Способ приготовления основы для микробиологических питательных сред

Способ приготовления основы для микробиологических питательных сред

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к основам для питательных сред и способам их получения. С целью увеличения выхода целевого продукта, улучшения физических и ростовых свойств питательных сред в качестве основы используют биомассу слизистых бацилл, которую сначала подвергают гидролизу в растворе соляной кислоты при рН 0,45-0,65: 120-123 с в течение 30- 40 мин, а затем полученный после декантации прозрачной фазы осадок подвергают ферментативному гидролизу поджелудочной железой при рН 7,8-8,0; 40-42°С в течение 10-14 дней. Прозрачные фракции ферментативного и кислотного гидролизатов смешивают в соотношении 1:1,17-1:1,3 и выдерживают при 5-7°С в течение 4-5 дней. Полученная основа имеет необходимое содержание общего и аминного азота 1000-1100 и 393-470 мг Соответственно , полностью удовлетворяет потребность в углероде, который содержится в аминокислотах(всего 17 аминокислот из них 10 незаменимых) иполисахарХнах и не требует добавления ростовых факто-. ров, так как содержит витамины группы В и А и микроэлементы. 3 табл. i (Л 1C с

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3880290/28-13 (22) 12.03.85 (46) 30.!2.86 Бюл. Ф 48 (71) Ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера (72) Е.Я.Виноградов, P.M.Êîðoòêîâà, В.К.Клеганов, Е.А.Слатин и Г.Г.Няникова (53) 663. 11(088.8) (56) Методические указания по использованию утративших срок годности кровезаменителей для конструирования микробиологических питательных сред.

M. 1980.

Авторское свидетельство СССР

11 - 742463, кл. С 12 И 1/00, 1977. (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ОСНОВЫ ДЛЯ

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПИТАТЕЛЬНЪ|Х СРЕД (57) Изобре тение относится к микробиологической промышленности, а именно к основам для питательных сред и способам их получения. С целью увели„,90„„12 ООО7 А1 (50 4 С 12 N 1/20, 1/00//

С 12 и 1 20 с 12 к 1 07 чения выхода целевого продукта, улучшения физических и ростовых свойств питательных сред в качестве основЫ используют биомассу слизистых бацилл, которую сначала подвергают гидролизу в растворе соляной кислоты при рН

0,45-0,65: 120-123 С в течение 3040 мин, а затем полученный после декантации прозрачной фазы осадок подвергают ферментативному гидролизу поджелудочной железой при рН 7,8-8,0;

40-42 С в течение 10- 14 дней. Прозрачные фракции ферментативного и кислотного гидролизатов смешивают в соотношении 1:1,17-1:1,3 и выдерживают при 5-7 С в течение 4-5 дней.

Полученная основа имеет необходимое содержание общего и аминного азота

1000-1100 и 393-470 мг соответственно, полностью удовлетворяет потребность в углероде, который содержится в аминокислотах(всего 17 аминокислот из них 10 незаменимых) и полисахаридах и не требует добавления ростовыхфакторов, так как содержит витамины группы В и А и микроэлементы. 3 табл.

128ООО7

26

2,08

Темно-каркч11Е ВЫК гидролизата

Амкноаэот, мг%

Общий азот, мг%

Степень расщепле— ния, %

130,0

690, О

19,8

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к основам для питательных сред и способам кх получения.

Целью изобретения является уве,пк5 чение выхода целевого продукта, улучшение физических и ростовых свойств питательных сред, приготовленных на предлагаемой основе.

Способ заключается в там, что для il0 приготовления основы питательных сред используют биомассу слизистых бацилл, которые подвергаются комбинированному способу гидролиза, включающему две стадии: !5 кислотный гидролиз, который разлагает белок слизистых бацилл на 20 — 30X с получением прозрачного гидрализата; ферментативный гидролиз как более мягкий и щадящий, который дорасщепляет остатки биомассы на 55-60%.

Предварительный кислотный гидролкз необходим потому, что биомасса слизистых бацилл не может разложиться да нужной степени под действием фермента, ввиду чего получаемый продукт гидролиза (основа для питательной среды) очень мутен и не пригоден для конструирования питательных сред. Деструкция белка бацилл происходит только пад действием кислот, в результате чего получается прозрачный гидралиэат.

