Производные пептидов или их фармацевтически приемлемые соли, способ их получения, применение и фармацевтическая композиция

Производные пептидов или их фармацевтически приемлемые соли, способ их получения, применение и фармацевтическая композиция

Реферат

 

Производные пептидов общей формулы I: R₁ -GH₂-СН₂-CONH-CH(R₂)CH₂-R₃ или их фармацевтически приемлемые соли, где R₁ представляет собой водород или углеводородный радикал с C₁-С₃, замещенный функциональной группой, например амино, амидной с C₁-С₅, уретановой с C₁-С₇ или карбоксильной группой, или углеводородный радикал с C₁-С₃, одновременно замещенный амино- и карбоксильной группой, причем карбоксильная группа может быть этерифицирована, а аминогруппа может быть замещена ацильным заместителем или эфиром угольной кислоты, R₂ - атом водорода или функциональная группа, например карбоксил, который может быть этерифицирован, R₃ - индол или его метильные и/ или гидроксильные производные, причем гидроксильная группа может быть ацилирована, алкилирована или аралкилирована, 5-6-членные насыщенные и ненасыщенные циклические и гетероциклические заместители, содержащие кислород, серу и/или 1-3 атома азота, или их метильные производные, причем при R₁=NH₂, NH₂-CH₂- R₂=H, R₃ не означает -4-Im, -3-(5-OMe-Ind), -3-(5-ОН-Ind), при R₁=NH₂, NH₂CH₂ R₂=COOH, R₃ не означает -4-Im, а при R₁=HOOC-CH(NH₂)- R₂=H, R₃ не означает -3-Ind, -3-(5-OH-Ind). Соединения I обладают свойствами модуляторов системы цитохрома Р-420, метаболизма арахидоновой кислоты, гормонов коры надпочечников, активности макрофагов, а также антиоксидантным, противоастматическим, антигипоксическим, противовирусным, липидрегулирующим, антиметастатическим, сахаропонижающим, адаптогенным и другими видами терапевтического действия. Соединения формулы I получают ацилированием аминогруппы в соединении II NН₂-СН-(R₂)-СН₂-R₃ карбоксильным компонентом R₁-СН₂-СН₂-СОХ, где Х - активирующая группировка. 4 с. и 19 з.п. ф-лы, 33 табл.

Настоящее изобретение относится к области биоорганической химии и, в частности, касается новых дипептидных и псевдодипептидных соединений, имеющих в своем составе имидазольную или индольную группу, способа получения этих и известных соединений подобного строения, а также их применения в медицине в качестве потенциальных лекарственных средств.

Объектом изобретения являются производные пептидов общей формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли, где R₁ представляет собой COOH, NH₂ или углеводородный радикал с C₁-C₃, замещенный функциональной группой, например амино, амидной с C₁-C₃, уретановой с C₁-C₇ или карбоксильной группой; или углеводородный радикал с C₁-C₃, одновременно замещенный амино- и карбоксильной группой, причем карбоксильная группа может быть этерифицирована, а аминогруппа может быть замещена ацильным заместителем или эфиром угольной кислоты; R₂ - атом водорода или функциональная группа, например карбоксил, который может быть этерифицирован; R₃ - индол или его метильные и/или гидроксильные производные, причем гидроксильная группа может быть ацилирована, алкилирована или аралкилирована; 5-6-членные насыщенные и ненасыщенные циклические и гетероциклические заместители, содержащие кислород, серу и/или 1-3 атома азота, или их метильные производные, причем при R₁=NH₂, NH₂-CH₂- R₂=H, R₃ не означает -4-Im, -3-(5-OMe-lnd), -3-(5-OH-Ind); при R₁= NH₂, NH₂-CH₂- R₂=COOH, R₃ не означает -4-Im; а при R₁= HOOC-CH(NH₂)- R₂=H, R₃ не означает -3-Ind, -3-(5-OH-Ind).

Предпочтительными являются производные пептидов общей формулы I, где R₁=HOOC-(CH₂)_n-, n=0-2, C₆H₅CH₂-OCO-NH-CH₂-, NH₂-CH₂-, R₂=H, -COOH, COOCH₃ причем R₄= -H, -OH, -OCH₃, -OCH₂C₆H₅.

Наиболее показательные примеры новых дипептидов и псевдодипептидов, соответствующих общей формуле (I), представлены ниже: Сукцинилгистамин (II) Глутарилгистамин (III) Адипинилгистамин (IV) N-ацетил-L-- глутамилгистамин (V) Метиловый эфир -L-глутамил-L-гистидина (VI) Метиловый эфир глутарил-L-гистидина (VII) Метиловый эфир -аминобутирил-L-гистидина (VIII) -Метиловый эфир--L-глутамилгистидина (IX) - Аминобутирилтриптамин (X) Глутарил-O-алкилсеротонин где R₄= -OH (XI), -OCH₃ (XII), -OCH₂-C₆H₅ (XIII).

Глутарил-4-(2-аминоэтил)морфолин (XIV) Глутарил-2-(2-аминоэтил)пиридин (XV) Глутарилфенилэтиламин (XVI) Известные псевдодипептиды, соответствующие общей формуле (I), где при R₁=NH₂-, NH₂-CH₂-, NH₂-CH(COOH)- R₂=H, R₃=-4-Im, при R₁=NH₂-CH₂- (COOH)- R₂=H, R₃=-3-Ind или -3(5-OH)Ind.

