Производные 8-азабицикло[3.2.1.]-окт-2-ена, способ их получения, фармацевтическая композиция, способ изготовления лекарственного средства, способы ингибирования обратного захвата моноаминного нейромедиатора, в особенности серотонина

Производные 8-азабицикло[3.2.1.]-окт-2-ена, способ их получения, фармацевтическая композиция, способ изготовления лекарственного средства, способы ингибирования обратного захвата моноаминного нейромедиатора, в особенности серотонина

Реферат

 

Изобретение касается новых химических соединений, а именно производных 8-азабицикло[3.2.1] окт-2-ена формулы I, или любых его энантиомеров, или любых их смесей, или любых его фармацевтически приемлемых солей, где R представляет собой водород, алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, циклоалкилалкил; и R⁴ представляет собой фенил, который может быть замещен одним или более чем одним заместителем, выбранным из группы, состоящей из галогена, CF₃, CN, алкоксила, циклоалкоксила, алкила, циклоалкила, алкенила алкинила, нитрогруппы; бензил, который может быть замещен одним или более чем одним заместителем, выбранным из группы, состоящей из галогена, CF₃, CN, алкоксила, циклоалкоксила, алкила, циклоалкила, алкенила алкинила, аминогруппы, нитрогруппы, гетероарила и арила, при условии, что если R представляет собой водород, то R⁴ не является фенилом, 4-фторфенилом или 3-трифторметилфенилом; если R представляет собой метил, то R⁴ не является фенилом, 4-галогенфенилом, 4-метилфенилом, 2-этилфенилом, 2,4-диметилфенилом, 2,4,6-триметилфенилом, 3-трифторметилфенилом или 4-метоксифенилом; если R представляет собой этил, то R⁴ не является фенилом; если R представляет собой октил, то R⁴ не является фенилом. Данные соединения обладают полезными фармацевтическими свойствами как ингибиторы обратного захвата моноаминных нейромедиаторов, в особенности серотонина, и могут быть использованы в качестве агентов, вызывающих быстрый антидепрессивный эффект. 6 с. и 5 з.п. ф-лы, 1 табл.

Настоящее изобретение относится к новым производным 8- азабицикло[3.2.1] окт-2-ена, которые являются ингибиторами обратного захвата моноаминных нейромедиаторов, таких как дофамин, серотонин и норадреналин. Настоящее изобретение, в частности, относится к новым производным 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-ена, которые являются сильнодействующими ингибиторами обратного захвата серотонина и, в связи с этим, полезными при лечении расстройств или заболеваний, таких как депрессии и родственные расстройства, обсессивно-компульсивные расстройства, состояния паники, нарушения памяти, состояние гиперактивности дефицита внимания, ожирение, состояния тревоги и расстройства, связанные с приемом пищи.

Предпосылки изобретения Моноаминные нейромедиаторы (т.е.серотонин, дофамин и норадреналин) освобождаются в синаптическую щель для того, чтобы стимулировать активность постсинаптических рецепторов. Выведение (или инактивация) моноаминных нейромедиаторов происходит в основном по механизму обратного захвата в пресинаптические окончания. При ингибировании обратного захвата происходит усиление физиологической активности моноаминных нейромедиаторов.

Ингибиторы обратного захвата норадреналина и серотонина применяются в настоящее время в качестве фармацевтических средств при проведении антидепрессивной терапии (Дезипрамин, Нортриптилин и Протриптилин являются ингибиторами обратного захвата норадреналина, а Имипрамин и Амитриптилин - ингибиторами обратного захвата серотонина и норадреналина).

Патофизиология главного аффективного расстройства остается недостаточно выясненной, и предполагается, что в патофизиологию депрессии вовлечены различные нейромедиаторы. Тем не менее, ряд предклинических и клинических данных свидетельствует о том, что усиление опосредованной серотонином нейротрансмиссии может являться основой терапевтического эффекта большинства применяемых ранее и в настоящее время для антидепрессивной терапии лекарственных средств, таких как флуоксетин, циталопрам и пароксетин.

Парадоксальные ингибиторы обратного захвата серотонина ингибируют транспорт серотонина в течение минут, в то время как их полный антидепрессивный эффект проявляется только через три-четыре недели лечения, что говорит о том, что ингибитор обратного захвата per se не является ответственным за антидепрессивный ответ, а скорее дальнейшие адаптивные изменения лежат в основе и/или способствуют его терапевтическому эффекту. Задержка начала антидепрессивного действия считается серьезным недостатком используемых в настоящее время ингибиторов обратного захвата моноаминов. Соединения, предусмотренные настоящим изобретением, являются сильнодействующими ингибиторами обратного захвата серотонина (5- гидрокситриптамина, 5-НТ).

