Способ получения мукополисахаридов
Иллюстрации
Реферат
Изобретение относится к химии высокомолекулярных соединений, конкретно к получению мукополисахаридов путем деполимеризации гепарина, обладающих биологическими свойствами, что позволяет использовать их для специфического регулирования коагуляции крови. Изобретение позволяет упростить процесс и повысить их антикоэгулянтную активность за счет того, что гепарин обрабатывают нитритом натрия в водной среде в присутствии соляной или уксусной кислоты при рН 2,2-2.75 и массовом соотношении гепарина и нитрита натрия 1 :(0,158-0,172) с последующими нейтрализацией раствора и высаждением целевого продукта этанолом. Целевой продукт может быть дополнительно обработан боргидридом или перманганатом калия при массовом соотношении деполимеризованного гепарина и боргидрида калия , 47:7 или деполимеризованного гепарина и перманганата калия 20:1 при рН 8,5. 2 з.п. ф-лы, 2 табл. сл
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛ ИСТИ Ч Е С К ИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕ ННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ (21) 3360355/05 (86) PCT/FR 81/00041 от 20.03,81 (22) 20.11.81 (31) 8006282 (32) 20.03.80 (33) FR (46) 23.06,91, Бюл. 1Ф 23 (71) Шоай С.А. (FR) (72) Жан-Клод Лормо, Морис Петиту и Жан
Шоай (FR) (53) 547.458.5 (088.8) (56) Патент СССР М 1209033, кл. С 08 В 37/10, 1981. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МУКОПОЛИСАХАРИДОВ (57) Изобретение относится к химии высокомолекулярных соединений, конкретно к получению мукополисахаридов путем деполимеризации гепарина, обладающих биолоИзобретение относится к химии высокомолекулярных соединений, конкретно к получению мукополисахаридов путем деполимериэации гепарина. обладающих биологическими свойствами, что позволяет использовать их для специфического регулирования коагуляции крови.
Целью изобретения является упрощение процесса получения мукополисахаридов и повышение их антикоагулянтной активности.
Пример 1. Растворяют 60 г гепарина, имеющего отношение показателя Юина—
Весслера, характеризующего способность активных продуктов вызывать ингибирова. Ж 1658820 А3 (51)5 С 08 В 37/10 // А 61 К 31/725 гическими свойствами, что позволяет использовать их для специфического регулирования коагуляции крови, Изобретение позволяет упростить процесс и повысить их антикоагулянтную активность за счет того, что гепарин обрабатывают нитритом натрия в водной среде в присутствии соляной или уксусной кислоты при рН 2,2 — 2,75 и массовом соотношении гепарина и нитрита натрия 1:(0,158 — 0,172) с последующими нейтрализацией раствора и высаждением целевого продукта этанолом. Целевой продукт может быть дополнительно обработан боргидридом или перманганатом калия при массовом соотношении деполимеризованного гепарина и боргидрида калия, 47;7 или деполимеризованного гепарина и перманганата калия 20:1 при рН 8,5. 2 э.п. ф-лы, 2 табл. ние фактора Ха-крови ингибированием антитромбином111(АТ111), к показателю, характеризующему способность активных продуктов ингибировать общую коагуляцию крови или плазмы (УСП) (ЮВ/УСП), близкое к 1, и показатель УСП 160 Еlмг, в 3 л дистиллированной воды при 4 С. Добавляют нитрит натрия в количестве, достаточном для получения 0,05 М раствора (10,35 г; массовое соотношение гепарин:нитрит натрия =
1;0,172), затем рН доводят до 2,5 при помощи чистой соляной кислоты, раствор при
4"С взбалтывают в течение 10 мин. Далее рН доводят до 7,5 при помощи 5 н. раствора соды. Добавлением 5 обьемов чистого эта1658820 нола (15500 мл) продукты реакции осаждают. Образовавшийся осадок извлекают при помощи центрифугирования. Его промывают этанолом и сушат при 60 С под глубоким вакуумом. Собирают 60 г продукта, обладающего следующими характеристиками: показатель УСП 17 Еlмг, показатель ЮВ 240
Е/мг.
В качестве исходного материала используют гепарин, имеющий показатель
УСП 165 Е/мг, а отношение ЮВ/УСП порядка 1. Растворяют 3 г гепарина в 150 мл дистиллированной воды при 4 С, затем добавляют 517 мг нитрит натрия в реакционную среду (массовое соотношение гепарин:нитрит натрия = 1;0,172). После окончания обработки, проведенной в соответствии с приведенным описанием, извлекают 2,8 г продукта с показателем УСП 24
Еlмг и показателем активности ЮВ 250
Е/мг.
Используют 50 г гепарина с показателем УСП 158 Е/мг и отношением ЮВ/УСП, близким к 1. Указанное количество гепарина растворяют в 2500 мл дистиллированной воды и при 4 С добавляют 8,625 г нитрит натрия (массовое соотношение гепарин:нитрит натрия = 1:0,172). После завершения обработки получают 46 г продукта, обладающего следующими характеристиками; показатель YCll 13 Еlмг, показатель активности ЮВ 270 Еlмг.