Примеры известных псевдодипептидов, соответствующих общей формуле (I), представлены ниже: -D-глутамилгистамин (XVII) -Аланилгистамин (XVIII) -Аминобутирилгистамин (XIX) - L-глутамилтриптамин (XX) -L-глутамилсеротонин (XXI) Примеры соединений общей формулы (I) приведены в табл. 1 (см. в конце описания).

Соединения общей формулы (I) получают путем ацилирования аминогруппы амина или аминокислоты активированным по карбоксильной группе производным дикарбоновой или N-защищенной аминокислоты.

Синтез дипептидов и псевдодипептидов, содержащих N-аминоацильный заместитель, осуществляют классическими методами пептидной химии с применением предпочтительно активированных, например, N- оксисукцинимидных эфиров. Наилучший вариант заключается в применении пентафторфениловых эфиров, как наиболее активных из известных. В качестве активированных производных дикарбоновых кислот применяют, как правило, их циклические внутренние ангидриды.

-Аминогруппу карбоксильного компонента замещают различными обычно применяемыми группами, предпочтительно трет.- бутилоксикарбонильной (Boc-) или бензилоксикарбонильной (Z-) защитами.

-Карбоксильную функцию глутаминовой кислоты защищают предпочтительно бензильной (Bzl-) группой.

Карбоксильная группа аминокомпонента - гистидина в соединениях общей формулы (I) находится в виде метилового эфира или остается незамещенной.

Синтез соединений, содержащих N-аминоацильный заместитель, представлен на следующей схеме 1: Схема 1.

Стадия 1. R₁-NH-A-COO-X+NH₂-B--->R₁-NH-A-CONH-B Стадия 2. R₁-NH-A-CONH-B--->NH₂-A-CONH-B Стадия 3.

Стадия 4. n-R₂HNH₂-A''-CONH-B--->NH₂-A''-CO-NH-B, где R₁=Boc, Z; NH₂-A-CO- = GABA-, H-L-Glu-OBzl; NH₂-B=HA, TrpA, H-His-OH, H-His-OMe; NH₂-A''-CO=H-L-Glu-, H-L-Glu-OMe, nR₂H=HHal(HCI); CF₃COOH n= 1, 2.

Стадию 1 проводят, как правило, в среде безводного апротонного растворителя, предпочтительно диметилформамида (DMFA), 18-48 час при комнатной температуре, за исключением дипептида Boc-L-Glu(L-His)-OBzl. Последний получают действием 3-кратного избытка Boc-L-Glu(ONSu)-OBzl на незащищенный L-гистидин в водно-диоксановой среде (1:1). Преимуществом данного способа является упрощение процесса вследствие уменьшения числа стадий (отсутствия необходимости вводить и удалять C-защиту гистидина) и возможности получения дипептида, селективно защищенного по одной из 2-х карбоксильных групп.

Если это необходимо, проводят отщепление защитных групп промежуточного соединения R₁-NH-A-CONH-B в соответствии со стадиями 2 и 3.

Стадия 2 проводится лишь в случае R₁=Z, NH₂-A-CO-= GABA- путем каталитического гидрогенолиза.

Когда это необходимо, осуществляется стадия 3 в 2-х различных модификациях при наличии в промежуточном соединении R₁-A-CONH-B N-Boc- и Bzl-групп, а именно для производных глутаминовой кислоты. Способ 3.1 заключается в ацидолитическом отщеплении N-Boc-защиты, например, действием хлористого водорода в органическом растворителе, преимущественно диоксане, метаноле или их смеси; или трифторуксусной кислотой с последующим удалением Bzl-группы каталитическим гидрогенолизом (3.2). По способу 3.3 сначала проводится гидрогенолиз, а затем ацидолитическое отщепление N-защиты (3.4). В результате осуществления стадии 3 получают продукты в виде соответствующих солей.

При необходимости получения целевых соединений в виде свободных оснований проводят стадию 4.

В случае, если соединение не содержит незащищенных карбоксильных групп, оно может быть получено в виде свободного основания путем добавления органического (Et₃N) или неорганического (NaOH) основания с последующим отделением соли этого основания от целевого продукта. Кроме того, для этой цели можно использовать ионообменную хроматографию в соответствии с методологией, описанной ранее [Евстигнеева Р.П., Желтухина Г.А., Огрель С.А., Небольсин В.Е. / Синтез псевдопептидов на основе биогенных аминов.// Докл. АН СССР. -1995. -т. 345. -N 4. -с. 493- 495].

Кроме того, когда это необходимо, соединение в форме основания может быть представлено в виде соли переходного металла с образованием хелата.

Известное соединение -L-Glu-HA [Koniski Н., Kakimoto Y./ Formation of -glutamylhistamine from histamine in rat brain.// J. Neurochem. -1976. -vol. 27. -pp. 1461-1463], являющееся исходным для получения нового производного (V), может быть получено описанным в литературе способом [Mc Caman М. W. , Stetzler J., Clark В. / Synthesis of -Glutamyldopamine and Other Peptidoamines in the Nervous System of Aplysia californica.// J. Neurochem. -1985. -vol. 45. -N 6. -pp. 1828-1835]. N- ацетильное производное -L-Glu-HA-Ac--L-Glu-HA (V) может быть получено в соответствии с предложенной нами схемой 2.

