Хинолоновые и акридиноновые соединения, способы их получения и фармацевтическая композиция на их основе

Хинолоновые и акридиноновые соединения, способы их получения и фармацевтическая композиция на их основе

Реферат

 

Изобретение относится к хинолоновым и акридиноновым соединениям формулы I или их фармацевтически приемлемым солям, где R² - H, (C₁-C₆)алкил (C₁-C₄)фторалкил; R³ - H, CN, (С₁-C₆)алкил, (C₁-C₆)фторалкил, этаноил или R² и R³ образуют 1,4-бутандиил; R⁴ означает группу формулы II; R⁷ - H, R⁸ - H, (C₁-C₄)алкокси, NO₂, CN, (C₁-C₄)фторалкил, галоген, (C₁-C₄)алкил; R⁹ - H, галоген, (C₁-C₄)алкил или (C₁-C₄)фторалкил или R⁸ и R⁹, взятые вместе, образуют (C₁-C₃)алкилендиокси; R¹⁰ и R¹¹ - H, (C₁-C₄)алкил. Предложено также соединение формулы III, которое подвергают декарбоксилированию или дегидратированию для получения соединения I, где R³ - H. Предложены также другие способы получения соединений I. На основе этих соединений может быть приготовлена фармацевтическая композиция, обладающая релаксирующим действием в отношении гладкой мышцы мочевого пузыря. 8 с. и 10 з.п. ф-лы.

Настоящее изобретение связано с новой группой соединений, которые полезны в лечении нестабильности мочевого пузыря у млекопитающих, таких как человек. Более конкретно, настоящее изобретение относится к группе 4,6,7,8-тетрагидро-5(1H)-хинолонов, их применению в лечении недержания мочи у млекопитающих (включая человека), способам их получения и фармацевтическим композициям, их содержащим.

Существующие методы лечения недержания мочи в большинстве случаев неудовлетворительны, основываются на лекарственных препаратах, которые первоначально разрабатывались для других показаний. Одна группа таких лекарственных препаратов включает блокаторы кальциевых каналов, такие как нифедипин, которые первоначально были разработаны и главным образом используются как сердечно-сосудистые препараты.

Нифедипин принадлежит к структурному классу соединений, известных как дигидропиридины. Этот структурный класс был широко исследован, и структурные требования для блокирования кальциевой активности в настоящее время достаточно хорошо установлены. Так, как описано в главе 14.1 Руководства по лекарственной химии, Comprehensive Medical Chemistry, том 3, под редакцией John C. Emmett, опубликованного Pergamon Press в 1990, соединения обладают 1,4-дигидропиридиновым циклом, имеющим оптимально арильную группу в 4-положении и сложноэфирные группы в 3- и 5-положениях. Удаление эфирных групп или замена их ацетильной или циано группами связаны со снижением активности. Обычно соединения имеют метильные группы в 2- и 6-положениях. Geinshteins et al. , Khim. Geterotsikl. Soedin. (6), 1118-20, 1967 раскрывают соединения 3-циано-4-фенил-2,7, 7-триметил-4,6,7,8-тетрагидро-5(1H)-хинолон и 3-этаноил-4-фенил- 2,7,7-триметил-4,6,7,8-тетрагидро-5(1H)-хинолон. 15(1), 39-42, 1981 раскрывает исследование воздействия некоторых 4,6,7,8-тетрагидро- 5(1H)-хинолонов и имеющих сложноэфирную или циано группы в 3-положении на сердечно-сосудистую систему и на гладкую мышцу кишечника. Сообщается, что 3-циано-4-фенил-2,7,7- триметил-4,6,7,8-тетрагидро-5(1H)-хинолон проявляет гипотензивные свойства и способен к блокированию спазмогенного воздействия как ацетилхолина, так и хлорида бария на гладкую мышцу кишечника.

DE 2003148 раскрывает группу 1,4-дигидропиридин производных, включая некоторые 4,6,7,8-тетрагидро-5(1H)-хинолоны, которые содержат сложноэфирную или кето группу в 3-положении и которые, как упоминается, проявляют широкий и многогранный фармакологический спектр воздействия. Основные упомянутые воздействия, проявляемые соединениями, включают сильные мышечные спазмолитические эффекты, которые становятся очевидными в гладкой мускулатуре желудочно-кишечного тракта, мочевого тракта и респираторной системы. Установлено, что другие основные воздействия проявляются в действии на сердце (сердечно-успокаивающий эффект) и в снижении кровяного воздействия животных с нормальным и гипертоническим кровяным давлением, так что они могут быть использованы в качестве гипотензивных средств.

