Способ получения производных полипептидов или их фармацевтически приемлемых солей

Способ получения производных полипептидов или их фармацевтически приемлемых солей

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение касается производных полипентидов ,в частности, соединений общей ф-лы 1: R-PHE-W-NH-chr<SB POS="POST">2</SB>-CH(OH)-CH<SB POS="POST">2</SB>(O)R<SB POS="POST">1</SB>, где R -трет.-бутилоксикарбонил или трет.-бутилоксикарбонил PRO

W - HIS или N - метил HIS

R<SB POS="POST">1</SB> = A-PHE-OH -(при A=LYS

JLE) или LYS

STA

PRO-OCH<SB POS="POST">3</SB>

или NH -chr<SB POS="POST">4</SB>-CH<SB POS="POST">2</SB>- NH - chr<SB POS="POST">5</SB> - C(O) OH [при R<SB POS="POST">4</SB> - втор. бутил, R<SB POS="POST">5</SB> = -CH<SB POS="POST">2</SB>-C<SB POS="POST">6</SB>H<SB POS="POST">5</SB>]

1,2,3,4 - тетрагидроизохинолин- 2-ил

1,2,3,4-тетрагидро-3-метоксикарбонилизохинолин-2-ил

4-фенилметилпиперидин-1-ил

1,2,3,4 - тетрагидро-3-аминокарбонилизохинолин-2-ил

1,2,3,4 - тетрагидрохинолин-1-ил

R<SB POS="POST">2</SB> -циклогексил или изобутил, или их фармацевтически приемлемых солей, которые могут быть использованы в медицине как биологически активные вещества. Цель изобретения - создание более активных и менее токсичных веществ указанного класса. Их синтез ведут реакцией соединений ф-л П и Ш: HW-NH-chr<SB POS="POST">2</SB>-CH(OH)-CH<SB POS="POST">2</SB> C(O) R<SB POS="POST">1</SB> (П) или его кислотно-аддитивной соли с R-PHE-OX (Ш), где W, R<SB POS="POST">1</SB> - даны выше

OX - карбоксильная группа, активированная для проведения ацилирования. В случае необходимости защитные группы удаляют и выделяют целевой продукт в свободном виде или в виде соли. Новые вещества оказывают ингибирование на ангиотензин - расщепляющее действие ренина IN VITRO. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСН ИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР! (21) 3884503/23-04

° °

22) 26. 04, 85

46) 30.07. 89, Бюл. 1! 28 (71) Пфайзер И»к. (ЦВ) (72) Джэзит Гинг Биндра, Эдвард Фокс

Клайнман и Роберт Луис Р< зяти (118) (53) 547,964.407(088.8) (56) Шредер Э., Любке К. Пептиды. Т,3, М.: !"1ир, 1967, с, 116, (54) СПОСОБ ПО 1УЧЕ!111Л ПРО!!ЭВОДНЬ1Х ПО.1ИПЕПТИ11ОВ И1П1 11Х ФАР! 1А!(ЕВТИЧЕСКИ

IIP ИЕИПЕ!"11 IХ СО:1 Е!! (57) Изобретение кос не reя производных полипептидов, в час гн,>с ги соединений общей ф-лы (1): R-Phe-1>--11Н-CH

К -СН(ОН)-СН. (О)Н „(де Н вЂ” трет.-(>yтилоксикарбонил или трет,— б>утилоксикарбонил — Pro; 4 — His или N — метил

His; R, — А--Phe-OH - (при А = Lys;

Ile) или I.ys; 8>ts; Pro — OCH>, или

NH СНК -СН NH CHR (. (Î)ОН (при R q втор.бутил, К - -01! г C",.11ю); 1,2, 3,4-тетрагидроизохинолин-2-ил; 1, 2, 3, 4Изобретение относится к способу получения производных полипептидов новых биологически активньгх соединений, которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретения — способ получения новых произ»одных полипе»тидов малотоксичных i<>единений, обладающих более высокой рс г»п(— ингибирующей актинност ью.

П р и и с р I,(N (t îóòèëîêñèêàðбс н»л) — -Фе) .

„.SU„„1498392 А 5 (>1) 4 С 07 К 5/10, 7/06//А б! К 37/02. -тетрагидро-3-метоксикарбонилиэохинолин-2-ил; 4-фенплметилпиперидин-1— ил; I, 2, 3, 4-тетрагидро-3-аминокарбо- нплизохинллин-2-ил; 1,2 13,4-тетрагидрохинолин-1-ил; R q — циклогексил, или изобутил, или их фармацевтически

»риемлем(х сс лей, которые могут бь ть использованы в мелицине как биологически активные вещества. Цель изобретения — создание более активных и менее токсичных веществ указанного класса, Их синтез ведут ре;:кцией соединений Ж-л II и III: HN-Ь!Н-СНК.—

-ГН(ОН)-СН С(О) R, (II) или его кислс>тно-алдитивной соли с R-РЬе-ОХ (T T.1 ); где 14 ° R — даны вьляе; ОХ карбоксильная группа, активированная для проведения ацилирования, В случае необходим(сти защитные группы удаляют и выделяют целевой продукт в свободном виде пли в виде соли. Новые вещества оказывают ингибирование

»а ангиотензин-расгяепляющее действие ренина in vitro, 2 табл, А, (11-Альфа — (t-бутнлоксикарбонил)-N-эпсилон-бензилоксикарбонил-лизин )фенилаланин, бензиловый эфир.

N-Гидроксибензотриазол (!62 мг, 1,2 ммоль), И-метплморфолин (10 1, 2 мг, 1 ммол ь), L-фенилал анин, бензиловый эфир р-тллуолсульфоната (428 мг, 1 ммоль), 11-альфа-(t-бутилоксикарбонил) -N эп< n>loH áåísèëîêñèкарбонил-L-лизин (456 мг, 1,2 ммоль)

1-цикло ге к с ил-2- (2--мирфолино этил)карбодиимид мето — р — i >дуол сульфонат (635 мг, 807 чист г(,, 1,2 ммоль) по1498 >92 следовлтельн<> рлстноряют El метиленх»ориде при О С и по><учл><»>(ий< я рлстс> нор нзбллтынлют н течение 19 ч»ри о, 20 С, Реагирующую г мес ь по си едо н лт опьио ото>нл><>т 75 мп 5, 5Х-«oro водного раствора НС1, 75 мп насыщенного водного растнорл МлНСО з и 75 мц с<>ляного раствора и eylивания получают 669 мг продукта в виде пени (Н ЯИР, СРС 1, 1, 5 d, 911S(B0C)3, который используют н последуюпн м без дальнейшей с>чистки.