Схема 2 Схема 2 введения ацетильной группы в дипептид имеет преимущества по сравнению с использованием N-ацетильного производного глутаминовой кислоты в качестве исходного продукта для создания пептидной связи, т.к. уменьшает риск рацемизации. Применение n-нитрофенилацетата предпочтительно по сравнению с уксусным ангидридом, т.к. его использование не сопровождается побочными реакциями по имидазольной группе, которые заключаются в образовании ацетильного производного по имидазолу и соответствующей соли последнего с молекулой выделяющейся уксусной кислоты.

Синтез соединений общей формулы (I), содержащих остаток дикарбоновой кислоты, может быть осуществлен различными способами, предпочтительно в соответствии со схемой 3, где в качестве С-активированного карбоксильного компонента применяют его внутренний циклический ангидрид.

Схема 3 где n=0-1, NH₂B=HA, H-His-OMe, где R₄=-H, -OH, -OCH₃, -OCH₂C₆H₅.

В случае, если подобный ангидрид не является доступным, например, для адипиновой кислоты, синтез псевдопептида может быть осуществлен DCC-методом. При этом сначала проводится реакция дикарбоновой кислоты с DCC при соотношении 2:1 моль/моль, а затем добавляют аминокомпонент (амин или производное аминокислоты).

Известные соединения, соответствующие общей формуле (I), а именно -аланилгистамин (XIII) и -аминобутирилгистамин (XIV), были получены ранее методами классической пептидной химии [Евстигнеева Р.П., Желтухина Г.А., Огрель С.А., Небольсин В.Е. /Синтез псевдопептидов на основе биогенных аминов. // Докл. АН СССР. -1995. -т. 345. -N 4. -с. 493-495; Mc Caman M. W., Stetzler J. , Clark B. / Synthesis of - Glutamyldopamine and Other Peptidoamines in the Nervous System of Aplysia californica. // J. Neurochem. -1985. -vol. 45. -N 6. -pp. 1828-1835; Евстигнеева Р.П., Желтухина Г.А., Агеева Е.А., Бабижаев М.А. /Липопепоксидазная активность карнозина и карцинина. // Докл. АН СССР. -1993. -т. 333. -N 1. -с. 104-106], а также ферментативным способом - путем сочетания аминокислоты и гистамина в присутствии фермента типа гидролазы [Seguin М. C., Babizhayev M. / Product de couplage de l'un acide amine, procede de preparation, et applications therapeutigues et cosmetologigues. // Patent Fr 2701947. 1994. C1 C 07 C 237/04. A 61 K 31/195. 7/48].

Наиболее близкие по структуре к новым соединениям дипептидной природы эфиры N-ацильных производных - глутамилдипептидов [Floyd D. /N-Acyl--glutamylimino and amino acids and esters.// Patent US 4568489. 1986. C1 C 07 C 103/52. C 07 D 217/00. C 07 D 548/470] были получены ранее DCC-методом, который, как известно, может приводить к побочным реакциям по имидазольной и индольной группе [Шредер Э., Любке К. Пептиды. - M.- Мир.- 1967.- с. 249]. В [Seguin М. C., Babizhayev M. /Product de couplage de l'un acide amine, procede de preparation, et applications therapeutigues et cosmetologigues.// Patent Fr 2701947. 1994. C1 C 07 C 237/04. A 61 K 31/195. 7/48; Floyd D. / N-Acyl--glutamylimino and amino acids and esters.// Patent US 4568489. 1986. C1 C 07 C 103/52. C 07 D 217/00. C 07 D 548/470; Babizhayev M., Seguin М.C. /Pseudodipeptide product having on imidazole grouping and applications. // WO 95/12581. C1 C 07 D 233/64. C 12 P 17/10. A 61 K 31/415. 7/42] не приведены формулы предлагаемых нами гистидинсодержащих дипептидов, методики их синтеза и константы.

Ниже представлены примеры химического синтеза соединений общей формулы (I).

Производные глутаминовой кислоты, используемые в синтезах, L-ряда, D-производные указаны особо. Индивидуальность полученных соединений проверяют методом ТСХ на пластинках "Silufol" фирмы Kavalier, UV-254 (Чехословакия) в системах растворителей: хлороформ-метанол 9: 1 (1), хлороформ-метанол 8:2 (2), н-бутанол-уксусная кислота-вода 4:1:5 (3); на пластинках "Kieselgel" фирмы "Merck" в системе растворителей хлороформ- метанол-25% водный аммиак 5: 3: 1 (4); на пластинках "Silufol": хлороформ-метанол 9,3:0,7 (5); хлороформ-метанол-25% водный амииак 5:3:0,5 (6), хлороформ-метанол 8,5:1,5 (7); изопропанол-вода - 25% водный аммиак 6:3:1 (8).

Хроматограммы проявляют хлор-толидиновым раствором, реактивами Паули и Эрлиха, нингидрином и по свечению в УФ-свете.

Температуры плавления веществ определяют на приборе "Boetius" (Германия).

¹H-ЯМР спектры снимают на приборе Brucker WM-250" (Германия) и "Varian XL-400" (Япония) с ТМС в качестве внутреннего стандарта.

Масс-спектрометрию осуществляют на приборе МСБХ (Украина, г. Сумы) методом плазменно-десорбционной ионизации осколками ядер калифорния 252.