Пример 2. При окружающей температуре растворяют 47 г продукта, полученного в примере 1, в 1200 мл дистиллированной воды. При перемешивании добавляют 7 г боргидрида калия, Перемешивание продолжают в течение 2 ч при окружающей температуре, а затем добавляют в реакционную среду уксусную кислоту для того, чтобы снизить рН до 4,0 и разрушить тем самым не использованный боргидрид калия. Смесь еще перемешивают в течение 30 мин, затем рН увеличивают до 7,5 при помощи 5 н, раствора соды. В реакционную смесь добавляют 5 объемов спирта. Образовавшийся осадок собирают, просушивают, промывают чистым этанолом и сушат под вакуумом при 60 С. Получают 46,5 г продукта, обладающего следующими характеристиками: показатель УСП 17 F /мг, показатель активности ЮВ 250 Е/мг.
Пример 3. Растворяют 40 г продукта, полученного по примеру 1, в 400 мл дистиллированной воды при окружающей температуре. Значение рН обеспечивают на уровне 8,5 при помощи 5 н. раствора соды, затем добавляют 2 г перманганата калия
КМп04, растворенного в 40 мл воды. Реакционную смесь подвергают перемешинанию b
55 течение 15ч. В течение этого перемешивания рН смеси постоянно поддерживают на уровне 8,5 при помощи 5н, раствора соды.
Через 15ч добавляют 0,2 объема спирта (90мл) с тем, чтобы удалить КМп04, который не участвовал в реакции.
Реакционную смесь отстаивают в течение 1 ч. Образовавшийся" осадок МпОг удаляют центрифугированием, Осаждением этанолом извлекают продукты реакции, промывают и сушат. Таким образом получают 35 r продукта, обладающего следующими характеристиками: показатель УСП 12 Еlмг, показатель активности ЮВ 270 Е/мг, Пример 4. Растворяют 3 г гепарина в
150 мл дистиллированной воды при 4 С. Добавляют 517 мг нитрита натрия для получения 0,05 М раствора. рН устанавливают на значении 2,2 добавлением чистой кислоты
HCl и перемешивают раствор при 4 С в течение 10 мин. Затем рН доводят до 7,5 при помощи 5 н. гидроокиси натрия. Добавлением 5 объемов чистого этанола осаждают полученный продукт. Образовавшийся осадок отделяют центрифугированием, промывают этанолом и сушат при 60 С под вакуумом. Получают 2,8 r продукта.
Используя те же самые исходные, осуществляют реакцию при рН равном 2,5; 2, 6 и 2,75. Выход продукта 2,8 г. Характеристики полученных продуктов сведены в табл, 1, Пример 5. Растворяют 10 г торгового гепарина (соотношение YW/USP около 1; титр USP 160 ед/мг) в 1 л дистиллированной воды при 4 С, Добавляют нитрита натрия
МаМО в количестве, достаточном для получения 0,02 М раствора, т.е, 1,58 г (соотношение гепарина и нитрита натрия 1:0,138), затем доводят рН до 2,5 с помощью чистой соляной кислоты, Перемешивают при 4 С в течение 10 мин и доводят рН до 7,5 с помощью 5 н. щелочи натрия. Путем добавления 5 объемов чистого этанола (т.е, 5 л) осаждают продукты реакции. Рекупериочют осадок центрифугированием, затем промывают чистым этанолом и сушат при 60 С под глубоким вакуумом.
Получают 10 г продукта, имеющего следующие характеристики:
Титр USP 15 м.е./мг
Титр Юина-Весслера 253 ед/мг
Титр АРТТ 11 ед/мг
Сравнительные данные по свойствам продуктов, полученных предлагаемым и известным способами, приведены в табл. 2.
Упрощение процесса достигается эа счет получения продуктов, которые непосредственно могут быть использованы в терапевтии без дополнительной очистки.
1658820
В известном способе целевой продукт требует очистки с помощью адсорбционной хроматографии.
Таблица
Составитель T. Мартинская
Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор М. Демчик
Редактор И. Дербак
Заказ 1724 Тираж 327 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Формула изобретения
1. Способ получения мукополисахаридов обработкой гепарина деполимеризующим агентом, отл и ча ю щи и с я тем, что, целью упрощения процесса и получения целевого продукта с повышенной антикоагулянтной активностью, в качестве деполимеризующего агента используют нитрит натрия, а обработку проводят в водной среде в присутствии соляной или уксусной кислоты при рН 2,2 — 2.75 и массовом соотношении гепарина и нитрита натрия
1:(0,138-0,172) с последующими нейтрализацией раствора и высаждением целевого продукта этанолом
5 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что целевой продукт дополнительно обрабатывают боргидридом калия при массовом соотношении деполимеризованного гепарина и боргидрида калия 47:7, 10 З.Способпоп.1,отличающийся тем, что целевой продукт дополнительно обрабатывают перманганатом калия при массовом соотношении деполимеризованного гепарина и перманганата калия 20:1
15 при рН 8,5,