Способ получения экстрактов из тушек животных,обладающих противоязвенной,инсулиноподобной,антилипидической и способствующей усвоению питания активностью

Способ получения экстрактов из тушек животных,обладающих противоязвенной,инсулиноподобной,антилипидической и способствующей усвоению питания активностью

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к фармацевтическор промьшшенности. Для повышения чистоты целевого продукта непереработанную сырую рыбу или животных , имеющих раковину или панцирь, нагревают до 75-80°С для полной дезактивации энзимов автолиза, добавляют бациллы вида Bacillus sub til is, производящие протеиназу при 50-60 С и рН 6,0-7,0, затем вносят грибок вида Koji, производящий протеиназу при температуре 40-50 0 и рН 6,0-7,0. Смесь вьщерживают 1-3 ч для полного разложения на пептидные аминокислоты, каждая из которых имеет м.в. менее 3000. Затем повьшают температуру до 80 С до полной дезактивации грибка Koj i с последующим отделением и концентрированием полученного продукта. 4 та бл. i W с/о о 00 оо со ы

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 А 61 К 35/60

Ъ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3598347/28-14 (22) 19 05.83 (31) 58-34385 (32) 04.03.83 (33) (JP) (46) 30.04.87. Бюл. II 16 (71) Нихон Буссан Кабусики Кайся (JP) (72) Такаси Такасаки и Иитцунори

Ивамото (1Р} (53) 615.45(088.8) (56) Патент Японии Ф 31935, кл. 34FO, 1978.

„„SU„„1308183 А3 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКСТРАКТА ИЗ

ТУШЕК ЖИВОТНЫХ, ОБЛАПАЮЩИХ ПРОТИВОЯЗВЕННОЙ, ИНСУЛИНОПОДОБНОЙ, АНТИЛИ .ПИДИЧЕСКОЙ И СПОСОБСТВУЮЩЕЙ УСВОЕНИЮ

ПИТАНИЯ АКТИВНОСТЬЮ (57) Изобретение относится к фармацевтической промьппленности. Для повышения чистоты целевого продукта непереработанную сырую рыбу или животных, имеющих раковину или панцирь, нагревают до 75-80 С для полной дезактивации энзимов автолиза, добавляют бациллы вида Bacillus sub t il i s производящие протеиназу при 50-60 С и рН 6,0-7,0, затем вносят грибок вида Koj i, производящий протеиназу при температуре 40-50 С и рН 6,0-7,0.

Смесь выдерживают 1 — 3 ч для полного разложения на пептидные аминокислоты, каждая из которых имеет м.в, менее

3000. Затем повышают температуру до

80 С до полной дезактивации грибка

Koj i с последующим отделением и концентрированием полученного продукта.

4 табл, 1 13081

Изобретение относится к медицине, в частности к фармацевтической промышленностии.

Целью изобретения является повышение чистоты целевого продукта за счет использования в качестве сырья животных, имеющих раковину или панцирь, с последующим нагреванием неразмельченного сырья.

Способ осуществляется следующим 10 образом.

Непереработанную сырую рыбу или животных, имеющих раковину или панцирь, нагревают до 75 — 80 С для полной деактивации энзимов автолиза, до- 15 бавляют Васillus subtilis, производящие протеиназу при 50-60 С и РН

6,0-7,0 для разложения протеинов до стадии протеозоза при температуре не ниже 75 С для полной дезактивации 20

Bacillus subtilis, а затем добавляют грибок вида Koj i производящий .протеиназу при 40-50 С и РН 6,0-7,0 и смесь вьдерживают в течение 1-3 ч для более полного разложения на 25 пептидные аминокислоты, каждая из которых имеет молекулярный вес менее

3000. Затем повышают температуру до 80 С до полной дезактивации грибка Koj i с последующим отделением и 30 концентрированием полученного продукта.

Пример 1, Цельные тушки макрели в количестве 4 т без предварительной обработки загружают в реакционную емкость, оснащенную перемешивающим устройством, вместе с 4 т воды и содержимое реакционной емкости нагревают до 80 С. Спустя 15 мин темпаратуру снижают до 50 С и добав- 10 ляют 4 кг бацилл вида Bacillus subtil is производящих протеиназу, содер— жимое реакционноР емкости подвергают реакции при РН 6,0 в течение 1,5 ч.

