Способ определения наличия ингибирующих веществ в молоке

Способ определения наличия ингибирующих веществ в молоке

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к молочной и ветеринарной промышленности и может быть использовано при ветсанэкспертизе молока, а также при контроле качества молока на предприятиях молочной промышленности. Целью изобретения является ускорение процесса и повышение точности. Для определения ингибирующих веществ в молоке в исследуемую пробу молока вносят поочередно STREPTOCOCCUS THERMOPHILUS и смесь индикатора и пептона. В качестве индикатора используют тетразолиевый синий с концентрацией 0,001-0,002% в смеси, а концентрацию пептона устанавливают 0,3-0,4%.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (51)4 С О1 М 33/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМУ СВИ4ЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ fKHT СССР (21) 4307232/28-13 (22) 03,08.87 (46) 15,07,89. Бюл. У 26 (71) Украинский научно исследовательский ветеринарный институт (72) А,И,Тютюн, Н.К,Оксамитный и С,A.Äåìåíòüåâà (53) 637.127.6(088,8) (56) ГОСТ 23454-79. Молоко, методы определения ингибирующих веществ °

М., 1979. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ ИНГИБИРУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ В МОЛО1<Е (57) Изобретение относится к молочной

Изобретение относится к молочной и ветеринарной промышленности и может быть использовано при ветсанэкспертизе молока, а также при контроле качества молока на предприятиях молочной промьппленности.

Целью изобретения является ускорение процесса и повышение точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Для исследований готовят рабочий раствор на дистиллированной воде, содержащей 0,001Х тетразолиевого синего и 0,47. пептона. Раствор автоклавируют при 112 С в течение 30 мин.

Им можно пользоваться на протяжении месяца при условии хранения в холодильнике при температуре (4-8 С).

В чистые пробирки отмеряют 10 мл исследуемого молока н выдержикают его в водяной банс прп 85...90 С в

„„Я0„„1493949 А 1

2 и ветеринарной промышленности и может быть использовано при ветсанэкспертизе молока, а также при контроле качества молока на предприятиях молочной промьппленности, Целью изобретения является ускорение процесса и повышение точности. Для определения ингибирующих веществ в молоке в исследуемую пробу молока вносят поочередно

Streptococcus thermophilus и смесь индикатора и пептона. В качестве индикатора используют тетраэолиевый синий с концентрацией 0,001-0,0027 в смеси, а концентрацию пептона устанавливают 0,3-0,4%. течение 10 мин.Затем после снижения температуры до 45 С в каждую пробирку с исследуемым молоком добавляют по 0,3 мл 16-18-часовой культуры (тест-культуры) Streptococcus thermophilus и по 1 мл приготовленного рабочего раствора тетразолиевого синего и пептона (смесь) комнатной температуры, Трехкратным переворачивани- М ем пробирок перемешивают их содержи- © мое. Пробы молока с реактивом и куль - « ь турой ставят в водную баню при 42- Ц, 43 С, Время погружения пробирок в водяную баню считают началом реакции.

Результаты учитывают через 1 ч 30мин, е по изменению цвета молока. Если столбик молока приобрел синпи цвет,знаЬ чит, в молоке не содержится ингибирующих веществ, Белый цвет смеси указывает на наличие ингнбиторов в молоке.

Способ основан на взаимодействии фермента культуры микроорганизмов

1493949 лактатдегидрогеназы, выделяемой ими в процессе дыхания с тетраэолиевым с синим. При этом молоко, не имеющее б ингибиторов, синеет по истечении т

1 ч 30 мин. В ходе реакции в моло5 д ке не проявляются другие цвета, л кроме синего, что упрощает способ и х повышает достоверность результатов.

Поочередное внесение тест-культу 10 в ры смеси тетразолиевого синего с пептоном в исследуемую пробу молока п перед началом реакции позволяет всем реагирующим компонентам (индикатор, б тест-культура, ингибитор, если имеется в наличии) контактировать на

P протяжении всего контрольного времени. Кроме того, такое поочередное внесение компонентов предотвращает 1 такое взаимодействие (индикатор + 20 тест-культура) вне исследуемого молока, какое происходит с метиленовым голубым (прототип), где предварительно готовится смесь тест-культуры с индикатором для анализа. Все это су- 25 щественно влияет на скорость протекания .реакции (ускорение процесса) и достоверность результатов.