Аналитическую обращенно-фазовую ВЭЖХ проводят в условиях (1): колонка МПС-270 C-18 (4,0 х 250 мм), 10 мкм, элюция 4% ацетонитрилом в воде, содержащей 0.1% TFA; в условиях (2): колонка та же, элюция градиентом от 10% до 50% фазы B в фазе A за 20 мин; фаза A - 0.1% TFA в воде, фаза B - 0.09% TFA в смеси ацетонитрила и воды 60:40; в условиях (3): колонка МПС 300 C18T (4,0 х 250 мм), 10 мкм, элюция градиентом от 0% до 40% фазы В за 20 мин, фаза A - 0.1% TFA в воде, фаза В - 0.09% TFA в смеси ацетонитрила и воды (60:40); в условиях (4): колонка МПС 270 C18 (4,0 х 250 мм) 10 мкм, элюция 0.1 M Na₂HPO₄, pH 2.3; в условиях (5): колонка та же, но элюция 0.1 M Na₂HPO₄, pH 2.7; в условиях (6): колонка Диасорб 130C18T (4.0 х 150 мм), 7 мкм, элюция градиентом от 0% до 42% ацетонитрила в 0.1% TFA; в условиях (7): колонка МПС 300 C18T (4.0 х 250 мм), 10 мкм, элюция градиентом от 0% до 18% ацетонитрила в 0.1% TFA за 20 мин; в условиях (8): колонка Lichrosorb RP-18 (4.6 х 250 мм), 5 мкм, элюция градиентом от 6% до 24% ацетонитрила в 0.1% TFA за 20 мин; в условиях (9): колонка Диасорб 130 C16T (4.0 х 150 мм), элюция 0,1% TFA; в условиях (10); колонка Диасорб 130 C16T (4.0 х 150 мм), 7 мкм, элюция градиентом от 0% до 24% ацетонитрила в 0.1% TFA; в условиях (11): колонка та же, элюция градиентом от 3% до 54% ацетонитрилом в 0.1% TFA за 30 мин; в условиях (12): колонка та же, элюция градиентом от 0% до 30% ацетонитрила в 0.1% TFA за 30 мин; в условиях (13): колонка МПС C18T (4.0 х 250 мм), элюция градиентом от 12% до 60% ацетонитрила в 0.1% TFA за 20 мин, в условиях (14): колонка МПС-270 (4.0 х 250 мм), 10 , элюция градиентом от 0% до 60% ацетонитрила в 0.1% TFA за 20 мин.

Во всех случаях ВЭЖХ проводилась при скорости элюции 1 мл/мин с детекцией при 214 нм.

Пример 1.

Сукцинилгистамин (II).

К раствору 0.080 г (0.72 ммоль) гистамина в 4 мл DMF при перемешивании добавляют 0.072 г (0.72 ммоль) янтарного ангидрида. Реакционную смесь перемешивают 1 ч и оставляют на 20 ч при 20^oC. Растворитель удаляют в вакууме. Маслообразный остаток растворяют в 1.5 мл этанола, прибавляют 4 мл сухого эфира, растирают и выдерживают 30 мин при 4^oC. Осадок отделяют и трижды перекристаллизовывают из метанола. Выход 0.075 г (49.2 %). R_f 0.41(4). Т.пл. 153-155^oC. ВЭЖХ в условиях (6): один пик, время выхода 7.77 мин. ¹H-ЯМР спектр (CD₃OD), _м.д. : 2.42 (т, 2H, -CH₂CONH), 2.55 (т, 2H, HOOC-CH₂), 2.8 (т, 2H, - CH₂-HA), 3.4 (т, 2H, - CH₂-HA), 7.0 (с, 1H, CH-4-Im), 8,0 (с, 1H, CH-2-Im). Масс-спектр; m/z: [М+1H]⁺ 212.2.

Пример 2.

Глутарилгистамин (III).

К раствору 0.366 г (3.3 ммоль) гистамина в 5 мл DMF прибавляют 0.376 г (3.3 ммоль) глутарового ангидрида. Реакционную смесь перемешивают 3 ч и оставляют на 20 ч при 20^oC. Белый осадок отделяют, сушат в вакууме, перекристаллизовывают. Выход 0.510 г (70,0%). R_f 0.36 (6), 0.34 (4). Т.пл. 187-189^oC. ВЭЖХ в условиях (7): один пик, время выхода 14.36 мин. ¹H-ЯМР спектр (D₂O), , м. д. : (м, 2H, - CH₂), 2.18 (м, 4H, ,- CH₂), 2.85 (т, 2H, - CH₂-HA), 3.5 (т, 2H, - CH₂-HA), 7.25 (с, 1H, CH-4-Im), 8.5 (с, 1H, CH-2-Im). Масс-спектр, m/z: [М+1H]⁺ 226.1.

Пример 3.

Хлоргидрат адипинилгистамина (IV).

