Способ приготовления препаратов молочных белково-жировых продуктов для изучения их микроструктуры

Способ приготовления препаратов молочных белково-жировых продуктов для изучения их микроструктуры

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к пищевой промлпленности, а именно к элект - ронно-микроскопическим исследованиям, и может найти использование при приготовлении препаратов молочных белково-жировых продуктов для изучения их микроструктуры. Целью изобретения является повышение качества препаратов . Для приготовления препаратов молочных белково-жировых продуктов для изучения от микроструктуры методом электронной микроскопии высокожирные смеси мороженого и стерилизованные молочные белково-жировые крем. фиксируют в водном 2%-ном растворе четырехокиси осмия, приготовленном на дистиллированной воде с рН 6,0 - 6,4 в течение 20-30 мин, центрифугируют в течение 5-10 мин прн 2000-- 2500 об/мин, прокывают в этиловом спирте с концентрацией 69-72%, обезвоживают сначала в этиловом спирте с концентрацией 79-82%, а затем с концентрацией 95-97% и трижды с концентрацией 99,9-100% с последующим центрифугированием после каждой промывки в течение 5-7 мин при 2000- 2500 об/мин. Затем проводят пропитку препарата смесью этилового спирта с концентрацией 99,9-100% и эпоксидной смолы в три этапа: на первом этапе в соотношении 151, на втором и третьем - в соотношении 1:1 - 1:3, центрифугируют после каждой пропитки 10-15 мин при 4000-5000 об/мин, осуществляют заливку в эпоксидной смоле в течение 15-18 мин с последующим центрифугированием в течение 20- 30 мин при 6000-8000 об/мин, полимеризацией , изготовлением срезов, размещением их на сетке, контрастированием и просмотром в электронном микроскопе . с S (Л 00 о ел о

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ЬП 4 С 01 N 33/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3851428/31-13 (22) 24,01.85 (46) 30.01,88, Бюл. № 4 (71) Киевский медицинский институт им. акад. А.А.Богомольца (72) Л.А.Стеченко, В.А.Усачева и В.В.Волынец (53) 637,1,002 (088,8) (56) Кпоор Е. StrukturaufklUrung

durch elektronenmikroskopische Unter "

suchungen an Eiweib und Milchfett.

Milchwissenshaft, 1972,27(6), S.3Ã4-373. (54) СПОСОБ ПРИГТ)ТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ

МОЛОЧНЫХ БЕЛКОВО-ЖИРОВЫХ ПРОДУКТОВ

ДПЯ ИЗУЧЕНИЯ ИХ МИКРОСТРУКТУРЫ (57) Изобретение относится к пищевой промппленности, а именно к электронно-микроскопическим исследованиям, и может найти использование при приготовлении препаратов молочных белково-жировых продуктов для изучения их микроструктуры, Целью изобретения является повьппение качества препаратов, Для приготовления препаратов мо" лочных белково-жировых продуктов для изучения от микроструктуры методом электронной микроскопии высокожирные смеси мороженого и стерилизованные

„„SU„„ l 370560 А 1 молочные белково-жировые кремы фиксируют в водном 27.-ном растворе четырехокиси осмия, приготовленном на дистиллированной воде с рН 6,0—

6,4 в течение 20-30 мин, центрифугиру" ют в течение 5-10 мин прн 2000-2500 об/мин, промывают в этиловом спирте с концентрацией 69-727, обеэвоживают сначала в этиловом спирте с концентрацией 79-827., а затем с концентрацией 95-97Х и трижды с концентрацией 99,9-100Х с последующим центрифугированием после каждой промывки в течение 5-7 мин при 20002500 об/мин, Затем проводят пропитку препарата смесью этилового спирта с19 с концентрацией 99,9-100Х и эпоксидной смолы в три этапа: на первом этапе в соотношении 1:1, на втором и третьем — в соотношении 1: 1 — 1: 3, центрифугируют после каждой пропитки

10-15 мин при 4000-5000 об/мин, осуществляют заливку в эпоксидной смоле в течение 15-18 мин с последующим центрифугированием в течение 2030 мин при 6000-8000 об/мин, полимериэацией, изготовлением срезов, размещением их на сетке, контрастирова- © нием и просмотром в электронном мик- О роскопе, CO

1 1370560

Изобретение относится к пищевой ч промьппленности, а именно к электрон- к но-микроскопическим исследованиям и н может найти свое использование при приготовлении препаратов молочных белково-жировых продуктов для изучения их микроструктуры.

Целью изобретения является повышение качества препаратов.

В предлагаемом способе фиксацию препарата проводят раствором четырехокиси осмия, приготовленным на дистиллированной воде, с р1» 6,0

6,4. Выбор четырехокиси осмия в качестве фиксирующей жидкости для молочных белково-жировых продуктов определяется тем, что использование водного раствора четырехокиси осмия с рН, близким к рН исследуемых продуктов, гарантирует сохранение субмицеллярного и мицеллярного состояния молочного белка. Четырехокись осмия действует не только как фиксатор, но и как контрастирующее вещество. Кроме того, фиксация четырехокисью осмия препятствует экстракции липидов в процессе последующей заливки.