Соединения по изобретению также обладают ингибирующей активностью по отношению к обратному захвату норадреналина и дофамина, но ингибирующая активность этих соединений в отношении обратного захвата серотонина является более сильной по сравнению с соответствующей активностью в отношение дофамина.

Кроме того, сильную ингибирующую активность обратного захвата дофамина в настоящее время связывают с риском нежелательных эффектов стимулирования центральной нервной системы. С другой стороны, предполагают, что активирующее воздействие на мезолимбическую дофаминовую систему лежит в основе общего механизма применяемого в настоящее время антидепрессивного лечения по механизму, который усиливает эндогенную систему подкрепления. Поэтому соединения с сильной ингибирующей активностью обратного захвата серотонина в сочетании с хорошо сбалансированной ингибирующей активностью в отношении обратного захвата дофамина могут являться агентами, вызывающими быстрый антидепрессивный эффект.

Было показано, что серотонергическая невральная система мозга оказывает влияние на разнообразные физиологические функции, и можно предполагать, что соединения по настоящему изобретению будут обладать способностью лечить у млекопитающих, включая людей, разнообразные заболевания, связанные с этими невральными системами, такие как расстройства при приеме пищи, депрессии, обсессивно-компульсивные расстройства, состояния паники, алкоголизм, боль, нарушения памяти и состояние тревоги. Таким образом, согласно настоящему изобретению предложены также способы лечения различных заболеваний, связанных с уменьшением нейротрансмиссии серотонина у млекопитающих. К таким заболеваниям могут быть отнесены депрессия и родственные ей заболевания, такие как псевдодеменции или синдром Ганзера, боль, вызываемая мигренью, булимия, ожирение, предменструальный синдром или синдром поздней лютеиновой фазы, алкоголизм, курение, состояния паники и тревоги, посттравматический синдром, потеря памяти, старческое слабоумие, социофобия, состояние гиперактивности дефицита внимания, синдром хронической усталости, преждевременное семяизвержение, эрректильные затруднения, анорексийный невроз, расстройства сна, аутизм, мутизм или трихотилломания.

Задачи изобретения Настоящее изобретение решает задачу предоставления новых производных 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-ена, которые являются ингибиторами обратного захвата моноаминных нейромедиаторов. Настоящее изобретение, в частности, решает задачу предоставления сильнодействующих ингибиторов обратного захвата серотонина.

Другая задача данного изобретения состоит в том, чтобы предоставить новые фармацевтические композиции, содержащие новые производные 8-азабицикло[3.2.1] окт-2-ена, пригодные для лечения расстройств или заболеваний, чувствительных к ингибирующей активности в отношении обратного захвата моноаминного нейромедиатора и, в особенности, к сильной ингибирующей активности соединений по изобретению в отношении обратного захвата серотонина. Такие заболевания и расстройства включают в себя депрессию и родственные заболевания.

Еще одной задачей данного изобретения является обеспечить способ лечения заболеваний или расстройств, чувствительных к ингибированию обратного захвата моноаминного нейромедиатора, в частности серотонина, таких как депрессия и родственные ей заболевания, при которых вводят терапевтически эффективное количество одного или нескольких новых производных 8-азабицикло[3.2.1]окт-2-ена живому организму, включая человека.

Другие задачи станут понятны специалистам по мере прочтения материалов заявки.