S. M. Tain et al., Indian Journal of Chemistry, том 30B, ноябрь, 1991, стр. 1037 - 1040 раскрывает синтез и фармакологический скрининг некоторых 9-(замещенный фенил)-1,8-(2H, 5H)-акридиндионов. Было обнаружено, что соединения обладают различными степенями гипотензивной противовоспалительной и противоимплантационной активности.

Известно, что ткань мочевого пузыря является возбудимой и что недержание мочи может быть вызвано неконтролируемыми или нестабильными сокращениями мочевого пузыря. Была найдена группа соединений, которые оказались неожиданно способными к расслаблению гладкой мышцы мочевого пузыря, обеспечивая, таким образом, предотвращение или уменьшение интенсивности неконтролируемых или нестабильных сокращений мочевого пузыря. Следовательно, соединения могут быть полезными для лечения недержания позывов, включающего, например, детруссорную нестабильность, которая может быть следствием цистита, уретрита, опухолей, камней, дивертикула или непроходимости оттоков; и детруссорную гиперрефлексию, которая может быть следствием удара, слабоумия, болезни Паркинсона, супрасакрального повреждения спинного мозга или супрасакрального заболевания спинного мозга. Было найдено, что некоторые соединения обладают дополнительным неожиданным свойством, состоящим в том, что они способны к селективному воздействию на мочевой пузырь, без существенного воздействия в то же время на сердечно-сосудистую систему, что показано измерениями частоты сердечных сокращений и кровяного давления. Таким образом, эти соединения особенно могут быть полезными при лечении недержания мочи у пациентов, таких, например, как пожилые люди, для которых сердечно-сосудистые воздействия, особенно такие, как гипотензивные воздействия, являются особенно нежелательными.

Было также неожиданно найдено, что соединения согласно изобретению служат для открытия калиевых каналов. Известно, что, выполняя действие по раскрытию калиевых каналов, соединения, открывающие калиевые каналы, могут функционировать таким образом, что расслабляют гладкую мышцу. Хотя не ставится задача теоретического ограничения, соответственно предполагается, что соединения настоящего изобретения действуют путем открытия калиевых каналов в клетках мочевого пузыря и тем самым расслабляют гладко-мышечную ткань мочевого пузыря, препятствуя, таким образом, неконтролируемым сокращениям или уменьшая интенсивность неконтролируемых сокращений мочевого пузыря, которые могут вызывать недержание мочи. Nurse D.A., Kestorick T.M. and Mundy A.R., British Journal of Urology, (1991), 68, 27 - 31 раскрывают, что хромакалим, который хорошо известен как вещество, открывающее калиевые каналы, как было установлено ими в первичных клинических испытаниях, является эффективным для лечения недержания мочи.

В соответствии с настоящим изобретением, было найдено, что структурные требования относительно активности 4,6,7,8-тетрагидро-5(1H)-хинолонов отличны от соответствующих требований, предъявляемых к дигидропиридиновым кальциевым блокаторам. Таким образом, придается большое значение тому, что настоящее изобретение основано на открытии нового фармакологического класса дигидропиридинов, являющихся миорелаксантами мочевого пузыря.

Настоящее изобретение дает соединение формулы I (формула вынесена вместе с другими формулами, обозначенными римскими цифрами, на страницы, следующие за примерами) или его фармацевтически приемлемую соль, где: R² представляет водород, (1-6C)алкил или (1-4C)фторалкил; и R³ представляет водород, циано, (1-6C)алкил, (1-6C)фторалкил или этаноил; или R² и R³, взятые вместе, образуют 1,4-бутандиил; R⁴ представляет 2- или 3-тиенил или фурил, замещенный в 4- и/или 5-положении(иях) радикалом или радикалами независимо выбранными из группы (a), состоящей из нитро, циано, гало, (1-4C)алкила, (1-4C) алкилсульфонила и 2-тиенила при условии что 3-тиенил или фурил группа могут быть замещенными только в 5-положении; или R⁴ обозначает 2-пиридил, который замещен в 5- положении и/или либо в 4-положении, либо в 6-положении одним из членов вышеприведенной группы (a); или R⁴ обозначает 3-пиридил, который замещен в 6-положении одним из членов вышеприведенной группы (a); или R⁴ представляет собой 4-пиридил, который замещен в 2-положении одним из членов вышеприведенной группы (a); или R⁴ представляет группу формулы II, в которой: R⁷ является водородом; и R⁸ и R⁹ независимо выбираются из водорода, гидрокси, (1-4C)алкокси, нитро, циано, (1-4C)фторалкила, (1-4C)фторалкокси, гало, (1-4C)алкила, (1-4C)алканоила, фенила и (1-4C)алкилсульфонила; или R⁸ и R⁹, взятые вместе, представляют (1-3C)алкилендиокси; и R¹⁰ и R¹¹ каждый независимо представляют водород или (1-4C)алкил, исключая 3-циано-4-фенил-2,7,7-триметил- 4,6,7,8-тетрагидро-5(1H)-хинолон и 3-этаноил-4-фенил-2,7,7-триметил- 6,7,8-тeтрагидро-5(1H)-хинолин.

