Способ определения активатора плазминогена

Способ определения активатора плазминогена

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Оп ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

„,Я90227

Союз Советских

Социалистических

Республик

Ж .ъ

rr (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 09.04.81 (21) 3278190/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (51 ) М. Кл. з

А 61 К 35/14

Ci 01 N 33/48

Гасударственные комитет (23) Приоритет—

СССР (53) УДК 615.38/39 (088.8) Опубликовано 23.01.83. Бюллетень № 3

Дата опубликования описания 28.01.83 по делам изобретеиий и открытий

Н. С. Мурашова и Л. А. Субботина т

" . а т

Центральный ордена Ленина и ордена Трудойот- о.=. асно

Знамени научно-исследовательский институт гематолог и переливания крови (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВАТОРА ПЛАЗМИНОГЕНА

Изобретение относится к медицине, а именно гематологии.

Известен способ определения активатора плазминогена в плазме путем разведения плазмы водой, осаждения фибринолитически активной фракции (ФАФ) уксусной кислоты, растворения осадка ФАФ в обратном буфере, его инкубации на фибриновой пленке (1).

Однако известный способ не позволяет с точностью опредедить активность активатора плазминогена в плазме кролика в связи с использованием условий тестирования, не обеспечивающих выделение ФАФ.

Целью изобретения является повышение точности определения активатора плазминогена.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения активатора плазминогена в плазме путем разведения плазмы водой, осаждения ФАФ уксусной кислотой, растворения осадка

ФАФ в обратном буфере, его инкубации на фибриновой пленке, отличительной особенностью является то, что осаждение ФАФ осуществляют при рН 5,7 — 5,8, инкубацию осуществляют в течение 48 — 50 ч.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример. Кровь. берут у ненаркотизированных животных из сердца, используя обычные медицинские шприц и иглы.

Кровь смешивают с антикоагулянтом—

3,8%-ным цитратом натрия в соотношении

9:1. Центрифугируют при 2000 оборотах

10 мин при комнатной температуре на центрифуге типа PY — 180. Плазму сразу отсасы10 вают в чистую, сухую пробирку. Выделение

ФАФ проводят при использовании 0,5 мл плазмы (меньшие или большие объемы не позволяют выделить ФАФ) и разведении указанного объема дистиллированной водой в интервале 1:16 — 1:20 (разведения вы15 ше или ниже указанных не позволяют выделить ФАФ) .

Оптимальным разведением является 1:18 (!9).

К плазме, разведенной 1:18 (19), по

20 каплям добавляют 1%-ную уксусную кислоту для получениия рН = 5,7 — 5,8, при котором и происходит осаждение ФАФ кролика (рН выше или ниже указанного интервала не обеспечивает выделение ФАФ).

990227

Сравнительная таблица определения активатора плазминогена известным и предлагаемым способом

Известный

Предлагаемый

Кролики (сердце)

Разведение 1: 16

Кролики сердце

Разведение 1:18-1:19 рН выделения

5,7-5,8

Площадь лизиса, мм

Площадь лизиса, мм

4. 375

0 0 0 0 0

1125

873

3.035

116

753

330

40

1283

770

Средние данные:

Оптимальным является рН = 5,7.

Раствор тщательно перемешивают до установления твердого значения рН.

Пробу инкубируют в холодильнике при

4 С в течение 20 мин.

Далее пробу центрифугируют при 3000 оборотах 7 минут.

Супернатант тщательно и осторожно сливают. Остатки супернатанта удаляют установлением пробирки в вертикальное положение на фильтровальную бумагу в течение 1 мин.

Осадок, содержащий фибринолитически активную фракцию, растворяют в 0,5 мл боратного буфера (0,25о/0 Мф От 10Н О в 0 85о/о Ма(!). рН выделения

5,1 5,3 5,5 5,5 5,9 6,0

Из таблицы видно, что предлагаемый способ повышает диагностическую точность определения активатора плазминогена.

Способ необходим при моделировании патологий, при которых нарушен антитромбогенный потенциал крови, а также для анализа вновь создаваемых антитромботических препаратов на этапе доклинического

Для определения активности активатора плазминогена, содержащегося в ФАФ, на ненагретую и гретую (30 мин при 86 С) фибри новую пленку микропипеткой наносят

0,05 мл раствора ФАФ.

Пробы ставят в термостат при 37 С.

Результаты учитывают через 48 ч (с целью преодоления толерантности бычьей фибриновой пленки к ФАФ кролика).

Наличие активатора плазминогена устанавливают по разнице площади зон лизиса (в мм ) нагретой и гретой фибриновой пленки.

Предлагаемый способ позволяет точно определить активатор плазминогена.

Венозная кровь Артерио-венозная кровь изучения с целью повышения точности оценки специфического действия препарата.

Формула изобретения

Способ определения активатора плазминогена в плазме путем разведения плазмы водой, осаждения фибринолитически активной фракции (ФАФ) уксусной кислотой, растворения осадка ФАФ в боратном буфере, 990227

Составитель С. Малютина

Редактор А. Шандор Техред И. Верес Корректор А. Дзятко

Заказ 11035/7 Тираж гн Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий! 13035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент>, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 его инкубации на фибриновой пленке, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения активатора плазмино-гена, осаждение ФАВ осуществляют при рН =

= 5,7 — 5,8, инкубацию осуществляют в течение 48 — 50 ч.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Андреенко Г. В., Суворов А. В., Серебрякова Т. Н. Зависимос1ь фибринолитической активности и степени осаждения эуглобулиновой фракции плазмы крови некоторых животных от значения рН. «Физиология и биохимия животных». Научные доклады высшей школы. 1973, 11, с. 45 — 48 (прототип) .