Б, (N-.3nñnëoí-беи зилоксиклрбонил — 15

»изин) -фенилаллнин, бензилоный эфир, гидрохлорид °

t N-АльАл-(t-бутилоксиклрбоиил)-Nэпсилон-бензилоксиклрбонил-лизин )фенилаланин, бензиловый эфир, >голу- 20 ченный на этапе Л (650 мг, 1 ммоль), р:>створяют в 7 мп 3, 7 н, НС! диок— о слн и остлнлян>т Ita 1 ч при 20 с.Раствор в последующем упаривлют досуха, получают 583 мг млслянис ro го исходного продукта, который в дальнейшем исполь.зуют без очистки (Н ЯМР, СД ОД, 5,2 д", 2HS (бензин СНI) 1.

В. (N (t Áóòèëîêñèêað6îíèë)-станин ) — (И-эпсилон — бензилоксикарбоиил- 30 лизин)-фенилаллнин, бензиловыи эфир.

Бензилоный эфир (-N-.п;пилон-бензилоксикарбонил-лизин) -фенилалл»инл, п.>лученный нл этапе Б (583 мг, 1 ммоль), N-метил-морфолин (101, 2 мг, 35

1 ммоль), N-(t — бутилоксикарбонил)— с татин (330 мг, 1, 2 ммоль), 1! — гидроксибензотриазол -(162 мг, 1,2 ммоль) и

1-циклогексил-3 (2-морфолинэтил) -карбодиимид Mpто-р — толуол eул holtлт 40 (635 мг, 807 частоты, 1,? ммоль) no—

< ледовательно растворяют н 50 мл метиленхлоридл при 0 С, получающийся раствор размешивают в течение 19 ч при 20 Г, Гмесь обраблтывлют, клк 45 указано в пункте А, получают 760 мг продукта, который использу>от без дальнейшей очистки на следующем этлпе синтеза(H ЯМР, СДС1„, 1,5 d, 9НБ(ВОС)).

Г. С гdTHH (N-ýnñHëoí-бензилоксикарбонил-ли:зин)-фениллллнин, беHзиловый эфир, гидрохлорид. !.И-(t-Бутилоксиклрбонил) — статин (N-3ncH nAEI-6>зн:зилок с>> карбони>з-.ln > Et>I 1Фенил алании, 6РН зил<>ний эфир, и >лученний на оТапе В (760 мг, 1 ммоль), растворяют н 10 мп 3, 7 н ° НС1/ди >кО сан и o< .Tà>>JI>II< > ил 1 ч»ри 20 с. >з v с мес ь обрабатывают, как укл:>,иto в

»унк re Б, »очучлют 620 мг продукта в ниде»с >и > ! Я! 1Р > СЛ 1,Л, 211 Б (беи зич СН) ), которую ис»ользуют бс.з;со»они»те.il> и >и о <ис- i ><и ил с ледующем э r;liie, П. (N — Л..ьфл — (t — бутилс»с<-ик<>рбонил)—

-N -им — (t — бутилоксиклрбоиил) — гистидинс т лтин- (N- > «с илон-бе из илок си к арбонил<и.>ин)- фе нилал анин, бен зиловый эфир °

Беизилоный эфир статин-(N-эпсилон—

Г; зилокс ик lpá<>EIHJI-лизин) — фенилллаl lIJ рохлорид, полученный на эта1Ie I (600 мг, 0> 857 ммоль), N —; етилморфолин (86, 7 мг, О, 857 ммоль), N-лл ьфл-(! -6ут ил<>кс.и кар бони >) -N-им-(t á$тилоьсиклрбонил) — !.— гH»T»дин (365 мг, 1, <03 III.ton ь), N — гидроксибенз<>т риаз оп (1 35 мг, 1, 03 ммо>l E>) и !в циклоге>сеип — 3-(— морф лин э >тил)-клрбс>диимиц мето — р-ro>Iso>I сульфонат (545 мг, 1, 03 ммо.> ь) последов лтел ьнс> растворяют н 50 мл метиленхлорида

»ри 0 Е; и»еремешинлют н течение 19 ч с>

»ри 20 С, Полу»леь<ую < месь обрабатывают, как указано l> пункте А, полуl с<а<с>т 770 мл»родуктл в ниде пены (Н

Я! П, СДС >, 1,5 <>, 2Н S (POC) ) и

1,6 <>, 9Н S (Вс>с.), который и»пользу><>г ил с лодующем .> r>Ine без очистки, F. Гис ги>1ин-с > атил-(11- эпсилон-бен— зилоксиклрбонил-ли зин)-фенилаланин, с>< и з,".повый .эфир, дигидрох<>орид, (N-Альфа-(t-бутилоксикарбонил) — (tбу тилак сик арбонил) -гистидин )-статин(М вЂ” эпсилон-бе и зилок си кар бонил-ли.зи») — фецилапанин, бензилоный э<рир, »о tyne»FII нл:этапе Д (770 мг, 0,85 ммоль), растворяют в .10 мл 3,7 н °

НС1/диокс;ш и оет<звляют íà 1) 5 ч при

20"Г. Затем смесь обрабатывают, как указано н пункте Б, с получением в виде пени 602 мг продукта (>Н, Я11Р

СЛ О!1, 5,2 <>, 2Н S (бензил ГН )), коз<>рый используют н дальнейшем без очистки, Ж, (N-(t-Бутилоксикарбонил) — фенилапанин )-гистидин-статин-(N-эпсилонбензилоксиклрбонил-лизин)-фенилаланин, бензилоный эфир, Гистидин-статин-(N эпсилон-бензил- к;>рбонил-лизин)-фени.плланин, бензиловый эфир, гидрохлорид> полученный на

sT>ane Е (602 мг, 0,689 ммоль), N-метил-морфолин (139 мг, 1, 38 ммоль), И-(t-бутилс>ксикарбонил)-L-фенилалашш (219 мг, О, 827 ммоль), N-гидроксибензс три;» >л (1!2 мг, 0,827 ммоль) и

