Замещенные пролилтирозины, обладающие психотропной активностью

Замещенные пролилтирозины, обладающие психотропной активностью

Реферат

 

Предлагаются замещенные пролилтирозины общей формулы R¹-X-Pro-Y-Tyr-R², где R¹ = H, (C₄-C₈)алкилкарбонил, трет.бутилоксикарбонил, бензоил, фенил(C₁-C₃)алкилкарбонил, бензилоксикарбонил, фенилокси(C₁-C₃)-алкилкарбонил; R² = O(C₁-C₃)алкил, NH₂, NH(C₁-C₃)алкил; X = L или D-конфигурация; Y = L или D-конфигурация; обладающие психотропной активностью, включающей нейролептическую и антидепрессантную в дозах 0,4 - 10 мг/кг. Дипептиды характеризуются отсутствием побочных экстрапирамидных эффектов и токсических проявлений в дозах, на 2 - 3 порядка превышающих пороговые дозы специфического эффекта, а также сохранением активности в условиях перорального введения. 10 з. п. ф-лы, 8 табл.

Изобретение относится к новым замещенным дипептидам пролилтирозинам, которые могут быть полезными как фармацевтические агенты, а также к фармацевтическим композициям, которые включают эти соединения.

Новые соединения являются психотропными веществами, которые в зависимости от структуры проявляют либо дофаминонегативное, либо дофаминопозитивное действие.

Предлагаемые соединения могут найти применение соответственно для лечения шизофрении как антипсихотические средства или для лечения депрессий как антидепрессанты.

Известны следующие источники: Tadashi Yoshimoto et. al. J. Biol. chem. 253(10), 3708 3716 (1978) -описаны дипептиды общей формулы: Y-Pro-D, L-X, где Y определенная N-защитная группа, например Z (бензилоксикарбонил), X часть аминокислоты, Glu, Glu (-OBzl), Glu (g OBzl), Trp, Phe, Tyr, Leu, Gly, Lys, как ингибиторы постпролинрасщепляющего фермента. Так для Z Pro Tyr OH показана Ki (M) 4,810^-4; PCT Int. Appl. 8000, 216; US Appl. 923, 187 (Walter R.W.) предложены определенные пептиды, которые эффективны в предупреждении развития толерантности и физической зависимости от морфина. Наряду с очень активными пептидами (цикло-Leu-Glu, Z-МИФ, Z-Pro-D-Leu, Z-Pro-L-Leu) описан малоактивный пекптид Z-Pro-Tyr-OH; Dive V. et al, Eur. J. Biochem. 191, 685 693 (1990) дан синтез некоторых производных пролилтирозина (Z-L-Pro-L-Tyr(OBzl)-OCH₃, L-Pro-L-Tyr-JCH₃HCl), которые были использованы для получения фосфонамидов пептидов, ингибиторов бактериальной коллагеназы; Spaaaartaco A. Bizzozero al. Helv. Chimica Acta. 65(6), 1707 1719 (1982) описали синтез Boc-Pro-Tyr-OMe, Pro-Tyr-OMe HCl, последний из которых был использован как карбоксильная компонента для получения олигопептидов структуры: Ac-Lxn- -Lxi-Lye- -Lym-NH₂ с Lxi Tyr, сконструированных как субстраты a-химотрипсина; Fuju Nobutaka et al. J. Chem. Soc. Per. Trans. 1 (3), 798 796 (1981) описан дипептид Z-Pro-Tyr-OMe, используемый как промежуточное соединение в синтезе фрагмента (110 124) бычьей панкреатической рибонуклеазы; Aubry A. et. al. J. Am. Chem. Soc. 107 (25), 7640 7647 (1985) описан дипептид Boc-L-Pro-D-Tyr-NHMe как модельное соединение для изучения конформаций в гетерохиральных пролилсодержащих дипептидах; Breslow E. et al. Biochemistry, 12(23), 4644 4653 описан некоторые тирозинсодержащие ди- и трипептиды как аналоги окситоцина и вазопрессина в их взаимодействии с бычьим нефрофизином-II. В том числе был изучен Pro-Tyr-NH₂, синтезированный фирмой "Cyclo Chemikal Corp".

Однако соединения, описанные в вышеприведенных ссылках, не открывают и не предполагают новых структурных вариаций патентуемых соединений и тем более их антипсихотических или антидепрессантных свойств.

Соединения с нейролептическими или антидепрессантными свойствами, предлагаемые в изобретении, являются замещенными дипептидами формулы R¹-X-Pro-Y-Tyr-R², где R¹ H, (C4-C8)алкилкарбонил, аралкилкарбонил, арилкарбонил, алкоксикарбонил, аралкоксикарбонил, ароксиалкилкарбонил; R² NH₂, NHAlk, OAlk(C1-C3); X т Y независимо L или D-конфигурация аминокислот.

Изучение нейротропной активности показало, что наиболее активными соединениями являются соединения формулы 1, где R¹=H, капроил, нонаноил, бензоил, феноксиацетил, фенилацетил, бензилоксикарбонил, трет.бутилоксикарбонил; R² NH₂, OCH₃, OC₂H₅; X Y L, X Y D, X D при Y L.

Некоторые из предлагаемых соединений ослабляют вызванную апоморфином вертикализацию, стереотипию и нарушение экстраполяционного поведения, вызванные L-дофа, уменьшают выраженность локомоторной гиперактивности, вызванной фенамином. Совокупность указанных эффектов позволяет прогнозировать наличие у этих соединений нейролептического действия. Важным отличительным признаком предлагаемых соединений от типичных нейролептиков (фенотиазиновой, бутирофеноновой структуры) является отсутствие каталептогенного, миорелаксантного и седативного эффектов. В отношении соединения XI, отобранного для более подробного изучения, показана также способность ослаблять интенсивность стереотипии, вызванной N,N-диметокситриптамином, что позволяет прогнозировать отсутствие у этого соединения экстрапирамидных расстройств, свойственных типичным нефролептикам. Важное отличие заявляемых соединений от атипичных нейролептиков, например, деривата бензамида, сульпирида, состоит в существенно более высоком уровне активности. Изученные соединения характеризуются низкой токсичностью. В отличие от пептидов более сложной структуры предлагаемые дипептиды сохраняют активность в условиях перорального введения.