Сущность изобретения Таким образом, данное изобретение, inter alia, включает в себя следующее, одно или в сочетании: Соединение, имеющее формулу или любой из его энантиомеров либо любая их смесь, или его фармацевтически приемлемая соль; где R представляет собой водород, алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, циклоалкилалкил и R⁴ представляет собой фенил, который может быть замещен одним или более чем одним заместителем, выбранным из группы, состоящей из галогена, CF₃, CN, алкоксила, циклоалкоксила, алкила, циклоалкила, алкенила алкинила, нитрогруппы; бензил, который может быть замещен одним или более чем одним заместителем, выбранным из группы, состоящей из галогена, CF₃, CN, алкоксила, циклоалкоксила, алкила, циклоалкила, алкенила алкинила, аминогруппы, нитрогруппы, гетероарила и арила; при условии, что если R представляет собой водород, то R⁴ не является фенилом, 4-фторфенилом или 3-трифторметилфенилом; если R представляет собой метил, то R⁴ не является фенилом, 4-галогенфенилом, 4-метилфенилом, 2-этилфенилом, 2,4- диметилфенилом, 2,4,6-триметилфенилом, 3-трифторметилфенилом или 4-метоксифенилом; если R представляет собой этил, то R⁴ не является фенилом; если R представляет собой октил, то R⁴ не является фенилом; соединение как оно определено выше, которое представляет собой ()-3-(3,4-дихлорфенил)-8-метил-8- азабицикло[3.2.1] окт-2-ен, ()-3-(3,4-дихлорфенил)-8- азабицикло[3.2.1]окт-2-ен либо его фармацевтически приемлемая соль присоединения; фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения, как оно определено выше, вместе с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем; применение соединения, как оно определено выше, для производства лекарственного средства для лечения расстройства или заболевания живого организма, включая человека, причем это расстройство или заболевание является чувствительным к ингибированию обратного захвата моноаминного нейромедиатора в центральной нервной системе; применение соединения, как оно определено выше, для производства лекарственного средства для лечения расстройства или заболевания живого организма, включая человека, причем это расстройство или заболевание является чувствительным к ингибированию обратного захвата серотонина в центральной нервной системе; применение соединения, как оно определено выше, для производства лекарственного средства для лечения депрессии и родственных расстройств, таких как псевдодеменции или синдром Ганзера, обсессивно-компульсивные расстройства, состояния паники, нарушения памяти, состояние гиперактивности дефицита внимания, ожирение, состояния тревоги и расстройства при приеме пищи; применение, как оно определено выше, при котором используемое соединение представляет собой ()-3-(3,4-дихлорфенил)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-ен, ()-3-(3,4-дихлорфенил)-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-ен либо его фармацевтически приемлемую соль присоединения; способ лечения расстройства или заболевания живого организма, включая человека, причем это расстройство или заболевание является чувствительным к ингибированию обратного захвата моноаминного нейромедиатора, при котором такому нуждающемуся в лечении живому организму, включая человека, вводят терапевтически эффективное количество соединения, как оно определено выше; способ лечения расстройства или заболевания живого организма, включая человека, причем это расстройство или заболевание является чувствительным к ингибированию обратного захвата серотонина, при котором такому нуждающемуся в лечении живому организму, включая человека, вводят терапевтически эффективное количество соединения, как оно определено выше; способ, как он определен выше, при котором лечат депрессию и родственные ей расстройства, такие как псевдодеменция или синдром Ганзера, обсессивно-компульсивные расстройства, состояния паники, нарушения памяти, состояние гиперактивности дефицита внимания, ожирение, состояния тревоги или расстройства при приеме пищи; и способ получения соединения, как оно определено выше, при котором дегидратируют соединение формулы где R и R⁴ такие, как определено выше, после чего возможно образуют фармацевтически приемлемую соль присоединения.

Примеры фармацевтически приемлемых солей присоединения включают в себя неорганические и органические соли присоединения, такие как гидрохлорид, гидробромид, фосфат, нитрат, перхлорат, сульфат, цитрат, лактат, тартрат, малеат, фумарат, манделат, бензоат, аскорбат, циннамат, бензолсульфонат, метансульфонат, стеарат, сукцинат, глутамат, гликолат, толуол-п-сульфонат, формиат, малонат, нафталин-2- сульфонат, салицилат и ацетат. Такие соли образуют общеизвестными способами.

Другие кислоты, такие как щавелевая кислота, не являясь сами по себе фармацевтически приемлемыми, могут быть полезны при получении солей, пригодных в качестве промежуточных соединений при получении соединений по изобретению и их фармацевтически приемлемых солей присоединения.

Галоген представляет собой фтор, бром или иод.

Алкил означает прямую или разветвленную цепь из от одного до шести атомов углерода, включая, но не ограничиваясь этим, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил, пентил и гексил; метил, этил, пропил и изопропил являются предпочтительными группами.

Циклоалкил означает циклический алкил, содержащий от трех до семи атомов углерода, включая, но не ограничиваясь этим, циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.

Алкенил означает группу из от двух до шести атомов углерода, включающую в себя по меньшей мере одну двойную связь, например, но не ограничиваясь этим примером, этенил, 1,2- или 2,3- пропенил, 1,2-, 2,3- или 3,4- бутенил.