Наилучшими условиями получения кислотного гидролиэата биомассы сли- 35 зистых бацилл, используемого в качестве основы для питательных сред, являются: рН среды, в которой приводится гидролиэ, 0,45-0,65 t 120123 С; время 40-60 мин. 40

Если при кислотном гидролизе рН среды брать выше 0,45 (0,2-0,3), то ведение гидролиза при такой же температуре (120-123 С) обеспечит необходимую степень расщепления.(20-30X) 45 за более короткое время (25-35 мин), но гидролизат будет содержать большое количество хлоридов и, как следствие этого, питательные среды, приготовленные на его основе, будут так- 50

Же содержать избыточное количества

NaC1 количественное содержание которого в питательных средах строго лимитировано. Кроме того, произойдет де струкция многих выделившихся аминокислот (тирозина, серина, аланина и др.), необходимых для раста микроорганизмов. р и и е р 1. Исходные данные: рН среды О, 2; прадалжительнас-:ь гкдралкэа 25 мин; темпера. ура гкдралкза

1?3 С.

100,0 г сухой биомассы заливают

4,О л воды, добавляют 300,0 мл концентрированной соляной кислоты, гкдролкэ сырья проводят прк t 123 С в течение 25 мкн. Содержанке амкнаазата в смеси да гидрслкза 100,48 мг%.

Химические показатели кислотного гкдролизата:

Амкнааэат, мг% 262, 38

Общий азат„Mr% 1020, О

Степень расщеплс— ния, %

Хларкдб!у %

Цвет

Содержание амкнсаэата увеличивается в 2,6 раза.

Данный пример подтверждает получе.ние кислотного гкдралкэата с необходимой степенью расшеппенкя, на ан содержит завьш1еннае количество хларидов к имеет плохие физические свойства — темный цвет, поэтому недопустимо его применение в качестве основы для питательных сред.

Если же кислотный гкдралкз проводить при рН киже 0,65 (0,75-1,0), то ведение гидрализа при тай же температуре (120-1231 С) обеспечит пеабхадкмую степень расщепления (20 — 30%) за более длительный период времени (более 2 ч). За этот период времени произойдет так же .деструкция многих(. амкноккспат, неабхацкмьm p !ß poc."a

H размножения микроорганизмов. Кроме того, гицролкэат буцет кметь плохие фиэическле свойства (темно-коричневый цвет) .

Пример 2. Исходные данные: рН среды 1,0; продопжктельнасть гидролиза 2 ч 10 мкн, t 120 С.

100,0 г сухой биомассы залквают

4,0 л воды, добавляют 165 мл концентрированной соляной кислоты, гкдралкз сырья прэводят прк t iI20 Ñ в течение

2 ч !0 млн. Содержание амкнаазата в смеси до гкдралкэа 92,4 мг%.

Химические показатели кислотного

1280007

Хлориды, 7. 0,704

Цвет Темно-коричневый

Данный пример подтверждает получение кислотного гидролиз ата с необходимой степенью расщепления. Но время гидролиза увеличивается и, как следствие этого, ухудшаются физические свойства гидролизата (темно-коричневь|й цвет), что затрудняет его применение как основы для питатель- 10 ных сред.

При еще более низком рН (ниже 2,0) и температуре 120-123 С достигается расщепление биомассы за еще более длительный период времени (более 6 ч),15 и продукт гидролиза будет иметь плохие физические свойства (темный цвет).

При ведении кислотного гидролиза биомассы при рН 0,45-0,65 в течение

30 мин и менее получается кислотный 20 гидролизат с плохими физическими свойствами и с малой степенью расщепления (до 87.), что приведет к удлинению стадии ферментативного гидролиза (до 4 недель).

Если же проводить гидролиз при рН 0,45-0,65 в течение 30-40 мин при пониженной температуре (60 — 80 С), то, как и в вышеприведенном примере, получается кислотный гидролизат с еще 30 более малой степенью расщепления (до 3-47) и плохими физическими свойствами (мутный). Гидролиз биомассы соляной кислотой при рН 0,45-0,65, при 120- 123 С в течение 40-60 мин деструктирует белок биомассы на 20307, в результате чего продукты гидролиза содержат: смесь разнообразных частиц распада белка и некоторые необходимые для роста микробов амино- 40 кислоты, не подвергшиеся деструкции; минимальное количество хлоридов, которые оказывают отрицательное влияние ма ростовые свойства питательных сред; и имеют хорошие физические 45 свойства (по прозрачности и цвету), что позволяет использовать как составную час-ь основы для питательных сред.