Предлагаемые дипептиды были получены рутинными методами, описанными, например, в книгах "Пептиды" (Основные методы образования пептидных связей)/ Под редакцией Э. Гросса и И. Майнехофера. Пер. с англ. М. Мир, 1983; Химический синтез пептидов. Гершкович А. А. Кибирев В. К. Киев: Наукова Думка, 1992.

Предпочтительно применяли метод смешанных ангидридов с использованием изобутилхлорформиата в качестве конденсирующего агента и метил- или этилморфолина как третичного основания. Химическая чистота веществ подтверждалась элементным анализом и тонкослойной хроматографией. Диастереомерная чистота полученных дипептидов проверялась методом ПМР.

Предлагаемые вещества были изучены по тесту вертикализации, вызываемой апоморфином (пример 29). Этот тест наиболее широко применяется в настоящее время для скрининга вследствие своей избирательной чувствительности к дофаминопозитивным и дофаминонегативным веществам (Worms P. Lloyd K. Predictability and specificity of dehavioral screening test for neuroleptics. Pharmacol. Therap. 1979, 5, 495 450; Protais P. Costentin J. Schwartz F.C. Climbing behavior induced apomorhine in mice-a simple test for the study of dopamine receptors in striatum. Psychopharmacology, 1976, 50, 1 6; Раевский К.С. и др. Экспериментальное доклиническое изучение специфической активности новых соединений, предлагаемых для клинических испытаний в качестве нейролептиков (антипсихотических средств). Методические рекомендации. Тарту. 1988).

В изучаемом ряду выявлено несколько соединений которые отчетливо ослабляют апоморфиновую вертикализацию: соединения I, III, IV, XI, XIII, XVI, XXI, XXIV. Наряду с этим был выявлен ряд соединений, усиливающих апоморфиновую вертикализацию (VI, VIII, IX, XIX) или оказывающих в зависимости от дозы как ослабляющее, так и усиливающее действие (II, XIV, XXV, XVII) (пример 29). Таким образом, в группе заявляемых пролил-тирозинов выявлены как вещества с дофамин-негативным действием, позволяющим прогнозировать нейролептический эффект, так и вещества с дофамин-позитивным действием характерным для многих потенциальных антидепрессантов. Для уточнения спектра дофаминергического действия этих соединений они были изучены в ряде других тестов. При этом было показано, что большинство перечисленных выше соединений, ослабляющих вертикализацию, вызванную апоморфином, ослабляет также стереотипию, вызванную L-ДОФА (пример 30). Эти же соединения отчетливо ослабляли степень нарушений экстраполяционного поведения, вызванных L-ДОФА. Если тесты вертикализации и стереотипии, как и подавляющее большинство тестов, используемых для скрининга нейролептиков, основаны на выявлении способности ослаблять влияния, оказываемые дофамино-позитивными веществами на моторные реакции, тест экстраполяционного избавления (ТЭИ) отражает принципиально иной эффект веществ влияние на познавательные функции и способность к принятию решения для избавления из нестандартной ситуации. Дофаминопозитивные вещества снижают число животных, способных к реакции избавления, и увеличивают количество нецелесообразных стереотипных движений. Изучение широкого спектра нейротропных веществ выявило избирательность действия нефролептиков различной химической структуры их способность ослаблять нарушение этой реакции, вызванное l-дофа (Бондаренко Н. А. Избирательное влияние нейролептиков на дофаминзависимое нарушение поведение крыс в тесте экстраполяционного избавления, Бюлл. эксп. биол. мед. 1990, 11.506 509).

Результаты изучения предлагаемых соединений в тесте ТЭИ (пример 31) свидетельствуют о том, что в предлагаемом ряду выявлены вещества, уменьшающие выраженность нарушений экстраполяционной реакции, вызванных l-дофа, по такому показателю, как уменьшение числа животных, совершивших реакцию избавления (соединения I, IV, XI, XIII, XVI, XXI, XXIV). Все эти соединения, а также соединения II, VII, VIII, XIV, XV, XXII, XXV проявили дофаминонегативное действие также и в отношении моторной активации, вызванной l-дофа. При этом важно подчеркнуть, что пороговые дозы, в которых начинают проявлять активность заявляемые соединений, составляют от 0,4 до 2 мг/кг, сульпирида, пороговая доза равна 8 16 мг/кг. Поскольку для многих нейролептиков характерно наличие каталептогенного эффекта, представляло интерес изучить с этой точки зрения предлагаемые соединения (пример 32). При этом показано, что ни представители группы дофамино-негативных соединений (I, XI, XXI XXIII), ни дофамино-позитивное соединение (XIX) не обнаружили признаков каталептогенного действия, будучи введены как в пороговых дозах, так и в дозах, значительно превышающих пороговые (500 мг/кг).

В этой же высокой дозе указанные соединения не вызывали миорелаксации в тесте вращающегося стержня, не проявляли седативного действия и не обнаруживали каких-либо токсических эффектов (пример 33). Выявив в числе предлагаемых группу соединений, проявляющих признаки дофаминогенативного действия, характерного для эффекта потенциальных нейролептиков, и установив отсутствие у них каталептогенного и миорелаксантного действия, представлялось целесообразным изучить некоторые из этих соединений более подробно. В качестве одного из соединений было отобрано соединение XI, проявляющее активность в широком диапазоне доз.

