Питательная среда для выращивания белок а продуцирующих бактерий

Питательная среда для выращивания белок а продуцирующих бактерий

Реферат

 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при получении микробного белка. Цель изобретения повышение выхода целевого продукта. Для приготовления среды используют ферментативно-кислотный гидролизат форменных элементов крови крупного рогатого скота (КРС) с содержанием аминного азота 500 600 мг% в количестве 69 72 об. и ферментативно-кислотный гидролизат сыворотки крови КРС с содержанием аминного азота 220 280 мг% в количестве 23,0 24,0 об. После стерилизации в смесь гидролизатов добавляют 4,0 7,0 об. этанола и 0,3 0,7 об. 40%-ного раствора глюкозы. При выращивании штаммов стафилококков продуцентов белка А последний накапливается в титре 1 512, при этом накопление бакмассы увеличивается в 10 15 раз. Среда может быть также использована для накопления бакмассы широкого круга микроорганизмов.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при получении микробного белка. Цель изобретения повышение выхода целевого продукта. Приготовление и использование среды иллюстрируется следующими примерами. П р и м е р 1. Приготовление компонента А* ферментативно-кислотного гидролизата форменных элементов крови крупного рогатого скота (КРС). (*Здесь и далее в примерах гидролизаты будут обозначены как компоненты А и Б). В ферментере готовят ферментационную смесь, для чего закачивают определенный объем (но не более половины объема ферментера) водопроводной воды, добавляют гидрокарбонат натрия 40-44 г/л, панкреатин 30-40 г/л или поджелудочную железу 300-400 г/л, хлороформ 15-20 мл/л и перемешивают в течение 1-2 ч. Затем закачивают в ферментер форменные элементы крови КРС в соотношении 1: 1 к объему феpментационной смеси, перемешивают в течение 1-2 ч, нагревают до 38-42^оС. Ферментацию ведут 24-48 ч при 38-42^оС и периодическом перемешивании до определенного содержания аминного азота в переваре. Затем подкисляют перевар до рН 3,0-3,5 центрированной соляной кислотой, прогревают 30-40 мин при 80-90^оС, осветляют сепарированием, нейтрализуют 20%-ным раствором NaOH до рН 7,8-8,3, добавляют 3,0 г/л Na₂HPO₄ и 2,33 г/л KH₂PO₄. Приготовление компонента Б ферментативно-кислотного гидролизата сыворотки крови КРС. В ферментере готовят ферментационную смесь, для чего в ферментер закачивают воду (не более половины его объема), добавляют гидрокарбонат натрия 40-44 г/л, панкреатин 60-80 г/л, или гомогенизированную поджелудочную железу 600-800 г/л, хлороформ 15-20 г/л и перемешивают в течение 1-2 ч. Затем закачивают в ферментер сыворотку или плазму крови КРС, осветленную сепарированием, в соотношении 1:1 к объему ферментационной смеси и нагревают до 42-45^оС. Ферментацию ведут при 42-45^оС и периодическом перемешивании в течение 2-6 суток до определенного содержания аминного азота в переваре. Подкисляют перевар до рН 3,0-3,5 концентрированной соляной кислотой, прогревают 30-40 мин при 80-90^оС, осветляют сепарированием, нейтрализуют 20%-ным раствором NaOH до рН 7,8-8,3, добавляют 3,0 г/л Na₂HPO₄ и 2,33 г/л KH₂PO₄. Компоненты А и Б осветляют сепарированием, центрифугированием или фильтрацией, разводят водопроводной водой до определенного содержания аминного азота, смешивают их в соответствующем соотношении, затем стерилизуют при 120-118^оС 45 мин, добавляют 3-7 об. этанола, 0,3-0,7 об. 40%-ного стерильного раствора глюкозы и используют для культивирования микроорганизмов. П р и м е р 2. Приготовленные в соответствии с примером 1 компоненты А и Б после осветления и разведения смешивают в объемных соотношениях, об. 3:1, т.