К раствору 0.197 г (1.35 ммоль) адипиновой кислоты в 2.5 мл DMF при 0^oC прибавляют 0.278 г (1.35 ммоль) DCC. Реакционную смесь перемешивают при 0^oC 30 мин и прибавляют раствор 0.150 г (1.35 ммоль) гистамина в 1 мл DMF и оставляют при 20^oC на 20 часов. Осадок DCU отделяют фильтрованием. К реакционной смеси прибавляют 10 мл сухого эфира и оставляют на 1 час при 0^oC. Маслообразный остаток растворяют в этаноле и прибавляют 0.2 мл 4 н. HCl в диоксане. Растворитель удаляют в вакууме. Остаток промывают эфиром, растворяют в смеси хлороформ-этанол 1.5:1 и очищают на колонке с силикагелем 40/100 (22 х 175 мм). Элюируют смесью хлороформа и этанола от 7:3 до 2:8, этанолом, метанолом и смесью метанола-AcOH- H₂O 8:1:0.5. Фракции, содержащие целевое вещество с R_f 0.25 (6), объединяют, растворитель удаляют в вакууме, сушат над P₂O₅. Выход 0.129 г (40%). R_f 0.25 (6). ВЭЖХ в условиях (11): один пик, время выхода 3.6 мин. ¹H-ЯМР спектр (CD₃OD), , м.д.: 1.6 (м, 4H, ,- CH₂), 2.3 (м, 4H, ,- CH₂), 3.0 (т, 2H, - CH₂-HA), 3.55 (т, 2H, - CH₂-HA), 7.25 (с, 1H, CH-4-Im), 8.65 (с, 1H, CH-2-Im).

Пример 4.

N-АЦЕТИЛ--L- глутамилгистамин (V).

К 0.10 (0.405 ммоль) -L- глутамилгистамина прибавляют 5 мл воды и перемешивают до растворения основной массы вещества. К реакционной смеси прибавляют 2.5 мл диоксана и 0.073 г (0.405 ммоль) n-нитрофенилацетата, перемешивают 2 ч и оставляют на 18 ч при 20^oC. Растворитель удаляют в вакууме при 40^oC. Остаток растворяют в минимальном количестве метанола и очищают колоночной хроматографией на Kieselgel 60, элюируют метанолом. Фракции, содержащие целевое вещество с R_f 0.3 (4), объединяют, растворитель удаляют в вакууме. Получают бесцветное стеклообразное вещество. Выход 0.046 г (40.0%). R_f 0.3 (4). ВЭЖХ в условиях (3): один пик, время выхода 10.77 мин. ¹H-ЯМР спектр (CD₃OD), , м.д.: 2.0-2.3 (м, 2H, -CH₂), 2.19 (с, 3H, CH₃CO), 2.45 (т, 2H, - CH₂), 3.07 (т, 2H, - CH₂-HA), 3.64 (т, 1H, - CH_AH_B-HA), 3.65 (т, 1H, - CH_AH_B-HA), 4.42 (т, 1H, - CH), 7.42 (д, 1H, CH-4-Im), 8.69 (д, 1H, CH-2-Im).

Пример 5.

Метиловый эфир N-ТРЕТ.-бУТИЛОКСИКАРбОНИЛ-- бензил-L-глутамил-гистидина (VI^a).

К раствору 0.30 г (1.16 ммоль) дигидрохлорида метилового эфира L-гистидина, полученному нагреванием до 40^oC с 4 мл безводного метанола с последующим охлаждением до 0^oC, прибавляют холодный раствор метилата натрия, полученный из 0.053 г металлического натрия (2.32 ммоль) и 1 мл метанола. Оставляют на 20 мин при 0^oC, затем прибавляют равный объем сухого эфира и оставляют на 20 мин при 0^oC. Осадок хлористого натрия отделяют, растворитель из фильтрата удаляют в вакууме. Остаток растворяют в 3.5 мл DMF и прибавляют 0.604 г (1.16 ммоль) Boc-L-Glu(OPfp)-OBzl. Реакционную смесь перемешивают 2 ч и оставляют на 20 ч. DMF удаляют в вакууме. Маслообразный остаток очищают на колонке 30 х 1.6 см с силикагелем 100/160, элюируют смесью хлороформ: метанол (9: 1). Фракции, содержащие целевой продукт, объединяют, растворитель удаляют в вакууме. Целевое вещество сушат над P₂O₅. Выход 0.334 г (55.0%). R_f 0.35 (1). ¹H-ЯМР спектр (CD₃OD): 1.45 (c, 9H, (CH₃)₃O, 2.0 (м, 2H, -CH₂), 2.3 (т, 2H, -CH₂), 3.0 (д, 2H, -CH₂- His), 3.7 (с, 3H, CH₃O), 4.1 (т, 1H, -CH), 4.55 (т, 1H, -CH-His), 5.15 (м, 2H, CH₂-Bzl), 6.85 (с, 1H, CH-4-Im), 7.35 (м, 5H, C₆H₅-Bzl), 7.6 (с, 1H, CH-2-Im).

Дигидрохлорид метилового эфира -L-глутамил-L-гистидина (VI).

К раствору 0.30 г Boc-L-Glu(HisOMe)-OBzl (Vl^a) в 1 мл MeOH прибавляют 3 мл 4 н. раствора хлористого водорода в диоксане. Через 30 мин прибавляют 5 мл сухого эфира. Растворители удаляют в вакууме, добавляют сухой эфир и также удаляют в вакууме. Остаток растирают с сухим эфиром. Эфир отделяют декантацией. Белое твердое вещество сушат над P₂O₅ в вакууме. Получают 0.25 г 2HCIL-Glu(HisOMe)OBzl.

