Способ получения производных дипептидов или их фармакологически приемлемых солей

Способ получения производных дипептидов или их фармакологически приемлемых солей

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Использование: в медицинской химии при получении соединений, обладающих способностью ингибировать ренин. Сущность изобретения: способ получения производных дипептидов общей формулы R 1-C(0)-A-B-NH-CH(R2)CH(OH)CH2CH2 СН2рн-сн-рн С- где RI гетеро-(С1-С2)-алкил, гетеро- (С1-С2)алкоксигруппа, гетеро-меркапто-(С.1-С2)-алкил, причем гетеро означает 5-6-звенное моноциклическое кольцо, которое может быть ароматическим, частично или полностью гидрированным, содержащим в качестве гетероатома азот и дополнительно содержащим азот, кислород или серу: R2 циклоалкил-()алкил-(Сг-С4); А и В независимо друг от друга обозначают остаток аминокислоты, связанный R или А с концевым атомом азота и с. В или- NH(R2)CH-CH(OH) (СН2)з с концевым атомом углерода, выбранный из группы: фенилаланин, гистидин. метионин, норвалин, или их фармакологически приемлемых солей. Реагент 1: фрагмент, содержащий концевую арбоксильную группу или его реакционно-способное производное. Реагент 2: фрагмент, содержащий свободную аминогруппу . Полученный продукт, в случае необходимости , деблокируют. с/

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 С 07 К 5/06//A 61 К 37/02

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ь

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4742564/04 (22) 08.12,89 (46) 23,08.93. Бюл. М 31 (31) Р 38417324 (32) 10.12.88 (33) t. E (71) Хехст АГ (DE) (72) Вольф-Ульрих Никель, Хансиерг Урбах, Дитер Рупперт и Бернвард Шелькенс (ОЕ) (56) Шредер 3., Любке K. Пептиды. М,; Мир, 1967,"ч,1, с.116, (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ДИПЕПТИДОВ ИЛИ ИХ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫХ СОЛЕЙ (57) Использование: в медицинской химии при получении соединений, обладающих способностью ингибировать ренин. Сущность изобретения: способ получения производных дипептидов общей формулы

R 3 — C(0) — А —  — NH — CH(Rz)Cl 1(ОН)СН2СН2 CH2—

СН-СН=СН у I

С вЂ” М=СН где Rq гетеро-(С1 — Ср)-алкил, гетеИзобретение относится к получению биологически активных органических соединений и касается способа получения производных дипептидов, оказывающих тормозящее действие на природный фермент ренин и виральные аспартилпротеазы.

Согласно изобретению получают производные дипептидов общей формулы!

Q R ОН 1 1 1 й1 А в NH Сн Сн СН2СН2СН 2 D где R1 — гетеро — (Ci-С2) — алкил, гетеро — (P)Cz) алкоксигруппу, гетеро-меркапто — (С вЂ”

СЯ- алкил, причем "гетеро" означает

5--7-звенное моноциклическое кольцо, которое мо>;от быть ароматическим. частично

„„5U„„1836381 АЗ ро — (С1 — Сг) — алкоксигруппа, гетеро-меркапто-(С1-Сг)-алкил, причем гетеро означает 5 — 6-звенное моноциклическое кольцо, которое может быть ароматическим, частично или полностью гидрированным, содержащим в качестве гетероатома азот и дополнительно содержащим азот, кислород или серу: R2 циклоалкил — (С4-С7) — алкил — (С вЂ” - Ca);

А и В независимо друг от друга обозначают остаток аминокислоты. связанный-c R или. А с концевым атомом азота и с . В или—

МН(К2)СН вЂ” CH(OH) (CHz)a с концевым атомом углерода, выбранный из группы: фенилаланин, гистидин, метионин, норвалин, или их фармакологически приемлемых солей. Реагент 1: фрагмент, содержащий концевую карбоксильную группу или его реакционно — способное производное. Реагент

2: фрагмент, содержащий свободную аминогруппу. Полученный продукт, в случае необходимости, деблокируют, или полностью гидрированным, которое в качестве гетероатомов содержит атом азота и дополнительно гетероатом из группы азот, кислород, сера;

Кг — (С 1 — С7) — ц и кл о ал к ил-(С1 — С4) — ал кил;

А и В независимо друг от друга означают связанный с R> или А — с концевым атомом азота и с В или NH-CHRIS — CHOH — (СН2)з — с концевым атомом углерода остаток аминокислоты из следующего ряда: фенилаланин, гистидин, метионин, норвалин или норлейцин, а также их физиологически приемлемые соли.

