Питательная среда для выделения и отбора микроорганизмов- продуцентов бактериальной @ -глюканазы

Питательная среда для выделения и отбора микроорганизмов- продуцентов бактериальной @ -глюканазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к микробиологии , а именно к питательным средам для экспресс-методов выделения и отбора микроорганизмов продуцентов Jb -глюканазы. С целью повьшения точности выделения и отбора активных штаммов - продуцентов Jb -глюканазы в питательную среду, содержащую пептон, глюкозу, гидролизат дрожжей , минеральные соли, внося г в качестве субстрата лихенин, окрашенный активным красителем ярко-оранжевьп-{ ЖТ, который расш;епляется продуцентами J -глюканазы до олигосахаридов, диффундирующих в гель агара. О выделении и отборе активных продуцентов уз-глюканазы судят по величине зон расщепления лихенина вокруг колоний. Среда имеет следующее соотношение компонентов, мас.%: агар-агар 3,0- 3,5, пептон 2,0-2,3; глюкоза 0,1- 0,12; гидролизат дрожжей 0,3-0,4; натрий хлористый 0,5-0,7; калий фосфорнокислый двухзамещенный 0,1-0,12; лихенин окрашенный 0,15-0,18; вода остальное. Среда позволяет быстро и точно отобрать активные продуценты о -глюканазы. 3 табл. (g

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„I45484S А 1

150 4 С 12 Н 1/20, 9/48//(С 12 N 1/20, С 12 R 1:125) ОПИСАНИЕ HSOEPETEHI48

К A BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Изобретение относится к микробиологии, а именно к питательным средам для экспресс-методов выделения и отбора микроорганизмов — продуцентов ,/ -глкканазы. 5

Цель изобретения — повышение степени точности выделения и отбора активных штаммов — продуцентов „Э-глюканазы.

Изобретение заключается в том, что

10 ( для выделения и отбора активных продуцентов 6 — глюканазы используется агаризованная питательная среда, ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

Il0 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4246744/28-13 (22) 18.05.87 1. (46) 30. Ol . 89. Бюл. Р, 4 (71) Научно-производственное объединение "Фермент" (72) Т.10. Падегимас, О,-В.D. Тряпшене, В.Ю. Авиженис и P.Ê. Рашаи (53) 577 ° 15(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 1246596, кл. С 12 N 1/20, 1983.

Авторское свидетельство СССР

М 1280005, кл. С. 12 N 1/20, 1984. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ

И ОТБОРА МИКРООРГАНИЗМО — ПРОДУЦЕНТОВ БАКТЕРИАЛЬНОЙ,/ь -ГЛЮКАНАЗЫ (57) Изобретение относится к микробиологии, а именно к питательным средам для экспресс-методов выделения и отбора микроорганизмов продуцентов,/5 -глюканазы. С целью повышения точности выделения и отбора ак1 содержащая пептон глюкозу гидро» лизат дрожжей, минеральные соли, в тивных штаммов — продуцентов „/ -глюканазы в питательную среду, содержащую пептон, глюкозу, гидролизат дрожжей, минеральные соли, вносят в качестве субстрата лихенин, окрашенный активным красителем ярко-оранжевым

ЖТ, которыи расщепляется продуцентами Р -глюканазы до олигосахаридов, диффундирующих в гель агара. О выделении и отборе активных продуцентов

Р-глюканазы судят по величине зон расщепления лихенина вокруг колоний.

Среда имеет следующее соотношение компонентов, мас.Е: агар-агар 3,03,5, пептон 2,0-2,3; глюкоза 0,1—

0,12; гидролизат дрожжей 0,3-.0,4; натрий хлористый 0,5-0,7; калий фосфорнокислый двухзамещенный 0,1-0,12; лихенин окрашенный 0,15-0,18; вода остальное. Среда позволяет быстро и точно отобрать активные продуценть

Р-глюканазы. 3 табл.

2 том числе калий фосфорнокислый как активатор биосинтеза /3 -глюканазы, а в качестве субстрата — лихенин, окрашенный активным красителем яркооранжевым ЖТ, расщепляемый микроорганизмами, продуцирующими /Ь -глюканазу до олигосахаридов, которые благодаря меньшему молекулярному весу диффундируют в гель агара, на которой о выделении и отборе активных продуцентов /3 -глюканазы судят по величине зон расщепления лихенина вокруг колонии, которые выглядят прозрачными на оранжевом фоне. з

145484

Пример 1. Приготовление пи- тательной среды. Для выделения и отбора микроорганизмов - продуцентов

Р -глкканазы готовят плотную пита5 тельную среду следующего состава, ма с. 7.:

Агар-агар 3,0

Пептон 2,0

Глккоэа 0,1

Гидролиэат дрожжей 0,3

Натрий xJIopHc TbIfI О, 5

Калий фосфорнокислый двухзамещенный 0,1 15

Лихенин окрашенный 0,15

Вода Остальное

Растворяют 10 r лихенина из Cetraria islandica в 600 мл 0,1 М раствора натрия фосфорнокислого трехэа- 20 мещенного при 70 С. К этому раствору о (рН 10) при перемешивании добавляют

400 мл 0,14 М раствора красителя ярко-оранжевый ЖТ.

Реакцию проводят 2 ч при 70 С и 25 о постоянном перемешивании. Иэ охлажденной реакционной смеси продукт осаждают зтиловым спиртом в соотношении 1:1,5 об/об, т.е, 1,5 л. 0ca док отмывают от остатков непрореаги- З0 ровавшего красителя 80%-ным этанолом.