В данном описании термины "алкил" и "алкокси" включают как линейные, так и разветвленные цепные радикалы, но для того чтобы было понятно, термин, отнесенный к конкретным радикалам, таким как "пропил" или "пропокси", охватывает только линейный цепной ("нормальный") радикал, разветвленные цепные изомеры, такие как "изопропил" или "изопропокси", упоминаются особо.

Термин "гало" включает фторо, хлоро, бромо, и йодо, если не оговорено особо.

Конкретные примеры 2- или 3-тиенил или фурил заместителей в 4- и/или 5-положениях включают 4-бром-2-тиенил, 5-бром-2-тиенил, 5-метилсульфонил-2-тиенил, 5-метил-2-тиенил, 5-(2-тиенил)-2-тиенил, 4-нитро-2-тиенил, 5-нитро-2-тиенил, 4-циано-2-тиенил, и 5-нитро-3-тиенил.

Конкретные значения (1-6C)алкила включают метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, тpeт-бутил, пентил, 3-метилбутил, 1-этилпропил, гексил или 4-мeтилпeнтил.

Конкретные значения (1-4C)алкила включают метил, этил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил, и трет-бутил.

Конкретные значения (1-4C)фторалкила включают трифторметил и пентафторэтил.

Конкретные значения (1-4C) алкокси включают метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси, изобутокси, втор-бутокси, и трет-бутокси.

Конкретные значения (1-4C)фторалкокси включают трифторметокси и пентафторэтокси.

Конкретным значением (1-4C)алканоила является этаноил.

Конкретное значение (1-4C)алкилсульфонила включает метиленсульфонил.

Конкретными значениями для (1-3C)алкилендиокси являются метилендиокси и этилендиокси.

Конкретные значения R⁸ включают водород, гидрокси, метокси, нитро, циано, трифторметил, трифторметокси, метил, этил, изопропил и гало и этаноил.

Конкретные значения R⁹ включают водород, гидрокси, метокси, нитро, циано, трифторметил, трифторметокси, метил, этил, изопропил и гало.

Конкретными значениями R² являются метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил и трифторметил.

Конкретными значениями для R³ являются водород, пиано, этаноил, или вместе с R² 1,4-бутандиил.

Было найдено, что соединения, в которых R³ является водородом или R² и R³, взятые вместе, образуют 1,4-бутандиил, проявляют, в частности, хорошую активность и селективность в отношении мочевого пузыря и являются, таким образом, предпочтительными.

Было найдено, что соединения, в которых R² является трифторметилом, проявляют, в частности, хорошую активность, селективность в отношении мочевого пузыря и стабильность, и являются, таким образом, особенно предпочтительными.

R⁴ является предпочтительно группой формулы II.

Конкретными значениями R⁴ являются фенил, 3-метоксифенил, 3-нитрофенил, 3-цианофенил, 3-трифторметилфенил, 3-трифторметил-4-цианофенил, 4-трифторметилфенил, 3-трифторметоксифенил, 3-фторфенил, 3-хлорфенил, 3-хлор-4-фторфенил, 3-бромфенил, 4-фторфенил, 4-хлорфенил, 3-бром-4- фторфенил, 3,4-дихлорфенил, 4-метилфенил, 3,4-метилендиоксифенил и 4-нитро-2-тиенил. Наиболее предпочтительным R⁴ является 3-нитрофенил или 3-цианофенил.

Предпочтительными значениями для R¹⁰ и R¹¹ являются водород и метил. Предпочтительно R¹⁰ и R¹¹ оба представляют водород или оба представляют метил.

Особенно предпочтительной группой соединений формулы I являются те, в которых либо R² обозначает метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил или трифторометил; и R³ обозначает водороду либо R² и R³, взятые вместе, образуют 1,4-бутaндиил; и R⁴ обозначает 3-нитрофенил или 3-цианофенил; и R¹⁰ и R¹¹ оба являются водородом.