20

30

40

50

5 /

1-цикло гекс.и!I — 3-(? -. I< рф > lll tl<»гни)— карбодии>сид мето — р — т<,!Iv<>!t <:ул?,3 >и,>т (438 мг, О, 827 ммоиь) 1и>след<>интел?.— но растворяю т в 50 Г11 Гlс TH>!eHx!1<2)2II о, да ири О С II посty teни>,<й р,!ств >р пере— ме?пинают и т че:1ие 19 ч ири 20 Г, В последующем р< «гируюп(у><> cìåñ ?. обрабатывают, как указано в пункте Л, <. получением н виде пены 555 мг продукта, который чистят хромато! рафически (силикатный гель, 95: 5 СН >(:! и 1)еОН) получают 136 мг очищенного продукта в виде пены(Н ЯМР, СДСI, ),5 d, 9Н S(aOC))

3. Названное вещество, (N-(t-Бутилоксикарбонил) †феиилаланин )- гистидии-статин-(N — ýltcèë<2116ензилоксикарбонил-чизин)-фенилаланин, бензиловый эфир (136 мг, О, 17 ммоль) и 70 мг 207.-ного Рс1(ОН)2 последовательно прибанляют к 15 мл метанола и получаемую сме<-.-. гидрогенизируют в течение 1 и ири 50 Пси

H < и 20 С. Затем смесь фильтруют чео рез Гуиер-цел, сушат и получают 76 мг стекловидной массы, которую расти— рают в порошок с эфиром с получением 63 мг очищенного (t)-(t-бутилоксик арбoíè.7) — феиилала HH? )- гис гидин-C ã ë— гин-ли зи и-<)>е ??ил аи анин н ни;!е иор ошк а (Н Я)1Р, СД ОД, 1,5 d, 9Н Б(ВОС)), Пример 2, (N †(t-Бутилоксикарбонил) †>е )†)??с-(:TH †(>I?I?I<2 †(2-втор. бутил-этилен))-Фе соль ацеTHJIo?30H кислоты °

А, N-(t-Бутилоксикарбоиил)-L-изолейцинал.

Готовят смесь >.-изолейцин метило— ного э*ира (24, 3 г, О, 134 ммоль) и триэтиламина (13, 5 г, О, 134 ммоль) в метиленхлориде (210 ми), к ней ио каплям добавляют растнор дитертбутил— дикарбоната (AldRich, 29,1 г, 0,134 ммоль) в метиленхлориде (25 мл) гри О С, По завершении добавления смесь нагревают до комнатной температуры в течение ночи, затем фильтруют, Фильтрат тщательн<2 ???????????????? ?????????? (3 ?? 75 ????), ???????????? ?????????????????? ??, 1 ??, ????i, (! 100 ????) ?? ???????????????????? 1)???????? 4 (1 ??>т), высушивают и выпаривают с получением метилоного эфира Ы-(t: †бутилоксикарбонил)-L-изолейцина н виде масла (30,7 г, выход 937, Н Я1)) (СДС! ); т) : 092 (д, .т = 7, 6)l); 1,43 (с, 9Н);

3,70 (с, 3H); 4,I7 (дд, 1 = .2, 9, IH); 5 >03 (д,,l = 9, Ill) . Растно)2

98 392

6 1< тtt!1< ><3 <2 t < > >II I> 7 11 (с б . ил< 1; Ги 3)2 г < гп<л ) — 1,— и < лейн:l ll н Ill>;I e м:! JIB

,15,0 г, 61,1 м1 л?.) в бс 3«дном толуоле (260 мл) охлажда>>т д<: — 78 С и

I2,1cтвор диизобутила а>тюминий гидрата в гексане (1 >3 hc!) по капиям д1бавляют так, чтобы ири этой экзо— термической реакции температура не о иовьппалась вып(е -65 с. затем следуо.

eт перемешииание ири 78 (., ио завершении смесь тщательно охла>?<дан>т с иоГ<с>?пью 15 мл метанола (температура о смеси не дслжна превышать -65 (.), затем следует добавление 200 мл раствора Ра?пель-соли. После нагревания до комнатной температуры отделяют органический слой, который зкстрагируют з<?>ир<>м (3 х 200 мл), повторно д<>бавляют раствор Ра<пель-соли в случае необходимости растворения аммониевых солей. Комбинированный органический экстракт 13htcóøHâàþò (.!а 804 ) и выпаptII3,7l>T с получением промежуточного продукта в виде масла. Это масло хранят ири — 78 С во избежание возможной рецемизации и использу>от без очистки иа следующем этапе синтеза (132 г, вых< д 987., Rf = О, 32 в 351-ном эфире в гексане, Н Я!(Р (.1CI> . с : 1,00 (д, .! = 7, 6Н); 1,46 (с, 9H); 9,65 (.- )Н)3

Б . (Ам??но — (2-с ек-бутил-этилен) 7— фе?ти?1,3217HIII?, бензи:тдвый эфир, дигидрохлорид.

Смесь N-(t-бутилоксикарбонил)-Lизолейцинала (2, ОО r, 9, 29 ммоль) и бе н зилоно го эфира и-то эилата фенилаланииа (кем<тли г, 3, 78 r, 8, 84 ммоль) в метаноле (150 ?си) перемешивают в течение 35 мии в присутствии молекулярной сетки с шагом 3 Анстромг (Вентрон) при комнатной температуре. Затем добавляют 0,73 г (!1,6 ммоль)

N7CNRH и гмесь иеремешивак>т еще в течение I ч при комнатной температуре, Затем <.етку отфильтровывают и фильтрат концентрируют с получением маслянистого остатк7, который растворяют в концентрированном 1)аНСО и дважды экстрагируют < помощью эфира, Комбинированный эфирный .экстр IKT высушивают (N;I.ЯО ) и концентрируют с получе4 нисм масла, котор<>с чистят флэш-хроматографиейй с исио3<ьзон анием 12Х-но го этилацет 7Tа н гeкс;гие — элюенте, tl<2сле чего 11олучают 1, (>9 г бензилово-о эфиРи ((t (>ÓTII!I к<.It><:t)2<2<2íèJ!)-амиH

25%-ном .)типацет;<ге н 7 ок л!и ), г<> м»с 77о кри<.т,<л. I» >yi<)T при хр;>ненни (т, р. 5 3-55 C:, Il Я!1! (С, jC:1 3), ()":

Г>, 6 — 1, О (м, 6Н); 1, 48 (с, 911); 2,92 (д, J = 7, 211); 507 ((, 2Н); 7, 17 (с, 511); 7, 25 (с, 5н) ) . 1 лс Tli<>p

t((t áуз HJl() ксиклрб)они?!)-лмин<) — 2 — нт(?p, . утил — этилен) — фениплллнин, белли<>о- l p вь>й эфир (2,94 г, C), 17 мл<<)37ь) в ч н.