Далее температуру содержимого реакционной емкости повьш ают до 80ОC и выдерживают на этом уровне 15 мин, а о затем охлаждают до 40 С, при этом до. бавляют 2 кг грибков вида Koj i, производящих протеиназу, содержимое Ре- 50 акционной емкбс и вьдерживают при этой температуре 3 ч при РН 6,0, Далее содержимое реакционной емкости нагревают снова до 80 С для дезактио вации протеиназы. Полученный продукт реакции отделяют с помощью центробежного сепаратора (центрифуги) с получением слоя экстракта, слоя масла и слоя остатка, содержащего кусочки

83 2 костей и непрореагировавшие материалы. Слой экстракта фильтруют и концентрируют при пониженном давпении и температуре 60 "С. Экстракт макрели подвергают анализу, Он содержит, 7: вода 35, 4; полупродукты протеина

57,4; полупродукты жиров 0,4; карбогидраты 0,5; зола 6,3, и характеризуется калорийной способностью 235 кал/г.

Хроматографический анализ этого продукта показал, что молекулярные массы имеют три пика 2500, 1300, 760, это указывает на то, что молекулярная масса аминокислотных компонентов существенно меньше 3000. Композиция из сгруппированных аминокислотных компонентов представлена в табл,1, Пример 2. Целые тушки рыб и животных, имеющих раковину или панцирь, таких как сардины, устрицы, каракатицы, жемчужницы, скумбрия или желтохвост (Seriola quinqueradiata) загружают в количестве 4 т в реакционную емкость вместе с 4 т воды, после чего повьш ают температуру до

75 С для полной дезактивации энзимов автолиза и для удаления рыбного запаха. Спустя 15 мин температуру снижают до 60 С и добавляют 4 кг бацилл вида Bacillus subtilis производящих протеиназу, и содержимое реакционной емкости подвергают реакции при

РН 7,0, вьдерживая 1,5 ч, Затем температур содержимого реакционной емкости повышают до 80 С, выдерживают

15 мин с последуюшим охлаждением до

50 С и добавляют 2 кг грибка вида

Koj i, производящего протеиназу, выдерживая содержимое реакционной емкости при этой температуре в течение

1 ч при РН 7,0 ° Далее температуру вновь повышают до 80 С и центрифугируют с получением в результате слоя экстракта, слоя масла и слоя остатка, содержащего кусочки костей или непрореагировавшие материалы. Слой экстракта отфильтровывают и концентрируют при пониженном давлении и температуре 60 С.

В табл, 1 представлено содержание аминокислот в экстракте, полученном из тушек рыб или животных, имеюших раковину или панцирь, по примерам

1 и 2; в табл. 2 — результаты анализа различных экстрактов, полученных по примеру 2.

Экстракт из тушек желтохвоста и скумбрии имеет аминокислотный состав, 83 4

Противоязвенная функция.

Противоязвенная функция экстракта, полученного из макрели, была испытана применительно к язве Shay, кото— рая является одной из моделей образования язвы. Для этих анализов использовали крыс. Впияние дозировки экстракта на секрецию желудочного сока исследовали по методу пилорической лигации.

Метод испытаний.

Противоязвенная функция (пилорическая лигационная язва) .

Самцов крыс породы Vistar весом

150 — 200 r привязывают на 24 ч, затем их пилорические области подвергают лигации в соответствии с методом, раз. работанным Shay, при применении эфирного наркоза. После того как крыс выдерживают в течение 12 ч без какойлибо пищи и воды, желудки крыс уда— ляли, язвы проявлялись во фронтальной области желудка и оценивались по шкале для язв в соответствии с методом, предложенным S,Namnri et al., Res.

Lab 29, 85, 1976.

Каждой из обработанных крыс вводят

500 мг/кг животного веса экстракта, полученного из макрели, растворенного в воде, ввод осуществляют через рот за 1 ч до пилорической лигации.

Активность по ингибированию сек— реции желудочного сока.

Эта активность была определена в соответствии с методом, описанным

Н,Shay et al. Gastroentегоlogy, 5, 43, 1945. Этот метод заключается в следующем: самцов крыс породы Mistar привязывают на 48 ч и затем их пилорические области подвергают лигации.