Алкинил означает группу из от двух до шести атомов углерода, включающую в себя по меньшей мере одну тройную связь, например, но не ограничиваясь этим примером, этинил, 2,3-пропинил, 2,3- или 3,4-бутинил.

Циклоалкилалкил означает циклоалкил, как он определен выше, и алкил, как он определен выше, обозначающий, например, циклопропилметил.

Алкоксил представляет собой О-алкил, где алкил такой, как он определен выше.

Циклоалкоксил представляет собой О-циклоалкил, где циклоалкил такой, как он определен выше.

Аминогруппа представляет собой NH₃, или NН-алкил, или N-(алкил)₂, где алкил такой, как он определен выше.

Подходящим гетероарилом является 5- или 6-членная гетероциклическая моноциклическая группа. Такая гетероарильная группа включает в себя, например, оксазол-2-ил, оксазол -4-ил, оксазол -5-ил, изоксазол-3-ил, иэоксазол -4-ил, изоксазол-5-ил, тиазол-2-ил, тиазол-4-ил, тиазол-5-ил, изотиазол-3-ил, изотиазол-4-ил, изотиазол-5-ил, 1,2,4-оксадиазол-3-ил, 1,2,4-оксадиазол-5-ил, 1,2,4-тиадиазол-3-ил, 1,2,4- тиадиазол-5-ил, 1,2,5-оксадиазол-3-ил, 1,2,5- оксадиазол-4-ил, 1,2,5-тиадиазол-3-ил, 1,2,5-тиадиазол-4-ил, 2-имидазолил, 4- имидазолил, 5-имидазолил, 2-пирролил, 3-пирролил, 2-фуранил, 3-фуранил, 2-тиенил, 3-тиенил, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил.

Арил представляет собой ароматический углеводород, такой как фенил или нафтил.

И.п. означает хорошо известный интраперитонеальный способ введения лекарственного средства.

П. о. означает хорошо известный пероральный способ введения лекарственного средства.

Кроме того, соединения по данному изобретению могут существовать как в несольватированной, так и в сольватированной формах с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и т.п. В общем, для назначения данного изобретения сольватированные формы считаются эквивалентными несольватированным.

Специалистам следует принять во внимание, что некоторые из соединений по настоящему изобретению содержат хиральные центры и что такие соединения существуют в форме изомеров (т.е. энантиомеров). Данное изобретение включает в себя все такие изомеры и любые их смеси, включая рацемические смеси.

Некоторые из соединений по настоящему изобретению существуют в (+) и (-) формах, равно как и в рацемических формах. Рацемические формы могут быть разделены на оптические антиподы известными способами, например разделением их диастереомерных солей с помощью оптически активной кислоты и выделением оптически активного аминосоединения обработкой основанием. Другой способ разделения рацематов на оптические антиподы основывается на хроматографии на оптически активной матрице. Кроме того, рацемические соединения по настоящему изобретению могут быть разделены на их оптически активные антиподы, например, фракционной кристаллизацией, например d- или 1-солей (тартратов, манделатов или камфорасульфонатов). Соединения по настоящему изобретению также могут быть разделены путем образования диастереомерных амидов в результате взаимодействия данных соединений по настоящему изобретению с оптически активной активированной карбоновой кислотой, такой как кислота, производная от (+)- или (-)- фенилаланина, (+)- или (-)-фенилглицина, (+)- или (-)-камфановой кислоты, либо путем образования диастереомерных карбаматов взаимодействием соединений по настоящему изобретению с оптически активным хлорформиатом или т.п.

Могут быть использованы известные специалистам в данной области дополнительные способы разделения оптических изомеров. Такие способы включают в себя те из них, которые обсуждались J.Jaques, A.Collet и S.Wilen в "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley and Sons, New York (1981).

Соединения по изобретению могут быть получены множеством способов. Соединения по изобретению и их фармацевтически приемлемые производные могут, таким образом, быть получены любым способом, известным в данной области для получения соединений аналогичной структуры, и как показано в приведенных далее примерах.

Следующая схема иллюстрирует один из способов, посредством которого соединения по изобретению могут быть получены: R⁴-Br+X-alkyl __ R⁴-X Заместители R и R⁴ на этой реакционной схеме такие, как определено выше, а X представляет собой Li, MgBr или любой другой тип функциональности, пригодный для генерирования карбаниона как его противоиона.

