Средство,обладающее ингибирующим действием на пируватдегидрогеназу
Иллюстрации
Показать всеРеферат
Оп ИСАНИЕ
ИЗОВЕЕтЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Совет сккк
Социалистических
Республик
Опубликовано 07.02.83. Бюллетень М 5 (51)М. Кл.
А 61 Р 31/51
Гавударстееннмй квинтет
СССР (53) УДК615. .779.94 (088.8) не аелам нзеврнтеннй н втнрапий
Дата опубликования описания 07.02.83 (72) Авторы изобретения
Т. И. Зиматкина, Ю. М. Островский и Д. А. парии ;ъ й,,, тдел регуляции обмена вешеств AH БелорусскЪй-&QP, (7I) Заявитель
О (54) СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ИНГИБИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ
НА ПИРУВАТДЕГИДРОГЕНАЗУ
Изобретение относится к биологии и может быть применено для ицгибирования активности пируватдегидрогеназы в тканях животных..
Известно применение окситиамина пиритиамина в качестве средств, обладаюших ингибируюшим действием на пируватдегидрогеназу (1 3 °
Однако их применение приводит к угнетению активности всех тиаминдифосфач т0 зависимых ферментов в организме животных.
Известно применение тиохромдифосфата, имеющего антикоферментным действием, и качестве средства обладающего инги I5 бируюшим действием на пируватдегидрогиназу (2) .
11ель изобретения — создание избирательного ингибирования активности пируватдегидрогеназы в тканях животных, а также расширение арсенала средств воздействия на живой организм.
Пель достигаегся применением тиохромтрифосфата l3 каче< тве средства, обладаю2 щего ингибируюшим действием на пируват дегидрогеназу.
Изучение антивитаминной активности тиохромтрифосфата проводили на белых мышах-самках массой 24-26 г. Живот ным подкожно вводили по 0,2 мл водного раствора препарата при физиологическом значении рН в дозе 10 мг/кг в виде однократных подкожных иньекций. Для сравнительной оценки антикоферментного действия тиохромтрифосфата в тех же условиях и дозах испытывали сильнейшие антивитаминные аналоги тиамина — окситиа»мин, а также тиохром, его моно- и дифосфорные эфиры в различных дозах.
Определение активности пируватдегидрогеназы в тканях животных проводили по методу, сушнос.i ь которот заключается в том, что при окислении пирувата гомогенатами исследуемых тканей происходит восстановление феррицианида калия в ферроцианид. Контроль вели Во убыли оптической плотности раствора на A =417 нм.
3 99396
И контрольные пробирки вносили все компоненты кроме субстрата (пирувата натрия), вместо которого добавляли равный объем КС0. В опытные — все компоненты и субстрат. Реакция начиналась с момента прибавлении гомогената. Состав инкубационной смеси: 75 мкмоль, Ala-Кфосфатного буфера (0,5 мл), 20 мкмоль
М S О (0,1 мл), 6 мкмоль АТФ-натриевой соли (0,1 мл), 2 мкмоль этилендиа-10 минтетрауксусной кислоты (0,1 мл), 20 мкмоль пирувата натрия (0,1 мл), 255 мкмоль КСР (17 мл), 4,66 мкмоль
К > (Pe(CN )6) (0,7 мл), гомогенат тканей (О, 4 мл). Пробы хорошо перемеши->> вали и ставили на 20 мин на водяную баню при 25 С. По истечении времени о инкубащии в каждую пробирку добавляли по О,Э мл 50% раствора трихлопуксчсной кислоты для осаждения белков. Пробы 2й центрифугировали 15 мин при 1500 об/мин . в центрифугатах, определяли на спектрофотометре оптическую плотность раствора.
Количество восстановленного феррицианида определяли по калибровочной кривой. 25
Активность фермента выражали в мкмоль
0 4 восстановленного К у gFe (CH )6 ) на 1 r белка в течение 20 мин при 25оС.
Тиохромтрифосфат, выделенный из смеси тиохромтрифосфатов, вводили в виде однократной подкожной иньекции белым мышам в дозе 10 мг/кг при физио- . логическом значении рН водного раствора. Через 3 ч после инъекции в срок максимального падения активности пируватдегидрогенаэы при применении различных уже известных антивитаминов В, животных забивали методом декапитации.
Исследуемые ткани печени и сердца гомогениэировали жа холоду с 0,15 М раствором КС9 . В приготовленных гомогенатах определяли активность пируватдегидрогеназы, степень угнетения которой является одним из принятых критериев при оценке глубины авитаминоза В, В таблице представлены абсолютные значения активности пируватдегидрогенаэы после введения тиохромтрифосфата и сравниваемых препаратов. Символом Р обозначена достоверность различий по отношению к контрольной группе животных. Величины P j (0,05 приняты эа достоверные
Я (:3
° -( о
v ф о л (О
С3 и.
61
CD л!
+(л о о о
v о о о
v о
СЧ ("Ф и:
3 .,t0 о
l(3 о
М (О о и.
I(3 о л ((3 о л ((3 о л
-о
С4
-993960 1 о
СЧ
+! о о о
< 3.t
Ч
О1
+! о
С ) л(СЧ л ((3 л(С )
;(!
Я ((O л л
Ф
Ф
СЧ
+(С4
CD о
С4
С4
Ф
Ф
CD (О
СЧ с4
Ф
CD
CD
+!
Ф о
Щ
С4 л
° "1 3
+I с(03 (О. л( с4
N .Ф
l(3
+!
0) л1 3
Ф сО л(03
+(03 о
° -( (Ч с 3
03 ((3
+( ((3
С4 с 3
СЧ
С4 (О
Ч
+!
Ф с 3 (Ч
Ф л.
Ф
+!
03 (Ф
1 (Ч
7 9939
Результаты проведенного исследования показали, что тиохромтрифосфат в отличие от самого тиохрома и его моно- и дифосфориъ|х эфиров значительно угнетает активносчь пируватдегидрогенаэы печени и сердца животных и обладает гораздо более сильным антивитаминиым действием в отношении названного фермента в сравнении с биологически неактивными в этой дозе окситиамином и пиритиамином.
Активность транскетолазы печени, серд ца, крови при введении тиохромтрифосфата в тех же условиях опыта не изменялась.
Использование предлагаемого средства в качестве антогониста тиамина в отличие от широко используемых s экспериментальной витаминопогической практике окситиамина и пиритиамина дает воэможность избирательно ингибировать актив60 8 ность одного из тиаминдифосфатзависимых ферментов (пируватдегидрогеназы) в тканях животных, что имеет важное значение три постановке различных моделей авитаминоза Ву.
Формула изобретения
Применение тиохромтрифосфата в качестве средства, обладающего ингибируюшим действием на пируватдегидрогеназу.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Биохимия витаминов и антивитаминов, М„Колос, 1972, с. 112.
2. ЬсЪеИепЪогч ег А., мбМег к,, 6 НОЪиег 61аЮ . 4. p%3sid,ц,,п, 1966, Ч 346, р, 123.
Составитель С, Малютина
Редактор Е. Хейфиц Техред С.Мигунова Корректор Ю. Макаренко
Заказ 693/3 Тираж 711 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4