Способ определения активности церулоплазмина

Способ определения активности церулоплазмина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (63) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 260680 (21) 2946042/28-13

Союз Советскик

Социалистических

Республик. оп 991 303

l$1 l kA. Mll. 3

G 01 И 33/48 с лрисоединением заявки Йо (Щ УДК 616-07 (088. 8) Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 2301.83. Бюллетень Йо 3

Дата опубликования описания 230183 (72) Авторы изобретения

Л.Н. Коптева, Н.A. Ковтуняк и Г.М. Ярмольчук

Черновицкий государственный медицинский институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЦЕРУЛОПЛАЗИИНА

Изобретение относится к биологической химии, в частности к способу определения активности ферментов.

Известен способ определения активности церулоплазмина в биологическом материале путем ингибирования гидроксиламином реакции превращения п-фенилендиамина церулоплаэмином 1 1.

Однако известный способ является трудоемким, а гидроксиламин высоко токсичен и взрывоопасен. Кроме того, ингибирующее действие его на церулоплазмин недостаточно выражено.

Целью изобретения является повышение точности и упрощение способа.

Эта цель достигается тем, что согласно способу определения активности церулоплаэмина в биологическом материале путем ингибирования реакции превращения.п-фенилендиамина церулоплазмином в качестве ингибитора используют сульфит натрия.

Для реализации способа используют реактивы: 0,1 M ацетатный буфер (рН 6,0), 0,5Ъ-ный раствор солянокислого п-фенилендиамина в дистиллированной воде, 0,25%-ный раствор сульфита натрия безводного в дистил лированной воде, н-бутиловый спирт, насыщенный ацетатным буфером.

Готовят на холоде 5Ъ-ный гомоге-нат исследуемой ткани в ацетатном буферном растворе. В три пробирки (одну контрольную и две опытные) вносят по 2 мл гомогената, в контрольную прибавляют 1 мл 0,25%-ного раствора сульфита натрия и взбалтывают ее содержимое. Во все пробирки вносят по 1 мл раствора и-фенилендиамина, встряхивают и помещают их. в водяной ультратермостат с температурой 37 С на 60 мин, взбалтывая их через каждые 2-5 мин. При этом церулоплазмин взаимодействует с и-фенилендиамином и превращает его в продукт синего цвета. По истечении 1 ч во все пробирки приливают по 7 мл н-бутилового спирта, в результате чего останавливается ферментативная реакция в опытных пробирках. Пробирки закрывают пробками, интенсивно встряхивают их 30 с, помещают в ледяную баню на 10 мин, после чего центрифугируют со скоростью

1500 об/мин в течение 10 мин, отсасывают верхнюю бутаноловую фазу, переносят ее в.кювету с толщиной рабочего слоя 10 мм и колориметрируют на ФЭК при длине световой волны

582 нм (фильтр 97).

991303

Формула изобретения

Составитель Г. Фролова

Редактор И. Николайчук Техред С.Мигунова Корректор Л Бокшан

Заказ 122/61 Тираж 871 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Для выражения активности церулоплаэмина в условных единицах среднюю арифметическую величину экстинкции, полученную при колориметрии двух параллельных опытных проб против контроля, умножают на 100 и делят на количество миллиграммов белка, содер жащегося в 2 мл внесенного в пробу гомогената, т.е. в 100 мг ткани.

Содержание белка определяют биуретовым способом. 3Î

Предложенный ингибитор в 17-128 раэ менее токсичен, чем солянокислый гидроксиламин, не вызывает кожных заболеваний, не взрывоопасен, обладает в 200 раз большей способностью 5 ингибировать реакцию превращения и-фенилендиамина церулоплаэмином, дешевле известного ингибирота и более доступен в приобретении.

Способ определения активности церулоплазмина в биологическом материале путем ингибирования реакции превращения п-фенилендиамина церулоплаэмином, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности и, упрощения способа, в качестве ингибитора используют сульфит натрия.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Ярмольчук Г.M., Руснак И.K.

Количественное определение активности церулоплазмина в тканях крыс.—

Украинский биохимический журнал, 1979, т. 51, Р 2, с. 177-178.