К раствору 0.140 г полученного вещества в 4.5 мл безводного метанола прибавляют 0.10 г 10%-го палладия на активированном угле и перемешивают 2.5 ч, периодически пропуская ток водорода. Катализатор отделяют, промывают на фильтре MeOH. Растворитель из объединенного фильтрата удаляют в вакууме. К остатку добавляют сухой эфир и также удаляют в вакууме. Вещество сушат в вакууме над P₂O₅. Выход 0.103 г (90.3%). R_f 0.35 (6). ВЭЖХ в условиях (9): один пик, время выхода 6.16 мин. ¹H-ЯМР спектр (CD₃OD), , м.д.: 2.15 (м, 2H, -CH₂), 2.55 (т, 2H, -CH₂), 3.15 (т, 1H, -CH), 3.75 (с, 3H, CH₃O), 4.0 (т, 1H, -CH-His), 4.8 (д, 2H, - CH₂-His), 7.4 (с, 1H, CH-4-Im), 8.81 (с, 1H, CH-2-Im). Масс-спектр, m/z: 299.1.

Пример 6.

Метиловый эфир глутарил-L-гистидина (VII).

К раствору 0.30 г (1.16 ммоль) дигидрохлорида метилового эфира L-гистидина, полученному нагреванием до 40^oC в 4 мл безводного метанола с последующим охлаждением до 0^oC, прибавляют холодный раствор метилата натрия, полученный из 0.053 г (2.32 ммоль) металлического натрия и 1 мл метанола. Реакционную смесь оставляют на 20 мин при 0^oC, затем прибавляют равный объем сухого эфира и оставляют на 20 мин при 20^oC. Осадок хлористого натрия отделяют, растворитель удаляют в вакууме. Остаток растворяют в 3.5 мл DMF и прибавляют 0.132 г (1.16 ммоль) глутарового ангидрида. Реакционную смесь перемешивают 2 ч и оставляют на 20 ч при 20^oC. Растворитель удаляют в вакууме. Маслообразный остаток очищают на колонке (30 х 1.6 см) с силикагелем 100/160, элюируют метанолом. Фракции, содержащие целевой продукт, объединяли. Растворитель удаляют в вакууме, сушат над P₂O₅. Выход 0.095 г (28%). R_f 0.43 (10). ВЭЖХ в условиях (8): один пик, время выхода 9.95 мин. ¹H-ЯМР спектр (CD₃OD), , м.д.: 1.85 (м, 2H, -CH₂), 2.25 (т, 4H, ,- CH₂), 3.05 (д, 2H, - CH₂-His), 3.7 (с, 3H, CH₃O), 4.67 (т, 1H, - CH-His), 6.92 (с, 1H, CH-4-Im), 7.72 (с, 1H, CH-2-Im). Масс-спектр, m/z: 284.4.

Пример 7.

Пентафторфениловый эфир N-бензилоксикарбонил - - аминомасляной кислоты (VIII^a).

К 0.60 г (2.53 ммоль) N- бензилоксикарбонил- -аминомасляной кислоты прибавляют 9 мл безводного этилацетата, перемешивают и охлаждают до 0^oC. Прибавляют 0.52 г (2.53 ммоль) DCC и 0.465 (2.53 ммоль) пентафторфенола. Реакционную смесь перемешивают при охлаждении 2 ч, после чего оставляют на 20 ч при 20^oC. Осадок DCU отделяют, промывают безводным этилацетатом. Фильтраты объединяют, растворитель удаляют в вакууме. Получают белые, слегка желтоватые кристаллы Z-GABA-OPfp, которые сушат в вакууме. Выход 1.05 г (98.0%). R_f 0.85 (1).

Метиловый эфир N-бензилоксикарбонил -- аминобутирил-L-гистидина (Vlll^б).

К 0.30 г (1.16 ммоль) дихлоргидрата метилового эфира L-гистидина прибавляют 4 мл безводного метанола и нагревают до растворения. Раствор охлаждают до 0^oC и прибавляют охлажденный раствор метилата натрия, приготовленный из 0.053 г (2.32 ммоль) металлического натрия и 1 мл безводного метанола. Реакционную смесь оставляют при 0^oC на 20 мин, прибавляют равный объем сухого эфира и оставляют при 20^oC на 20 мин. Осадок хлористого натрия отделяют. Растворитель из фильтрата удаляют в вакууме. К маслообразному остатку прибавляют 5 мл безводного DMF, 0.50 г (1.24 ммоль) Z-GABA-OPfp и оставляют на 20 ч при 20^oC. Растворитель удаляют в вакууме. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле L 40/100, элюируют хлороформом и градиентом метанола в хлороформе до соотношения 2:8. Фракции, содержащие целевое вещество с R_f 0.46 (2), объединяют, растворитель удаляют в вакууме. К полученному остатку прибавляют избыток сухого эфира с 1 каплей триэтиламина, растирают. Белое твердое вещество отделяют, промывают сухим эфиром, сушат в вакууме. Выход 0.243 г (65.0%), R_f 0.46(2). Масс-спектр, m/z: 375.

Метиловый эфир - аминобутирил-L-гистидина (VIII).

К 0.04 г (0.124 ммоль) Z-GABA-L-His-OMe прибавляют 7 мл безводного метанола, 0.04 г 10%-го палладия на активированном угле и гидрируют 1 час при перемешивании. После полного превращения исходного вещества с R_f 0.46 (2) в целевой продукт с R_f 0 (2) катализатор отделяют, промывают метанолом. Фильтраты объединяют, растворитель удаляют в вакууме. Получают бесцветное вязкое масло. Выход 0.030 г (90.0%). R_f 0.05 (3), R_f 0.1 (4). ВЭЖХ в условиях (1): один пик, время выхода 4.8 мин. ¹H-ЯМР спектр (CD₃OD), , м.д.: 1.85 (м, 2H, - CH₂), 2.23 (т, - CH₂), 2.95 (д, 2H, - CH₂-His), 3.1 (т, - CH₂), 3.7 (с, 3H, CH₃O), 4.65 (т, 1H, - CH-His), 6.85 (с, 1H, CH-4-Im), 7.6 (с, 1H, CH-2-Im).