Известно, что одним из характерных эффектов нейролептиков является способность ослаблять степень локомоторной гиперактивности, вызванной фенамином (Раевский К. С. 1973 Антагонизм с фенамином как тест для экспериментальной оценки нейролептиков. Фармакология и токсикология, 1973, 2, 149 154). Соединение XI отчетливо ослабляет фенаминовую гиперактивность уже в дозе 2 мг/кг, тогда как сульпирид проявляет антифенаминовое действие лишь в дозе 75 мг/кг. Одним из характерных свойств нейролептиков является способность потенцировать эффект барбитуратов (Lambert P. Revol L. Ckassification psychopharmacologuigue et clinigue des differents neuroleptigues. Presse med. 1960, 68, 1509 1511). Для соединения XI была также продемонстрирована способность удлинять продолжительность гексеналового сна (пример 34). Веществам, содержащим структуру нейролептического фармакофора, присуща способность устранять торможение тирозингидроксилазы избытком субстрата (М.Ф. Минеева, 1985). Изучение влияния соединения XI на кинетические параметры тирозингидроксилазной реакции выявило его способность устранять субстратное торможение тирозингидроксилазы (пример 34). Соединение XI ослабляет интенсивность стереотипных движений головы, вызванных N,N-диметил-5-метокситриптамином. Известно, что антагонизм с серотонино-позитивными веществами характерен для нейролептиков, не вызывающих экстрапирамидных нарушений.

В сочетании с перечисленными выше фактами отсутствия у соединения XI собственного каталептогенного, миорелаксантного и селдативного эффектов эти данные свидетельствуют о том, что соединение XI является потенциальным нейролептиком избирательного действия, не проявляющим побочных эффектов, в том числе экстрапирамидных. В экспериментах с апоморфиновой вертикализацией было выявлено ряд веществ с дофамино-позитивным эффектом, указывающим на возможное антидепрессантное действие. Часть из этих веществ проявила активность и по показателю, более специфическому для выявления антидепрессантной активности в тесте "неизбегаемого плавания". Наибольшую активность в этом тесте так же как и в тесте апоморфиновой вертикализации проявляло соединение XIX как потенциального антидепресанта является его способность потенцировать стимулирующий эффект l-дофа в отношении моторной активности у крыс, ослаблять каталепсию, вызванную галоперидолом, и снижать интенсивность встряхиваний головы, вызванных серотониномиметиком.

Изобретение иллюстрируется следующими специфическими примерами, в которых температура плавления химических соединений определялась в открытых капиллярах и не корректировалась. Оптическое вращение измеряли на автоматическом поляриметре Perkin-Elmer 241. Спектры ПМР регистрировали на спектрометре AC-250 Briken в растворах CDCl₃ и ДМСО-d6, внутренний стандарт ME₄Si. Для резонансных сигналов была использована следующая аббревиатура: с синглет; д дублет; т триплет; кв квадруплет; м - мультиплет.

Тонкослойную хроматографию проводили на пластинках DS-Altfolien Kieselgel 60 F254 (Merk) или на пластинках silica gel (Eastman Kodak), пятна проявляли в йодной камере, нингидрином или под УФ7 В экспериментах in vivo использовались белые беспородные мыши-самцы массой 22 25 г и мыши-самцы C 57 Bl 6 такой же массы, а также белые беспородные крысы-самцы массой 250 280 г.

Пример 1. Получение метилового эфира N-капроил-L-пролил-L-тирозина, N-CH₃(CH₂)₄C(O)-L-Pro-L-Tyr-OMe (I).

а) N-капроил-L-пролин.

К раствору 2,74 г (0,024 моль) L-пролина в 12 мл 2 н. гидроокиси натрия при 0^oC и перемешивании медленно добавляют попеременно 7 мл. 4н. гидроокиси натрия и 3,31 мл (0,024 моль) хлорангидрида капроновой кислоты. Через 15 мин реакционную смесь подкисляют соляной кислотой до pH-3. Затем экстрагируют хлороформом, экстракт промывают водой. Высушивают над безводным сульфатом магния. Осушитель отфильтровывают, хлороформ упаривают. Остаток сушат над P₂O₅. Получают 2,75 г (54%) N-капроил-L-пролина в виде масла, []²_D⁰ -298^o (с 0,5; ДМФА), R_f 0,82 (силикагель, изопропанол-аммиак, 3:1).

Найдено, C 62,27; H 12,4; N 12,1. C₁₁H₁₉NO₃.

Вычислено, C 61,94; H 11,9; N 11,7.

б) Метиловый эфир N-капроил-L-пролил-L-тирозина.

К раствору 1,06 г (0,005 моль) L-капроил-L-пролина в 25 мл хлороформа при охлаждении (-10^oC) и перемешивании добавляют по каплям 0,55 мл (0,005 моль) N-метилморфолина и 0,67 мл (0,005 моль) изобутилхлорформиата из разных капельных воронок. Через 2 3 мин медленно добавляют смесь 1,16 г (0,005 моль) хлоргидрата метилового эфира L-тирозина и 0,55 мл (0,005 моль) N-метилморфолина в 10 мл хлороформа и 10 мл ДМФА. Затем перемешивают 1 ч при охлаждении и оставляют на ночь при комнатной температуре. Осадок отфильтровывают, растворитель упаривают. Остаток растворяют в хлороформе, промывают 5-ным раствором бикарбоната натрия, водой, 1 н. раствором соляной кислоты, водой и сушат безводным сульфатом натрия. Осушитель отфильтровывают, растворитель упаривают. Остаток перекристаллизовывают из гексана. При этом получают 1 г (54% ) эфира I в виде кристаллов с т. пл. 113 116^oC, ([]²_D⁰ - 49^o (с 0,4; хлороформ), R_f 0,56 (кизельгель, хлороформ-этанол, 9: 1). ПМР спектр в ДМСОd6 (м.д.): 0,84 и 0,87 (каждый т, CH₂-CH₃, 3H); 1,02 2,17 (м, CH₂-CH₂ Pro, 4H); 2,23 и 1,02 2,17 (два м, (CH₂)₄, 8H); 2,7 3,1 (м, CH₂ Tyr, 2H); 3,2 3,45 (м, CH₂Pro, 2H); 3,56 и 3,63 (каждый с, OCH₃, 3H); 4,26 и 4,35 (каждый м: CHPro, 1H); 4,35 и 4,48 (каждый м, CHTyr, 1H); 6,65; 6,98 и 7,00 (каждый м, ArTyr, 4H); 8,04 и 8,42 (каждый д, NHTyr, 1H); 9,23 и 9,26 (каждый с, OHTyr, 1H).