Процессы, приведенные выше на реакционной схеме, осуществляют традиционными способами. Дегидратирование спирта осуществляют с использованием кислот, таких как соляная или серная кислота, либо других традиционных дегидратирующих агентов, таких как, например, P₂O₅ или SOCl₂.

Соединение по изобретению может быть превращено в другое соединение по изобретению с использованием традиционных способов.

Исходные материалы для процессов, описанных в настоящей заявке на изобретение, известны или могут быть получены известными способами из коммерчески доступных материалов.

Продукты реакций, описанные здесь, выделяют традиционными способами, такими как экстракция, кристаллизация, дистилляция, хроматография и т.п.

Биология Соединения по изобретению были испытаны на их способность ингибировать обратный захват дофамина (DA), норадреналина (NA) и серотонина (5-НТ) в синаптосомах.

Предпосылки Специфические сайты на нервных окончаниях, ответственные за транспорт/захват нейромедиаторов, предположительно функционируют так, чтобы окончить прохождение нейронного сигнала посредством выведения нейромедиаторов дофамина, норадреналина и серотонина, соответственно, из синаптической щели. Активность транспортных интегральных белков может быть измерена in vitro по синаптосомальному захвату ³H-дофамина, ³H-норадреналина и ³H- серотонина, соответственно.

Ингибирование захвата ³H-дофамина (³H-DA) в синаптосомах полосатого тела in vitro Препараты тканей Препараты готовят при 0-4^oC, если не указано иначе. Полосатое тело из самцов крыс Wistar (150-200 г) гомогенизируют в течение 5-10 с в 100 объемах охлажденного льдом 0,32М раствора сахарозы, содержащего 1 мМ паргилина, используя гомогенизатор Ultra-Turrax. Активность моноаминоксидазы будет ингибироваться в присутствии паргилина. Гомогенат центрифугируют при 1000 х g в течение 10 мин. Полученную надосадочную жидкость затем центрифугируют при 27000 х g в течение 50 мин, после чего надосадочную жидкость отбрасывают. Осадок (P₂) заново суспендируют в оксигенированном (уравновешенном с атмосферой из 96% O₂ : 4% CO₂ в течение по меньшей мере 30 мин) буфере для инкубации Кребса-Рингера (8000 мл на грамм первоначальной ткани) при pH 7,2, содержащем 122 мМ NaCl, 0,16 мМ EDTA, 4,8 мМ KCl, 12,7 мМ Na₂HPO₄, 3,0 мМ Na₂HPO₄, 1,2 мМ MgSO₄, 1 мМ CaCl₂, 10 мМ глюкозы и 1 мМ аскорбиновой кислоты.

Анализ Аликвоты суспензии ткани объемом по 4,0 мл добавляют к 100 мкл тестируемого раствора и 100 мкл раствора ³H-DA (1 нМ, конечная концентрация), перемешивают и инкубируют в течение 25 мин при 37^oC. Неспецифический захват определяют, используя бензтропин (10 мкМ, конечная концентрация). По окончании инкубации образцы выливают непосредственно на стекловолокнистые фильтры Whatman GF/C под отсосом. Затем фильтры промывают трижды по 5 мл охлажденного льдом 0,9% (мас./об.) раствора NaCl. Количество радиоактивности на фильтрах определяют посредством Традиционного жидкостного сцинтилляционного счетчика. Специфический захват рассчитывают как разницу между общим и неспецифическим захватом.

Прежде чем рассчитывать значение IC₅₀, необходимо получить 25-75%-ное ингибирование специфического связывания.

Определяемое в испытании значение приводят как IC₅₀ (концентрация (мкМ) тестируемого вещества, которая ингибирует специфическое связывание ³H-DA на 50%).

Ингибирование захвата ³H-норадреналина (³-NA) в синаптосомах гиппокампа in vitro Препараты тканей Препараты готовят при 0-4^oC, если не указано иначе. Гиппокамп из самцов крыс Wistar (150-200 г) гомогенизируют в течение 5-10 с в 100 объемах охлажденного льдом 0,32М раствора сахарозы, содержащего 1 мМ паргилина, используя гомогенизатор Ultra-Turrax. Активность моноаминоксидазы будет ингибироваться в присутствии паргилина. Гомогенат центрифугируют при 1000 х g в течение 10 мин. Полученную надосадочную жидкость затем центрифугируют при 27000 х g в течение 50 мин, после чего надосадочную жидкость отбрасывают. Осадок (P₂) заново суспендируют в оксигенированном (уравновешенном с атмосферой из 96% O₂ : 4% CO₂ в течение по меньшей мере 30 мин) буфере для инкубации Кребса-Рингера (2000 мл на грамм первоначальной ткани) при pH 7,2, содержащем 122 мМ NaCl, 0,16 мМ EDTA, 4,8 мМ KCl, 12,7 мМ Na₂PO₄, 3,0 мМ NaH₂PO₄, 1,2 мМ MgSO₄, 0,97 мМ CaCl₂, 10 мМ глюкозы и 1 мМ аскорбиновой кислоты.