Окислительно-востановительный по40 тенциал тетразолиевого синего выше, 30 чем у резаэурина и метиленового гулубого, что также характеризует более высокую чувствительность индикатора и способа в целом. Так, например, наличие стрептомицина при помощи тетразолиевого синего можно определить в молоке при концентрации его 1 мкг/мл и более, с помощью резазурина — 5 мкг/мл, а с метиленовым голубым — 30-50 мкг/мл.

Концентрация тетразолиевого синего 0,001-0,002 в реагирующей смеси является оптимальной, Увеличение концентрации до 0,01 ведет к проявлению ингибирующего действия самого индикатора на тест-культуру, что проявляется в постеленном снижении интенсивности окраски реагируемой смеси, вплоть до полного отсутствия реакции при концентрации тетразолиевого синего 0,05%, Использова50 ние концентраций индикатора 0,00030,0004-0,0005 и т.д. нецелесообразно по причине того, что интенсивность окраски при этом хуже, чем при установленных оптимальных значениях.

Это объясняется недостаточным количеством индикатора для полного прохождения реакции.

Данный способ позволяет определить ледующие ингибирующие вещества:антииотики (пенициллин, стрептомицин, етрациклин и др.), консервирующие и езинфицирующие соединения (формаин, перекись водорода, йодистые и лорные препараты и др.). Ингибирующие вещества задерживают размножение молоке полезной молочнокислой микрофлоры, используемой в виде заквасок ри изготовлении молочных продуктов.

Пример 1. В две чистые проирки отмеряют по 10 мл исследуемого молока. В первую пробирку вносят аствор пенициллина, содержащий 1 ИЕ.

Обе пробирки ставят в водяную баню и выдерживают при 90 С в течение

0 мин. После остывания молока в пробирках до 45 С в каждую из них добавляют по 0,3 мл 16-18 часовой культуры Str, thermophilus и по 1 мл рабочего раствора, содержащего 0,01% тетразолиевого синего и 4% пептона.

Трехкратным перевертыванием пробирок перемешивают их содержимое. Затем пробирку с приготовленной смесью ставят в водяную баню при 43 С. Время погружения пробирок в водяную баню считают началом анализа. Результаты реакции учитывают через 1 ч 30 мин.

В первой пробирке молока (с концентрацией пенициллина 0,1 МЕ/мл) осталось белым, во второй стало синим.

Пример 2 ° В две чистые пробирки отмеряют по 10 мл молока. В обе пробирки вносят по 20 мкг стрептомицина и ставят их в водяную баню при о

85 С íà 10 мин. После охлаждения молока в пробирках до 45 С в каждую пробирку добавляют по 0,3 мл тесткультуры Str,thermophilus. В первую пробирку вносят 1 мл рабочего раствора, содержащего 0,01% тетразолиевого синего и 4 пептона, Трехкратным перевертыванием пробирок перемешивают содержимое. Затем пробирку с приготовленной смесью ставят в водяную баню при 42 С. Через 1 ч 30 мин в первой пробирке учитывают результаты. Иолоко осталось белым (концентрация стрептомицина 2 мкг/мл), Во вторую пробирку через 2 ч вносят 1 мл рабочего раствора резазурина (0,05 ) и снова ставят ее в водяную баню на

15 мин, после чего учитывают результаты. Во второй пробирке молоко (с концентрацией стрептомицина 2 мкг/мл) приобрело розовый цвет, 93949

Составитель Н,Абрамова

Техред Л.Олийнык Корректор М. Васильева

Редактор М.Циткнна

Заказ 4103/42 Тираж 789 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.ужгород, ул. Гагарина, 101

14

Формула изобретения

Способ определения наличия ингибиру ощих веществ в молоке, предусматривающий внесение в исследуемую пробу молока тест-культуры Streptococcus

thermophilus и индикатора с использованием пептона, полученную смесь перемешивают, выдерживают в водяной бане и определяют наличие ингибирующих веществ по изменению цвета молока, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа и повышения точности, в исследуемую пробу мо5 лока Streptococcus thermophilus вносят поочередно со смесью индикатора и пептона, при этом в качестве индикатора используют тетразолиевый синий с концентрацией 0,001-0,002Х в смеси, а концентрацию пептона устанавливают равной 0,3-0,47.