НС1 /дион с ан (1 10 мп) перел!е!1!и <<ают н течение 2 ч при комн;лтн(й темпср»ту— ре, зл!яищая от атмосферы трубой

C;»C I >. Растноритель уд;>?7яю при пони- 15 женном давлении с эфир — лзеотроп<>м и остлток растирают С эфиром с по.>7у— чением белого твердого вещества

t 2,65 г, деблокиронлнный выход 9 5%, т.р ° 183-18ч С; Rf = 0, 73 в ВИОН, И О и уксусной кислоте (4: 1: 1); Н Я!!1

<-Л3ОЛ) ° d: 1, 00 (широкое д, 6Н);

5, 13 (с, 2H); 7, 1 — 7,5 (м, 10 II))

В. (N-(t-Бутилоксикарбонил)- "r;i тин )- (а мино-(2-сек — бутил — этш>ен) )— (N-бензилоксикарбонил — фенила?3»нин), бензилоный э<3>ир (1,55 г, 3,63 ммоль), Суспензию (»мино-(2-бутилэтилен))— фенилаланин, бензилового эфира, г>гдрохлорида н метипенхлориде (40 ><7k) 30 с, охла?<(дают до О С и нейтр»:7изуют пpu этой температуре гриэтиламином (О, 808 r, 7,99 ммопь) .

N-(t-Бутилоксикарбонил) — статин (1, 00 г, 3, 63 мл<оль) и N — гидроксибензотриазоп (0, 74 г, 5, 45 л!моль) с . добавляют к суспензии при 0 С. В 7»ключение ди>!Иклог<) I«JHJII(арбодиил(ид

,О, 75 r, 3,63 ммоль) н мет>цlekkx;ir>pHде (2 мп) добавляют к с ус пензии при

0 С и полученную смесь перемешивают о в течение 3 ч при О С, л затем еще н течение 16 ч при комназ.ной температуре. Образун>щийся оса;(ок фи.3ьтруЮТ И фИЛЬТPGT КОНЦЕНТРИРУ<>Т И Г >tckie отфильтровынания нерастворимых твердь>х веществ этиллцетатный слой отмынлют насыщенным водным раствором !1»НСО (135 мп), в>к)ущивают (На БО4) и 1<1,!в плривают с получением пенистого неIIecTI3a, Последнее чистят флэш-хро <атографией, используя 35%-ный > !»Jiго (N-(t-бутилоксиклрбон>.<3) - г,ггин ) — (>мино-(2 — сек — бути;! —.>Tплеени. 1;)л»i

I3 в<-; " ll(.klk 7 (1, 96 т; !>ь!ход ЯЯ о К Г

О, .Н <7 < г

1l Я1Ч> (С;!С! ), (! : О, 6-1, (и, 12 II);

1,5 ((, 911); 4,88 (д, Л = 9, !Н);

5 06 C(., 2!I); i, 15 ((, 5!l); 7 2 ) (<., 5l1) . 1 il(òi«р (п<щ(пн<>го (, 4-(t 6óTHH<) к(.ик,ip6<>I!It. ) — "7,<тпн 1- (»мино — (2-«el(-.

6у i ii. -! — > ги !сil) 7-— !)еп>)п»lr)kikkil, г (kt»II!Iî7«>! о н>>ирii 11 1<ил(пены (1,о! г, 1, 12 t it!(>?I I > I> диоксап!е (16 мl) цилиру<<>т 6енэип<>ксиклрбонилхп<)ридом (кемлл(><, 67 ?<кп, 0,80 г, 4,68 ммоль) с и< 11() ь эо !7 i IIII(>I и;7< !)!17!сивого водно о г>)ор,! N»НС7>з, I,)kl п<>лучения рН Я, К .j;i в(е II(ê(>I!ill.lå м»тори "и)ы изГ>,7< ) (—. до><лны (!И> пока l;ir(7Hsil4 fl. „ ), дь(?к --.>и у;!л<1>пот 7!ри >ниженпом длн;!ени>1, остлток p»r lно1)я>>т H воде и экстрагиру> т )Tll! лцет, iT<>M Птиплцетатныи экг; I> 11 т ньк. ушив<71<73 (1188(;< ) и выпори>за 4 н>т с 1!олу ч(kilt<? м 17 IIII< то о не!це i т в а °

I< (> i о р () P » и < т Я т ."I ) ш .. р (> м i О Г p il(k>I I <= H >

<к>сле чо i >н>луч»к>т 6t. Jlók(> пену (2, 06 г; Ri - О, 7 в этиллцет <Т< и ! e.,,<- лне (I: ! ° "II Я1.г1) (C,3C- I ) d °

О, C) 1, 0 (м, 12Н); 1, 48 (с, 9Н); 707>4 (м ° 1?II), Г.-Ж. (PH эилокси к,>рб<)ни.l — фениплпан;<н )) беH: иповый

>фир, По способу, описанному 1» этапах — примера 1, очищенный (.1-(t-бутип)ксиклрбонил)-стагин1-(амин )-(2-нтор, бутил-этилен)j †(N-бензилокrикарбонилфениллланин), бензил(>ный эфир, иолу-! е><нь!)! на эт лпе В (2, 03 г, 2, 72 ммоль), превр !!ксикарбонип)-фенилаллнин )-гистидинсT»тин-(ëìèíî-(2-I?тор,бутил-этилен)) (N-бензил ксикарбонип — фенилаланин), < ензипоный эфир (0,595 г; иена; Rf — О, 36 в 50%-Hnv метаноле в хлороформе, 1Н ЯМР (СДСI ), : 0,6-1,0 (м, !