Анализ Аликвоты суспензии ткани объемом по 4,0 мл добавляют к 100 мкл тестируемого раствора и 100 мкл раствора ³H-NA (1 нМ, конечная концентрация), перемешивают и инкубируют в течение 90 мин при 37^oC. Неспецифический захват измеряют, используя дезипрамин (1 мкМ, конечная концентрация). По окончании инкубации образцы выливают непосредственно на стекловолокнистые фильтры Whatman GF/C под отсосом. Затем фильтры промывают трижды по 5 мл охлажденного льдом 0,9% (мас./об.) раствора NaCl. Количество радиоактивности на фильтрах определяют посредством традиционного жидкостного сцинтилляционного счетчика. Специфический захват рассчитывают как разницу между общим и неспецифическим захватом.

Прежде чем рассчитывать значение IC₅₀, необходимо получить 25-75%-ное ингибирование специфического связывания.

Определяемое в испытании значение приводят как IC₅₀ (концентрация (мкМ) тестируемого вещества, которая ингибирует специфическое связывание ³H-NA на 50%).

Ингибирование захвата ³Н-5-гидрокситриптамина (³H-5-НТ, серотонин) в кортикальных синаптосомах in vitro Препараты тканей Препараты готовят при 0-4^oC, если не указано иначе. Кору головного мозга из самцов крыс Wistar (150-200 г) гомогенизируют в течение 5-10 с в 100 объемах охлажденного льдом 0,32М раствора сахарозы, содержащего 1 мМ паргилина, используя гомогенизатор Ultra-Turrax. Активность моноаминоксидазы будет ингибироваться в присутствии паргилина. Гомогенат центрифугируют при 1000 х g в течение 10 мин. Полученную надосадочную жидкость затем центрифугируют при 27000 х g в течение 50 мин, после чего надосадочную жидкость отбрасывают. Осадок (P₂) заново суспендируют в оксигенированном (уравновешенном с атмосферой из 96% O₂ : 4% CO₂ в течение по меньшей мере 30 мин) буфере для инкубации Кребса-Рингера (1000 мл на грамм первоначальной ткани) при pH 7,2, содержащем 122 мМ NaCl, 0,16 мМ EDTA, 4,8 мМ KCl, 12,7 мМ Na₂HPO₄, 3,0 мМ Na₂HPO₄, 1,2 мМ MgSO₄, 1 мМ CaCl₂, 10 мМ глюкозы и 1 мМ аскорбиновой кислоты.

Анализ Аликвоты суспензии ткани объемом по 4,0 мл добавляют к 100 мкл тестируемого раствора и 100 мкл раствора ³H-5-НТ (1 нМ, конечная концентрация), перемешивают и инкубируют в течение 30 мин при 37^oC. Неспецифический захват определяют, используя циталопрам (1 мкМ, конечная концентрация). По окончании инкубации образцы выливают непосредственно на стекловолокнистые фильтры Whatman GF/C под отсосом. Затем фильтры промывают трижды по 5 мл охлажденного льдом 0,9% (мас./об.) раствора NaCl. Количество радиоактивности на фильтрах определяют посредством традиционного жидкостного сцинтилляционного счетчика. Специфический захват рассчитывают как разницу между общим и неспецифическим захватом.

Прежде чем рассчитывать значение IC₅₀, необходимо получить 25-75%-ное ингибирование специфического связывания.

Определяемое в испытании значение приводят как IC₅₀ (концентрация (мкМ) тестируемого вещества, которая ингибирует специфическое связывание ³H-5-НТ на 50%).

Результаты испытаний, полученные при тестировании отдельно взятого соединения по настоящему изобретению, видны из приведенной ниже таблицы.

Представленные выше результаты показывают, что данные соединения являются ингибиторами in vitro обратного захвата моноаминных нейромедиаторов, в особенности серотонина.

Соединения по изобретению были также протестированы в следующем испытании на антидепрессивную активность.