Особенно предпочтительными соединениями являются 2- трифторметил-4-(3-нитрофенил)-4,6,7,8-тетрагидро-5(1H)-хинолон и 2- трифторметил-4-(3-цианофенил)-4,6,7,8-тетрагидро-5(1H)-хинолон. Было найдено, что оба эти соединения проявляют удивительно высокую активность in vitro и неожиданно высокую селективность в отношении мочевого пузыря in vivo (в живом организме). Было также найдено, что они проявляют химическую стабильность, превосходящую стабильность соответствующих соединений формулы I, в которых R² является метилом.

Специалистами в соответствующей технике будет оценено, что соединения формулы I содержат асимметрически замещенный углерод и соответственно могут существовать и быть выделены в оптически-активной и рацемической формах. Некоторые соединения могут проявлять полиморфизм. Понятно, что настоящее изобретение включает любую рацемическую, оптически-активную, полиморфическую или стереоизомерную форму, или их смеси, чья форма обладает свойствами, полезными в лечении недержания мочи, специалисту в соответствующей технике хорошо известно, как приготовить оптически-активные формы (например, разделением рацемической формы, синтезом из оптически-активных исходных материалов, хиральным синтезом, или хроматографическим разделением, использующим хиральную неподвижную фазу) и как определить в лечении недержания мочи стандартными методиками, описанными здесь далее.

Соединение формулы I может быть получено способом, включающим способ, известный в химической технике для получения структурно аналогичных соединений. Такие способы для производства 4,6,7,8-тетрагидро-5(1H)-хинолонов формулы I, как определено выше, даны в качестве дальнейшей особенности изобретения и иллюстрируются следующими методиками, в которых значения основных радикалов такие, как приведено выше, если не оговорено особо. Такой способ может быть эффективным в основном: (a) для соединения формулы I, в которой R³ обозначает водород, при использовании декарбоксилирования соответствующей карбоновой кислоты формулы III, в которой R¹² и R¹³ вместе представляют связь, или декарбоксилирования и дегидратации карбоновой кислоты формулы III, в которой R¹² обозначает водород, а R¹³ обозначает гидрокси; b) при использовании взаимодействия ненасыщенного кетона формулы IV с соответствующим 1,3-циклогександионом и аммиаком или солью аммония; c) для соединения формулы I, в которой R² и R³, взятые вместе, образуют 1,4-бутандиил, при взаимодействии акридиндиона формулы VI с восстанавливающим агентом; d) для соединения формулы I, в которой R² и R³, взятые вместе, образуют 1,4-бутандиил, при взаимодействии кетона формулы VII с соответствующим 1,3-циклогександионом и аммиаком или солью аммония; е) при взаимодействии ендиона (дикетона с одной двойной связью) формулы III с енамином (амином с двойной связью) формулы XIII, в которой обозначает имино группу в присутствии аммиака или соли аммония; f) для соединения формулы I, в которой R³ обозначает этаноил или циано при взаимодействии соединения формулы XV, в которой R^3a обозначает этаноил или циано с соответствующим 1,3-циклогександионом и соответствующим альдегидом формулы R⁴CHO.

Декарбоксилирование, описанное в (a), удобно выполнять при повышенной температуре, например, в интервале от 50 до 250^oC, предпочтительно в интервале от 90 до 120^oC. Подходящие для реакции растворители включают спирты, например, метанол или этанол; диметилсульфоксид; ароматические углеводороды, такие как толуол, и простые эфиры, такие как, например, 1,2-диметоксиэтан или диглим. Взаимодействие удобно осуществлять в присутствии кислоты, например, концентрированной серной кислоты или п-толуолсульфоновой кислоты.

Реакцию (b) удобно выполнять при температуре, например, в интервале от 0 до 150^oC, предпочтительно при повышенной температуре, например в интервале от 50 до 120^oC. Подходящие для реакции растворители включают спирты, например метанол или этанол; диметилсульфоксид; простые эфиры, такие как 1,2-диметоксиэтан или диглим; и карбоновые кислоты, например уксусная кислота. Подходящей солью аммония является, например ацетат аммония.

Реакцию (c) удобно проводить при температуре, например, в интервале от 20 до 80^oC, предпочтительно при температуре в интервале от 50 до 80^oC. Подходящие растворители включают спирты, например, этанол, пиридин и их смеси. Подходящие восстанавливающие агенты включают, например, боргидрид натрия.

Реакцию (d) удобно выполнять при температуре, например, в интервале от 0 до 150^oC, предпочтительно при повышенной температуре, например в интервале от 50 до 120^oC. Подходящие растворители для взаимодействия включают спирты, например метанол или этанол; диметилсульфоксид; простые эфиры, такие как 1,2-диметоксиэтан или диглим; и карбоновые кислоты, например уксусная кислота. Подходящей солью аммония является, к примеру, ацетат аммония.