Согласно изобретению указанные соединения получают взаимодействием фраг1836381 мента с концевыми карбоксильными группами или его реакционноспособного производного с соответствующим фрагментом со свободной аминогруппой, при желании от. щеппяют введенную временно для защиты других функциональных групп защитную группу (или группы) и полученное таким образом соединение при желании переводят в его физиологически приемлемую соль, Фрагменты соединения формулы с концевой карбоксильной группой имеют формулы Illa, illa и lllc: Г P, — С вЂ” -OH Р,— С-А-В-ОЙ в-соон 1 1, 1

ЩС

Фрагменты соединения формулы с концевой аминогруппой имеют формулы

Иа, Ив и!Чс: . R QH z -A-8-NH-cH-Сн-Сн-Р „Ea

2 OH RÇ нг 8 »-сн-сн-сн-р р„ M-ÑÍ-СН-СН р, аС

, 6н р, Предпочтительно для получения амидной связи используются следующие способы: способ активного эфира с использованием

N-оксисукцинимида или 1-оксибензотриазола в качестве эфирного компонента, сочетание с карбодиимидом, например дициклогексилкарбодиимидом, или ангидридом пропанфосфоновой кислоты и смешанный ангидридный метод с использованием пивалоилхлорида, Для получения использующихся в качестве исходных соединений оптически активных аминов формулы IVc

R, ОН 2 СН Сн Сн3 где Rz имеет указанные значения, в качестве исходного материала берут оптически активные а-аминокислоты с центром асимметрии. Для получения такой аминокислоты, которая сохраняла бы центр симметрии, получают известным способом:ее N-защищенный альдегид, который затем с помощью аналогичного альдольному присоединению способа сочетают с соответствующим гетероалкильным структурным элементом. В результате, после отщепления N-защитной группы, образуются аминоспирты формулы

lVr..

Получают смесь диастереоизомеров относительно центра, связанного с ОН-группой, которую затем разделяют известным способом, например путем фракционной кристаллизации или хроматографии, на отдельные изомеры, Контроль чистоты диастереоизомеров осуществляют с помощью высокопроизводительной жидкостной хроматографии, Чистоту энантиомеров можно контролировать известным способом путем перевода в Mosher-производные, Аналогичную альдольному реакцию присоединения к N-защищенным альдегидам аминокислот (предпочтительно с

N-трет-бутоксикарбонильными и бензилоксикарбонильными защитными группами) проводят в среде инертного по отношению

15 к основаниям растворителя, например эфира, тетрагидрофурана, толуола, диметилсульфоксида, диметилформамида или диметоксиэтана.

B качестве оснований для депротониро20 вания гетероалкильных компонентов можно испольэовать алкоголяты щелочных металлов. такие как 0-трет-бутилат калия, метилат натрия, гидриды щелочных металлов, такие как гидрид натрия или калия,металлоорганические основания, такие как н-бутиллитий, втор-бутиллитий, метиллитий или фениллитий, амид натрия, а также соли щелочных металлов органических азотистых оснований, например диизопропиламида

3О лития.

Необходимые для получения соединений формулы 1 предварительные и окончательные операции, такие как введение и отщепление защитных групп, являются из35 вестными. Соли соединений формулы с солеобразующими группами получают известными способами, например путем взаимодействия соединения формулы I c основной группой со стехиометрическим

4О количеством подходящей кислоты. Смеси стереоизомеров, в частности смеси диастереоизомеров, образующиеся при использовании в качестве исходного материала рацемических аминокислот А или В, могут

45 быь разделены на отдельные изомеры известным образом,. путем фракционной кристаллизации или хроматографии.

Под физиологически приемлемыми солями соединений формулы 1 понимают соли как органических, так и неорганических кислот.

Соли соединений формулы 1 получают взаимодействием эквимолярных количеств соединений формулы (I) и пригодной кисло55 ты (соляной, серной, уксусной, малеиновой, винной и т.д.) или пригодного основания (гидроокиси натрия, калия, аммония, тризтиламин, морфолин и т.д) в инертном растворителе (ацетон, CHzClz, ЕЕ и т.д). Если соль не кристаллизуется, ее получают в

1836381 аморфном виде путем вымораживания водного раствора, Предлагаемые в соответствии с настоящим изобретением соединения формулы I обладают способностью тормозить действие ферментов. В частности, они тормозят действие природного фермента ренина. Ренин представляет собой протеолитический фермент класса аспартилпротеаз, который в результате воздействия различных раздражителей (истощение объема, дефицит

10 натрия, Р-рецепторная стимуляция) выделяется в кровь юкстагломерулярными клетками почек. Там он отщепляет от выделяющегося иэ печени ангиотензиногена декапептид ангиотенэин I. Последний под действием Angiotensin converting ensyme (АСЕ) переводится в ангиотенэии ll. Ангиотензин Il играет важную роль при регулировании кровяного давления, так как

20 непосредственно повышает его за счет ангиоспаэма. Кроме того, он стимулирует выделение альдостерона из надпочечников и увеличивает благодаря этому через торможение выделения натрия внеклеточный

25 объем жидкости, что, в свою очередь, способствует повышению кровяного давления, Ингибиторы ферментной активности ренина способствуют снижению количества .образующегося ангиотензина I, что приводит и к уменьшению количества образующегося ангиотензина II Уменьшение концентрации этого активного пептидного гормона является непосредственной причиной снижения кровяного давления, вызываемого действием ингибиторов ренина.

Активность ингибиторов ренина может

35 быть определена в опытах in vitro. Для этого человеческий ренин).

1. Принцип испытаний.

К примеру, человеческую плазму, содержащую как ренин, так и ангиотензиноген, выдерживают при 37 С с испытуемым соединением. При этом под действием ренина из ангиотензиногена выделяется в свободном виде ангиотензин I, количество которого может быть затем определено с помощью обычного радиоиммунного анализа. Выделение ангиотензина тормозится ингибиторами ренина.

2. Получение плазмы.