2Н )1 1, 38 (с, 9Й); 6, 75 (с, IН);

7,1 — 7,3 (м, 20Н); 7, 38 (с, 1Н)) °

3, Названное вещество, Катализ<)т<?р — 10% Pd/С вЂ” добанляюз к растнору бензилового эфира (11(t.— — бутилоксикарбонил)-фенилаланин 17 истидин — cT»тин-(амино-(2-втор, бутип- этилен)1 -(Ы-бензилоксикарбонилфениллланина ) (150 мг, 0,)50 ммоль)

I7 4 мп см(.си: этанол и муравьиная

I(H1 л<)тл (1: ) ° по!7у (енную сMpc ь гид

p<) i < !373 зируют в течение !? ч при комнлтн )й темперлт;ре и 40 Пси водорода, l l< >< и <э э Tr) ) < ме < iз

>,1 "1 1= (>1<1,< il Г r>117>У1 1 (17(l i !» 1(<3с и T li< I>—

149839

6!ff, 9 4 (1и)) . дого rfc llrc.cTHл (128 "-ll ), к<)торое рлс— тир»эют с эфиром Jfn»nJ»y«vrrrf>r <> (ищен—

II<>гc>»»р<>Луктл (!1-t — (6утилокгиклрб>о— пил ) -фс If»»Jr(ra;I »fr»If ) — I и с: тlf!»»»H-(тлтин5 (лмино-(2 — втор. 6, т»гл — э I »»>»е»») 1 — фениллл анина В ви,(укгугrf<)IIII< JI< и со;»и (109 мг; вь»х< д 84"; т.р. 117- !26 С;

Rf = О, 57 В ВП011, If<(f И Ас (3! . (4: 1: 1);

"Н ЯМР (г .Дз()Д, 250 М1!), д"", 0,8-1,0 !0

Пример 3, (N — (t — Бутилоксикярбонил) -Фе — 1»»г-»гиклостат»»н-Лиз-Фе .

A. N-(t-1 утил(ксикярбонил)-циклогтлтин: циклогексил

СН, I

СН- CH- СН вЂ” СООН

ОН кяк злюен гл при силикатной хромятогрлфии, названное вещество из готав45 (»- Цн> ап ансанар5анан !- NM

;Iеднную укгусную» I«,>»с гу (()5 мл) и 107 Rh IС (катали э;lò 1, 1, > г) доблвлЯют к prру 1! — (» — <>у. и(1<)к(»»к lp — 20 бс>нил) — 4(,<->)-я (инс> — 3(S) —, идрг кои-5 — фенилпентянс>вой кислотл» (!0,02 г, 9, 70 ммоль) в "..к тяноле (2000 м>»), нов пученную смег» гидро» ен» эирук т в тече»IHp 8 ч прн комнлтн<л(тp Hll<рлтуре 25 и 45 Лси водорс>дл . П<)с,(с p(f arrl>IH смесь фил» труют и фильтрат концентриру»от до белого тв(рлог(> вещества, которое растирают в гекг<»не, Получают очищенный пр(дукт (8, 46 г; выход 30

837.; тр. !09-110 С; Rf = О, 72 и

СНС I, е0Н и ук<:у<.. и кисJI<>xe (18:

: 2: 1) 1 Н ЯМР (С IH I 3): I > 45 (сэ 9Н);

2 55 (д, .1 = 6, 211) .

Б ° Нлз»><э»»ное Веще< > H() °

Подобно (floe<)>>y,, )»»и(л»п >му в примере 1, но с исп()»ь«>в;»иием N-(t — бутилоксикарбонил) — IIHviJI(>(татин вместо

N (t — 6vTIfJIoKcHI,1f)6()»fIfJI) — стятин, изго— т л В Jг>эB лют ил I H IHHnc >эе llrc (тв(> с ЯМР 40 (СД С)Д), 1, 50 д>, 9Н S(8(rr ) j»эыход

57, П р и м с р 4, j N-(t-Бутилокгик лрбонил) — Г!ро )-Фе — I и<. — Irrf I<)»o(татинЛиз-Фе °

Подобно с»п< обу, о»»игя»»ному нл этапах А F. примерл 1, н» с иснользованием N (t áутилоксиклрбонил)-циклостатин вместо !1-(t-бутилоксиклрбо— нил)-статинл получаю г векfec r»n гис50 тидин-циклостrlòèH-(Ы- эп" и:I(>H бензилк арбонил-Jrrf s HI f ) -нин, бе нзиловый эфир, ди гидр >:.>I ри,(. Аналогично этапам Ж и 3, о»ги(лн»п». (н приме— ре I но с исполня(»>я»»и(f {!1 — (t.— буФ

55 тилоксикарбонил) — »р<»(и>» ) — (I)(IIHJIH!Icflfr»нл (имеюще гоев H пр .»<>ж< ) )ме(. I<>

N — (Г.— бутил< ксив,>р6:>HI(:I ) — Фени.lllërlíèín и с игполь э<>вяни<,.«. fl< I, и Мес>Н 95; 5, (I, 12!1); 1,36 (<-, 9Н); 1,п ((2,2-2, 45 (м, 2Н); 4, 28 (дд, .1

I H); 3,54 (l>lrfpnlcne т, 111); 6, »2

1H); 7, 2-7,4 (м, 1011); 7,63 (с, ливают в виде твердого очищенного продукта(11 ЯМР, (СЛОБОД), 1,49 с>), 9Н S(HOC)), выход 2,5/.

Пример 5. (N-(t †Бутилоксикярбо»гил) — Фе )-Гис-циклостатин-(амино-(2-вт<>р,бутил-этилен)) -Фе, соль муравьиной киглоты.

По способу, описанному в пример< 2, но с использованием N (t áóтилоксиклрбонил)-циклостатина вместо

N-(t 6óòèënêcèêHðáníHë)-с,,тин, получ;э» т названное вещество (т,р. 150163 0 (дек.); Кà — 0,50 в бутаноле, уксусной кислоте и воде (4: I:I) (нингидрил); И ЯМР (СД ОЛ): 0,6-2,4 (м, 23H); 1,37 (с, 911); 7,1 — 7,4 (!IH);

6,95 (c, IН); 7,70 (г, IH), Пример 6.(N (t-Бутилоксикарбони I) — >e )-Гиг-циклостлтин-Лиз-Ста.

