Способ получения фракций,содержащих гидроперекиси фосфатидилэтаноламина

Способ получения фракций,содержащих гидроперекиси фосфатидилэтаноламина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Соввтскни

С©цналнстнческнк

Увспублнк м996412 (61)Дополнительное к авт. свид-ву рц д g+ з (22) Заявлено 16.06.81 (2t)3302385/28-.13

С 07 С 179/02

//С 07 F 9/10 с присоединением заявки ИВГосударственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий (23) Приоритет(33) УДК 615. 45:

:577.158 (088.8) Опубликовано 1502.83. Бюллетень М 6

Дата опубликования описания 150283 (72) Авторы изобретения

Т.Д.Чуракова, В.Е.Каган, В.Г.Булгаков и М.В.Биленко.! :

Научно-исследовательский институт по- бйологическ м испытаниям химических соедрнбйий,-, . (71 } Заявитель,Р (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФРАКЦИЙ, СОДЕРЖМЦИХ

ГИДРОПЕРЕКИСИ ФОСФАТИДИЛЭТАНОЛАМИНА

Изобретение относится к биологи=ческой химии, а именно к способам получения биологически активных веществ, принимающих участие в мембранных изменениях различных физиологических процессов.

Известен способ получения фракций, содержащих гидроперекиси фосфатидилэтаноламина, включающий окисление суспензии фосфатидилэтаноламина в буферном растворе с помощью прооксидантов (1).

Однако известный способ не обеспечивает достаточно высокого выхода целевого продукта.

Целью изобретения является увеличение выхода целевого продукта.

Поставленная цель достигается тем, что согЛасно способу получения фракций, содержащих гидроперекиси фосфатидилзтаноламина, включающему окисление суспензии фосфатидилэтаноламина в буферном растворе, окисление суспензии фосфатидилзтаноламина проводят в присутствии липоксигеназы в концентрации 3 10Г -5-10 мг/мл

-L при 0-4еС и рН 7,8-8,0 при постоянной продувке кислородом с последующей экстракцией липидов смесью растворителей хлороформ-метанол, растворением липидов в хлороформе и выделением целевого продукта тонкослойной хроматографией.

Пример 1. 100 мг ФЭА суспендируют в 100 мл буфера трис-HCl-йаС1 (pH 7,8), охлажденного до 4 С. В суспензию липидов добавляют 3 мг фермента липоксигеназы, окисляют в течение 30 мин прн постоянной продувке кислородом на водяной бане с температурой 4 С. После окисления липиды экстрагируют пятикратным объемом смеси растворителей хлороформ-метанол

{2:1) в делительной воронке. После расслаивания хлороформную фракцию, содержащую липиды, отбирают и растворители отгоняют на роторном испарителе ° Выход липидов, представляющих собой смесь неокислившегося ФЭА и его гидроперекисей равен 70 мг. После растворения липидов в 3,5 .мл хло- . роформа пастеровской пипеткой наносят липиды на нижний край хроматографической пластинки, покрытой тонким слоем силикагеля, пластинки помещают в хроматоГрафическую банку, содержащую 63 мя .смеси растворителей хлороформ:метанол: 28% НН40Н (объемное соотношение 13:7:1). После хроматографнческого разделения и последующей

996.412

1 типом предла фракций, софосфатиднлэта1ественно повы1ение гидропере«тативному кроме того степень очист.ов.

По сравнению с прот гаемый способ получени держащих гидроперекиси ноламина, позволяет су сить (до 30-35%) накоп кисей, благодаря ферме окислению фосфолипида получить более высокую ки от примесных продук

Формула изобрет .ния

Составитель В. Брусиловская

Редактор И. Митровка Техред М. Гергель

Корректор 1. Ференц

Заказ 836/36 Тираж 416

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д.4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 трехкратной экстракции гидроперекисей смесью хлороформ: метанол (2г1) выход липида, обогащенного гидроперекисями . на ЗОВ, равен 5 мг..

Пример 2. Осуществляют аналогично примеру 1, но окисление про- 5 водят при рН буфера 8,0, температура . буфера и водяной бани при окислении 0®С. К суспензии липидов добавляют

5 мг липоксигеназы и окисляют в течение 20 мин. В этих условиях выход липида, обогащенного гидроперекися-., ми на 35% равен 8 мг.

Контроль за частотой фракции гидроперекисей ФЭА проводят с помощью

УФ-спектрофотометрии.

Экспериментальные исследования по изучению биологическОй активности гидроперекисей фосфатидилэтаноламина .показывают., что данное вещество .оказывает влияние на мембраны саркопг;азматического ретикулума клетки путем 2© встраивания в мембраны и формирования каналов, через которые происходит утечка ионов Са, протонов °

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получать фракцию, содержа- 2 щую гидроперекиси фоефатидилэтаноламина, которые могут быть использованы при исследовании действия первичных продуктов перекисного окисления . фосфатидилэтаноламина на различные 30 мембраны клеток и роли перекисного окисления мембранных фосфолипидов в осуществлении ряда мембранных функций.

Способ получения фр акций, содержащих., гидроперекиси фо:фатидилэтаноламина, включающий окис 1ение суспензии фосфатидилэтаноламина i буферном растворе, о т л и ч а ) шийся тем, что, с целью увел учения выхода целевого продукта, оки ление суспензии фосфатидилэтанолам на проводят в прйсутствии липоксиген зы в концентрации 3 10- -5. 10- мг- щ при 0-4 С и рН 7,8-8,0 при постоян ой продувке кислородом с последующ 1й экстракцией липидов смесью раствор- телей хлороформ-метанол, растворе wex липидов в хлороформе и выделение 1 целевого продукта тонкослойной хро атографией.

Источники инфор юации, принятые во внимание п «и экспертизе

1. Владимиров Ю.A. < Арчаков А.М.

Перекисное окисление л <пидов в биологических мембранах, . !., "Наука",,1972.