Найдено, C 64,19; H 7,9; N 6,9. C₂₁H₃₀N₂O₅.

Вычислено, C 64,6; H 7,8; N 7,2.

Пример 2. Получение амида N-капроил-L-пролил-L-тирозина, N-CH₃(CH₂)₄C(O)-L-Pro-L-Tyr-NH₂ (II).

0,52 г эфира I растворяют в 5 мл этанола и насыщают газообразным аммиаком при 0^oC. Оставляют на 2 дн при комнатной температуре. Растворитель упаривают. Остаток перекристаллизовывают из хлороформа. Получают 0,29 г (59% ) амида II в виде кристаллов с т. пл. 150^oC (возг.), []²_D⁰ 66^o (с 0,3; метанол), R_f 0,4 (кизельгель, хлороформ-этанол, 9 1). ПМР-спектр в ДМСО-d6 (м.д. ): 0,83 и 0,87 (каждый т, CH₂-CH₃, 3H); 0,99 2,27 (м, (CH₂)₄, 8H); 1,2 2,36 (м, CH₂-CH₂Pro, 4H); 2,66, 2,88 и 2,71; 2,99 (каждый м, CH₂Tyr; 2H); 3,26 3,59 (м, CH₂Pro, 2H); 4,16 и 4,25 (дд и м, CHPro, 1H); 4,43 и 4,25 (каждый м, CHTyr, 1H); 6,63; 6,98 т 6,61; 6,99 (каждый м, ArTyr, 4H); 7,10; 7,47 и 7,09; 7,10 (каждый с, NH₂, 2H); 7,66 и 8,10 (каждый д, NHTyr, 1H); 0,18 и 9,20 (каждый с, OHTyr, 1H).

Пример 3. Получение этилового эфира N-нонаноил-L-пролил-L-тирозина, N-CH₃(CH₂)₇C(O)-L-Pro-L-Tyr-OEt (III).

а) N-Нонаноил-L-пролин.

К раствору 1,15 г (0,01 моль) L-пролина в 5 мл 2 н. гидроокиси натрия при перемешивании и охлаждении (0^oC) медленно добавляют попеременно 1,9 мл (0,01 моль) хлорангидрида нонановой кислоты и 5 мл 2 н. гидроокиси натрия, перемешивают 20 мин. Примеси экстрагируют ЭА. Затем подкисляют 4 н. раствором соляной кислоты до pH-2. Выпавшее масло экстрагируют хлороформом, сушат над безводным сульфатом магния. Осушитель отфильтровывают, хлороформ упаривают. Получают 1,8 г (68%) N-нонаноил-L-пролина в виде масла с []²_D⁰ -71,1^o (с 0,1; хлороформ), R_f 0,95 (силикагель, изопропанол-аммиак, 3 1).

Найдено, C 65,7; H 10,0; N 5,7. C₁₄H₂₅NO₃.

Вычислено, C 65,9; H 9,9; N 5,5.

б) Этиловый эфир N-нонаноил-L-пролил-L-тирозина.

К раствору 0,95 г (0,037 моль) N-нонаноил-L-пролина в 5 мл абсолютного хлороформа при охлаждении (-5^oC) и перемешивании медленно прибавляют 0,42 мл (0,037 моль) N-метилморфолина и 0,5 мл (0,037 моль) изобутилхлорформиата из разных капельных воронок. Через 2 3 мин. по каплям прибавляют смесь 0,9 г (0,037 моль) хлоргидрата этилового эфира L-тирозина и 0,42 мл (0,037 моль) N-метилморфолина в 3 мл ДМФА. Реакционную смесь перемешивают 30 мин. при охлаждении и 1,5 ч при комнатной температуре. Осадок отфильтровывают, растворитель упаривают. Остаток растворяют в хлороформе, промывают 5-ным раствором бикарбоната натрия, водой, 1 н. раствором соляной кислоты, водой, затем сушат над безводным сульфатом магния. Осушитель отфильтровывают, растворитель упаривают. Остаток перекристаллизовывают из эфира. При этом получают 1 г (60% ) белого кристаллического вещества с т. пл. 115 117^oC, []²_D⁰ 50,4^o (с 0,4; хлороформ), R_f 0,9 (кизельгель, хлороформ-метанол, 9 1). ПМР спектр в CDCL₃ (м.д.): 0,87 (т, H₃-CH₂, 3H); 1,26 (м, CH₃-(CH₂)₆-CH₂, 12H); 1,5 2,06 (м, CH₂-CH₂Pro, 4H); 2,28 (т, CH₃CH₂O, 3H); 2,93 и 3,09 (каждый дд, CH₂Tyr, 2H); 3,30 3,54 (м, CH₂Pro, 2H); 4,16 (кв, CH₃CH₂O, 2H); 4,55 (дд, CHPro 1H); 4,77 (дд, CHTyr, 1H); 6,28 и 7,28 (каждый д, NHTyr, 1H); 6,67; 6,97 и 6,76; 6,93 (каждый м, ArTyr, 4H); 7,27 (с, OHTyr, 1H).