Берут кровь у добровольных пробандов (около 0,5 л у человека; прибор для взятия крови фирмы ASID Bona and Sohn, UnterschllIibheIm) и охлаждают ее льдом в частично вакуумированных склянках. Для предотвращения свертывания к крови доI

55 определяют уменьшение количества образующегося ангиотенэина I в различных сис- . 40 темах (человеческая плазма, очищенный бавляют ЭДТА (конечная концентрация

10 ммоль). После центрифугирования (Rotor

HS4 (Sorvall). 3500 об/мин, 0-4"С; 15 мин; повторение в случае необходимости) плазму осторожно отбирают пипеткой и эамораживают подходящими порциями при -30 С. В опытах используют тольку плазму с достаточно высокой активностью ренина. Плазму с низкой активностью ренина активируют путем обработки при низких температурах (-4 С, 3 дня) (проренин при этом переходит в ренин).

3. Проведение испытаний.

Ангиотензин I определяют с помощью набора Penin-Mala . Инкубацию плазмы проводят по приведенной в наборе инструкции. Смесь, подвергаемая инкубации:

1000 мкл плазмы (после оттаивания при

0-40 С)

100 мкл фосфатного буфера (рН 7,4) с добавкой 10 М Ramiprilat

-4

10 мкл раствора PMSF

10 мкл 0,1% Genapol PFIC

12 мкл ДМСО или испытуемого препарата

Испытуемые препараты растворяют в

100%-ном диметилсульфоксиде (ДМСО) и разбавляют ДМСО таким образом, чтобы конечная концентрация их равнялась 10 М.

Смесь для инкубирования должна содержать не более 1% ДМСО. Приготовленные для инкубирования смеси смешивают со льдом и помещают на 1 ч для инкубации в водяную баню (37 С). Иэ дополнительной смеси, не содержащей ингибитора, не проводя инкубацию, отбирают 6 проб по 100 мкл для определения исходного содержания аногиотенэина1 в используемой плазме.

Концентрации испытуемых препаратов выбирают таким образом, чтобы перекрыть область примерно 10 — 90%-ного торможения фермента (как минимум 5 концентраций), В конце инкубирования иэ каждой смеси отбирают по три пробы по 100 мкл, замораживают их в предварительно охлажденных сосудах Эппендорфа на сухом льду и сохраняют до определения ангиотензина

1 при температуре около -25 С (берут среднее значение из трех определений).

Радиоимунный анализ (RIA) ангиотензина I, Анализ проводят точно по инструкциИ, содержащейся в наборе RIA, Калибровочная кривая охватывает интервал концентраций ангиотенэина 102—

25,0 нг/мл. Исходное содержание ангиотензина I в плазме вычитают из всех измеренных значений. Активность ренина в плазме (PRA) выражают в нг Anq 1/мл.ч.

Значения PRA в присутствии исп . туемых .

1836381 соединений соотносят со смесью, не содержащей ингибитора (=100 ), и выражают в остаточной активности. Из графика зависимости ф, остаточной активности от концен. трации (M) испытуемого препарата (логарифмическая шкала) определяют значения !С50.

Описанные в настоящем изобретении соединения общей формулы I оказывают тормозящее действие в опытах in vitro при концентрациях примерно 10 — 10 мол/л.

Ингибиторы ренина способствуют снижению кровяного давления у животных с пониженным содержанием солей, Поскольку человеческий ренин отличается от ренина других видов, то для опытов с ингибиторами ренина !и ч!чо использовали приматов (игрунков, макак резус). Ренин приматов и человеческий ренин являются гомологами, Путем внутривенной иньекции фуросемида вызывают эндогенное выбрасывание ренина, Затем животных вводят испытуемые соединения и определяют их действие на кровяное давление и частоту сердечных сокращений. В результате опытов установлено, что соединения в соответствии с настоящим изобретением проявляют активность при внутривенном введении при дозе порядка 0,1 — 5 мг/кг, а при интрадуоденальном введении через гастроскоп — при дозе около 1 — 50 мг/кг.

Описанные в настоящем изобретении соединения общей формулы могут использоваться в качестве средств, снижающих артериальное давление, а также для лечения сердечной недостаточности.

HIV-протеаза автокаталитически выделяется из GAG-POI -полипептида и расцепляет затем пептид-предшественник р55 на

Coze-антигены р17, р24 и р14. Она,. таким образом, является важным ферментом, торможение которого прерывает жизненный цикл указанного вируса и препятствует его размножению, В ходе биологических опытов установлено, что соединения в соответствии с настоящим изобретением оказывают тормозящее действие на ферменты, а также ингибируют вирусные ферменты, такие как HIV-протеазу. Особенно важное значение имеет их ингибирующее действие на HIV-протеазу, что позволяег использовать соединения в соответствии с настоящим изобретением для лечения и профилактики болезней, вызываемых инфекцией HIV. Б опытах установлено, что предлагаемые в соответствии с настоящим изобретением соединения общей формулы оказывают тормозящее действие при концентрациях порядка 10

10 моль/л.

Соединение формулы применяют для получения лекарственных препаратов для лечения высокого кровяного давления, застойной сердечной недостаточности, а также для лечения и профилактики вирусных заболеваний, в частности болезней, вызываемых НИ.