Пример 8.

N-трет.-бутилоксикарбонил-- бензил-L-глутамилгистидин (IX^а).

К раствору 0.100 г (0.645 ммоль) L-гистидина в 3 мл воды при перемешивании прибавляют 0.75 мл диоксана и затем порциями в течение 2 ч 0.560 г (1.29 ммоль) Boc-L-Glu(ONSu)OBzl и 2.25 мл диоксана (до соотношения диоксан: вода 1:1). Образовавшуюся суспензию перемешивают 2 ч и оставляют на 20 ч при 20^oC, после чего суспензия превращается в раствор. Растворитель удаляют в вакууме. Маслообразный остаток очищают на колонке 30 х 1.6 см с силикагелем 100/160, элюируют смесью хлороформ-метанол 5:1, постепенно увеличивая содержание MeOH до 50%. Фракции, содержащие целевой продукт, объединяют, растворитель удаляют в вакууме. Получают белое твердое вещество.

Выход 0.150 г (45.7%). R_f 0.48 (3). ¹H-ЯМР спектр (CD₃OD), , м.д.: 1.4 (с, 9H, (CH₃)₃C), 1.98 (м, 2H, - CH₂), 2.3 (т, 2H, - CH₂-Glu), 3.1 (м, 2H, - CH₂-His), 4.07 (т, 1H, - CH), 4.5 (т, 1H, - CH-His), 5.18 (м, 2H, CH₂-Bzl), 7.17 (с, 1H, CH-4-Im), 7.35 (м, 5H, C₆H₅), 8,4 (с, 1H, CH-2-Im).

Дихлоргидрат - метилового эфира -- L-глутамилгистидина (IX).

К раствору 0.140 г Boc-L-Glu(His)-OBzl (IX^а) в 1 мл безводного метанола прибавляют 3 мл 4 н. раствора хлористого водорода в диоксане и выдерживают 40 мин при 20^oC. К реакционной смеси прибавляют эфир, и растворители удаляют в вакууме. К остатку дважды прибавляют порциями эфир и удаляют в вакууме. Осадок растирают с эфиром до образования белого твердого вещества. Эфир декантируют, остаток сушат в вакууме и очищают препаративной бумажной хроматографией в системе бутанол-уксусная кислота-вода 4:1:5, верхняя фаза. Получают 0.12 г (95.8%) дихлоргидрата дипептида, R_f 0.26 (3). К раствору 0.117 г полученного продукта в 4.5 мл безводного метанола прибавляют 0.096 г 10%-го палладия на активированном угле. Реакционную смесь перемешивают 2.5 ч, периодически пропуская ток водорода. Катализатор отделяют, промывают на фильтре 5 мл MeOH. Фильтраты объединяют, растворитель удаляют в вакууме. Остаток сушат в вакууме над P₂O₅. Выход 0.091 г (96.1%). R_f 0.3(6). ВЭЖХ в условиях (10): один пик, время выхода 5.40 мин. Масс-спектр, m/z: 299.2. ¹H-ЯМР спектр (CD₃OD), , м.д.: 2.15 (м, 2H, - CH₂), 2.55 (т, 2H, - CH₂), 3.16 (т, 1H, - CH), 3.75 (с, 3H, CH₃O), 3.99 (т, 1H, - CH-His), 4.8 (дд, 2H, - CH₂-His), 7.38 (с, H, CH-4-Im), 8.80 (с, H, CH-2-Im).

Пример 9.

N-бензилоксикарбонил -- аминобутирилтриптамин (X^а).

К раствору 0,252 г (0,625 ммоль) Z-GABA-OPfp в 5 мл DMF прибавляют 0.10 г (0.625 ммоль) триптамина и перемешивают при 25^oC 2 ч. Реакционную смесь оставляют на 16 ч при той же температуре, после чего прибавляют 7-кратный избыток воды (по объему). Белый творожистый осадок отфильтровывают, промывают на фильтре водой, сушат. Выход 0.22 г (93.0%). R_f 0.6 (5), R_f 0.54 (3). Масс-спектр, m/z: [М+1H]⁺ 380.6.

- Аминобутирилтриптамин (X).

К 0.133 г (0.35 ммоль) Z-GABA-TrpA прибавляют 7 мл безводного метанола, перемешивают до растворения основной массы вещества, прибавляют 0.133 г 10%-го палладия на активированном угле и гидрируют 1 ч. После полного превращения исходного вещества с R_f 0.6 (5) в целевой продукт с R_f 0 (5) катализатор отделяют, промывают метанолом. Фильтраты объединяют, растворитель удаляют в вакууме. Получают бесцветное вязкое масло. Выход 0.086 г (99.0%). R_f 0.43 (3). ВЭЖХ в условиях (2): один пик, время выхода 18.5 мин. ¹H-ЯМР спектр (CD₃OD), , м.д.: 1.65 (м, 2H, - CH₂), 2.05 (т, 2H, - CH₂), 2.85 (т, 2H, - CH₂-TrpA), 3.0 (т, 2H, - CH₂), 3.45 (м, 2H, - CH₂-TrpA), 6.95 (с, 1H, CH-2-Ind), 6.99 (м, 1H, CH-5-Ind), 7.05 (м, 1H, CH-6-Ind), 7.28 (д, 1H, CH-7-Ind), 7.48 (д, 1H, CH-4-Ind).

