Способ получения кератиназы

Способ получения кератиназы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к получению препаратов кератиназы и может быть применено в микробиологической промышленности, биохимии микроорганизмов и медицине. С целью сокращения времени ведения процесса и увеличения выхода кератиназы в качестве продуцента используют STREPTOMYCES chrOMOGENES S. GRAECUS ЛИА 0832, культивирование которого осуществляют на питательной среде, содержащей минеральные источники азота и углерода и воду, при начальном значении PH от 10 до 11. Предлагаемый способ получения кератиназы позволяет повысить выход фермента в 11 раз (34 ед/мл) и сократить время культивирования с 9 сут. до 48 ч по сравнению с известным способом. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ HOMHTET

flO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ fXHT СССР (21) 43581 77/30-13 (22) 08.12.87 (46) 23.05.90. Вюл. Р 19 (71) Воронежский технологический институт (72) Н.А.М(еребцов и Л.В.Насонова (53) 577. 15 (088. 8) (56) Фениксова P.Â,, Петрова И.С.

Протеолитическне ферменты Асtinomyces

fradiae. — Прикладная биохимия и микробиология, 1965, т. 1, h". 2, с. 175180.

Долидзе Д.А., Патарая Д.T., Турманидзе И.С., Квеситадзе Г.И. Отбор продуцентов протеолитических ферментов у актиномицетов. — Иикробиология, 1983, т, 52, Р 1, .с. 83-86.

Takinshi S,, Higuchi О., Sei G., Koga И. Solation of an extracellular

poroteinase (Keratinase) from Nicrosporum Canis. — Sabouraudia, 1982, ч. 20, Р 4, р. ?81.

Изобретение относится к получению препаратов кератиназы и может быть применено в биотехнологии, биохимии микроорганизмов, медицине.

Целью изобретения является увеличение выхода фермента и сокращение времени ведения процесса культивирования. .Способ культивирования Streptomyces chromopenes S,p. ЛИА 0832 осуществляют следующим образом.

В среде состава, мас.%: картофельный крахмал 50; соевая мука 5 перо 10; углекислый кальций 4; фос„„sU„„ 888 A 1

О1)5 С 12 И 9/50 // (С 12 N 9/50, С 12 R 1:465) 2 (54} спосоь получения кн Атинлзь. (57) Изобретение относится к полу сению препаратов кератипазы и может быть применено в микробиологической промышленности, биохимии микроорганизмов и медицине. С целью cокращеш ч времени ведения процесса и увеличения выхода кератиназы в качестве продуцента используют Streptomyces

СЬготорепез S.graecus ЛИА 0832, культивирование которого осуществляют »а питательной среде, содержащей минеральные источники азота и углерода и,воду, при начальном значении рН от

10 до 11. Предлагаемый способ получения кератиназы позволяет повысить И выход фермента в 11 раз (34 ед./мл) и сократить время культивировanns с 9 сут. до 48 ч по сравнению с изпегTным способом. 1 табл. С: форнокислый калий одноэамещенньи 0,8, сульфат железа 0,01, cyчьф \T цинка

0,02; водопроводная вода с стальное. доводят величину рН 1 н.едкHM нат1 и и до 10,0-11,0, Затем стерплпзуInT при давлении 0,1 Ина в течешке 1 и, После охлаждения за -евают 5Х 48- асового госевного материала Streptоmyces сЬтояоВепes S,p. ЛИА 0832 культивируют в колбах обт.,емом 7 0 1л, содержащих по 100 мл среды на качалке (220 об/мнн) при 27 С в тг»<ние 48 ч. Конечное значение рН t., —

6,8.

1565888

За единицу протеолитической акивности принимают такэе количество ермента, которое за 1 мин при 30 С атализирует переход в неосаждаемое

ТХУ состояние количество каэеина, содержащее микроэквивалент тирозина.

За единицу кератиназной активности принимают такое количество фермента, которое в результате протеоли- 10 а 200 мг кератина при 37 С в течее 3 ч в присутствии 5 мл О, 1М боатного буфера рН 9,2, 0,5 мп 10 3N лорида магния и дистиллированной воы (для доведения объема до 10 мл) ает повышение оптической плотности пытных проб над контрольными, равое О, 1, при измерейии на спектрофо-. ометре (Л = 280 ммк)„

Пример 1. Нродуцент кераинаэы S.chromogenes S„g. ЛИА 0832

ыращивают в течение 11 сут при наальном значении рН 7 8. Протеолитиj ° ческая активность через 11 сут сотавляет 0,142 ед/мл, а кератиназная

1 авиа нулю.

Пример 2. S.chromogenes S.g.

3 ИА 0832 выращивают 48 ч. Протеоли1ическая активность составляет

99, 158 ед/мл, а кератиназная 0,8 ед/мл, Условия культивирования аналогичны примеру 1.

Пример 3. S.chromogenes S.g.

ДИА 0832 выращивают 120 ч. Условия культивирования аналогичны примеру 1.

Протеолитическая активность 35

0,996 ед/мл, кератинаэная 1,1 ед/мл.

Пример 4. S.chromogenes S.g.

IHA 0832 выращивают 120 ч при начальном значении рН 9. Протеолитическая активность 1,956 ед/мл, кератиназная

,1 ед/мл.

Пример 5. S.chromogenes S.g.

ЛИА 0832 выращивают 120 ч при начальном значении рН .10. Протеолитическая активность 2,622 ед/мп, кератиназная

2,7 ед/мл.

Пример 6 ° S,chromogenes S.g.

ЛИА 0832 выращивают 120 ч при начальном значении рН 11,О, Прот олитическая активность 3,111 ед/мл, кератиназная 8 ед/мл.

Пример 7. $.chromogenes S.g.

ЛИА 0832 выращивают 48 ч при начальном значении рН 11,0. ПротеолитиI ческая активность 6,044 ед/мп,. кера-, тиназная 34 ед/мп.

В таблице представлены результаты, показывающие преимущества предлагаемого способа по сравнению с известным.

Выращивание S.chromogenes S.g.

ЛИА 0832 в предлагаемых условиях повышает прцтеолитическую активность в

5,2 раза, а кератиназную в 11,3 раза по сравнению с известным способом

Ф и сокращает время выращивания на

9 сут.

Формула изобретения

Способ получения кератиназы, предусматривающий культивированиепродуцента на питательной среде, содержащей минеральные соли, источники углеродного и азотного литания и воду, при оптимальной температуре до достижения максимальной активности фермента, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода фермента и сокращения времени ведения процесса, в качестве продуцента используют штамм актиномицета Streptomyces chromogenes S. graecus

ЛИА 0832, а культивирование осуществляют при начальном значении рН 10-11.

1, 16

7,8

Способ по примеру

2

4

6

8 (известный) Начальное значение рН

7,8

7,8

7 8

9,0

10,0

11,0

11,0

Время культивирова.ния, сут

11

2

5

Протеолитическая активность ед/мл

0, 142

0,996

О, 158

1,956

2,622

3,111

6,044

Кератиназная активность, ед/мл

О

1,1

0,8

2,1

2,7

8,0