Самостоятельного применения кис- 50 лотный гидрализат иметь не может, так как имеет малую степень расщеп— ления, недостаточную для применения его в качестве основы для питательных сред. 55

Пример 3. Исходные данные: рН среды 0,45; продолжительность гидролиза 40 мин при 120 С.

100,0 г сухой биомассы заливают

4,0 л воды, добавляют 260,0 мл концентрированной соляной кислоты гидролиз о

Ф проводят при 120 С в течение 40 мин.

Содержание аминоазота в смеси до гидролиза 78,6 мг.

Химические показатели кислотного гидролизата:

Аминоазот, мг . 151,2

Общий азот, мг . 750,0

Хлориды, 7 1, 281

Степень расщепления, 7 %20

Цвет Слабо-коричневый

Содержание аминного азота увеличилось почти вдвое.

Получено 3,0 л прозрачного кислотного гидролизата, которь1й декантируют и 1,2 л осадка.

Данный пример подтверждает получение кислотного гидролизата с необходимыми химическими показателями и хорошими физическими свойствами, что позволяет испольэовать его как cDc тавную часть основы для питательных сред.

Пр ер рН среды 0,65; продолжительность гидролиза 60 мин при 123 С.

100,0 г сухой биомассы заливают

4,0 л воды, добавляют 220,0 мл концентрированной соляной кислоты, гидролиз сырья проводят при 123 С в течение 60 мин.

Содержание аминоазота в смеси до гидролиза 128,8 мг ..

Химические показатели кислотного гидролизата:

Лминоазот, мгЕ 240, 55

Общий азот, мг . 750,0

Хлориды, 7. О, 980

Степень расщепления, ЯЗО

Цвет Слабо-коричневый

Получено 3,2 л прозрачного кислотного гидролизата, который декантируют, и 1,0 л осадка.

Данный пример подтверждает получение кислотного гидролизата с необходимыми химическими показателями и хорошими физическими свойствами, что позволяет использовать его как составную часть основы для питательных сред.

B случае проведения только кислотного гидролиза с применением соляной кислоты для получения гидролизата с необходимой степенью расщеп1280007 ления, применяемого в качес-.âå основы для питательных сред, необходимо подействовать на биомассу слизистых бацилл очень крепкой соляной кислотой при рН среды О, 1-0, 15, продслжительнасти более 4,5 ч и 110- 120 С.

Как следствие этого>продукты гидролиза будут иметь плохие физические свойства (темно-коричневь«Й), произойдет деструкция многих аминокислот, необходимых для роста микрооргани,— мов (триптофан, тирозин, алании, серии, метионин и др.), кроме тогс, продукты гидролиза будут содержать большое количество кислоты., которую необходимо удалить или нейтрализовать. При нейтрализации произойдет образование большого количества хлоридов, т.е. основа будет иметь большую зольность, что недопустимо иметь в основе питательных сре,ц. установлено, что хорошие ростовые свойства питательных сред, приготовленных на основе из гидролизатов биомассы, будут в этом случае, если Основа будет иметь степень расщепления белков 40-45Х. Поэтому для достижения этого и для увеличения выхода Up.-. левого продукта с единицы биомассы осадок после кислотного гидролиза дополнительно подвергают ферментативно-му гидролизу, как более мягкому:и щадящему, который проводят с приме.«ени-. ем поджелудочной железы в течение 1014 сут, так как в дальнейшем нараста-. ет аминоазот в гидролизате крайне незначительно.

Для этого кислотные осадки заливают водой, доводят рН смеси до 7,88,0, добавлением 20Х Na0Ii. Фарша поджелудочной железы берут из расчета

100 r на 1 л жидкости, консервируют хлороформом в количестве 1 — 1,3Х эт объема жидкости и термостатируют rpI

40-42 С. Длительность ферментатизнаго гидролиза 10" 14 дн обеспечивает необходимое накопление в гидролизате и нужную степень расщепления сыр:,я равную 55-60Х. При меньшем времени воздействия поджелудочной железы (5У дн) на кислотный остаток биома сы степень расщепления последнего уменьшается (30-33%)J и в гидролизате будут преобладать в основном высокомолекулярные пептиды и пептаны. Аналогична величина рН среды устанавливает ся таким образом, чтобы это обеспечивало максимальную активность приме-няемого фермента. Оптимальная реакция