Пример 10.

Глутарил-O-бензилсеротонин (XI).

К суспензии 0.20 г (0.66 ммоль) хлоргидрата O-бензилсеротонина в 3 мл DMF прибавляют при перемешивании 0.09 мл (0.66 ммоль) триэтиламина, а затем 0.075 г (0.66 ммоль) глутарового ангидрида. Реакционную массу перемешивают 1 ч и оставляют на 20 ч при 20^oC. Осадок хлоргидрата триэтиламина отделяют, растворитель удаляют в вакууме. Маслообразный остаток очищают на колонке 31 х 1.5 см с силикагелем Silica gel 60, 0.063- 0.2 мм (Merck). Элюируют смесью хлороформ - метанол 9:1. Фракции, содержащие целевой продукт, объединяют, растворитель удаляют в вакууме. Получают бесцветный стеклообразный продукт. Выход 50 мг (20 %). R_f 0.48 (1). ВЭЖХ в условиях (14): один пик, время выхода 23.8 мин. ¹H- ЯМР спектр (CD₃OD), , м.д.: 2.05 (м, 2H, - CH₂-GA), 2.45 (м, 4H, ,- CH₂-GA), 3.1 (т, 2H, - CH₂), 3.67 (т, 2H, - CH₂), 5.3 (с, 2H, CH₂-Bzl), 7.0 (дд, 1H, CH-6-Ind), 7.1- 7.7 (м, 8H, CH-7-Ind, CH-2-Ind, CH-4-Ind, C₆H₅).

Пример 11.

N-глутарилсеротонин (XII).

К 25 мг (0.065 ммоль) глутарил-O- бензилсеротонина прибавляют 4 мл безводного метанола. К раствору добавляют 30 мг катализатора - палладия на активированном угле и гидрируют 1 ч при перемешивании. Катализатор отфильтровывают. Растворитель из фильтрата удаляют в вакууме. Выход 17 мг (90 %). R_f 0.31 (1). ВЭЖХ в условиях (14): один пик, время выхода 16.27 мин. ¹H-ЯМР спектр (CD₃OD), , м.д.: 2.0 (м, 2H, - CH₂-GA), 2.5 (м, 4H, ,- CH₂-GA), 3.0 (т, 2H, - CH₂), 3.65 (т, 2H, - CH₂), 6.85 (дд, 1H, 6-CH-Ind), 7.15 (д, 1H, CH-4-Ind), 7.25 (с, 1H, CH-2-Ind), 7.4 (д, 1H, CH-7-Ind).

Пример 12.

Глутарил-5-O-метилсеротонин (XIII).

К раствору 0.20 г (1.05 ммоль) O-метилсеротонина в 3 мл DMF прибавляют при перемешивании 0.12 г (1.05 ммоль) глутарового ангидрида. Реакционную массу перемешивают 1 ч и оставляют на 20 ч при 20^oC. Растворитель удаляют в вакууме. Маслообразный остаток очищают на колонке 31 х 1.5 см с силикагелем Silica gel 60, 0.063-0.2 мм (Merck). Элюируют смесью хлороформа и метанола 9:1. Фракции, содержащие целевой продукт, объединяют, растворитель удаляют в вакууме. Получают бесцветное стеклообразное вещество. Выход 0.095 г (29.8%). R_f 0.51 (1). ВЭЖХ в условиях (14): один пик, время выхода 19.0 мин. ¹H-ЯМР спектр (CDCl₃+CD₃OD), , м.д.: 1.95 (м, 2H, - CH₂-GA), 2.37 (м, 4H, ,- CH₂-GA), 3.0 (т, 2H, - CH₂), 3.56 (т, 2H, - CH₂), 3.92 (с, 3H, CH₃O), 6.83 (дд, 1H, CH-6-Ind), 7.1 (д, 2H, CH-2,4-Ind), 7.31 (д, 1H, CH-7-Ind).

Пример 13.

Глутарил-4-(2-аминоэтил)морфолин (XIV).

К раствору 0.5 г (4.39 ммоль) глутарового ангидрида в 1 мл DMF при перемешивании и охлаждении водой прибавляют 0.57 мл (4.39 ммоль) 4-(2-аминоэтил) морфолина. Перемешивают 30 мин, оставляют на 20 ч при 20^oC. Растворитель удаляют в вакууме. Маслообразный остаток промывают эфиром, растворитель удаляют в вакууме, сушат и оставляют при +4^oC на 20 ч. Образующееся кристаллическое вещество промывают и растирают с эфиром (3 х 1.5 мл), а затем с ацетоном (4 х 1.5 мл), отделяют от растворителей, сушат в вакууме. Получают 0.265 г (24.8%), R_f 0.41 (6). ВЭЖХ в условиях (11): один пик, время выхода 3.93 мин. ¹H-ЯМР спектр (CD₃OD), , м.д.: 0,5 (м, 2H, - CH₂-GA), 0.9 (м, 4H, ,- CH₂-GA), 1.3