В реакции (е), Z может быть, к примеру, диалкиламиногруппой, такой как диметилимино, или циклической имино группой, такой как пирролидино или пиперидино.

Енамин - исходный продукт формулы XIII удобно получать на месте по реакции соответствующего кетона формулы R²COCH₂R³ с соответствующим амином.

Реакцию удобно проводить при температуре в интервале от 20 до 80^oC. Подходящие растворители включают спирты, такие как этанол.

Реакцию (f) удобно выполнять при температуре в интервале от 0 до 150^oC предпочтительно от 50 до 120^oC. Подходящие растворители включают спирты, такие как этанол.

Если нет готовых коммерческих продуктов, необходимые вещества для описанных ниже способов могут быть изготовлены по методикам, выбранным из стандартных органических химических методик, методикам, являющимся аналогами синтезов известных структурно подобных соединений, или по методикам, аналогичным вышеописанным методикам или методикам, описанным в примерах.

Промежуточный продукт формулы III может быть приготовлен взаимодействием ацетоуксусного эфира формулы X, в котором OR₂ является спиртовым остатком, таким, например, как 2-цианоэтокси или этокси с альдегидом формулы R⁴CHO и соответствующим 1,3-циклогександионом, что дает сложный эфир формулы VIII, как показано в схеме 1, приведенной после формул. Гидролиз сложного эфира, например, обработкой водной гидроокисью натрия в 1,2-диметоксиэтане дает кислоту формулы III. В некоторых случаях может быть получен сложный эфир формулы VIIIa вместо сложного эфира формулы VIII, и он может быть гидролизован, что дает соединение формулы IIIa. Такая методика иллюстрируется далее в примере 15.

Промежуточный продукт формулы IV может быть приготовлен взаимодействием соответствующего бензальдегида формулы R⁴CHO с кетоном формулы XIV. Реакцию удобно проводить в присутствии основания, например гидроокиси натрия.

Промежуточный акридиндион формулы VI может быть приготовлен, как показано в схеме II, приведенной после формул, взаимодействием соответствующего альдегида формулы R⁴CHO или ацеталя, или его полуацеталя с аммиаком или солью аммония (такой, как ацетат аммония) и соответствующего 1,3-циклогександиона. Реакцию выполняют при температуре в интервале от 0 до 150^oC, предпочтительно при повышенной температуре, например в интервале от 50 до 120^oC. Подходящие для реакции растворители включают спирты, например метанол или этанол; диметилсульфоксид; простые эфиры, такие как 1,2-диметоксиэтан или диглим; и карбоновые кислоты, например уксусную кислоту.

Как показано в cхеме II, промежуточный акридиндион формулы VI может быть получен взаимодействием соединения формулы IX с альдегидом формулы R⁴CHO или его ацеталем, или полуацеталем, или его реакционноспособным производным. Реакция выполняется при температуре в интервале от 0 до 150^oC, предпочтительно при повышенной температуре, например в интервале от 50 до 120^oC. Подходящие для реакции растворители включают спирты, например метанол или этанол; диметилсульфоксид; простые эфиры, такие как 1,2-диметокси этан или диглим; и карбоновые кислоты, например уксусную кислоту.

Промежуточный продукт формулы VII может быть приготовлен конденсацией 1-морфолиноциклогекcена и альдегида формулы R⁴CHO с последующим гидролизом как показано в cхеме III, приведенной после формул.

Промежуточный продукт формулы XII может быть приготовлен взаимодействием альдегида формулы R⁴CHO с соответствующим 1,3- циклогександионом. Реакция наиболее эффективна при температуре в интервале от 0 до 80^oC, предпочтительно от 40 до 50^oC. Подходящие для такой реакции растворители включают спирты, такие как этанол.

Фармацевтически приемлемые соли могут получены использованием стандартных методик, хорошо известных в соответствующей технике эксперимента, например взаимодействием соединения формулы 1 c подходящей кислотой или основанием, дающими физиологически приемлемый противоион.

При использовании для лечения недержания мочи соединение формулы I обычно вводится в виде соответствующей фармацевтической композиции, которая включает соединение формулы I, определенное ранее с фармацевтически приемлемым растворителем или носителем, композиция является адаптированной для конкретного выбранного способа введения. Такие композиции являются предметом изобретения.

Поэтому согласно иному аспекту изобретение обеспечивает фармацевтические композиции, которые включают соединение формулы I или его фармацевтические приемлемую соль, как определено выше, и фармацевтически приемлемый растворитель или носитель.