Подвешивание за хвост Предпосылки Сокращение времени неподвижности мышей, подвешенных за хвост, наблюдалось после систематического введения стимуляторов центральной нервной системы и антидепрессантов (Steru L, Chermat R., Thierry В. & Simon P. (1985) The tail suspension test: A new method for screening antidepressants in mice. Psychopharmacology 85:367-370).

Метод Используют самок мышей NMRI (20-25 г), адаптированных к комнате (12 часов света/темноты) в течение по меньшей мере 16 часов и помещенных по 25 штук в клетку. Через 30 мин после перорального введения разбавителя или лекарства мышь подвешивают за хвост, присоединяя с помощью липкой ленты к стержню, находящемуся на расстоянии 30 см над лабораторным столом. В течение следующих 6 мин отмечают суммарную продолжительность неподвижности, определяемую как отсутствие движений туловища или конечностей (однако движения головы не учитывают в качестве движений). Используют по шесть мышей на дозу.

Обработанные физиологическим раствором или разбавителем мыши имеют время неподвижности между 160 и 180 с в среднем. Значение ED₅₀ рассчитывают путем графической интерполяции результатов, полученных с использованием по меньшей мере 3 доз, как дозу, снижающую неподвижность до 100 с.

Значение ED₅₀ составляет 0,96 мг/кг для соединения ()-3-(3,4-дихлорфенил)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1]окт-2-ен.

Приведенные выше результаты позволяют предположить наличие сильной антидепрессивной активности соединения по изобретению.

Фармацевтические композиции Несмотря на то, что в терапевтических целях соединение по изобретению можно вводить в виде исходного химического вещества, предпочтительным является предоставлять активный ингредиент в форме фармацевтического состава.

Таким образом, данное изобретение предусматривает фармацевтические составы, содержащие соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль или его производное вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями и возможно другими терапевтическими и/или профилактическими ингредиентами. Носитель(и) должен быть "приемлемым" в смысле его совместимости с другими ингредиентами состава и безвредности для реципиента.

Фармацевтические составы включают в себя составы, пригодные для перорального, ректального, назального, местного (включая трансбуккальное и подъязычное), вагинального или парентерального (включая внутримышечное, подкожное и внутривенное) введения, либо составы в форме, пригодной для введения ингаляцией или инсуффляцией.

Таким образом, соединениям по изобретению, вместе с традиционным адьювантом, носителем или разбавителем, может быть придана форма фармацевтических композиций и их стандартных доз, и в такой форме они могут применяться как твердые вещества, такие как таблетки или заполненные капсулы, либо как жидкости, такие как растворы, суспензии, эмульсии, эликсиры или заполненные ими капсулы, все для перорального введения, в форме суппозиториев для ректального введения; либо в виде стерильных инъекционных растворов для парентерального (включая подкожное) введения. Такие фармацевтические композиции и их формы стандартных доз могут содержать традиционные ингредиенты в обычных пропорциях с дополнительными активными соединениями или составляющими либо без них, и такие формы стандартных доз могут содержать любое подходящее эффективное количество активного ингредиента, соразмерное с назначаемой суточной дозой. Составы, содержащие десять (10) миллиграмм активного ингредиента или, в более широком интервале, от 0,1 до ста (100) миллиграмм на таблетку, являются соответственно подходящими характерными формами стандартной дозы.

Соединения по настоящему изобретению можно вводить в разнообразных формах стандартной дозы для перорального и парентерального введения. Для специалистов очевидно, что следующие формы доз могут содержать в качестве активного ингредиента либо соединение по изобретению, либо фармацевтически приемлемую соль соединения по изобретению.

Для получения фармацевтических композиций из соединений по настоящему изобретению фармацевтически приемлемые носители могут быть либо твердыми, либо жидкими. Препараты твердой формы включают в себя порошки, таблетки, пилюли, капсулы, облатки, суппозитории и дисперсные гранулы. Твердый носитель может представлять собой одно или более чем одно вещество из веществ, которые могут также действовать как разбавители, корригенты, солюбилизаторы, смазывающие вещества, суспендирующие агенты, связующие, консерванты, агенты, обеспечивающие дезинтеграцию таблетки, или инкапсулирующий материал.

В порошках носитель представляет собой тонко измельченное твердое вещество, которое находится в смеси с тонко измельченным активным компонентом.

В таблетках активный компонент в подходящих пропорциях смешан с носителем, обладающим необходимой связующей способностью, и спрессован в таблетки желаемых формы и размера.

