Способ получения @ -лизина

Способ получения @ -лизина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ oL-ЛИЗИНА путем глубинного культивирования продуцирующих его микрооргани/Лов на питательной среде, содержащей мелассу в качестве источника углерода , источник азота, необходимые минеральные соли и стимулятор биосинтеза лизина, в условиях аэрации среды с последующим выделением целевого продукта, отличающийс я тем, что, с целью повышения выхода , в качестве стимулятора биосинтеза сС-лизина используют 1 5%-ный водный экстракт морских водорослей рода FUCUS .vesiculosus в количестве 0,02-0,8 г/л (Ьреды.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПИ ЛИК

09) (11) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21 ) 3442201/28-13 (22) 19.05.82 (46) 30.03.84. Бюл. М 12 (72) P.М.Анатолян, К.A.Калунянц, Т.Ф.Киселева, Л.A.Õeðñîíîâà, Э.Г.Симонянц и Э.М.Акопян

«(71) Всесоюзный научно-исследова-тельский биотехнический институт (53) 668.394 (088.8) (56) 1.Авторское свидетельство СССР

O 494040, кл. С 12 P 13/08, 1970.

2.Патент Японии Р 45-32233, кл. 32/2/ВО2, опублик. 1970.

З.Влияние экстрактов их зеленых водорослей S acuminaus на- развитие дрожжей С.lipolytica в газоконденсатосодержащих средах. — Узбекский биологический журнал, 1979, М 4, с. 12-14.

4.Дагис И.К.Карапюте И.К. Стимуляторы роста в водорослях Балтийского побережья. - Сб. "Физиологически активные вещества и их применение в растениеводстве". Вильнюс, институт Ботаники AH Лит ССР, 1965, с. 83-89.

5.Авторское свидетельство СССР.

В 661013, кл. С 12, Р 13/08, 1976.

3 5П С 12 Р 13/08// С 12 Я 1/38;

С 12 R 1/13 С 12 R 1/15 (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ о(.-ЛИЗИНА путем глубинного культивирования продуцирующих его микрооргани.Ъов на питательной среде, содержащей мелассу в качестве источника углерода, источник азота, необходимые минеральные соли и стимулятор биосинтеза лизина, в условиях аэрации среды с последующим выделением целевогопродукта, о тли ч ающи йс я тем, что, с целью повыаения выхода, в качестве стимулятора биосинтеэа eL-лизина используют 1

5%-ный водный экстракт морских водорослей рода Fucus,vesiculosus в количестве 0,02-0,8 г/л среды.

С2

1082815 азота,необходимые минеральные соли и стимулятор биосинтеза лизина,в усло65

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам получения (, -лизина ферментацией.

Известен способ получения,4-лизина путем глубинного культивирования 5 продуцирующих его микроорганизмов в питательной среде, содержащей минеральные соли, с введением в нее порционно или непрерывно источников углерода, необходимых для роста аминокислот, и стимуляторов роста с последующим выделением (. -лизина иэ культуральной жидкости одним из известных способов. В качестве стимуляторов роста используют кукурузный экстракт, клеточный сок картофеля, дрожжевой гидролизат или дрожжевой экстракт. Ферментацию ведут при 3032 С, рН 7,0-7,2, непрерывной аэрации и перемешивании (1 ), Известно использование экстрактов различных водорослей в качестве стимуляторов роста микроорганизмов, таких как хлорелла (2), зеленых водорослей S.acuminatus ГЗ 1, а также экстрактов морских водорослей рода

Fucus veciculosus $43

Однако указанные выше экстракты водорослей, в частности водные или спиртовые экстракты морских водорослей рода F.vesiculosus,èñïoëüçóþòñÿ

30 в качестве стимуляторов роста биомассы, т.е. их использование при выращивании дрожжей, грибов Aspergillus niger R p o . Lemna minor папраалено на повышение урожайности биомассы.

Наиболее близок к предлагаемому способ получения L -лизина путем глубинного культивирования его продуцентов на питательной среде, со- 40 держащей мелассу, в качестве источника углерода, кукрузный экстракт или ферментативный гидролизат дрожжевых клеток в качестве стимулятора биосинтеза и источника азота и мине- 45 ральные соли, при аэрации среды с чоследующим выделением L -лизина известным методом (5)

Недостатком способа является то, что он не обеспечивает достаточно высокого выхода L-лизина (33,4

39„0 г/л), а также предусматривает использование дорогих и дефицитных компонентов - источника азота, кановым является кукурузный экстракт.