Пример 1, N-(2-Аминотиазол-4-ил-ацетил)-1=РЬе-(-!Чча-(1-S-циклогексил-метил2S-окси-5(2-пиридил))-н-пентиламид, 100 мг N — (N-трифенилметил-2-аминотиазол-4-ил-ацетил)-! -Phe-! -Nva-(1-S-циклогексилметил-2-S-окси-5-(2-пиридил})-н-пентиламида перемешивали B течение 5 ч при

R.Т. в смеси муравьиной кислоты и воды в соотношении 5:1. После этого отсасывали выпадающий осадок трифенилметанола, промывали его холодной водой и упаривали водный раствор в вакууме. Остаток растворяли в уксусноэтиловом эфире и дважды промывали разбавленным раствором чаНСОз до нейтральной реакции, после чего промывали насыщенным раствором

NaCI, высушивали Hà MgSO<, отфильтровывали от осушителя и упаривали. Выход

57 мг, Температура плавления: 87 С, MS(FAB): 664 (М +1).

Пример 2. N-(N-трифенилметил-2-амино-тиазол-4-ил-ацетил)-! -Phe-! — Nна-(1-Sциклогексилметил-2-S-окси-5-(2-пиридил))

-н-пентиламид.

262 мг N — (N-трифенилметил-2-аминотиазол-4-ил-ацетил)-1-фенилаланина растворяли с 81 мг НОВ1, 109 мг ОСС и 67 мкл NEM в 5 мл DMF и перемешивали раствор в течение часа при R.Т. После этого добавляли к реакционной смеси 180 мг N-норвалин-(1-5ци клогексил метил-2-S-окси-5-(2-и и ридил))

-н-пентиламида, растворенного в 2 мл DMF.

Смесь перемешивали втечение 48 ч при R,T.

Затем ее разбавляли водой, отфильтровывали выпадающий осадок дициклогексилмочевины, а раствор упаривали в вакууме.

Остаток растворяли в уксусноэтиловом эфире и трижды промывали насыщенным раствором !чаНСОз, дважды насыщенным раствором NaCI, затем высушивали над

М9504 и упаривали. После хроматографической очистки на силикагеле (CHIC!2/МеОН 20:1) получали 210 мг целевого продукта.

Температура плавления: 75 С. MF (FAB): 906 (М +1).

Пример 3. N-(N-Трифенилметил-2аминотиазол-4-ил-ацетил)-1-фенилаланин а). 3,2 r N-трифенилметил-2-аминотиаэол-4ил-уксусной кислоты. 1.34 г HOBt, 1,81 r

DCC. 1,48 г -Phe-GMe и 1 мл N-этилморфолина растворяли в указанной последовательности в 30 мл абсолютного DMF u перемешивали раствор в течение ночи, Че183638 !

55 р,:з 2« ч реакционную смесь разбавляли небольшим когичеством воды. отфильтронывзли ehiïaäзющий осадок дициклогексилмочевины и полученный расгвор упзривали в вакууме. Остаток растворяли в уксусноэтиловом эфире и трижды промывали разбавленным раствором !чаНСОз, дважды 10ь-ным раствором лимонной кислоты и дважды насыщенным раствором

NaCl. Органическую фазу высушивали над

MgSO4, после чего упаривали. После очистки с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием в качестве подвижной фазы смеси циклогексана и ЕЕ получали 3.6 г метилового эфира в виде маслянистой жидкости.

e) 3,4 r полученного по пункту (а) метилового эфира в 30 MR смеси диоксана и в«ды в соотношении 1:1 перемешивали в течение

3 ч при R.T. с эквимолярным количеством

1-нормального раствора едкого натра, После этого из реакционного раствора удаляли в вакууме диоксан, подвергали его экстракции диэтиловым эфиром, водную фазу подкисляли до рН 3 и трижды подвергали экстракции уксусноэтиловым эфиром, Органическую фазу высушивали над MgSO4, осушитель отфильтровывали, а раствор упаривали в вакууме. Выход бесцветного твердого вещества 2.7 г, Температура плавления 205 — 208 С.

Пример 4. N-трет-Бутоксикарбонилнорвзлил-(1-S-циклогексилметил-2-S-окси-5-(2-и и ридил))-н-пентиламид.

2,1 г N-трет-бутоксикарбонил-норвалина, 1,6 г НОВт, 2,1 г DCC и 1.4 мл N-этилморфолина растворяли в 50 мл абсолютного

DMF; К приготовленному раствору добавляли при 0 С 2.6 r 2-S-амино-1-циклогексил-3S-окси-6-(2-п и ридил)-гекса на, растворенного в 5 мл DMF. Раствор перемешивали в течение 48 ч при R T. После этого к реакционной смеси добавляли 5 мл воды, отфильтровывали ее от выпадающего осадка дициклогексилмочевины и разбавляли

150 мл уксусноэтилового эфира, Эту фазу трижды экстрагировали насыщенным раствором ИаНСОз, дважды насыщенным раствором !чаС! и дважды водой. Органическую фазу высушивали над MgSO4 и упаривали в вакууме, после чего подвергали хроматографии на силикагеле, используя в качестве подвижной фазы смесь СНгС!г и МеОН. В результате получали 3.56 г продукта в виде вязкой маслянистой жидкости. Угол оптического вращения: ac = -47.4" (с=1,135, метанол), MS (FAB): 476 (М +1).