Порошки и таблетки предпочтительно содержат от пяти или десяти до приблизительно семидесяти процентов активного соединения. Подходящими носителями являются карбонат магния, стеарат магния, тальк, сахар, лактоза, пектин, декстрин, крахмал, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натриевая, легкоплавкий воск, масло какао и т. п. Термин "препарат" обозначает состав, содержащий активное соединение с инкапсулирующим материалом в качестве носителя, обеспечивающим получение капсулы, в которой активный компонент, с или без носителей, окружен носителем, который таким образом является связанным с ним. Точно так же этот термин включает в себя облатки и лепешки. Таблетки, порошки, капсулы, драже, облатки и лепешки можно применять как твердые формы, пригодные для перорального введения.

Для получения суппозиториев сначала расплавляют легкоплавкий воск, такой как смесь глицеридов жирных кислот или масло какао, и в нем диспергируют до однородного состояния активный компонент, например перемешиванием. Расплавленную гомогенную смесь затем разливают в формы удобных размеров, оставляют для охлаждения и, соответственно, затвердевания.

Составы, подходящие для вагинального введения могут быть представлены в форме вагинальных суппозиториев, тампонов, кремов, гелей, паст, пенок и аэрозолей, содержащих в дополнение к активному ингредиенту такие носители, как подходящие носители, известные специалистам в данной области.

Препараты жидкой формы включают в себя растворы, суспензии и эмульсии, например воду или водно-пропиленгликолевые растворы. Например, жидкие препараты для парентерального введения могут быть составлены как растворы в водном растворе полиэтиленгликоля.

Таким образом, соединения по настоящему изобретению могут быть приготовлены в форме состава для парентерального введения (например, инъекцией, например болюс-инъекцией или непрерывной инфузией) и могут быть представлены в форме стандартной дозы в ампулах, предварительно заполненных шприцах, флаконах небольшого объема для инфузии или многодозовых флаконах с добавлением консерванта. Данные композиции могут быть представлены в таких формах, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных либо водных разбавителях, и могут содержать в своем составе суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Альтернативно, активный ингредиент может находиться в форме порошка, полученного выделением в асептических условиях стерильного твердого содержимого или лиофилизацией из раствора и предназначенного для приготовления составов с подходящим разбавителем, например стерильной не содержащей пироген водой, перед применением.

Водные растворы, пригодные для перорального применения, могут быть приготовлены путем растворения активного компонента в воде и добавления, при желании, подходящих подкрашивающих агентов, корригентов, стабилизаторов и загустителей.

Водные суспензии, пригодные для перорального применения, могут быть приготовлены диспергированием тонко измельченного активного ингредиента в воде с вязким материалом, таким как природные или синтетические смолистые вещества, смолы, метилцеллюлоза, натриевая карбоксиметилцеллюлоза или другие хорошо известные суспендирующие агенты.

Также данным изобретением предусматриваются препараты в твердой форме, которые предназначены для превращения непосредственно перед применением в препараты жидкой формы для перорального введения. Такие жидкие формы включают в себя растворы, суспензии и эмульсии. Эти препараты в добавление к активному компоненту могут содержать подкрашивающие агенты, корригенты, стабилизаторы, буферы, искусственные и природные подсластители, диспергирующие агенты, загустители, солюбилизирующие агенты и т.п.

Для местного воздействия на эпидермис соединения по изобретению могут входить в состав мазей, кремов или лосьонов, либо трансдермального пластыря. Мази и кремы могут, например, быть приготовлены на водной или масляной основе с добавлением подходящих загущающих и/или гелеобразующих агентов. Лосьоны могут быть приготовлены на водной или масляной основе и, как правило, должны также содержать один или более чем один эмульгатор, стабилизатор, диспергирующий агент, суспендирующий агент, загуститель или подкрашивающий агент.

Составы, пригодные для местного введения в полость рта, включают в себя собой лепешки, содержащие активный агент в корригентной основе, обычно в сахарозе и акации или трагаканте; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин, глицерин или сахароза и акация; полоскания для рта, содержащие активный ингредиент в подходящем жидком носителе.

Растворы или суспензии вводят непосредственно в носовую полость традиционными средствами, например капельницей, пипеткой или распылителем. Составы могут быть представлены в форме разовой и многократной дозы. В последнем случае при использовании капельницы или пипетки это достигается в результате введения пациенту целесообразного, заранее определенного объема раствора или суспенз