Спустя 4 ч из желудка отбирают желудочный сок и измеряют объем желудочного сока, общий выход кислоты и общую пептическую активность.

При сравнении с обычными свиньями, которым не давали, экстракт, были обнаружены четкие различия в количестве жиров, прилипших к органам (коли- 55 чество жиров было уменьшено); кроме того, различие заключалось в том, что не было обнаружено заболеваний или отделенных частей.

3 13081 подобный составу экстракта из макрели.

Экстракт из тушек жемчужницы характеризуется количеством энергии

152 ккэл на 100 г, экстракт из тушек устриц — 225 ккал на 100 r.

Данный способ получения экстракта дает возможность получить более чистый препарат за счет полной дезактивации протеиназы. Экстракты, полученные предложенным способом из рыб и животных, имеющих раковину или панцирь, содержат много пептидных и свободных аминокислот, характеризуемых величиной молекулярной массы менее 15

3000, которые обладают также различными фармацевтическими функциями— инсулиноподобной, противоязвенной, антилипидической и способствующей усвоению питания, 20

Функция балансирования питания, Экстракт из макрепи, полученный по. примеру 1, подвергают 30 — кратному разбавлению водой, 10 см разбавлен- 25 ного экстракта вводят свиньям каж— дый день после прекращения кормления материнским молоком путем добавления этого раствора в пищу. После кормления в течение 6 мес, свиней умерщв ляли и сравнивали со свиньями, которым не давали экстракт, Результаты анатомических исследований следующие. Легкие у свиней, которым давали экстракт, имеют чис — 35

1 тую окраску и не имеют локальных поражений, Внешние стенки сердца не имеют налипшего слоя жира. Печень не имеет локальных поражений или отделенных частей, имеет коричневый цвет. Небольшое количество жиров окружает большие и малые кишки ° Мясо свиней, которым давали экстракт, имеет хороший внешний вид и плотную массу с соответствующим количеством >ки45 ров. Мясо свиней, которым давали экстракт, плотное и имеет хорошую текстуру и цвет. Жир также имеет хоро пий цвет.

Общий выход кислоты был опреде— лен путем титрования 0,02 í. NaOH c использованием фенолфталеина в качестве индикатора, общая пептическая (пищеварительная, пепсиновая) активность была определена в соответствии с методом M L.Anson, I.Геп. Phisiol, 29. 79, 1938 при использовании казеина в качестве основного материала.

Каждой из исследуемых крыс вводят экстракт через рот за 1 ч до пилорической лигации.

Результаты испытаний представлены в табл. 2. Как видно из данных, пред1308183

35 ставленных в табл. 3, значительные различия в ингибировании объема желудочной кислоты и общем выходе кислоты говорят о том, что есть тенденция к образованию язвы, когда экстракт, полученный из макрели, в соответствии со способом вводится в количестве 500 мг/кг живого веса.

Функция, подобная инсулину.

Инсулиноподобную функцию экстрак- 10 та из макрели, приготовленного по примеру 1, испытывали с использованием в качестве индекса эффекта экстракта макрели на липолиз свободных жировых клеток, вызванный адреналином.

Метод испьгганий.

Из организма крыс извлекают жировые кле ки и обрабатывают их коллегеназой, их используют для изучения 20 эффекта ингибирования эмиссии свободных кислот жирного ряда из жировых клеток, вызванной .пиполизом вследствие присутствия адреналина. Полученные результаты испытаний представ- 25 лены на чертеже.

Результаты испьгганий.

Как показано на чертеже 5,5p. Eq/g свободных жирных кислот изолируется после того, как к ним добавили 1мг/мл 30 адреналина. Количество изолированных свободных жирных кислот снижается до

2,3 p Eq/g, когда к ним добавляют

1 mItJ/ml инсулина.

Метод испытаний.

Прованское (салатное) масло нагревали до 170-180 С в течение 2 ч при одновременном барботировании чер ез него кислорода, в р езультате образовывались перокисленные жиры. Перемешанная пища была получена путем смешения порошкообразных пищевых материалов, содержащих халат холестерина натрия с прованским (салатным) маслом, содержащим перокисленные жиры, и ее использовали для кормлейия: группы крыс. Спустя 5 недель крысы имели высокое содержание холестерина и незначительные поражения печени, Одной из групп крыс давали экстракт, полученный из макрели, с тем, чтобы исследовать гематологически функцию экстракта по снижению содержания холестерина. Внутренние органы крыс исследовали. с точки зрения паталогически-морфологических изменений. Экстракт вводили крысе один раз в день через рот.