Цель изобретения - повышение выхода L -лизи на.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения

-лизина, предусматривающему глубинное культивирование продуцирую- 60 щих его микроорганизмов на питательной среде, содержащей мелассу в качестве источника углерода, источник риях аэрации среды с последующим выделением целевого продукта,в качестве стимулятора биосинтеза L -лизина используют 1-5%-ный водный экстракт морских водорослей рода Fucus vesicu-.

losus a количЕстве 0,2-0,8 г/л среды, Экстракт готовят путем настаивания сухих водорослей в течение 2-4ч при 25-30. С, после чего центрифугируют, стерилизуют и вводят через 1016 ч после внесения в питательную среду посевного материала.

Культивирование продуцентов L -лизина Corynebacterium glutamicum T-3 или штамм "ВНИИгенетика" 4995, или

Brevibacterium Bp. 22 .,,или 22 4 Д проводят на питательной среде следующего состава, вес.В:

Меласса 16-21 (сахар

48%) Кислотный гидролизат БВК 3,5-4,1

Кукурузный экстракт

1-5%-ный водный экстракт морских водорослей 0.,002-0,008

ИН С1 1,5 - 2,5

Мел 1,5 - 2,5

Вода водопроводная рН среды составляет 7,4. Остальное

Пример 1. Для получения лизина используют культуру рода

Cor,glutamicum Т-З, которую выращивают на питательной среде следующего состава, вес.Ъ:

Меласса

1,0-2,0

Водный экстракт готовят из сухих морских водорослей рода Fucus

vesiculosuslIyTeM настаивания в .течение 2 ч при 25 С. По окончании экстракции суспензию центрифугируют при 6000 об/мин, стерилиэуют в течение 0,5 ч при 1,0 ати и полученный фугат используют в качестве стимулятора при биосинтезе L -лизина.

Ферментацию проводят в колбах

Эрпенмейера емкостью 250 мл в лабораторных условиях на качалке (240 об/мин). Процесс протекает при

30 + 1 С и рН 7,4. Объем ферментационной среды 10 мл.

16 (сахар

48%)

Кислотный гидролизат БВК 3,5

Кукурузный экстракт

ИН С1

Мел 1 5

Вода водопроводная Остальное рН среды составляет 7,4.

Через 10 ч после внесения посевного материала, выращенного в пробирках на скошенной агариэованной среде MIIA, добавляют стерильный

1Ъ-ный фугат водного экстракта морских водорослей рода Fuсus,vesiсиlosus из расчета 0,2 г/л (0,002 вес.%)

1082815

Составитель М.Ларина

Редактор Л.Пчелинская Техред H. Метелева Корректор Г.Решетник

Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Заказ 1677/24

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä, ул. Проектная,4

При этом на выходе (, -лизина (определяется методом бумажного электрофореза): в культуральной жидкости составляет 30 г/л.

Пример 2. Режим культивирования продуцента (. -лизина Cor. glu- 5

tamicum "ВНИИгенетика" 4995 аналогичен примеру 1.

Используют питательную среду следующего состава, вес.%:

Меласса 19 (сахар 48%) 1Я

Кислотный гидролизат БВК 3,8

Кукурузный экстракт 1,5

НН4 С1 2,0

Мел 2,0 15

Вода водопроводная Остальное рН. среды составляет 7,4.

Через 13 ч после внесения посевного материала добавляют в питательную среду стерильный фугат 3%-ного водного экстракта морских водорослей рода Fucus vesiculosus в количестве 0,5 г/л. Время настаивания сухих водорослей 3 ч.при 30 С. Через 72 ч ферментации выход L -лизина в культивированной жидкости составляет 45 r/л.

Пример 3. Режим культивиро-.. вания продуцента Ь -лизина Brevi- ЗО

bacterium $р. 2 L аналогичен примерам 1 и 2.

Используют питательную среду следующего состава, вес..%:

Меласса 21 (сахар

48%) Кислотный гидролиэат БВК

4,1

Кукурузный экстракт 1,5

БН4 С1 2,5

Мел 2,5

Вода водопроводная Остальное рН среды составляет 7,4.

Через 16 частов после внесения посевного материала добавляют в питательную среду стерильный фугат

5%-ного водного экстракта морских водорослей рода Fucus vesiculosus в количестве 0 8 г/л. Время настаиваt

0 ния сухих водорослей 4 ч при 35 С.

Выход L -лизина в культуральной жидкости через 72 ч ферментации составляет 39,1 r/ë.

Пример 4. Режим культивирования продуцента L -лизина В.Sp 22LD аналогичен примеру 3. Через 72 ч ферментации активность лизина составляет 42,8 г/л.

Таким образом, предлагаемый спо соб позволяет увеличить выход лизина с 30 до 45 г/л по сравнению с известным (33,4 - 39,6 г/л).