Фиксация препаратов в течение менее 20 мин не дает статистически достоверных данных по толщине обо— лочки жирового шарика, что видимо, связано с малой и неравномерной проникающей способностью четырехокиси осмия, фиксация в течение более 30 мин также не дает возможности получить качественные препараты, что вызвано растворением липидно-бе. «овых компонентов и прежде всег оболочки жирового шарика при длительном контакте материала с четырехс ;исью осмия.

При фиксации препаратов исследуемых молочных белково-жировых продуктов в течение 20-30 мин получены статистически достоверные результаты по толщине оболочек жировых шариков.

Для уменьшения экстракции липидов можно использовать в качестве обезвоживающей жидкости этиловый спирт, Поэтому в предлагаемом изобретении предлагается промывку, обезвоживание и пропитку проводить с использованием этилового спирта.

Погружение исследуемого материала после фиксации в спирт слабой кон центрации (менее 69 .) сопровождается явлениями неравномерной мацерации, 10

1г

55 то приводит к сморщиванию белковых омпонентов и особенно субмицеллярого слоя оболочки жирового шарика, в результате полученный разброс данных по толщине оболочки не поддается статистической обработке, Погружение же объектов сразу в крепкий спирт (абсолютный с концентрацией

99,9-100/) приводит к разрыву оболочек жировых шариков и смещению структурных элементов, что, в конечном итоге, не дает возможности получить статистически достоверные данные по размерам структурных элементов и правильное представление о микроструктуре, в частности, стерилизованных кремов с кофе и какао.

Установя"ио что промывка объектов молочных белково-жировых продуктов в этиловом спирте с концентрацией 69-72,, обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации (сначала

79 — 82, затем 95 — 97 и трижды— в абсолютном спирте с концентрацией

99,9 — 100 ) обеспечивают необходимое качество препаратов. 11аличие следов воды мешает полимеризации блоков при последующей пропитке и заливке препаратов эпоксидной смолой.

При одно- и двухразовой обработке препаратов абсолютным спиртом с кон" центрацией 99,9 — 100 . иногда в полимеризованных блоках, готовых к изготовлению срезов, обнаруживаются пузырьки воздуха, что связано с загрязнением препарата водой, При трехразовой обработке абсолютным спиртом препаратов качество последних было гарантированным и артефактов при просмотре в электронном микроскопе не наблюдали, Обезвоженные препараты подвергают пропитке в заливке эпоксидной смолой.

Препараты исследуемых молочных белково-жировых продуктов обрабатывают с применением центрифугирования объекта на всех этапах подготовки его.

Цель пропитки — проникновение эпоксидной смолы в исследуемый материал .

Для получения прочных блоков био" логических объектов необходимо постепенно замещать обезвоживаюшую жидкость на эпоксидную смолу, поэтому процесс пропитки препарата осуществляют с постепенным замещением спирта эпоксидной смолой. Наличие менее вязкого спирта способствует более глубокому и полному проникновению

3 l 3705 эпоксидной смолы в препарат, Применение центрифугирования после каждого этапа пропитки также облегчает проникновение эпоксидной смолы в препарат, 5

Экспериментально установлено, что трехэтапная пропитка препаратов смесью абсолютного спирта (с концентрацией 99,9 — 1007) и эпоксидной смолы (на первом этапе в соотношении

3:1, на втором и третьем " 1:1 и

1:3) дает возможность сохранить все элементы ультрамикроструктуры продуктов и определить их размеры, При других соотношениях спирта и эпоксидной смолы наблюдаются разрывы оболочек жировых шариков, что ухудшает качество готовых препаратов.

Экспериментально установлено также, что для исследуемых молочных бел- 20 ково-жировых продуктов заливка в эпоксидной смоле в течение 15-18 ч обеспечивает хорошую прочность полимеризованных блоков, При выдержке менее 15 ч встречаются мягкие блоки, а при полимеризации более 18 ч— очень хрупкие, в обоих случаях получают некачественные срезы.

Для получения качественных препапаратов образцы исследуемых молочных 30 белково-жировых продуктов обрабатывают с применением центрифугирования объекта на всех этапах подготовки его. Скорость и продолжительность центрифугирования при фиксации, обез- 35 воживания пропитке и заливке экспеВ

Ф риментально подобраны в зависимости от химического состава исследуемых продуктов, т.е, от вязкостных характеристик. 40

Пример 1, 2 г молочных белково-жировых смесей с содержанием жира

10 — 15 и 3,57 молочного белка, используемых при производстве мороженого, фиксируют 2 мл 27-ного раство- 45 ра четырехокиси осмия в дистиллированной воде с рН 6,0 — 6,4 в течение