е. 69,0 об. компонента А и 23,0 об. компонента Б и закачивают в ферментер. Смесь охлаждают до 38-40^оС и добавляют 4,0 об. этанола и 0,3 об. 40%-ного раствора глюкозы. В ферментере с питательной средой закачивают посевной материал 10 об. суточной бульонной культуры белок А продуцирующего золотистого стафилококка, шт. Cowan-1 при концентрации микробных клеток 1 млрд/см³. Культивирование ведут при 38-40^оС, рН 6,8-8,2 в условиях аэрации и постоянного перемешивания. Титр белка А, продуцированного в питательную среду, достигает не ниже 1: 512 в реакции встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ) со свиными иммуноглобулинами. П р и м е р 3. Готовят среду в соответствии с примером 2, но компоненты берут в следующем объемном соотношении, об. Компонент А 70,5 (3:1) Компонент Б 23,5 Этанол 4,0 40%-ный раствор глюкозы 0,3 Посев материала и культивирование бактериальных клеток осуществляют, как в примере 2. Титр белка А достигает в реакции ВИЭФ 1:512. П р и м е р 4. Приготовление питательной среды, посев бактериальных клеток и культивирование их осуществляют, как в примерах 2 и 3, только в качестве продуцента белка А используют золотистый стафилококк штамм ГИСК N А676. Накопление белка А в среде достигает в титре 1:512. П р и м е р 5. Готовят среду в соответствии с примером 2, но компоненты берут в следующем объемном соотношении, об. Компонент А 72,0 (3:1) Компонент Б 24,0 Этанол 4,0 40%-ный раствор глюкозы 0,3 Посев материала и культивирование бактериальных клеток осуществляют, как в примере 2. Титр белка А в реакции ВИЭФ 1:512. Кроме выращивания белок А продуцирующих золотистых стафилококков, предлагаемая питательная среда пригодна и для культивирования ряда других бактериальных клеток, что иллюстрируется следующими примерами. Среда может быть использована также для культивирования микроорганизмов. П р и м е р 6. Для культивирования сальмонелл среду готовят в соответствии с примером 2, но компоненты берут в следующем объемном соотношении, об. Компонент А 70,5 (3:1) Компонент Б 23,5 Этанол 4,0 40%-ный раствор глюкозы 0,3 Во флакон вместимостью 500 см³, содержащий 200 см³ среды, вносят 20 см³ суточной бульонной культуры сальмонелл с концентрацией микробных клеток 1 млрд/см³. Культивируют при 371,0^оС, рН 6,8-8,0 в стационарных условиях. Через сутки культивирования концентрация микробных клеток составила 2,7 млрд/см³. П р и м е р 7. Для культивирования кампилобактерий среду готовят в соответствии с примером 2, но компоненты берут в следующем объемном соотношении, об. Компонент А 70,5 (3:1) Компонент Б 23,5 Этанол 4,0 40%-ный раствор глюкозы 0,3 Посев материала и культивирование бактериальных клеток осуществляют, как в примере 6. Через сутки культивирования концентрация микробных клеток составляет 0,8 млрд/см³. Приведенные примеры показывают, что предлагаемая питательная среда при определенных соотношениях компонентов А и Б пригодна для культивирования бактериальных клеток. В качестве контрольной среды для сравнительных испытаний, проводившихся одновременно, используют питательную среду на основе перевара Хоттингера. Установлено, что накопление бакмассы стафилококка на предлагаемой питательной среде выше в 10-15 раз по сравнению с контрольной. Титр белка А в контрольной среде определяется не выше 1:16, на известной среде 1:32, а на предлагаемой 1:512. Накопление биомассы сальмонелл на предлагаемой среде в 1,5-2 раза выше, кампилобактерии накапливаются в 10-20 раз выше, чем на известной среде.

Формула изобретения

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ БЕЛОК А ПРОДУЦИРУЮЩИХ БАКТЕРИЙ, содержащая питательную основу, глюкозу и стимулятор роста, отличающаяся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве питательной основы она содержит ферментативно-кислотный гидролизат форменных элементов крови крупного рогатого скота с содержанием аминного азота 500 600 мг% и ферментативно-кислотный гидролизат сыворотки крови крупного рогатого скота с содержанием аминного азота 220 280 мг% в качестве стимулятора роста она содержит этанол, а глюкозу в виде 40%-ного раствора при следующем количественном соотношении компонентов, об. ферментативно-кислотный гидролизат форменных элементов крови крупного рогатого скота с содержанием аминного азота 500 600 мг% 69,0 72,0; ферментативно-кислотный гидролизат сыворотки крови крупного рогатого скота с содержанием аминного азота 220 280 мг% 23,0 24,0; 40%-ный раствор глюкозы 0,3 0,7; этанол 4,0 7,0.