По cHc)cn6y, о»»ислнному в примере 1, но г использованием статин-бен.»fJl<>Hnl эфир<» гидрохлорида вместо 1.— <»)ениляллнин 6ензилового эфнf);l р — толуол сул ьфоната и 11-(t áóтилокгиклрбонил) — циклостлтин вмеc то N-(t — бутилоксиклрбонил)-статинл, получают Ifa lfлнное вещество(Н

ЯМР (СД 0Д), 1,5 г, 9Н Б(Вос)), ход 1 17, Пример 7.(N — (t Áóòèëîêñèêàðбонил) -Фе 1-Гис-ци клог тлтин — (3-метокгиклрбонил- l, 2, 3, 4-тетрагидро-2— изохинолин).

А, (N-(t — Бутилокс:иклрбонил)-циклостлтин )-(3-метокгиклрбонил-1,2,3,4тетряг»»дро-2-изох»гио IHH) .

Подобно с ног об у, (>rlHc анно му в эт а—

lrQ В примера 1, н > (и< пользованием

N- f t-6yvIfJInIccH»cHptioIIII;I)-циклостатина (l 90 мг, О, 60 »(nnr ) Вместо N-(t-бу1498392 тилоксикярбонип)-гтятиня и 3-метоксик ар<)онил- 1, 2, 3, 4-т ет р;1 гидр(— изохинолина гидрохпоридя (I 37 мг, О, 60 мм<>п!.) вместо N- эпсипон-бензил-(>K(èêÿð(>OIJè5 ли зин ) — фениляпянин бенэил<>вый эфир гидрохпоридя в ниде пенис гого вещества получают 1 N-(t-бутипоксикарбонип)—

1(икпостатин )-(3-метоксикарГ><)нип—,2, 3,4-тетрагидро-2-изохинолин), ко-Ip торий использун)т без до(!олнитепьной очистки ня следующем этапе синтез» (301 мг, Н ЯМР, (СДС I ), 1,5 <), 9f1

Б(80С)).

Б, Названное вещество, !5

По способу, ука эянному н Ox;tl((tx

Г- 3 примера 1, получают 39 1 мг(!1-(t— бутилоксикярбонил)-фенилапяниня )--гистидин-циклостатин-(3-метоксикярбонип-1,2, 3,4-тетрагидро-2-изохинолиня) в виде иены. Зту пену чистят хромятограАически (силикатний гель, хпороформ метяноловый градиент) с I

1,5

Пример ы 8-! 2. Ilo cttoco(>y, oltHoàHHoìó н примере 7, но с Нс.èoëüзовянием соответствующих производных изохинолиня, хинопина ипи (пгперидиня Зр вместо 3-меток-икярбонип — 1, 2, 3,4 — тетра гидро-изохин<>линя, получали следующие нещегтня: (N-(t f óòIJJt<>êñèêÿðáîíèJI)-е }-1 ис цикпостатин — R (см, табл, 1), 4

Полученн((е соединени>! изучены с

ttn ott1I,(<> спектроскопии ЯМР, Пример 13. (Ы-(t-Бути:!оксик Ip«(I>JI)-Фе 7-Ги<..-пиклостатин-НР<, 4р метиповый эфир, А. (!<1-(t-Бутилоксикарбонип)-цикло— с татин )-пропинметип °

По способу, описанному н этзн В примера 1 ° но Г и(поп ьзо ванин л< !1- (Гбутилоксикярбонил)-II,HKJIo< татин» (3, 15 г, 10 мм<>пь) вместо N — (t,— бутпп— оксикарбонил) — гтатина и мети!гон >to эфира пропин гидрохпорида (1,65 г, 10 ммопь) 1)MP<-òo бенэилового эфира

5р (N-эпсилон-бензо:t(зксикарбонип-!>ги эин)— фенилалянина в в«де I идрохпоридя получают метиповий зАир (!1-(t-бутlot<>« сикарбонип-(п(кл >(-татин )-нр<>л>п!я (з иде бе "в) го тв(pr() г<> вещества (3,9 з» )

Б. f1<1 1âÿííî(в<-щ(< тво °

По с(нп < Гу, >1>и»ttt

à — 3 прил<ера 1 ° попу (;1(<>т (N — (t -бу-тllпоксик;зрб< «11 (— фснп.):з <пнин )-г(1< г<1J1кп! (ИК по (. ;! 11(I 11 f) < > гJlи и и(тн! I<°, 1!11IИ .эфир, выход 2%, II р и м е р. (IJ — (трет. -Бутил<)ксик,!рбонип)-фе!!иляланин )-N-метил-гистидин-стятин-изопейцин-фени.!алании.

А. N-(трет,-Бутипоксикарбонип)-N— метил-гистидин.

600 мг (2,93 ммоль) N-метипгистидина, 1,65 мп (11,2 ммоль) триэтиляминя, 1,48 мп (б, 4 млоль) трет,-бутилоксикарбонила, 8, 5 мп 10 -ного бик рбоната натрия и 10 л(п 2 í, НС I р. гворяют н 5 мп диметилформамида, После занерщения реакции диметилформамид упариняют, добавляют 15 мл этипацетата и 15 мп IO ного раствора бикарбоната натрия, Полученную смесь промывают этипацетатом (2хэ мл), подкисляют 8 мл 2 í. НС!, экстрагируют этипяцетатом (зх20 лс!), пролгыняют

t ряс< ()JloM и нисущивяют, получая 846 мг пены. IÍ ЯМР, 60 мГц, СДС 13, частичный: 1,4 (c, 9H, Вос); 1,6 (с, 9Н, Вос); 28 (с, ЗН, ЯСНА); 2, 85 (м, lll) 3, 15 (м, l fl); 4 ° 75 (м, IН); 7, 2 и 8, 1 (с, IН еа, Н имлазолила), Б. Изопейцил-фенилял анин-бензиловий эфир (11-(трет.-бутилоксикарбонил) -N-èå гил-ги<.тидин 7-с тятина, 179 мг (О, < 3 ммопь) фенил,)панин бензилово го .эг)ир,< хлор гидрята статини.(<>лейциня, 316 мг (О, 65 ммопь) N— — (трет, — бутипок<.икярбонип) — N-1<етилгистидина со стадии Л, 0,91 мп три)типамина, 165 мг (1,07 ммоль) гидрок< ибензтриязоля и 134 мг (0,65 ммоль) дицикпо гексипкярбодиимида переносят в 8 мп хлористого метилена, По занерщении реакции (7 ч) реакционную смесь разбавляют хлористым метиленом, фильтРУК>т, КОНЦЕНтРИРУЮт, 3КСтРЯГИРУЮт этилацетятом (40 мп), промынан>т н °

