Способ стабилизации уриказы

Способ стабилизации уриказы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к энзимологии, а именно к способу стабилизации фермента уриказы. Сущность изобретения заключается в том, что. с целью увеличения сроков хранения уриказы, в способе, включающем растворение уриказы в щелочном водном растворе при 4-6°С, в качестве комплексообразующего соединения добавляют кальций-динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (I) и выдерживают 10-20 мин, в качестве серосодержащего соединения добавляют парааминобензолсульфацетамид натрий (II) и дополнительно в полученную смесь вводят 10%-ный раствор декстрана (III). При этом I добавляют из расчета 5-10 мг/мл раствора, содержащего 1000 ед, уриказы, II и III - соответственно 10-12 мг и 2-4 мл на 1 мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы. Предлагаемый способ позволяет повысить стабильнсть водных растворов уриказы при4-6°С до28- 30 сут. 1 з.п.ф-лы. (/ с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s C 12 N 9/06, 9/96

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4822340/13 (22) 04.05,90 (46) 30.04,92. Бюл. N" 16 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт текстильно-галантерейной промышленности (72) Л.И.Стекольников, В.В.Рыльцев, И,И,Самойленко и Б.Е.Рушайло (53) 577.15(088.8) (56) Holmerg С. Uricase purification and

properties. — Biochem J., 1939, н.33, р,1901—

1909.

Practorius Е., Poulsen Н. Enzymatic

determikation of uric acid. — Scand J. Chin.

Zab. Investig, 1953, v.5, N 3, р.273 — 278. (54) СПОСОБ СТАБИЛИЗАЦИИ УРИКАЗЫ (57) Изобретение относится к энзимологии, а именно к способу стабилизации фермента уриказы, Сущность изобретения заключаетИзобретение относится к энзимологии, конкретно к способу стабилизации фермента уриказы. катализирующего распад пуринов и используемого в составе анализаторов для определения концентрации мочевой кислоты в биологических жидкостях организма.

Известен способ стабилизации уриказы путем добавления к ферменту сульфита натрия (NazSOs), причем на каждые 1000 ед. уриказы добавляют 10--30 мМ NazSOs, Однако. этот способ не позволяет сохранять активность уриказы в водном растворе более 10 ч. Кроме того. Ка ЯОЗ легко окисляется на воздухе и растворы фермента при этом быстро желтеют.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения стабилизирован. Ы 1730145 А 1 ся в том, что. с целью увеличения сроков хранения уриказы, в способе, включающем растворение уриказы в щелочном водном растворе при 4 — 6 С, в качестве комплексообразующего соединения добавляют кальций-динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (1) и выдерживают 10-20 мин, в качестве серосодержащего соединения добавляют парааминобензолсульфацетамид натрий (11) и дополнительно в полученную смесь вводят 107,-ный раствор декстрана (1II). При этом I добавляют из расчета 5 — 10 мг/мл раствора, содержащего

1000 ед, уриказы, 11 и 111 — соответственно

10 — 12 мг и 2 — 4 мл на 1 мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы. Предлагаемый способ позволяет повысить стабильнсть водных растворовуриказы при4 — 6 Сдо28—, 30 сут. 1 з.п,ф-лы. ной уриказы, согласно которому в качестве стабилизаторов используют серосодержащее соединение — сульфит натрия из расчета 10-20 мМ на 10000 ед уриказы и комплексообразующее соединение — динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (йа2-ЭДТА) из расчета 1 — 2 мМ на

10000 ед. уриказы.

Недостатками известного способа я вляются непроизводительное время сохранения активности уриказы в водном растворе при 4-6 С вЂ” не более 1 сут, а также быстрое пожелтение раствора при хранении.

Цель изобретения — увеличение сроков хранения уриказы, Поставленная цель достигается тем, что согласно способу стабилизации уриказы, включающему растворение уриказы в ще1730145

10

Составитель Л,Стекольников

Техред М,Моргентал Корректор Н.Ревская

Редактор М.Петрова

Заказ 1488 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 лочном водном растворе при температуре

4 — 6 С, добавление комплексообразующего и серосодрежащего соединений и перемешивание смеси, рН щелочного раствора устанавливают 7,5 — 8,5. в качестве комплексообразующего соединения добавляют кальций-динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (тетацин-кальций) и выдерживают смесь в течение 10-20 мин, а в качестве серосодержащего соединения добавляют парааминобензолсульфацетамид натрий (сульфацил-натрия) и дополнительно 10 -ный раствор декстрана (реополиглюкин), при этом тетацин-кальций добавляют из расчета 5 — 10 мг/мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы, сульфацилнатрия и реополиглюкин соответственно

10 — 12 мг и 2 — 4 мл на 1 мл раствора. содержащего 1000 ед. уриказы.

Пример 1, 10 мл водного раствора, содержащего 1000 ед,/мл уриказы из печени свиней, подщелачивают 0.1 н,раствором

NaOH до рН 7,5, добавляют 50 мг тетацинкальция (5 мг/мл), смесь выдерживают 10 мин, затем добавляют 100 мг сульфацил-натрия (10 мг/мл) и 20 мл раствора реополиглюкина (2 мл/мл). Получают раствор. в котором активность уриказы сохраняется при 4 — 6 С в течение 28 сут.

Пример 2. 10 мл водного раствора, содержащего 1000 ед./мл уриказы из печени свиней, подщелачивают 0,1 н. раствором

NaOH до рН 8,0, добавляют 75 мг тетацинкальция (7,5 мг/мл), смесь выдерживают 15 мин, затем добавляют 110 мг сульфацил-натрия (11 мг/мл) и 30 мл раствора реополиглюкина (3 Mfl/мл). Получают раствор, в котором активность уриказы сохраняется при 4 — 6 С в течение 29 сут.

Пример 3. 10 мл водного раствора, содержащего 1000 ед,/мл уриказы из пече5 ни свиней, подщелачивают 0,1 н.раствором

NaOH до рН 8,5, добавляют 100 мг тетацинкальция (10 мг/мл), смесь выдерживают

20 мин, затем добавляют 120 мг сульфацилнатрия (12 мг/мл) и 40 мл реополиглюки10 на (4 мл/мл). Получают раствор, в котором активность уриказы сохраняется при 4 — 6 С в течение 30 сут;

Формула изобретения

1, Способ стабилизации уриказы, вклю15 чающий растворение уриказы в щелочном водном растворе при 4 — 6 С, добавление комплексообразующего и серосодержащего соединений и перемешивание смеси, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью увеличе20 ния сроков хранения уриказы, рН щелочного pacTsopa устанавливают 7,5 — 8,5, в качестве комплексообразующего соединения добавляют кальций-динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты и вы25 держивают смесь в течение 10 — 20 мин, а в качестве серосодержащего соединения добавляют парааминобензолсульфацетамид натрий и в полученную смесь дополнительно вводят 10%-ный раствор декстрана.

30 2. Способ по и 1, отличающийся тем, что кальцийдинатриевую соль этилендиаминтетрауксуснй кислоты добавляют из расчета 5 — 10 мгlмл раствора, содержащего

1000 ед. уриказы, парааминобензолсульфа35 цетамид натрий и декстран соответственно

10 — 12 мг и 2 — 4 мл на 1 мл раствора, содержащего 1000 ед, уриказы.