Пример 5. -Nva-(1-S-Циклогексилметил-2-S-окси-5-(2-пиридил)-н-пентиламид.

200 мг описанною в примере 1 соедпнепния растворяли при 0 С е 3 мл трифюруксусной кислоты и проводили растворение в течение 30 мин. После нагревания до R Т. избыток трифторуксусной кислоть о гоняли в вакууме, остаток растворяли в уксусноэтиловом эфире и трижды подвергали полученный раствор экстракции разбавленным раствором йаНСОз, Органическую фазу промывали насыщенным раствором йзС! и водой, высушивали над MgSO4, отфильтровывали осушитель и упаривали. В результз те получали маслянистую жидкость.

Полученное таким образом производное аминокислоты с защищенным концевым атомом азота очень быстро использовали для последующего синтеза. MS (FAB): 376 (M + 1).

Пример 6. N-(S-4-Пиридил)-меркаптоацетил)-! -фенилаланин.

Целевое соединение получали из (4-пиридил)-меркаптоуксусной кислоты и метилового эфира 1=фенилаланина описанным в примере 3 способом, Температура плавления 199 — 201 "С, Н-ЯМР (60 мГц, dr-DMSO): д=3,05 (2Н. СНг); 3,8 (2Н, СН СО) 4,5 (м. 1Н, С вЂ” Н), 7,30 (с. 5Н, фенил ; 8,0-8,7 (м. 4Н, пиридил) М$ (DCI); 317 (M + 1).

Пример 7, N-(S-(4-Пиридил)-меркаптоацетил)-1-Phe-! -Nva-(1-S-циклогексилметил-2-S-о к с и-5-(2-и и р ид ил))-н-и е н т ил а м ид.

Целевое соединение получали из описанного в примере 6 производного фенилаланина и описанного s примере 5 производного норвзлина по примеру 2. MS (FAB): 674 (М + 1), Пример 8. N-(2-Пиридил)-этоксикарбонил-! -Phe-I -Nva-OH.

Целевое соединение получали из N-(2пиридил)-этокси карбонил-L-фен ил алан и на и (=Муз-ОМе по примеру За с последующим омылением сложного эфира в соответствии с примером Зв. MS (FAB); 414 (М +1).

Пример 9, N-(2-Пиридил)-этоксикарбонил-L-Phe-ИЧна-(1-S-циклoråксилметил2-S-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

Целевое соединение получали из описанного в примере 8 дипептида и 2-Sамино-1-S-циклогексил-3-S-окси-б-(2-пири дил)-гексана по примеру 4. MS (ГАВ): 672 (М + 1).

Пример 10. N (3-Пиридил)-этоксикзрбонил-! -Phe-(=Nva-(1-S-циклогексилметил2 -S-о к си-5-(2-и и р ид ил))-н-и е н т ил а м ид.

Целевое соединение получали из N-(3пиридил)-этоксикарбонил-L-Phe и nriисзнного в примере 5 соединения по при . еру 2.

Температура плавления 46--50 С M. (- >F3):

672 (М + 1).

1836381

Пример 11. N-(4-Пиридил)-этоксикарбонил-i -Phe-1 -Nva-(1-S-циклогексилметил2-S-окси-5-(2-пиридил)))-н-пентиламид.

Целевое соединение получали из N-(4пиридил)-этоксикарбонил-L-Phe и описан- 5 ного в примере 5 соединения по примеру 2, MS (FAB): 672 (M +1).

Пример 12. Fmoc-His (Trt)-(1-S-циклогексилметил-2-S-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид. 10

1,2 г Fmoc — His (Trt)-OH, 340 мг HOBt, 445 r DCC и 0,3 мл NEM растворяли в 11 мл

DMF и перемешивали полученный раствор в течение часа при R.Т. Смесь затем смешивали с 580 мг 2-S-амино-1-S-циклогексил-3- 15

S-окси-6-(2-пиридил)-гексана, растворенного в 4 мл DMF, и перемешивали в течение ночи. После добавления 5 мл воды отфильтровывали выпадающий осадок мочевины, а фильтрат растворяли в 100 мл 20 уксусноэтилового эфира. Органическую фазу трижды промывали насыщенным раствором ИаНСОз и два раза расыщенным раствором NaCI, после чего высушивали над

MgS04 и после фильтрации упаривали в ва- 25 кууме. Остаток подвергали хроматографии на силикагеле (СН2С12/MeOH). Выход целевого соединения 1,06 r, Температура плавления 85 С.

Пример 13, Н-His (Trt)-(1-S-циклогек- 30 силметил-2-S-окси-5-(2-пи ридил))-н-пентиламид, 500 мг описанного в примере 12 соединения растворяли в 5 мл абсолютного DMF вместе с 0,6 мл диэтиламина и перемешива- 35 ли раствор в течение 20 мин при R.Т, После этого растворитель отгоняли в глубоком вакууме, а остаток подвергали хроматографии на силикагеле, используя в качестве подвижной фазы смесь CHzClz и МеОН, В 40

Ф результате получали 320 мг целевого соединения, MF (FAB}; 656 (М +1).