Результаты испытаний представлены в табл . 4 и 5. Как видно из табл . 4 и 5, значительный эффект снижения сво. бодных жирных кислот, образовавшихся из пищевых жиров, приводящих к заболеванию, связанному с высоким содержанием холестерина, имеет место в тех случаях, когда производится добавле-. ние 500 мг/кг живого веса экстракта, произведенного из макрели.

Когда экстракт, полученный из макрели, используют вместо инсулина, наблюдается заметный эффект ингибирования отделения свободных жирных кис40 лот в тех случаях, когда концентрация экстракта из макрели, присутствующего в исследуемой системе, увеличивается до 500 мг/мл.

Из данных, приведенных на чертеже, 45 следует, что экстракт макрели, полученный с помощью предлагаемого способа, характеризуется функцией, подобной инсулину, и может быть использован в качестве эффективного лекарственного репарата для лечения диабета.

Функция снижения холестерина.

Экстракт, полученный из макрели по примеру 1 использовали Для сни 55 жения содержания холестерина в крови или для лечения незначительных расстрОнств печени, вызванных употреблением жирной пищи.

Были проведены эксперименты с различными экстрактами рыб, моллюсков и ракообразных. Результаты показали, что экстракты содержат те же аминокислоты, что и экстракт макрели. Таким образом, эти экстракты характеризуются такими же фармацевтическими функциями.

Формула изобретения

Способ получения экстрактов из тушек животных, обладающих противоязвенной, инсулиноподобной, антилипидической и способствующей усвоению пита. ния активностью, путем нагревания тушек в воде, ферментной обработки с последующим отделением полученного экстракта центрифугированием, фильтрованием и концентрированием продукта, отличающийся тем, что, с целью повьппения чистоты целевого про1308

183

Таблица 1

Содержание аминокислот, г/100 г образца, в экстракте из

1 1

Аминокислоты макрели жемчужницы устриц . каракатицы сардин

1, 17

3,40

2,57

2,72

t 52

Аргинин

Лизин

4,37

1,47

3,21

3,92

2,24

2,76

0,33

0,70

0,30

Гистидин

1,30

1,44

0,59

0,56

1,31

Фенилаланин

1,27

0,58

0,59

0,80

0,92

Тирозин

1,07

3,31

1, 10

2,68

Лейцин

3,09

0,79

1,70

Из олейцин

0,70

1,25

1,50

Метионин . Валин

0,43

1,23

0,53

0,99

1,15

1,58

0,84

2,38

2,09

1,51

3,62

Алании

1,29

2,87

3,26

4,37

1,34

3, 75

Глицин

1,80

2,33

Пролин

2,53

1,40

4,09

2,28

1, 13

Глутаминовая кислота

7,46 3, 18

3,21

5,69

6,22

2,24

1,04

0,85

1,84

2,22

Ссрин

Треонин

1,16

1,66

2,14

0,89

1,71

Аспарагиновая кислота

4,43

2,34

2,01

3,95

4,03

0,31

0,15

0, 30

0,18

Триптофан

Цистеин*

О, 17

0,24

0,27

0,40

0,37

0,20

* Определяли по методу окисления надмуравьиной кислоты. дукта, в качестве сырья используют тушки макр ели, сардин, устриц, каракатиц, жемчужниц, скумбрии и желтохвоста (Seriola quinqueradiata) а нагревание неразмельченного сырья 5 проводят до 75-80 С, добавляют к смеси бациллы вида Вас il lu s sub t il is при 50-60 С и рН 6,0-7,0, затем грибок вида Koji при 40-50 С и том же рН и выдерживают в течение 1-3 ч с последующим повышением температуры до 80 С.