Композиции могут быть получены применением oбычных методик и эксципиентов и связывающих веществ и могут быть представлены в разнообразных дозированных формах. Например, они могут быть в форме таблеток, капсул, растворов или суспензий для перорального введения; в форме суппозиториев для ректального введения; в форме стерильных растворов или суспензий для введения путем внутривенной, интравентрикулярной, подкожной или внутримышечной инъекции или вливанием; или в форме пластыря для транcдермального применения.

Далее изобретение дает способ лечения недержания мочи, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в такой обработке, эффективного количества соединения формулы I, как определено выше, или его фармацевтически приемлемой соли.

Обработка, использующая соединение согласно изобретению, может быть лечебной или терапевтической, производимой введением соединения в начальной стадии или при развитом недержании мочи у пациента. Обработка может также быть профилактической или перспективной, производимой введением соединения в ожидании возможного развития недержания мочи, например у пациентов, которые в прошлом страдали недержанием.

Согласно дальнейшему аспекту изобретение дает применение соединения формулы I, определенной выше, в производстве лекарственного препарата для лечения недержания мочи. Поскольку соединения согласно изобретению действуют таким образом, что открывают калиевые каналы клеток, они могут также быть полезными в качестве терапевтических средств при лечении других состояний или болезней, при которых действие терапевтического средства, которое открывает калиевые каналы, является желательным или известно, что оно обеспечивает улучшение. Такие состояния или болезни включают гипертонию, астму, заболевание периферических сосудов, недостаточность правых отделов сердца, застойную сердечную недостаточность, ангину, ишемическую болезнь сердца, заболевание сосудов головного мозга, глаукому, почечную колику, нарушения, связанные с почечными камнями, синдром раздраженной толстой кишки (слизистый колит), форму мужской гнездовой плешивости, преждевременные роды, и пептическую язву.

Доза соединения формулы I, которая вводится, будет обязательно варьироваться в соответствии с принципами, хорошо известными в соответствующей технике с учетом способа введения, тяжести состояния недержания, размеров и возраста пациента. В основном соединение формулы I вводится теплокровному животному (такому как человек) таким образом, что эффективная доза является общепринятой, обычно суточная доза выше 0,005, например в интервале приблизительно от 0.01 до 10 мг/кг веса тела. Предпочтительно в этом дозовом интервале соединение вводится перорально.

Специалистам в соответствующей технике должно быть понятно, что соединение формулы I может вводиться совместно с другими терапевтическими или профилактическими средствами и/или лекарственными препаратами, которые не являются с ним лекарственно несовместимыми. Не было найдено, чтобы соединения, находящиеся в рамках объема данного изобретения и приложенных пунктов, оказывали какие-либо неблагоприятные побочные действия на животных, используемых в лабораторных испытаниях при многократном превышении эффективной дозы.

Действие соединений формулы 1 в качестве миорелаксантов, полезных как терапевтические средства для лечения недержания мочи, проявляемое в открытии калиевых каналов и гиперполяризации мембранного потенциала в детруссорной гладкой мышце может быть показано использованием соответственно моделированных испытаний in vitro (в лабораторном сосуде), таких как описаны далее. Было найдено, что соединения согласно изобретению являются в этих испытаниях активными при 30 мкМ (микромолей) или менее. При испытании найдено, что для соединений, приведенных здесь в качестве примеров, характерно давать IC₅₀ порядка 30 мкM или ниже.

Например, соединение, описанное в примере 9, дает при испытании IC₅₀, равное 8.11 мкM. "IC₅₀" - хорошо известный термин и означает концентрацию испытуемого соединения, которая вызывает 50%-ное снижение in vitro сокращения ткани мочевого пузыря, описанное в следующем испытании.

Мужских особей морской свинки-альбиноса Hartley (450 - 500 г) умерщвляют с помощью двуокиси углерода, вызывающей асфиксию, и быстро cпускают кровь. Вскрывают нижнюю часть брюшной полости и отделяют мочевой пузырь. Мочевой пузырь очищают от окружающей соединительной ткани и жировой ткани, и часть, расположенную выше отверстий мочеточников, удаляют и промывают в буферном растворе Krebs-Henseleit'L следующего состава (в мМ): N₂Cl 118.0, KCl 4.7, MSO₄ 1.2, KH₂PO₄ 1.2, CaCl₂ 2.5, NaHCO₃ 25.0 и d-глюкоза 11.1. Раствор нагревают до 37^oC и насыщают смесью 95% O₂ и 5% CO₂. При энергичном барботировании, раствор должен иметь значение pH, близкое к 7.4.