Найдено, C 67,0; H 8,7; N 6,0. C₂₅H₃₈N₂O₅.

Вычислено, C 67,2; H 8,6; N 6,3.

Пример 4. Получение амида N-нонаноил-L-пролил-L-тирозина, N-CH₃(CH₂)₇C(O)-L-Pro-L-Tyr-NH₂ (IV).

0,75 г эфира III растворяют в 20 мл метанола, насыщенного газообразным аммиаком, затем оставляют на 2 нед при комнатной температуре. Растворитель упаривают. Кристаллический остаток растворяют в смеси хлолформ-этанол и хроматографируют на колонке с силикагелем, элюируют хлороформом, смесью хлороформэтанол. Получают 0,15 г (22%) амида (IV) с т.пл. 178 180^o (с 0,3; метанол), R_f 0,7 (кизельгель, хлороформ-метанол, 9: 1). ПМР спектр в ДМСО-d₆ ( м. д.): 0,86 (т, CH₃-CH₂-, 3H); 1,10 2,27 (м, CH₃-(CH₂)₇-, 14H); 1,5 2,1 (м, CH₂-CH₂Pro, 4H); 2,6 3,0 (м, CH₂Tyr, 2H); 3,2 3,5 (м, CH₂Pro, 2H); 4,16 и 4,26 (каждый м, CHPro, 1H); 4,26 и 4,42 (каждый м, CHTyr, 1H); 6,62 6,97 и 7,01 (каждый м, Ar Tyr, 4H); 6,95.7,15 (четыре с, NH₂, 2H); 7,67 и 8,10 (каждый д, NH Tyr, 1H); 9,17 и 9,18 (каждый с, OH Tyr, 1H).

Найдено, C 66,4; H 8,1; N 10,2. C₂₃H₃₅N₃O₄.

Вычислено, C 66,15; H 8,5; N 10,1.

Пример 5. Получение метилового эфира N-валерил-L-пртлил-L-тирозина, N-C₄H₉C(O)-L-Pro-L-Tyr-OMe (V).

а) N-валерил-L-пролин.

К раствору 3,8 г (0,033 моль) L-пролина в 16,5 мл 2 н. раствора гидроокиси натрия при перемешивании и охлаждении (0^oC) медленно добавляют попеременно 4,1 г (0,033 моль) хлорангидрида валериановой кислоты и 16,5 мл 2 н. раствора гидроокиси натрия. Перемешивают еще 20 мин. Примеси экстрагируют этилацетатом (ЭА). Подкисляют 4 н. раствором соляной кислоты до pH2. Выпавшее масло экстрагируют хлороформом, сушат над безводным сульфатом магния. Осушитель отфильтровывают, хлороформ упаривают. Получают 6 г (94%) N-валерил-L-пролина в виде масла, []²_D⁰ 121^o (с 0,1; хлороформ), R_f 0,83 (силикагель, изопропанол-аммиак, 3 1), R_f 0,6 (силикагель, бутанол-уксусная кислота-воды, 5 1 2).

Найдено, C 59,9; H 8,3; N 7,2. C₁₀H₁₇NO₃.

Вычислено, C 60,3; H 8,6; N 7,0.

б) Метиловый эфир N-валерил-L-пролил-L-тирозина.

К раствору 1,82 г (0,005 моль) N-валерил-L-пролина в 25 мл ЭА при охлаждении (-5^oC) и перемешивании добавляют медленно из разных капельных воронок 0,55 мл (0,005 моль) N-метилморфолина и 0,67 мл (0,005 моль) изобутилхлорформиата. Через 2 3 мин медленно прикапывают смесь 1,16 г (0,005 моль) хлоргидрата метилового эфира L-тирозина и 0,55 мл (0,005) N-метилморфолина в 12 мл диметилформамида (ДМФА). Перемешивают 1 ч при охлаждении и 2 ч при комнатной температуре. Осадок отфильтровывают. Растворитель упаривают. Остаток растворяют в хлороформе. Промывают 5-ным раствором бикарбоната натрия, водой, 1 н. раствором соляной кислоты, водой. Сушат над безводным сульфатом магния. Осушитель отфильтровывают, растворитель упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с кизельгелем, элюируют смесью хлороформ-этанол. Получают 1,8 г (51% ) эфира V в виде масла, []²_D⁰ 58^o (с 0,5; хлороформ), R_f 0,77 (кизельгель, бутанол-уксусная кислота-вода, 5 1 2). ПМР спектр в ДМСО-d₆ (дельта м.д.): 0,82 и 0,88 (каждый т, CH₃-CH₂-, 3H); 0,98 2,17 (м, CH₂-CH₂Pro, 4H); 0,98 2,0 (м, CH₃-CH₂-CH₂-, 4H); 2,23 (т, CH₃-CH₂-CH₂-CH₂-C(O), 2H); 2,7 3,04 (дд, CH₂Tyr, 2H); 3,2 3,5 (м, CH₂Pro, 2H); 3,6 и 3,65 (каждый с, OCH₃, 3H); 4,25 и 4,33 (каждый дд, CHPro, 1H); 4,33 и 4,47 (каждый м, CH Tyr, 1H); 6,64; 6,65 и 6,98; 6,99 (каждый м, Ar, 4H); 8,07 и 8,4 (каждый д, NH Tyr, 1H); 9,18 и 9,2 (каждый с, OH Tyr, 1H).

Найдено, C 63,5; H 7,6; N 7,0. C₂₀H₂₈N₂J₅.

Вычислено, C 63,8; H 7,5; N 7,4.

Пример 6. Получение этилового эфира N-бензоил-L-пролил-L-тирозина, Bz-L-Pro-L-Tyr-OEt (VI).

а) N-бензоил-L-пролин.