1308183

Таблица 2

Содержание компонентов, 7, в экстракте из

Состав жемчужннцы устриц каракатицы желтохвос- сардин скумбта рии

48,7

36,9

35,5

Вода

33,5

25,6

27,3

53,0

Белок

52,5

Липид

0,4

0,1

2,5

0,1

0,1

0,1

6,4

Волокна

14,1

6,,4

Зола

8,3

6,6

2,4

7,9

Глюцид

9,8

30,5

5,0

3,6

3,2

34,8

4,17

Таврин

Менее

0,01

Таблица 3

Обработка (р.о.) Общий выход кислоты, (.К1/1ОО8.

bio

Доза, mg /kg

Общая пептическая активность (тирозин) 3, 18+0, 55 4, 24 0,36 470,8+42, 5 2 17, 7+38, 2 целлюл оз а

2,63+0,46 2, 75+0, 5(303,9376, 1 * 157,3+43,6

Бава-экстракт

500 8

ОООО Оэ 00* 0,62+-О, 18*** 43, 7+17> 1 "** 23, 6+7, 4***

10 8

Сульфат атропина

* р 4 0,001; **р а0,005; ***p (0,001.

Контроль

0,27 карбоксиметилКоличество крыс

Инд екс я з вы (среднее + стандартное отклонение) Объем желудочного сока,мл.100 г

36,1 38,2

52,7 24,5

1308183

l

О) (-> и

Э ((х о

t М а

,О л . о

o +!

+! м

О1 л о

00 м л о

+1

Ю л

С>

СО л о

+Г

СС(Ю

ГЧ

>О

О>

+ л о

4 м

СЧ

+I

>С> м

С4 С 4

»! +!

С> м м

° (ь I

>х c4 (Х 1 !

О

Ю Q

С>

+(С 1

° >

Ю О л +!

»»l

СО С> л т —

0О

»-! ! о

»ь

+!

0О о О о

+!

"О м

4С

Ch

+I о

- ь

1 ! Г» сь л

С 4

+! +! О СО ! и

СЧ I О л

+I О л !

О> л о

+! м л

СО

0О л

+I

С 4 л

О>

С>

+!

СЧ л

СМ

С»4 о о

+!

С4

0О

С>

o o л

o o .(! +! ь

CO СО л

o o

С:> л о

+I л" л л о! Е»

I Р

С3 л

С>

С» л

С 1 о

+ л м

o o

»-! .(-!

С 4 л л с 1 м о

I Е4 с

С» х х

>Х QI

E"

>о а о х к м

+-!

С">

+I л л о

+I О л О о .(- I

СЬ О (»

u u

Q! д

Р О

Х х о о х I!

-т — - х

Ц C(С» т» а

H Q! ! Е» И

1 — — — — 4 ь LO

+ +

СО О

СЧ С 4

+ м

СЧ л л

1 !

1

С>

Ю

О 1 о

1 l д I и и 7

О Q! P,, з И

1 !

1 л СО

i <б,М

1 С>!о 001

1 8 I л л л 00

cd Я

C>I

О 00 (=Т 8

С> о

О о о с»4

1 I

С> (о

cd х (-( о о

О ь

ID а

Ю (»

Х

Щ cd х а

СО и

Х х

Х (» о

>О °

cd а ь IO а 1

О

1 »С

1 х х

>х о а е х а Х I (И>О

» — — > х ..i A

1

I !

1 (1

I

I Р»

1 1

i

l м с \

+!»! +!

O 1 О

-4 О 1

o o o .н +! +I л ь, л

o o o о о о

+! +! +! м м л л л

o o o

О! СО CO

О > О

+! +I

С! О\ CO

ill О \ О\

С 4 М м

С4 О\ м м

Ф-I +! (н:> Cc> 00 м

С4 М м м

>Л О С4

»-! +! +!

0О С 1 - >

СО Ch О > о о

l I С 4

>О 1 Е

cd X

О mQI х а х а

E» CO

О и о о И х м A

I л(1

1 и

cd I Х

1 Х С! о хх

I P, Х I QI QI

I И !»

Ц I

I ь > — — ч х1 (!

1! х

> 1 > о а

И о

И х х

Q!

a> E"

QI х х

QI

Н о х (» о о оо <

С! о

1 — — — — Л ч

Д ! I о

cd p, Х а х сп о о х л (о

I Х

Р а

cd E» сО и 1

И I

С) 1

1308183

1и тР + + + м лю ммю и /rnР

Составитель Л. Шилина

Редактор М.Циткина Техред М.Ходанич Корректор A,Îáðó÷à

Заказ 1644/58 Тираж 596 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. ужгород, ул. Проектная, 4