NaOH (?x5 мп), промывают рассолом и нь(сущиняют над сульфатом натрия с получением 235 мг пены (выход 62 .), Н ЯМР, 250 и! и, СДС1з, частичный:

0,82 (м, 12Н); 1,45 (с, 9Н, Вос); 1,6 (с, 9Н, имВос); 1,8, 2,33, 2,52, 2,91, 3,24, 3 67, 4 05, 4 25, 6 82 (м, IН к<>ждл(й); 2,93 (с, ЗН, !1-СН)<); 3, 2 (м, 2Н); 4, 8 — 5 (и, 2Н); 5, 13 (АВ дублети, (;f1 ()), 7 — 7,4 (м, 2-15Н); 7,96 (<, I Н, Н вЂ” 2 имидж золипя), В . Бен энп<) г<1(й .>Аир хлор гидрят я

N — мет(гп — гис пгдин-(тя(нн — из<>лейципфЕНИП ЯП Ill!It!;I, Нр >дукт < т.(днн (?28 мг, О, 26> мм< п() рз< творя(т в 4 lt, нс в

1498392

14 диокс ане с получением <. ое чин< ния, обозначенного н заглавии. ll ЯМг, 250 мГц, ДМСО-d(,, асти чныи: О, 7-0, 95 (M, !2Н); 3,03 (и, 211); 3,8 (м, 3Н);

4,25 (м, 2Н);, ".. (м, 111); 3, Гб (АВ дублеты, >Н, О(.11.,); 7, 1 — 7,4 (и, примерно 2Н); 7. > (с., 111, Il-7<;<мидазолила); 7, 8 > (д, 1Н); 816 (м, 2Н);

8, 8 (ill, l ll ), (. Бензин >вый <1»t > (. — (тp«6yтилоксикарбошгл) — фени»:t.t;III;IH 1 — 11-ме— тил-гигтидш<-с та-.ин — i.-t<»tp>IIIII» — фенил10

;>л а>п< на, 11родукт стадии В (100 мг, О, 133 мм ль), трет ° — 6ут«локсикарб>о«ип<1>ени >; ланиil (7 1 ьll, ti, 15л t.;;I<>nt ), гри.> TIUIамин (О, 08 . г<, О, 35 ммол ь), t èäpoKо, < (3 > ti< >

О, 154л ммоль) переносят в 1 мл хлорис- 20

ТО I <> МРТИЛЕИ 1 li 1 М>1 Ill t < ГИ>>фа!> Mi> МИ да ° По завершении реакции ем<.c> o(.— рабатывают разбавленной со .яной кислотой, нейтраслизуют насьчле>IHI tw водным раствором бик..>рбонат,< HHTрия, вы- 25

У 7gnpot>I tx c <> брали плазму кр<

l pvIIHHx<> tI л;>боратории ви, I <> > <>p vн переме л>ив aчи и xp HII <и в I <".4<>p<» t« IHHО м с<> стоянии, Перед нач;>ч<, t опыч а часть

»а> т, t llтр>чАугируют

- «»лин:;лгi <- ингибир . < Pl. 7 4.

;>лазмы разморажи и прс дварите IF Н<>

TL>p > <1<>a г ушивают раствор, упаривают и получают 74 мг (577.) продукта в виде белои пены, Н ЯМГ, 250 мl ц, С, 1Г 17, ч,>cти ч<:ый: О, 75-0,"5 (и, 12!1); 1, 3> и 1,4 (с ., 9H об<лис, не эквив,7»ен г>п >е Вос Р 30

Bvx poTаметри <е1ских !>

N CH ); 3> l 1 (ме 2 3! ) 1 Зе 95 4 25е <,8 и 4,9 (t), 3, 1 (Al дублеть<, 2Н, О(H1)16,7(и, 1Н);7-7,4(м,ароматика).

Д, Заглавн<>е гoeili»IPHIlp.

t N-(трет.-Бутичок .икарбонил)-фенилаланин — N — метил- гигтидин-статинизоз ейцин — фенилаланин получ» от путем снятия о.сидения соотвстгтву><>лсегo бен- 40 эипов<>го эфира, получснно го в стадии

Б. Н-ЯМР, Г!1 О;1, 250 м! ц, частичньл1:

Б (ррм от ТМС); 0,9 (9Н, 111); 1,37 и 1,45 (с, 9Н, общие Вог); 2, 71, 3,06 (с, 3Н, n<6ïtnå, N-ГН 3) 1 4,23 (д, 45

1H); 7, 2- 7, 3 (м, 7po<матика, 10-12H), Пр<>веде>лл биочс>гине< кие испытания соединений, получ >HH}tx в v< ловиях предлагаемо го спогоба.

Ингибир нацие «нгиотен гин-расщепЛЯЮЩЕГс> ДЕйСтВИЯ РЕШ.На 1П Vi tIO

ltIIII6H7OpIl pPHIIH7 Лс 6аРЧЯ>ОТ В pn I!I!i I

H(>il кратнс>сти разведения к подготовленной плазме. Полученную смесь инку6ируют в течение 3 ч при 37 С, В этих å у-ловиях инкубируют пробы, не содержащие ингибиторы ренина, После инкуб гции смеси охлаждались н воде < о льдом и каждая иэ них ис— ( следов;<лась на содержание ангиотензиногена 1 с помощью антител к ангиотензино гену 1. Образование ангиоте»aIIHnгена 1 в грисутствии ингибиторс<в ренина сравнивалось с его количеством в пробах без ингибитора с последующим исчислением процентного соот><с >чения ингиб>гции. Используя получен><ые данные при дублируемой инкубации каждой из серии концентраций ингибитора, определялась концентра>сия ингибитора в инкубируемой смеси, способная уменьшить ангиотензин-расщепляющее действие ренина на 50%, т ° P, 1С ингибитора, и этот параметр 5о применялся при изучении различных ингибиторов, Ангиотенэиноген 1 в охлажденных инкубированных смесях изучался радиоиммунным способом с использованием мечено го ренина, поставляем >го фирмой

Бектон, Дикинсон и К (Орангебург, о

Н.И. ), Указанная методика радиоиммуноло гического исследования разработана НаЬег.