Пример 14. N-(2-Пиридил)-этоксикарбонил-L-Phe-1 -His(Trt)-(1-S-циклогексилме- 45 тил-2-S-окси-5(2-пиридил))-н-пентиламид, 157 мг 2-Руос-(=Рпе 85 мг HQBt, 113 мг

DCC и 70 мкл NEM растворяли в 5 мл DMF и полученный раствор смешивали с раствором 310 мг соединения, полученного в при- 50 мере 13. в 3 мл DMF. Смесь перемешивали в течение 58 ч и далее процесс проводили так же, как в примере 12. В результате получали 265 мг целевого соединения, MS (FAB)

: 953 (М + 1), 55

Пример 15. N-(2-Пиридил)-этоксикарбонил-1.-Phe-L-His-(1-S-циклогексилметил2-S-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид, 115 мг соединения, полученного в соответствии с примером 14 перемешивали е течение 1.5 ч с 2,5 мл трифторуксусной киг.лоты. После этого избыток кислоты удаляли в вакууме, а остаток растворяли в уксусноэтиловом эфире и нейтрализовывали разбавленным раствооом МаНСОз. Эфирный раствор высушивали над М9$0а фильтровали и упаривали в вакууме. После хроматографии остатка на силикагеле с использованием в качестве подвижной фазы смеси СН2С12 и МеОН получали 57 мг целевого продукта. Температура плавления

68"С, MS (FAB); 710 (M + 1).

Пример 16, 2-Руос- -метионин, 6 г 2-(2-пиридил)-этил-и-нитрофенилкарбоната и 2,5 г L-Met-OMe растворяли в

60 мл ацетонитрила, смешивали полученный раствор с 1-нормальным раствором

NaGH до достижения рН 8,5 — 9,0 и перемешивали смесь до окончания реакции (контроль с помощью тонкослойной хроматографии), Затем ацетонитрил отгоняли в вакууме и водный раствор реакционной смеси экстрагировали диэтиловым эфиром при рН 9, затем при рН 6 и после дальнейшего подкисления 1 н.HCl при рН 3. В результате последней экстракции получали целевой продукт, который подвергали очистке с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь CH2Clz и ЕЕ. Выход 2,43 г. 2,2 r полученной таким образом маслянистой жидкости растворяли в 30 мл смеси этанола и воды с соотношением 2;1 и смешивали с

585 мг твердого NaOH. Через 2 ч этанол отгоняли в вакууме, рН водного раствора устанавливали равным 3 и упаривали его в вакууме, Остаток смешивали с ацетоном и органический раствор отделяли от нерастворимых компонентов, После высушивания и упаривания раствора получали 1,89 г целевого соединения. Угол вращения ар = -9,4

20 о (c=1, зтанол).

Пример 17. N-(2-Пиридил)-этоксикарбонил-(-Met- -Nva-(1-$-циклогексилметил2-S-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

Проводили реакцию между 167 мг 2-Руос-Met -ОН и 190 мг соединения, полученного в соответствии с примером 5, по примеру

2. После описанной в этом гримере переработки и хроматографии получали 64 мг целевого соединения. Температура плавления

104 — 105 С. MS (FAB): 657 (M +1).

Пример 18. 4-Пиридилметил-4-нитрофенилкарбонат.

20,3 г и-нитрофенилового эфира хлормуравьиной кислоты растворяли в 150 мл абсолютного СН2С!2 и охлаждали раствор в атмосфере Nz до 0"С. K приготовленному раствору добавляли 520 мг 4-диметиламинопиридима (О МАГ (, затем по каплям рас1836381

reop 10 r 4-оксиметилпиридина в 50 мл абсолютного CH2Clz, Смесь перемешивали в течение ночи при К.T. и отфильтровывали выпадающие кристаллы, которые перекристаллизовывали из свежего СН2С!2 при высокой температуре и после охлаждения снова отфильтровывали. Выход 17,5 r. Температура плавления 150-154 С.

Пример 19. N-4-Пиридилметоксикарбонил-L-фенилаланин.

8 г 4-пиридилметил-4-нитрофенилкарбоната и 4,82 г L-фенилаланина растворяли в 350 мл смеси ацетонитрила и воды, взятых в соотношении 1:1, и смешивали раствор примерно с 45 мл 2 н,Na0H до достижения рН 10. Смесь перемешивали в течение ночи, после чего отгоняли ацетонитрил в вакууме. рН водного раствораустанавливали равным

6, трижды промывали раствор диэтиловым эфиром, после чего его рН устанавливали равным 1 и упаривали до получения твердого остатка, Этот остаток растворяли в воде, экстрагировали уксусноэтиловым эфиром, устанавливали рН равным 2 и отсасывали выпадающий осадок. Масса осадка после высушивания 7,3 r. Температура плавления l95-197 С, Таким же образом, как в случае соединения, описанного в примере 19, получали следующие соединения.

Пример 20, N-(2-(N-Фталимидил)-этоксикарбонил)-L-фенилаланин, Температура плавления 65-72 С.

Пример 21. Гидрохлорид N-(3-пиридилэтоксикарбонил)-L-фенилаланина.

Температура плавления 105 С.

Пример 22. Гидрохлорид N-(2-пиридилэтоксикарбонил)-L-метионин-сульфона.

Температура плавления 48ОС, Пример 23, N-(4-Пиридилэтоксикарбо н ил)-L-фе н ил ал а н и н.