После этого осадок еще два раза промывают 96Х-ным этиловым спиртом и высушивают.

Питательную среду в объеме 500 мл

35 готовят следующим порядком. К 450 мл воды добавляют и растворяют 15 г агар-агара, 10 г пептона, 0,5 г глккозы, 1,5 г гидролизата дрожжей, 2,5 г натрия хлористого и 0,5 г ка- 40 лия фосфорнокислого двухзамещенного, раствор кипятят 2-3 мин при интенсивности перемешивания до полного растворения. К 50 мл воды добавляют

0,75 г лихенина окрашенного, подогре- 45 вают до 60 С и постоянно перемешивао ют в течение 20 мин. После этого все компоненты объединяют, доводят рН до 7,2 NaOH и автоклавируют при

115 С в течение 40 мин, Питательную среду охлаждают до

55 С и разливают по стерильным чашкам Петри (в одну чашку 10 мл). Для проверки стерильности питательную среду в чашках Петри выдерживают в термостате при 37 С в течение 24 ч, 10

Питательная среда для выделения и отбора микроорганизмов — продуцентов бактериальной у-глюканазы, содержащая агар-агар, пептон, глюкозу, гидролизат дрожжей, субстрат и воду, отличающаяся тем, что, с цепью повышения степени точности выделения и отбора активных штаммов—

5 продуцентов /» -глюканазы, она дополнительно содержит хлористый натрий, фосфорнокислый двухзамещенный калий, а в качестве субстрата — лихенин, окрашенный активным красителем ярко50

Технология приготовления питательной среды аналогична примеру 1, а количество ингредиентов в четырех вариантах представлено в табл. 1.

На вышеуказанной питательной среде стерильные чашки Петри засевают приготовленным материалом из различных природных объектов или музейные штаммы микроорганизмов. Засеянные чашки Петри помещают в термостат при а

37 С на 48 ч. Микроорганизмы, продуцирующие р -глюканазу, оценивают по величине зон расщепления лихенина вокруг колонии. Зоны расщепления лихенина четко выражены, прозрачны в оранжевом фоне.

Результаты четырех вариантов питательной среды при выделении и отборе продуцентов „9 -глюканаэы приведены в табл. 2.

Результаты опытов свидетельствуют о том, что предлагаемая питательная среда для выделения и отбора продуцентов /ъ -глюканазы содержит все необходимые компоненты, обеспечивающие в процессе культивирования направленный биосинтез фермента а -глюканазы.

Определены оптимальные дозы компонентов в питательной среде. Как видно иэ данных табл,1 и 2, малые дозы компонентов (вариант I) не дают положительного эффекта, а большие (вариант

IV) экономически не выгодны.

Доказательство преимущества питательной среды с лихенином окрашенным и известной питательной средой по выделению и отбору продуцентов /Ъ-глюканазы представлены в табл. 3.

Данные в табл. 3 свидетельствуют о точности и направленности питательной среды для выделения и отбора продуцентов /ь -глюканазы.

Формула и з о б р е т е н и я

5 1454848 оранжевым ЖТ, при следующем соотношении компонентов, мас.й:

3,0-3,5

2,0-2,3

0,1-0,12

Агар-агар

Пептон

Глюкоза

Т а б л и ц а 1

Ингредиент

Состав ингредиентов, мас.Ж

Варианты питательной среды

II III 1 т

Агар-агар

2,5

3,0

4,0

3,5

2,0!,7

Пептон

2,3

2,5

0,08

Глюкоза

0,12

0,15

0,1

0,5

0,4

0,2

0,3

Гидролизат дробей

0,7

Натрий хлористый

0,3

0,8

0,5

Калий фосфорнокислый двухзамещенный

0,08

0,15

0,12

0,1

0,20

0,18

0,15

0,1

Лихенин окрашенный

Остальное Остальное Остальное Остальное

Вода

Таблица 2

Микроорганизм

Варианты питательной среды

III ели- Вели-,/3 -ГА, ина чина ед/мл о зоны, -rA

/мл

„а -ГА, ед/мл

Величина зоны, ми

Величина зоны мм иы, Bacillus subtilis

15е3 . 22 18â7 22 19 0 20 17 5

11,8 . 23 18,5 23 17,5 20 . 15,7

22 17,1 22 15,9, 20 14,5

5,1

19

20 220 20 19 7 22 190

11,8

24 23 6 24 21 9 20 206

1,2,0 ф

Р -ГА -p -глюканазиая активность.

В. subtilis K-52

В. subtilis-65 ,В. subtilis-3

В. subtilis Т-86

Гидролизат дрожжей

Хлористый натрий

Фосфорнокислый двух замещенный калий

Указанный лихенин

Вода

0,3-0,4

0 5-0,7

0,1-0,12

0,15-0,!8

Остальное

1454848

Т а блица 3

Микроорганизм

Известная питательная среда

Предлагаемая питательная среда

Величина Р-ГА, эоны, мм ед/мл

Величина J3-ГА, эоны, мм ед/мл.

В. subtilis ЕЯ

В. subtilis К-52

18,7

18,5

В. subtilis 65

В. subtilis 3

B. subtilis T-86

17,1

22,2

23,6

Составитель В. Соина

Редакч ор Н. Киштулинец Техред М.Ходанич . Корректор С,1!1екмар

Тираж Я6:

Заказ 7411/30

-Подписное

Производственно-полиграфическое предпРиятие, r Ужгород, ул. Проектная, 4

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5