К раствору 5,75 г (0,05 моль) L-пролина в 25 мл 2 н. раствора гидроокиси натрия при 0^oC и перемешивании медленно прибавляют попеременно 12,5 мл 4 н. раствора гидроокиси натрия и 5,8 мл (0,05 моль) хлористого бензоила. Через 15 мин реакционную смесь подкисляют 1 н. раствором соляной кислоты до pH3. Выделившееся масло экстрагируют хлороформом. Сушат над безводным сульфатом натрия. Осушитель отфильтровывают, растворитель упаривают. Остаток заливают эфиром и оставляют на 2 сут при комнатной температуре. Получают 9,42 г (86%) N-бензоил-L-пролина в виде кристаллов, т. пл. 152 - 154^oC, []²_D⁰ -68,5^o (с 0,4; хлороформ), R_f 0,21 (кизельгель, бутанол-уксусная кислота-вода, 5 1 2). Литературные данные [Davies J.S. et al. J. Chem. Soc. Perkin Trans 2, 1978, 1157] т.пл. 154 156^oC, []²_D⁰ 97^o (с1, метанол).

б) Этиловый эфир N-бензоил-L-пролил-L-тирозина.

К раствору 1,2 г (0,0052 моль) N-бензоил-L-пролина в 15 мл ЭА и 3 мл ДМФА при охлаждении (-5^oC) и перемешивании прибавляют по каплям 0,42 мл (0,0052 моль) N-метилморфолина и 0,5 мл (0,0052 моль) изобутилхлорформиата из разных воронок. Через 2 3 мин добавляют по каплям смесь 0,9 г (0,0052 моль) хлоргидрата этилового эфира L-тирозина, 0,42 мл N-метилморфолина в 3 мл ДМФА (при этом температура реакционной смеси не должна превышать -5^oC). Реакционную смесь перемешивают 1 ч. и оставляют на ночь при комнатной температуре. Осадок отфильтровывают. Растворитель упаривают. Остаток растворяют в хлороформе. Промывают 5-ным раствором бикарбоната натрия, водой, 1 н. раствором соляной кислоты, водой. Сушат над безводным сульфатом натрия. Осушитель отфильтровывают, растворитель упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем, элюируют хлороформом, смесью хлороформ-этанол. Полученное масло заливают эфиром, кристаллы отфильтровывают, сушат над P₂O₅. Получают 0,7 г (42%) эфира VI с т. пл. 63 - 67^oC (гигр.), []²⁰_D/ 42,4^o (с 0,3; хлороформ), R_f 0,74 (кизельгель, хлороформ-метанол, 9 3). ПМР спектр в (CD₃)₂SO ( м.д.): 1,08 и 1,13 (каждый т, CH₃-CH₂-O, 3H); 1,76 2,09 (м, CH₂-CH₂Pro, 4H); 2,73; 2,83 и 2,88 (два дд и д, CH₂Tyr, 2H); 3,4 (м, CH₂Pro, 2H); 4,0 (кв, CH₃-CH₂-O, 2H); 4,07 и 4,51 (каждый м, CH Pro, 1H); 4,35 (м, CH Tyr, 1H) 6,63; 7,02 и 6663; 6,89 (два м, Ar Tyr, 4H); 7,29 и 7,47 (каждый м, Ar, 5H); 8,22 и 8,26 (каждый д, NH Tyr, 1h); 9,23 и 9,25 (каждый с, OH Tyr. 1H).

Найдено, C 66,94; H 6,65; N 6,88. C₂₃H₂₆N₂O₅.

Вычислено, C 67,29; H 6,4; N 6,82.

Пример 7. Получение амида N-бензоил-L-пролил-L-тирозина, Bz-L-Pro-L-Tyr-NH₂ (VII).

0,61 г эфира VII растворяют в 15 мл метанола, насыщенного газообразным аммиаком и оставляют при комнатной температуре на 2,5 недели. Растворитель упаривают, остаток перекристаллизовывают из метанола. Сушат над P₂O₅. Получают 0,3 г (53%) амида VII в виде кристаллов, т. пл. 88 93^oC, []²_D⁰ 105,3^o (с 0,4; хлороформ), R_f 0,37 (кизельгель, хлороформ-метанол, 9 1).

Найдено, C 66,25; H 6,33; N 11,01. C₂₁H₂₃N₃O₄.

Вычислено, C 66,12; H 6,09; N 11,01.

Пример 8. Получение этилового эфира N-феноксиацетил-L-пролил-L-тирозина, PhOAc-L-Pro-L-Tyr_OEt (VIII).

а) N-Феноксиацетил-L-пролин.

К раствору 5,75 г (0,05 моль) L-пролина в 25 мл 2 н. раствора гидроокиси натрия при 0^oC и перемешивании медленно прибавляют 12,5 мл 4 Н7 раствора гидроокиси натрия и 6,9 мл (0,05 моль) хлорангидрида фенилуксусной кислоты из разных капельных воронок. Через 15 мин реакционную смесь подкисляют 1 н. раствором соляной кислоты до pH3. Выделившееся масло экстрагируют хлороформом, сушат над безводным сульфатом натрия. Осушитель отфильтровывают, растворитель упаривают. Остаток заливают эфиром и оставляют на холоде. Выпавшие кристаллы отфильтровывают и получают 12,33 (98%) N-феноксиацетил-L-пролина с т. пл. 100 103^oC, []²_D⁰ 49^o (с 1,3; метанол). Литературные данные [J. Med. Chem. 1984, 27(12), 1549] масло, []²_D⁰ -29,6^oC (с 1, метанол).

Найдено, C 63,1; H 6,12; N 5,6. C₁₃H₁₅NO₃.

Вычислено, C 62,63; H 6,08; N 5,62.

б) Этиловый эфир N-феноксиацетил-L-пролил-L-тирозина.