Купол промытого мочевого пузыря обрезают и отбрасывают, оставшийся мочевой пузырь помещают на марлю в чашку Петри, содержащую буферный раствор. Производят средневентральный продольный разрез ножницами, чтобы открыть мочевой пузырь. Из купола нарезают полоски и край основания отбрасывают. Оставшийся детруссорный средний отдел разрезают на две горизонтальные полоски приблизительно шириной 2.0 мм. Эти две полоски затем делят пополам по среднедорсальному отделу, получая четыре полоски одинакового размера. Таким образом, каждая полоска содержит как дорсальную, так и вентральную области мочевого пузыря.

Два конца каждой отдельной подоски привязывают к стеклянному стержню, служащему основой, и преобразователю силового смещения (модель Grass'L FR03) соответственно с помощью 4 - 0 черной плетеной шелковой шовной нити. Преобразователь подключают к полиграфу (модель Grass'L 7E), который калибруют при 5 м/см, и калибровку проверяют на линейность грузами 5 и 0.5 г. Аналогичные электрические выходящие сигналы полиграфа приобретают вид пиков благодаря преобразующей сигналы системе модулирующего устройства Micro 5000, использующей Biowindon файлы от Acquisition Software, которая работает c операционной системой Microsoft OS/2 на IBM-совместимой PC. Детруссорные полоски на стеклянном стержне укрепляются в 20 мл ванны для тканей и уравновешиваются под предварительной нагрузкой 2 г. Во время следующего от 45 до 60 мин периода уравновешивания ткани промывают свежим буферным раствором с 15-минутным интервалом c нагрузкой, приведенной, если необходимо, перед промыванием, к 2 г. После периода уравновешивания применяется начальная доза 15 мМ KCl (общая концентрация в ванне). Через 10 мин ткань промывают и промывают вдвое больше при 15-мин интервалах с нагрузкой, приведенной к 2 г, перед каждым промыванием.

Когда ткань после последнего промывания релаксируется до устойчивого состояния, снова применяют 15 мМ KCl. Когда миогенная активность ткани достигает устойчивого состояния, c помощью системы, использующей Biowindows файлы от Acquisition, получают основные (нулевые) данные путем 5-мин усреднения миогенных данных, полученных при 32 Гц. Как только нулевая линия получена, экспериментальные соединения вводят определенными дозами кумулятивным способом в половинных инкрементах структурных единиц. Время контакта с каждой дозой составляет 10 мин, причем последнее с 5 мин, являeтся периодом времени, которое требуется для получения ответных дозовых характеристик. Если 30 мМ испытуемого соединения не уничтожают детруссорную механическую активность, тогда вводится 30 мМ хромакалима, вещества, считающегося способным открывать калиевые каналы, чтобы получить максимальный отзыв. Действие соединения при каждой дозе выражается в % максимально ингибирующего отклика, который далее нормализуют по отношению к соответствующему эффекту носителя соединения в качестве контроля. Нормализованный отклик используют затем для получения lC₅₀ релаксирующей активности соединения путем применения методики приведения нелинейной итерактивной кривой Marquardt'L стандартной функции доза-отклик. Способность соединений согласно изобретению открывать калиевые каналы в детруссорной гладкой мышце может быть дополнительно продемонстрирована вторым испытанием in vitro.

Это второе испытание in vitro аналогично описанному выше в отношении подготовки ткани и получения данных. Однако необходимо отметить следующие исключения. В этом втором испытании сокращение детруссорных полос на начальном периоде и после периода уравновешивания осуществляют с помощью 80 мМ KCl вместо 15 мМ KCl (общая концентрация в ванне). Постоянное напряжение в ткани после этой высокой KCl-стимуляции является очевидным, так как чувствительные к напряжению кальциевые каналы делаются открытыми, что разрешает приток кальция в клетки и развитие тонизирующего напряжения. Это напряжение полностью устраняется 300 мкМ папаверина, который поэтому используется для создания максимального отклика в данном испытании. Обычные блокаторы кальциевых каналов, такие как нифедипин, нимодипин, израдипин и верапамил, способны уменьшать напряжение и снижать миогенную активность детруссорных полосок морской свинки в обоих испытаниях путем воздействия их блокирующей активности на кальциевые каналы. Однако всевышеупомянутые блокаторы кальциевых каналов более сильно действуют во втором испытании, когда используют 80 мкМ KCl, чем в первом испытании, где используют 15 мкМ KCl. Напротив, хотя хромакалим, вещество предположительно открывающее калиевые каналы, обладает сильнодействующей релаксантной активностью в первом испытании с IC₅₀ в интервале от 0.6 до 0.9 мкМ, он проявляет незначительную релаксантную активность во втором испытании при таких высоких концентрациях, как 30 мкМ. Таким образом, показатели более высокой релаксантной активности в первом испытании по сравнению со вторым для соединений согласно изобретению указывают на то, что соединения действуют как вещества, открывающие калиевые каналы.