55 ного гидро.-«изата: >М«.. 1- О Я 3 О Г ... > »

Об>;цр и азат мг%

Степень рас1>p1;! е— ния, %

638,4

i 250,, (7 среды, которая Обеспечивает максимальную актив:ocть под;келудочной железы пр1« за;!анной температуре 40-42 С, находится в пределах 7,8-8,0 рН. Отрегулировать рН среды до требуемьж пр делан в -. ðîöåññå гидролиза можно добавлением раствора шелочи или кислоты.

Для хорашегс роста большинства мик10 роорган«змов необходима, чтобы в питательных средах содержалось определенное кодичественное и зидовое содержание свободных аминокислот, которые будут освобождаться Г«о мере Воздействия поджелудочной железь: 1!а кислотный осгаток биомассы.

71 р и:" е р 5. Исходные данные: рН о с-)ед.! 8,0> температура гидролиза 42 С, =, f>e!»I.: f 1!!!;)> .1Tизa I 3 дн, 20 Кислотнь)Й Осаь(01; в количестве 1,0л зализа)от 2,5 л Воды, добавляют 350,0 г фарша лоджелудоч)-.0Й железы. доводят

20%-ньп раствором МаОН до рН 8, О; кон.сервир >ют хлорс)фо э1ИО"I. доба««ля" его

В кали IP с . Ве 1%» О Об ье .!а смеси гид; о ролизуют ври 42 С в Гечение 10 дн в термос Гате, Содер)1!ание а !и «оаза-à U смеси цо гермостатирования 128,8 мг%.

30 Химические пок,«з а ели ферме ч f p TI«H

Ho 1" О ГIIJJpoJ!из ята:

>)«1«наазат, мг . 644,4?

IJÎÃ(ÈÉ аз О > М: % "; 50

> >.

От!:-лечь расще>«ле. I И 51, % 56

IIoJ:учено 3, 3 л 1-«розрзч!1Огo ферментативно го г ядр Оли: afr I! с необходимой ,тчя ос1>овь! пи Гательнь1к сред степенью

>ВВСШРПГ>ЕИ«)У! сг I» HH!Iма >1»НО КО«)отКИЙ

4Q суок, iI p .-. м р 6, Исхацныс ца:.ные: рН среды 7.,8, те1 :-ерятура гидрализа

4 О С „«3po!»«JI Гидра;11«за 14 > >н.

Кислотный гидрал:1зат в коли-!естве

45 1, О л .)вливают 2, > л воды, добавляют 3)01, О г фарша 110,!««;елудачнай желе"-,I I, добавляю Г 70% р,"= стна«) КаОН до рН 7,8, ко)«сер«1ирун)т J)«f)м в количест3«е 1% Г)бъе1«а жидк!)с -и, гидролиз ве0, 5(7 цут при 40 в те ение 14 цн В термос 1 а те

Содержаь!ие ами -оазота в смеси да ЕРМOO I а >)ИT») Ð >!IÈß дc> МГ .

».> l

Хим««ческие ITОказатели ферментатив80007

7 12

Получено 3,2 л прозрачного ферментативного гидролизата с необходимой для основы питательных сред степенью расщепления в максимально короткий срок.

Для хорошего роста большинства микробов необходимо, чтобы в питательной среде в среднем количество аминоазота было в пределах 25-30Х от общего азота.

Смешивание ферментативного и кислотного гидролизатов в соотношении

1:1, 17-1:1,3 позволяет получить основу с необходимой степенью расщепления (40-457) и, как следствие, из такой основы можно приготовить питательные среды с необходимым содержанием аминного и общего азота (содержание аминоазота 395-470Х, а общего белка 100-1100 мг7).

С повышением ферментативного гид ролизата в этом объеме смеси увеличивается степень расщепления основы (до 55X), но ростовые свойства основы от этого не улучшаются. Следовательно, увеличение ферментативного гидролизата нерационально и экономически не выгодно, так как себестоимость его гораздо выше кислотного гидролизата ввиду длительности процесса первого и, следовательно, требует больших энергозатрат.

С понижением содержания ферментативного гидролизата уменьшается степень расщепления основы (до 30X) и, как следствие, ростовые свойства питательных сред резко ухудшаются.