К раствору 0,92 г (0,0037 моль) N-феноксиацетил-L-пролина в 16 мл ЭА и 3 мл ДМФА при охлаждении (-5^oC) и перемешивании попеременно прибавляют 0,43 мл (0,0037 моль) N-метилморфолина и 0,51 мл (0,0037 моль) изобутилхлорформиата. Через 2 3 мин медленно прибавляют смесь 0,92 г (0,0037 моль) хлоргидрата этилового эфира L-тирозина и 0,43 мл N-метилморфолина в 3 мл ДМФА. Перемешивают при охлаждении 1 ч. и при комнатной температуре еще 2 ч. Осадок отфильтровывают, растворитель упаривают в вакууме. Остаток растворяют в хлороформе, промывают 5-ным раствором бикарбоната натрия, водой, 1 н. раствором соляной кислоты, водой. Сушат над безводным сульфатом натрия. Осушитель отфильтровывают, хлороформ упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем, элюируют хлороформом, смесью хлороформ-этанол. Получают 0,6 г (45% ) эфира VIII в виде кристаллов с т. пл. 55 58^oC, []²_D⁰ -37^o (с 0,3; метанол), R_f 0,46 (кизельгель, хлороформ-метанол, 9 1). ПМР спектр в (CD₃)₂SO ( м.д.): 1,08 и 1,09 (каждый т, CH₃-CH₂-O, 2H); 1,5 2,28 (м, CH₂-CH₂Pro, 4H); 2,75 3,05 (м, CH₂Tyr, 2H); 3,2 3,5 (м, CH₂Pro, 2H); 4,27; 4,63 и 4,72; 4,79 (каждый д, J 15,3 Гц и J 15,0 Гц, CH₂-OC₆H₅, 2H); 4,3 4,45 (м, CH Pro, 1H); 4,3 4,45 (м, CH Tyr, 1H); 6,65 7,35 (M, Ar Tyr, 4H); 8,18 и 8,53 (каждый д, J 7,5 Гц, NH Tyr, 1H); 9,23 и 9,26 (каждый с, OH Tyr, 1H).

Пример 9. Получение амида N-феноксиацетил-L-пролил-L-тирозина, PhOAc-L-Pro-L-Tyr-NH₂ (IX).

0,5 эфира VIII растворяют в 11 мл метанола, насыщенного газообразным аммиаком и оставляют при комнатной температуре на 2 нед. Растворитель упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем, элюируют хлорофором, смесью хлороформ-этанол. Получают 0,41 г (87%) амида IX с т.пл. 16 112^oC, []²_D⁰ 60^o (c 0,3; метанол), Rf0,4 (кизельгель, диоксан-вода, 10:1). ПМР спектр в (CD₃)₂SO ( м.д): 1,36 2,23 (м, CH₂-CH₂Pro, 4H); 2,7; 2,88 и 2,7; 2,98 (каждый д, J 14,2 Гц, J=4,8 Гц, J 14 Гц, J 4,6 Гц, CH₂Tyr, 2H); 3,2 (м, CH₂Pro, 2H); 4,1-4,6 (м, CH Pro, 1H); 4,18 и 4,56 (каждый д, J= 15,3 Гц, CH₂-OAr, 2H); 4,1 4,6 (4,43) (м, CH Tyr, 1H); 4,76 и 4,8 (каждый д, J 15,5 Гц, CH₂-OAr, 2H); 6,49-7,35 (м, Ar Tyr, 4H); 7,35-7,54 (с, NH₂, 2H); 7,28 и 8,23 (каждый д, J 8,1 Гц, Tyr, 1H); 9,16 и 9,22 (каждый с, OH Tyr, 1H).

Найдено, C 64,4; H 6,42; N 1,32. C₂₂H₂₅N₃O₅.

Вычислено, C 64,54; H 6,13; N 1,27.

Пример 10. Получение этилового эфира N-фенилацетил-L-пролил-L-тирозина, PhAc-L-Pro-L-Tyr-OEt (X).

К охлажденному до -1^oC раствору 0,862 г (0,0037 моль) N-фенилацетил-L-пролина (т.пл. 150-151^oC, []²_D⁰-60,5 в ДМФА) в 15 мл ЭА и 3 мл ДМФА по каплям прибавляют 0,42 мл (0,0037 моль) N-метилморфолина и5 мл (0,0037 моль) изобутилхлорформиата из разных капельных воронок. Через 2 3 мин по каплям прибавляют смесь 069 г (0,0037 моль) хлоргидрата этилового эфира L-тирозина (т. пл. 165-167,198>C) и 0,42 мл N-метилморфолина в 3 мл ДМФА. Перемешивают при охлаждении 1 ч и при комнатной температуре еще 2 ч. Осадок, содержащий соль N-метилфорфолина отфильтровывают, растворитель отгоняют в вакууме. Остаток растворяют в 15 мл хлороформа, промывают 5% раствором бикарбоната натрия, водой, 1 н. раствором соляной кислоты, водой. Высушивают над безводным сульфатом натрия, растворитель отгоняют. Получают г (64%) эфира X в виде кристаллизирующего масла, Rf0,83 (кизегель, хлороформ-этанол, 9:3). ПМР спектр в (CD₃)₂SO ( м. д.): 1,7 1,1 (набор триплетов, O-CH₂-CH₃, 3H); 1,5 2,2 (м, CH₂-CH₂Pro, 4H); 2,3 3,4 (дд, CH₂Tyr, 2 H под сигналом растворителя)* 3,3 (м, CH₂Pro, 2H); 3,63 (с, CH₂C₆H₅, 2H); 4,0 (набор квадруплетов, O-CH₂-CH₃ 2H); 4,3 (м, CH Pro, 1H); 4,36 и 4,53 (каждый м, CH Tyr, 1H); 6,7 7,1 (м, CH₂-C₆H₄OH, 4H, AA,XX, система)* 9,22 и 9,26 (каждый с, OH, 1H).