Способность соединений согласно изобретению воздействовать в качестве веществ, открывающих калиевые каналы, на ткань мочевого пузыря может быть дополнительно продемонстрирована путем стандартного испытания, которое измеряет воздействие испытуемого соединения на скорость истечения рубидия из ткани.

Специалистами в соответствующей технике будет дополнительно оценен тот факт, что эффективность соединений согласно изобретению может быть продемонстрирована стандартными испытаниями in vivo. Ниже приведено описание такого стандартного испытания. Самцы крыс Wistar, весящие 450 - 550 г, подвергнуты анастезии 20 мг/кг i.p. (внутрибрюшинно) Нембутала и 80 мг/кг i.p. Кетамина. Трахел катетеризируется для препятствия обструкции дыхательных путей. Температурa тела поддерживается с помощью грелки-подушки. Артериальное кровяное давление и частота сердечных сокращений могут быть измерены датчиком давления, соединенным с полиэтиленовой трубкой (РЕ50), которая может быть вставлена в правую сонную артерию. Правая яремная вена катетеризируется для введения лекарства. Производят срединное чревосечение мочевого пузыря и выпускают мочу, применяя слабое надавливание рукой. Катетер (РЕ50) вводят через верхушку cвода мочевого пузыря приблизительно на 3 - 4 мм в его полость и привязывают шовной нитью (4 - 0 шелк) для предотвращения утечки. Катетер мочевого пузыря соединяют с датчиком давления для измерения давления мочевого пузыря. Мочевой пузырь помещают затем обратно в брюшную полость и надрез закрывают швом за исключением того места, где катетер выходит из полости. Мочевому пузырю дают уравновеситься в течение приблизительно 15 мин. После периода уравновешивания крысам проводят вливание солевого раствора непосредственно в мочевой пузырь при скорости 0.05 мл/мин за чистое время эксперимента. Затем регистрируют с помощью приборов давление мочевого пузыря для исходных сокращений мочевого пузыря. После того, как начинаются сокращения, животному дают стабилизировать свой паттерн сокращений приблизительно от 30 до 45 мин перед введением лекарства. Испытуемые соединения вводятся i. v. (внутривенно). Эффективность испытуемого соединения измеряется в сравнении с известным в литературе лекарством хромакалим (Smithkline-Beecham), которое вводится i.v. в дозовом интервале от 0.05 до 0.5 мг/кг.

Приведенное выше испытание in vivo дает возможность оценки как кровяного давления, так и цистометрической активности испытуемых соединений. Кровяное давление измеряют немедленно после введения лекарства и спустя 5, 15 и 30 мин. Позывы на мочеиспускание вызывают медленным непрерывным введением раствора соли непосредственно в мочевой пузырь. Для каждого соединения приведено среднее превращение (в секундах от контроля) в длительности интервала между сокращениями (время между сокращениями) через приблизительно 20-минутный период.

Далее приведено описание испытания in vivo, которое является добавочным к вышеописанным испытаниям и которое может быть использовано для выяснения, является ли испытуемое соединение активным, и обладает ли испытуемое соединение селективностью в отношении мочевого пузыря без существенного сердечно-сосудистого воздействия, когда оно вводится перорально в дозированной форме. Соединение, описанное в примере 1, является активным и селективным в этом испытании, когда оно вводится перорально в дозированной форме при 3 мг/кг веса тела.

Самцов крыс wistar (400 - 500 г) анестезировали 50 мг/кг Нембутала, i.p. У каждой крысы, брюшная область и передняя и задняя части шеи были выбриты и на кожу нанесены повидов-иод. Для катетеризации сонной артерии левую сонную артерию подвергли воздействию через небольшой вентральный цервикальный надрез. Область воздействия была промыта сильной струей 2% лидоксинового HCl раствора, чтобы ослабить сосуд. Катетер, наполненный 0.9% солевым раствором, ввели приблизительно на 2,4 см в артерию, так чтобы его наконечник находился в дуге аорты. Дистальный конец катетера был завернут наружу в задней части шеи, наполнен гепарином (1000 единиц/мл) и теплоизолирован. Для катетеризации мочевого пузыря произвели срединное чревосечение мочевого пузыря. Троакар пропустили через абдоминальную мышцу на расстояние около 1 см от верхнего края сечения и затем провели подкожной туннелизацией так, чтобы выходил наружу в задней части шеи. Заполненный солевым раствором катетер провели через т