Коэффициент ренин-ингибиции с ис— пользованием указанной методики определялся для каждого из веществ, описанных в прил<ерах 1-5 и 7- 12, Во всех < случаях TC в эксперименте оказался ниже 5 микромоль на литр, Подавление экэогенных ренин-индуцируюл(их прессоров in vivo.

Крысы Sl>rague-Darky мужского пола (весом 200-3(!О г) <>нестезировалис.ь фенобарбиталом натрия (65 мг/кг веса, интраперитонеальное введение), после чего бедренная вена и сонная артерия животных катетеризирсвались. По завершении хирургического вмешательства животных укладывали на спину и проводили на протяжении опыта измерение ректальной температуры. Значения артериального давления (МАР) записывались через катетер сонной артерии при помощи St I tham P-2 3 Д

1 (трансдуктора дав.<с иия и фиэиографа) .

По <<-течении перис>д.> с-табилизации определяли прессорнуl<»ктивность рсНННа

1498 392 (dp) (»»p<.делах 20 — 30 м» рт.ст.) с ис»< льзоиа »<ем свиного ренина (30ЯО »11/кг ие<.а, внутриненно) . 11осле но. »ращения МЛР к исходному уровни

»римеияли ингибиторы ренина (10 мг/кг неся, »нутриненно) и животным повтор-

Но вводили свиной ренин (дозу, ана(контрольное dp — экспериментальное dp) х -1007) контрольное dp сравнения.

CH — CH — СН2 СОВ д

1 1 к

R- Phe - Ю вЂ” NH— где R трет,-бутилоксикарбонил, трет.-бутилоксикарбонил Pro;

i!is, N-метил Н1н; циклогексил, изобутил;

l

5 тор. бутил

=КНСН(СН )--NH СН вЂ” СООН

I

СЫ2С Н5

1,2,3

1,2, 3 изохи ка гид — 2-ил э 3

HW — NH — СН вЂ” СН вЂ” СН С(О)Р

2 1

R2. где контрол ьное dp и экспериментапьное dp соотнетстновали изменению прессорного эффекта в 1!АР перед и .«1сле применения ингибиторов ренина, Желательно, чтобы в каждом исследовании использовалось не менее трех жи»о тных и исчислялись средние величины, Г использованием указанной месодики может быть о»ределен процент

<к давления »рессорного эффекта.,4-тетрагидроизохинолин-2-ил,,4-тетрагидро-3-метоксикарбонилнолин-2-ил, 1, 2, 3, 4, 5, б, 7, 8-деро-3-метоксикарбонилизохинолин4-фе»илметилпи»еридин- I èë, ;4-тетр а гидро- 3-а минок арбонилили е го кисло Сно-аддитивную с<1ль поднер гают нзаи.одейстнию с соединением ф< рмулы

P -- Phe .- OX, где ОХ вЂ” карбок<.»льная группа, актипогич«ую выбранной»ри к<пггро«ьном введении) на 5, 15 и 30 é мин после ннсдения»нг»6»тор»и ренина, »осле че I o и эмери»и соотнетстнуннщие данные

»рессорной с»особности ренина (<)р), Нроцент подавления исчислял<.я по фор— мулe:

I3 табл. 2 приведены величины под:и»ения прес сорно го эффект а предпага ыми соединениями и соединением

Ф о р м у л а и з о 6 р е т е н и я

Способ получения производных полипептидон общей формулы

R -0Н;

К вЂ” А — РЬе ОН, где А — Еун, 11е; или R — Lys Sta, PrnOCH изохинолин — 2-ил, 1,2, 3,4-тетрагидрохинолин-l-ил, или их Жармацевтически приемпемых солей,отличающийсятем

У

40 что соединение формулы в»ров анная для проведения ацилиронания, с последующим удалением, н случае необходимости, защитных групп и выделе—

50 нием целевого продукта н свободном виде или в виде соли °

1498392

17 16 tl и 1!а 1

Выход, 7

Лример

1, 2 3, 4-Те тр а гидро-2изохинолин

3-А:щнонарбс нил— 1,2,3,4-тетрагидро-2-изохинолин

1,2,3-Тетрагидро — 1-хи13

10 нолин

1 1 4-Фенилиетил — 1-л11»е. ридин

3-Ме то кси к ароонил— 1,2, 3,4,5,6, 7,8-декагилро — 2-изохинолин

12

НрнЧеловечеокий ремни, 3Сг tiN

1 BOC

ОН Lys-Phs

0,24

Циклогекснл (мтилен)

Цнклд" гексмл (четилен)

Циклогексил (нет лен)

Циклогексил (иетнлен)

Циклогексил (мти" лен)

Цнклогексил (иетилен)

Цмклоге к сил (метилан)

Цнклогехсил (мти лен)

Циклогексил (мтнлен)

Цихло" гекснл (иетнлан) 0,01

2 BOC Рго His

ОЧ Lys-Phs

НН Ck gqCOOH !

His

" Р Сй С Н бутнл т а в

ОН !.ys-Sta

His

4 BOC

0,1

His

5 ВОС

3,0

ОН 1,2,3,4-,Тетраruttyo-3-иетокснкарбоннл-2-нюохинолнн

ОН 1 2,3,4-Тетрагндро-2-нв1охинолнм

His

0t l

7 ВОС

1,2,3 4-Тетрагндро-3-alslnoкарбоиил-2-Нюо хи Ionnn

1,2, 3-Тетрагидро-1-книолнн

1 S

2,0

Hi °

9 BOC

kis

4-Феннлмтнл- 3,0

1 3ВВ пернднн

10 ВОС

His

3-Нетоксм кар бо нил- 1 2, 3, 4, 9 ° 6 ° 7е Э-декагидро-2-нзохмнолин

BoONe

4,6

1! ЗОС

Hiа

Цнкло- ОН ге к сна (мтнлен)

Нэобу- Ok Ile-Phs 2,3 тнл

His-Pro-Ph&li а-Leu-Lsu-Va1-РЬе(ОСй ) й, 4 ъ

12 ЗОС

Соединение

Н-Иатнл

His сравнения

ТаЬлиц ° йелнчинн активности предлвгaewx соединений, сносоЬнне лодавлять действия ренина нв ангиотенэни й-Pha-Нв-НН-Сйй -СНй -СН СОй

s 1