20 мин, центрифугируют в центрифуге

ЦУМ-1 при 2500 об/мин в течение

10 мин, для прекраще„„„oK „ < 50 действия фиксатора полученный осадок промывают 2 мл 70 -ного этилового спирта в течение 15 мин и центрифугируют 7 мин при 2500 об/мин, затем осуществляют обезвоживание осадка в спиртах возрастающей крепости (по 2 мл) в течение 5 мин в каждом 70; 80; 96 и 3 раза в 100 -ном с последующим центрифугированием после каждой обработки в течение

7 мин при 2500 об/мин. Предварительную пропитку проводят в смеси 100 ного спирта и эпоксидной смолы аралдит в пропорции 3: 1, 1: 1, 1: 3 в течение часа при комнатной температуре с центрифугированием после каж" дой обработки в течение 15 мин при

5000 об/мин, В чистой смоле осадок оставляют на 15 ч, затем центрифугируют в течение 30 мин при 8000 об/мин н переносят осадок в желатиновые капсулы, наполненные заливочной смолой (аралдит М + аралдит НУ в равных количествах с добавлением

1,57, катализатора) и полимеризуют о прн 45 С в течение суток и при

60 С 2 суток. Из полученных блоков с белково-жировой смесью изготавливают ультратонкие срезы, монтируют их на сетки, контрастируют 2 -ным раствором уксусно-кислого уранила в

70 -ном спирте в течение 10 мин и цитратом свинца — 15 мин. Срезы просматривают в электронном микроскопе, Пример 2. Стерилизованные крем с кофе и крем с какао, сЬдержание 457 молочного жира и 57 молочного белка, являются маслоподобными продуктами и имеют достаточно прочную структуру при температуре хранения о

0 — 10 С. Поэтому для фиксации вырезают кусочки кремов размером не более 1 1 мм, заливают 27-ным раствором четырехокиси осмия в дистиллированной воде с рН 6,0 — 6,4 и фиксируют 30 мнн при комнатной температуре.

Фиксирующую жидкость декантируют без це нтрифугирования.

Остальные операции проводят аналогично примеру 1: при промывке и обезвоживании пробы центрифугируют после каждой обработки 5 мин при

2000 об/мин, при предварительной пропитке пробы центрифугируют 15 мин при 4000 об/мин, пропитку в чистой смоле осуществляют в течение 18 ч с последующим центрифугированием при 6000 об/мин в течение 20 мин, Предлагаемый способ позволяет получить качественные препараты молочных белково-жировых продуктов, изучить их ультрамикроструктуру, установить размер структурных элементов, в том числе жировых шариков, толщину их оболочки, мицелл казеина, толщину дисперсионных прослоек и

13705

20

Составитель H.Àáðàìîâà

Техред M.Õîäàíè÷

Корректор С.Черни

Редактор А.Маховская

Заказ 414/44

Тираж 847

В1ПП1ПИ Государственного комичета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д,4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, г,ужгород, ул,Проектная,4 провести статистическую обработку полученных данных.

Применение водных растворов четырехокиси осмия, фиксация при комнатной температуре, исключение ацетона при промывке, обеввоживания, предварительной пропитке и центрифугирование после каждого этапа обработки материала дает возможность повысить качество исследуемых препаратов на

80-85Х.

Использование предлагаемого способа позволяет также разработать научно обоснованную технологию стерилизованных кремов с кофе и какао со сроком хранения до трех лет и дает воэможность усовершенствовать технологию приготовления мороженого.

Формула изобретения

Способ приготовления препаратов молочных белково-жировых продуктов для изучения их микроструктуры методом электронной микроскопии, о т л ич а ю ш и и с я тем, что, с целью повышения качества препаратов, в качестве исходного сырья используют 30 высокожирные смеси мороженого и сте60 6 рилиэо ванные молочные белково-жировые кремы, которые фиксируют в водном

27.-ном растворе четырехокиси осмия, приготовленном на дистиллированной воде, с pkl 6,0 — 6,4 в течение 20—

30 мин, центрифугируют в течение

5 — 10 мин при ?000-2500 об/мин, промывают в этиловом спирте с конценграцией 69-727., обезвоживают сначала в этиловом спирте с концентрацией 79-827., а затем с концентрацией 95-97ã. и трижды — с концентрацией

99,9-1007. с последующим центрифугированием после каждой промывки в течение 5-7 мин при 2000-2500 об/мин и проводят пропптку препарата смесью этилового спирта с концентрацией

99,9-1007. и эпоксидной смолы в три этапа: на первом этапе в соотноше- нии 3:1, на втором н третьем в соотношении 1:1 н 1:3, центрифугируют после каждой пропитки 10-15 мин при

4000-5000 об/мин, осуществляют заливку в эпоксидной смоле в течение

15-18 мин с последующими центрифугированием в течение 20-30 мин при

6000-8000 об/мин, полимеризацией, изготовлением срезов, размещением их на сетке, контрастнрованием и просмотром в электронном микроскопе,