результате чего резко снижаются затраты на производство протиногангреноэных сывороток и ана- токсинон, Пример 2. Испытаны маточная культура производственного штамма 28, вЫцеленннй из нее нетоксигенный клон 28х, - †. àêæ.å нетоксигенный штамм 27., Результаты приведены в табл. 1 .

Данные „представленные н табл. 1, показывают,. что специфическая к нетоксигенному клону 28х сыворотка снимает ингибирующее влияние особей клона 28х на про.цесс токсинообразования особями штамма 28. Специфическая к штамму 27 сыворотка окаэываеТ менее ныраженное действие, однако ее добавление в гетерогенную популяцию также приводит к значительному повышению титра лецитиназы по сравнению с контролем.

П р и м e p 3. Для доказательства наличия угнетающего действия нетоксигенных особей СХ. perf г1л<3ег s на синтез токсина токсигенными особями гетерогенной популяции провели опыт с искусственными смесями клеток произнодственного токсинообраэукицего штамма 28 с клетками выделенного

986100 из него нетоксигенного клона 28х. Результаты приведены в табл. 2.

Представленные в табл. 2 данные свидетельствуют о значительном уГнетакщем действии нетоксигенных особей на процесс токсинообраэования токси-, rенными особями.

Таким образом, новый способ получения токсинов клостридий эначитель10

Лецитиназная активность

Специфическая к штамму 28

28+2, 3 6415, 2 256+ 74

Специфическая к клону 28х

178+73 332 78 256+49

Специфическая к штамму 27

8515,4 85+5,4 128+ 33

Контроль (беэ обработки сывороткой) 8,6+1,9

1 28+ 30

Tàáëèöà2

Влияние нетоксигенных особей на синтез токсина токсигенньми особями смешанной попул яции

Культура

Количество Лецитинаэная посевов активность

20

20

8 0,48

483122,62

28

28х

ВНИИПИ Заказ 10642/7 Тираж 523 Подписное филиал ППП "Патент",г.ужгород,ул.Проектная,4

28+28х (1: 1 )

28+28х (1: О, 5)

28+28х(1:0,4)

28+28х (1: О, 3)

28+28х (1: О, 2)

28+ 28х (1:0,1) но повышает выход токсинов, что позволяет повысить эффективность идентификации штаммов клостридий, потерявших свою токсигениость. Новый способ позволяет избежать расходы, свя» эанные с использованием животных п9и подборе маточной культуры пу-i тем определения титра токсина.

1 Табл ица1 изученных популяций (a LV единицах)