С повышением содержания кислотного гидролизата в этом объеме смеси степень расщепления основы незначительно повышается (до 48X), но одновременно происходит и повышение содержания NaC1 (1,0-1,3), что недопустимо.

С понижением содержания кислотного гидролизата в смеси степень расщепления основы повышается (до 50X), со- держание NaC1 в ней уменьшается, но ростовые свойства питательных сред, приготовленных из этой основы, не улучшаются, следовательно, уменьшение нерационально и экономически невыгодно, так как это должно привести к увеличению расхода ферментативного гидролизата, более дорогостоящего, чем кислотный.

Выбранные оптимальные соотношения прозрачных фракций ферментативного и кислотного гидролизатов биомассы слизистых бацилл способствуют

10 достижению цели изобретения.

Смесь выдерживают при 5-7 С 45 дней для выпадения нерасщепленных белков ферментативного гидролизата, инактивации ферментов, установления

15 стабильности рН и содержания аминного азота. За этот срок происходят аналогичные процессы., Фракции могут храниться длительное время в холодильной камере или

20 бытовом холодильнике. Кислотная фракция, имеющая рН 0,45-0,65, хранится до 2-х лет при 5-8 С,Ферментативная фракция хранится при этой же температуре до одного года. Консерван25 том для нее является хлороформ, который добавляется согласно литературным данным из расчета О, 1Х.

Смесь ферментативного и кислотно30 го гидролизатов хранится при той же температуре до одного года. Добавка консерванта и его количество такие же, что у ферментативного гидролизата.

Пример 7. Из данной основы готовили питательные среды для контроля стерильности и плотные питательные среды. Причем чувствительность сред, приготовленных на этой

40 основе по сравнению с питательными средами, приготовленными на основе казеина, одинакова, а в некоторых случаях превосходит при значительно меньшем содержании аминоазота, т.е. расход основы на 1 л питатель" ных сред, приготовленных из гидролизата Bacillus mucilagenosus, меньше . расхода гидролизата каэеина.

Сравнительные ростовые свойства представлены в табл. 1.!

И о

К ! И

1 1 (-, ! г

С4 л u

И о 1

;1 . (f о < z

3 т) Г()1

I (:) !, («(! г!

О о

1 О(л !

3 л

i (:) и! («6 )

1 !

1 g о

1 и)

Р

O () ! G ! ! Г;>

1 )"

Р, 1 (71 ! 1»

I с, 1

1 1

П) („

1", >

j Г 6 () j

Г) 1 о с с

J (rl iJ

Р, «.

f . (1 1i

1 СЗ!

I.1

1! г

f.;.

f3) и

I

I !

I ! !

i

I

I

1 Т о

1 д

1 1; ) (1 Х

1r«г..;

Г.) (,1 ", ((1

1 (-7 (()

) :>

:«.1

1 (»! EI

1

f."

-Ю

61 .Э

7 (I !

1

СЗ 1 (>

) 1

i(l

") . "г (й Т, 1 Q

) 1

1-, 1

i«

1 л

IО о

1 >

1

)О(о гр

I !

I

1 !

1 !

«! л (fJ

4 и! и (fJ

Cd .О л

° 4 O

4-4

О П4 (.1 44 .

EI

:4 r f

"(d

I-I !.1

4- И

G (II

1-4 1-! (.3 4-1 (о1

Р-6 И (n

И Ю (л л л ((4 "1 4-4

Е, п

ЬО О (!4 ((! (4

1-4 )4Л( о

6 ,— 1 .1! 1-!

«г, оз (.3 ((! о о ((( ч з (d г! о

О о

4-1

Р«

П4

N ,J г»!

М г!

Э (.4 гf о

1-)

rd .и

Р»

1-!

I гп

1 ц

I:1! 1 о

t, I о

6 х (.) „> Я

О ((6

l )

Ж ".«l Г о

1 .",! (г (п З (7" Ж И

C, о

И С, ("

П)

ГО I (,) ((>

1280007

3 С3

11 1280007

Пример 8. Сравнительная характеристика ростовых свойств плотны питательных сред, приготовленных на основе гидролизата биомассы слизистых бацилл и на основе гидролизата киль5 ки Дагестанского института питательных сред представлена в табл. 2.