Температура плавления 196 — 204 С (с разложением).

Пример 24. N-(N-трет-Бутоксикарбон ил-4-пиперидил)-этоксикарбонил-L-фенилаланин, MS (DCI): 421 (M + 1).

Пример 25. N-(N-трет-Бутоксикарбонил-2-пиперидил)-этоксикарбонил-L-фенилаланин, Температура плавления 52 С, Пример 26, N-)2-4-Морфолино)-этоксикарбонил)-L-фенилаланин.

MS (DCI): 323 (М + 1), температура плавления 66 С (сублимация).

Пример 27. N-(2-(N-Метилпирролидин-2-ил)-этоксикарбоиил)-L-фенилаланин.

MS (DCI): 321 (М - 1).

Пример 28. N-(2-(4-трет-Бутоксикарбонилпиперазин-1-ил)-этоксикарбонил)-Lфенилаланин.

MS (DCI); 421(М + 1). температура плав5 ления 85 С.

Таким же образом, как и в случае соединения, описанного в примере 17, получали следующие соединения:

Пример 29. N-(2-(N-Фталимидил)-эток10 сикарбонил)-1 -Phe-L-Nva-(-S-циклогексилметил-2-S-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид, Целевое соединение получали из соединений в соответствии с примерами 20 и 5 по

15 примеру 2.

Температура плавления 57 — 62 С; MS (FAB): 740 (M + 1).

Пример 30. N-(3-Пиридилэтоксикарбонил)-1 -Phe-1 -His-(1-S-циклогексилметил20 -2-S-окси-5-(2-пиридил)) — н-пентиламид,.

MS (FAB); 709 (M + 1), Пример 31. N-(2-Морфолин-4-ил)-этоксикарбонил-L-Phe-L-Nva-(1-S-циклогексил метил-2-S-окси-5-(2-пиридил))-н-пентила25 мид.

MS (FAB); (M +1).

Пример 32. N-(2-(N-Метилпирролидин-2-ил))-этоксика рбонил)-L-Р he-Неуча-(1

-S-циклогексилметил-2-S-окси-5-(2-пири30 дил))-н-пентиламид, Температура плавления 115 — 125 С; MS (FAB): 678 (M + 1); Pg 0,52 (CHzClg/СНзОН/

/Н20/СНзСОО Н 100/50/10/5), Пример 33. N-(2-(4-трет-Бутоксикар35 бонилпиперазин-1-ил)-этоксикарбонил)-1=

Phe-1 -Nva-(1-S-циклогексилметил-2-S-окси

-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

MS (FAB): 779 (M + 1).

Пример 34. N-(2-(2-Пиридил)-этокси40 карбонил)-L-метионинсульфон-L-норвалин(1-S-циклогексил метил-2-S-о кси-5-(2-пи риди л))-н-и е н т ил а м ид.

Температура плавления 79 — 81 C; MS (FAB): 689 (М + 1).

45 П. р и м е р 35. N-(2-(N-трет-Бутоксикарбонил-2-пипе риди н)-этоксика рбонил)-L-Phe

-1-Nva-(1-S-циклогексилметил-2-S-окси-5(2-пиридил)-пентиламид.

Целевое соединение получали из соеди50 нений в соответствии с примерами 5 и 24 по примеру.2.

MS (FAB): -778 (M +1); температура плавления 59 — 61 С.

Пример 36. N-(2-(2-Пиперидил)-эток55 сикарбонил)-1=Рпе-L-Nva-(1-S-циклогексилметил-2-S-окси-5-(2-пиридил)-пентиламид.

Целевое соединение получали из описанного в примере 34 соединения по примеру 5 с последующей хроматогрзфической очисткой на силикагеле, 1836381

MS jFAS): 678 (M + 1); Rg 0,30 (СНгС(г/МеОН, 9: 1).

Г! р и м е р 37. N-(2 (N-трет-Бутоксикарбонил-4-пиперидил)этоксикарбонил)!-Ph е-НМа-, 1-S-циклогексилметил-2-S-окси-5- 5 (2-пиридил)-пентиламид, Целевое соединение получали из соединений в соответствии с примерами 23 и 5 по примеру 2.

MS (FAB): 778 (М + 1); температура 10 . плавления 65 — 72 С.

Пример 38. й-(2-(4-Пиперидил)-этоксикарбонил)-L-Phe-! -Nva-(1-$-циклогексилметил-2-$-окси-5-(2-пиридил) пентиламйд.

Целевое соединение получали из опи- 15 санного в примере 36 соединения по примеру 5 с последующей хроматографической очисткой на силикагеле.

MS (FAB): 678 (M +1); Rg 0,22 (СНгС!г/метанол, 9:1), 20

Пример 39. N-(2-(й-трет-Бутоксикарбонил-2-пиперидил)-этоксикарбонил) lPhe-1.-Hls-(1-S-циклогексилметил -2-S-окси-5-(2-пиридил)пентиламид, Температура плавления 98 С (с раэло- 25 жением);. MS (FAB): 817 (M + 1); Rg 0,33 (СНгс!г/СНзОН, 9: 1).

Пример 40. N-(2-(2-Пиперидил)этоксикарбонил-(=Phe-1=His-(1-S-циклогексил метил-2-$-окси-5-(2-пиридил)}-пентиламид, 30

MS (FAB): 717 (М + 1).