Найдено, C 68,23; H 6,94; N 6,43. C₂₄H₂₈N₂O₅.

Вычислено, C 67,91; H 6,66; N 6,59.

Пример 11. Получение амида N-фенилацетил-L-пропилил-L-тирозина, PhAc-L-Pro-L-Tyr-NH₂ (XI).

1 г эфира X растворяют в 10 мл метанола, предварительно насыщенного газообразным аммиаком при 0^oC и отставляют на 18 дн при комнатной температуре. Растворитель упаривают, маслообразный остаток растворяют в спирте и высаживают эфиром. Выпавший осадок отфильтровывают и получают 0,71 г (75%) амида XI с т. пл. 201 203^oC, Rf0,75 (кизельгель, хлороформ-этанол, 9:3), []²_D⁰ 89,6^o (с0,3; ДМФА). ПМР спектр в (CD₃)₂SO ( м.д.): 1,5 2,2 (м, CH₂-CH₄Pro, 4H); 2,55 2,7; 2,8 3,0 (каждый м, CH₂ Tyr, 2H); 3,5 (м, CH₂ Pro, 2H); 3,68 и 3,69 (каждый д, AB-система, CH₂C₆H₅, 2H); 4,2 и 4,35 (каждый дд, CH Pro, 1H); 4,28 и 4,51 (каждый м, CH Tyr, 1H); 6,5 - 7,1 (м, AA, XX, система, CH₂C₆H₄OH, 4H); 7,1-7,3 (м, CH₂C₆H₅ 5H); 7,05-7,45 (с, NH₂ под сигналом Ar, 1H); 7,53 (с, NH₂, 1 H); 7,72 и 8,21 (каждый д, NH, 1H); 9,11 и 9,16 (каждый с, OH, 1H).

Найдено С 66,8; H 6,34; N 10,69. C₂₂H₂₅N₃J₄.

Вычислено, C 66,82; H 6,37; N 10,63.

Пример 12. Полученное этилового эфира N-фенилацетил-D-пролил-L-тирозина, PhAc-D-Pro-L-Tyr-OEt (XII).

а) N-Фенилацетил-D-пролин.

К раствору 1,15 г (0,01 моль) D-пролина (Reanal) в 5 мл 2 н. раствора гидроокиси натрия при 0^oC и перемешивании медленно прибавляют 2,5 мл 4н. раствора гидроокиси натрия и 1638 мл (0,01 моль) хлорангидрида фенилуксусной кислоты. Через 15 мин реакционную смесь подкисляют 1 н. раствором соляной кислоты до pH 3 4. Выпавшие белые кристаллы отфильтровывают, промывают водой. Сушат над КОН и над P₂O₅. Получают 1,05 г (83%) N-фенилацетил-D-пролина с т.пл. 147-149^oC, []²_D⁰ +57,7^oC (с0,3; ДМФА).

Найдено, C 70,1; H 6,52; N 5,99. C₁₃H₁₅NO₃.

Вычислено, C 66,93; H 6,49; N 6,00.

б) Этиловый эфир N-фенилацетил-D-пролил-L-тирозина.

К раствору 0,86 г (0,0037 моль) N-фенилацетил-D-пролина в 15 мл ЭА и 3 мл ДМФА при охлаждении (-5^oC) и перемешивании медленно прибавляют 0,42 мл (0,0037 моль) N-метилморфолина и 0,5 мл (0,0037 моль) изобутилхлороформиата из разных капельных воронок. Через 2 3 мин добавляют смесь 0,9 г (0,0037 моль) хлоргидрата этилового эфира L-тирозина и 0,42 мл N-метилфорфолина в 3 мл ДМФА (при этом температура реакционной смеси не должна превышать -5^oC). Осадок отфильтровывают, растворитель удаляют в вакууме. Остаток растворяют в, хлороформе и промывают 5-ным раствором бикарбоната натрия, водой, 1 н. раствором соляной кислоты, водой. Сушат над безводным сульфатом натрия. Осушитель отфильтровывают, хлороформ упаривают. Выход неочищенного маслообразного продукта 0,8 г (94%). Масло покрывают гексаном и оставляют на холоду. Получают 0,56 г (66%) эфира XII c т. пл. 186-188^oC, []²_D⁰ +49,5^oC (с 0,3; метанол). ПМР спектр в (CD₃)₂SO (/ м. д.): 1,09; 1,13 (каждый т, J 7,04 Гц, OCH₂CH₃, 55: 45, 3H); 1,48 -2,2 (м, CH₂-CH₂ Pro, 4H); 2,7 3,05 (м, CH₂ Tyr, 2H); 3,18 3,4 (м, CH₂ Pro, 2H); 3,65 (с, CH₂C₆H₅, 65% 2H); 3,4 3,5 (дд, CH₂C₆H₅, 45% 2H); 4,04 и 4,05 (каждый кв, OCH₂CH₃, 55:45, 2H); 4,31; 4,37 (каждый дд, CH Pro, 55:45, 1H); 4,40 и 4,44 (каждый м, CH Tyr, 55:45, 1H); 6,62 и 6,65 (каждый м, AA, BB, система, CH₂C₆H₄OH, 45% 4H); 6,97 и 7,01 (каждый м, AA,BB, система, CH₂C₆H₄OH, 55% 4H); 7,1-7,34 (м, CH₂C₆H₅, 5H); 8,15 (д, J=8,41 Гц, NH, 55% 1H); 8,59 (д, J=8,02 Гц, NH, 45% 1H); 9,25 и 9,26 (каждый с, OH, 55:45, 1H).

Найдено, C 68,13; H 6,54; N 6,44. C₂₄H₂₈N₂O₅.

Вычислено, С 67,91; H 6,54; N 6,59.