Были взяты наиболее распространенные виды патогенных микроорганизмов кишечной и гноеродной группы, кото- 1О рые имеют первостепенное значение в медицинской практике для диагности ки вызываемых ими заболеваний. Эти

12

Продолжение табл. 3

Валин

Тирозин

Пролин

4,2

4,5

2,1

Аспарагиновая 3, 2

Глютаминовая 9, 1 микроорганизмы входят и в список последних методических рекомендаций. 15

Та блица 2

14,7

Алании

3,2

Глицин

Микроорганизмы

Агаровые среды

4,4

16,3

Лизин

Аргинин на основ на основе гидролизата килвки, 3,2

7,4 гидролизата био массы**

0,3

4,3

Триптофан

1 0-7

Sh. sonne i

Серии

4,8

10 <

Sh. f lexuer i

0,5

Цистин

S. heidelberg

10-7

E.coli 0119

2,5

10-7

Е. coli 0111

Аминомасляная 0,6

Staphylococcus

aureus

35 Изолейцин

3,5

10 6

3,0

Хетионин

1;4

Пуриновые и пиримидиновые основы

12Х

50Х

Количество микроэлементов

Содержание полисахаридов

35-40Х

Наличие витаминов группы В

Аминокислоты

Лей цин 16,3

3,7

Наличие витамина А

Фенилаланин 3,6

"максимальные разведения культуры, из которых был получен рост микробов;

**размеры колоний несколько крупнее по сравнению с другими испытанными средами.

Пример 9. Проводилась сравнительная характеристика химического состава биомассы слизистых бацилл дрожжей.

Результаты представлены в табл.3.

Т а бл и ц а 3

Орнитин 1ь8

Треонин О, 1

Гистидин

Количество аминокислот 17

;: й300 i

Редактор Л.ДОП -=

Заказ 7020/2 1

Преимуще ств ом ппс ...

СОба ПОЛуЧЕНИя ОСНOBÜ = .: -.-, .и: бацилл являе l с.- з а::"-. го дефицитного пишево"11,.;рь. . .ч1"

Са И EIP, (КЯЗЕ IH I . r : 1 «i, Об ходимости введеrrlя щие полученную Ос:- :О .:1-" у - ::"

:роста так «a;- or!;-: -. де1:;.:::., е:. < обходимые компон нты, т я .::::пар.1ч :-=.-. ния и вь1деления 1ж:-:крс: —;-:.:-=: I B .-:1кг сырья !.,биомасс ге! с,—;и--; —.. .;у.". цилл) можно приво : О-l.. I. с" .т за больше пи гата.—.т--; .. и той же концен-:.р ...==-1 та (120 xr7),. - == и.

НО:Bbr> ПОЛУЧЕ HI! O i l :-, ф:= : гидролиз атов дро1оipr"I@ О р м у -"- ". и з .: ..;:

СпОс06 при готов, е::1е1 О микробиологических

Произвопствепно- ;.О..:- . г

- :.,;.".:. ..:". р .:,111 в оп.;нй ферментативный

:1=,"-1-: .з. 11 1-;-ход:ои биомассы микроорга"1." о, поджелу, Очнои железои„о та е о 1.1 и Й с я тем„. что, с

О и 1 °, i -l?. иче ни я выхода целе в ОГО про т= 1!-:r×× -:- Ия 11ИЗИЧЕСКИХ И рОСтО-.. ëoéс r B питательных сред. в ка5

:!ее шве иск Од нов Оиомассы используют с таз.:.. -. т.:— : бациллы,, которые предва эиI;.rr Ь -.С ПСI!ВЕ РгаИТ 1 КДРОЛИЗУ В DBC r BO

,е О-лянс 1-. y,-ис:.1оты при pI- 0,45-0,65 т =",.1пео:. ту-е 1 20--125 Г в течение

<-. "ir1;;rr,; „З; I e;„; П Каитацнн . н.". - j B .:- Ннс г" гидролиз-; подвев:" з" по,—.. —:.- -,:::ыи порпе деканта:-,ии .I- 7, D--H ..0 в -:.ê— чение от 30 з з=".÷!:!e фракции ферме н1<но,.:-,:;.D.О -.. È!IPOËHÇàòOÂ

or-,1-- ПИ1.1 - 1 I /

: — 1 жн-11:-;р".- при = - 7 С в те че,)1-:Оп,. 1, 11п,-,р1< Tнзя 4