Пример 41. Й-(2-Морфолин-4-ил}-этоксикарбонил-L-Phe-L-His-(1-$-циклогексилметил-2-S-окси-5-(2-пиридил))-пентиламид.

Температура плавления 70 — 810С; MS 35 (FAB): 718 (М + 1); Rg 0,72 (СНгС!г/СНзОН, 9 1)

Пример 42, N-(2,2,5,5-Тетраметил-1,3тиазолидин-4-ил-карбонил)-1=фенилаланин- .

1=норвалил-(1-S-циклогексилметил-2-S-o - 40 си-5-(2-пиридил))-пентиламид.

Целевое соединение получали из соединения, описанного в примере 5, и N-(2,2,5,5,тетраметил-1,3-тиаэолидин-4-ил-карбонил)

-1=фенилаланина по примеру 2. 45 MS FAB {: 695 (М + 1); Rg 051 (СНгС!г! СНзО Н).

Пример 43. N-(2-(4-трет-Бутоксикарбонилпипераэин-1-ил)-этоксикарбонил —.!Phe-! -His-(1-$-циклогексилметил-2-$-окси- 50

5 2-пиридил))-н-пентиламид.

Целевое соединение получали из соединений в соответствии с примерами 13 и 28 по примеру 2.

MS (FAS): 817 (М+ + 1): температура 55 плавления 82-89 С.

Пример 44. N (2-Пиперазин-1-ил)этоксикарбонил)-L-Phe-L-Н!э(1-S †циклогексилметил-2- S-окси-5-(2-пиридил))-н-пентиламид.

Целевое соединение получали из соединений в соответствии с примером 43 по примеру 5.

MS (FAB): 717 (M + 1).

Пример 45. N-Никотиноил-! -Phe-!Hi s-(1-S-цикл о гексилметил-2-S-о кси-5-(2пиридил))-пентиламид.

Целевое соединение получали из N-никотиноил-! -фенилаланина и описанного в примере 5 соединения по примеру 14. Полученный таким образом продуМт обрабатывали СЕзСООН по способу в соответствии с примером 15. После хроматографической очистки получали 412 мг целевого соединения.

MS(FAB): 666(М + 1); температура плавления 103-110 C; Rg 0,18 (СНгОг/СНзОН, 9 : 1).

Ниже представлены значения Сбо дл я соединений согласно изобретению.

Пример. С50 (10 М)

1 2,6

2 !60

7 1,4

9 0,7

10 0,22

11, 0,24

15, 2.0

17 16

29 0,21

32 1,5

34 520

35 0,16 (диастереомеры)

36 0,42

37 0,24

38 1,5

39 0,14

41 3,1

42 22

43 1,9

44 1,6

45 1,7

По известному уровню техники описаны только соединения, структура которых значительно отличается от структуры соединений по изобретению.

Известны пептиды, напоимер, следующе го типа:

Эти соединения содержат ВОС-защитные группы на С-конце молекулы и нециклическую группу на С-конце молекулы.

Вышеуказанное соединение имеет величину индекса !С50)1.0 (10 M). Вследствие наличия ВОС-защишенной фенилаланин1836381

Составитель В. Назина

Тех ред М.Моргент ал.

Корректор О. Кравцова

Редактор

Заказ 3005 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 группы это соединение не ресорбируется орально.

Соединения из примере 35 данной заявки (1Сщ = 0,16) в различных дозировках . испытывали на Phesusaffen. 5

При дозе 24 кг/кг кровяное давление понижалось на 25;4 за 90 мин, что подтверждает активность соединений in vivo, Соединения согласно изобретению содержат на N-концах молекулы менее липо- 10 фильных групп (гетероциклы), чем соединения по известному уровню техники.

Несмотря на наличие этих полярных остатков йроиэводные аминокислот, раскрытые в данной заявке, ресорб ируются 15 орально.

Соединения по изобретению оцениваются как нетоксичные.

Формула изобретения 20

Способ получения производных дипептидов общей формулы

g R,он и к-С-4-9,"МН-СН вЂ” СН-СН1СН1СНЩ2Б где R i — гетеро-(С1 — Ст)-ал к ил, гетеро-(С 1-С2}алкоксигруппа, гетеро-меркапто-(С1-СД-алкил, причем гетеро означает 5 — 6-звенное моноциклическое кольцо, которое может быть ароматическим, частично или полностью гидрированным; содержащим в качестве гетероатома азот и дополнительно содержащим азот, кислород или серу;

Rg — цикл оал кил-(С4-Ст)-алк ил(С 1-.С7);

А и  — независимо друг от друга обоз- начают остаток аминокислоты, связанной с

R i или А с концевым атомом азота и с В или -NH(Rz)CH — СН(ОН)(СНф с. концевым атомом углерода, выбранный из группы . фенилалаййн, гистидин, метионин, норвалин, или их фармакологически приемлемых солей, отличающийся тем, что осуществляют взаимодействие соответствующих фрагментов, один из которых содержит концевую карбоксильную группу или его реакционно-способное производное, а другой фрагмент имеет свободную аминогруппу и, в случае необходимости, защитные группы удаляют и целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде фармакологически приемлемой соли,