Имид/амидные простые эфиры, фармацевтическая композиция на их основе и способ снижения уровня фнока у млекопитающих

Имид/амидные простые эфиры, фармацевтическая композиция на их основе и способ снижения уровня фнока у млекопитающих

Реферат

 

Описываются имид/амидные простые эфиры формулы I, где R¹ означает замещенный или незамещенный линейный, разветвленный или циклический C₁ - C₁₂алк, незамещенный или замещенный фенил, R² - H, C₁ - C₈алк, R³ - этилен, винилен, разветвленный алкилен и др., R⁴ - -CX- или -CH₂-, X - O или S, n равно 0, 1, 2, 3, используемыми для снижения уровня ФНОКа у млекопитающих. Описываются также фармацевтическая композиция на основе этих соединений и способ снижения уровня ФНОКа у млекопитающих. Технический результат - расширение ассортимента соединений, позволяющих воздействовать на уровень ФНОКа у млекопитающих. 3 с. и 4 з.п. ф-лы, 1 табл.

(I)

Изобретение относится к способу снижения уроня ФНОКа (фактор некроза опухолевых клеток) у млекопитающих и к соединениям и композициям, применяемым по этому способу.

ФНОКа, или фактор некроза опухолевых клеток а, представляет собой цитокин, который высвобождается преимущественно моноядерными фагоцитами в ответ на действие различных иммуностимуляторов. При введении в организм животных или человека он вызывает воспаление, лихорадочное состояние, сердечно-сосудистые реакции, кровотечение, коагуляцию и острофазные реакции, сходные с теми, которые наблюдаются при острых инфекциях и шоковых состояниях.

Избыточное или нерегулируемое образование ФНОКа имеет место в случае множества заболеваний или болезненных состояний. Они включают эндотоксемию и/или синдром токсического шока {Tracey et al., Nature 330, 662-664 (1987) and Hinshaw et al., Circ. Shock 30, 279-292 (1990)}; кахексию {Dezube et al. Lancet, 335, (8690), 662 (1990)} и респираторный дистресс-синдром взрослых, при котором в аспирационном материале больных с РДСВ (респираторным дистресс-синдромом взрослых) была выявлена концентрация ФНОКа, превышающая 12000 пг/миллилитр {Millar, et al., Lancet 2(8665), 712-714 (1989)}. При системном вливании рекомбинантного ФНОКа также наблюдаются изменения, наблюдаемые обычно при РДСВ { Ferrai-Baliviera et al., Arch. Surg. 124(12), 1400-1405 (1989)}.

ФНОКа, по всей видимости, принимает участие в механизме различных заболеваний, связанных с резорбцией кости, включая артрит, в случае которого было обнаружено, что лейкоциты при активировании продуцируют активность, направленную на резорбцию костей, и при этом были получены данные, свидетельствующие о том, что и ФНОКа принимает участие в механизме такого активирования { Bertolini et al., Nature 319, 516-518 (1986) and Johnson et al. Endocrinology 124 (3), 1424-1427 (1989)}. Было показано, что ФНОКа стимулирует резорбцию костей и ингибирует костеобразование in vitro и in vivo через механизм стимуляции образования остеокласта и активации процесса ингибирования остеобластов. В дополнение к факту участия ФНОКа в механизме развития многих заболеваний разрежения костей, включая артрит, следует отметить наиболее важный пример, демонстрирующий связь этого фактора с заболеванием, который относится к зависимости продуцирования ФНОКа опухолями или тканями организма от гиперкальциемии, возникающей при злокачественных новообразованиях {Caici. Tissue Int. (US) 46 (Suppl. ), S3-10 (1990)}. При реакции "трансплантат против хозяина" повышенный уровень ФНОКа в сыворотке крови сопровождается серьезными осложнениями, развивающимися после острой фазы при проведении аллогенной трансплантации костного мозга { Holler et al., Blood, 75 (4), 1011-1016 (1990)}.

Церебральная малярия представляет собой летальный сверхострый неврологический синдром, сопровождаемый высоким уровнем ФНОКа в крови, и наиболее тяжелые осложнения наблюдаются у пациентов, больных малярией. Сывороточный уровень ФНОКа коррелирует напрямую с тяжестью заболевания и с прогнозом развития заболевания у пациентов с острыми приступами малярии {Grau et al., N. Engl. J. Med. 320 (24), 1586-1591 (1989)}.

ФНОКа играет определенную роль в патогенезе хронических воспалительных заболеваниях легких. Отложение частиц кремнезема ведет к развитию силикоза, заболевания, характеризующегося прогрессирующей дыхательной недостаточностью, вызванной фибротической реакцией. Антитела к ФНОКа полностью блокируют индуцируемый кремнеземом фиброз легких у мышей {Pignet et al., Nature, 344: 245-247 (1990)} . На моделях животных с фиброзом, вызванным отложением кремнезема и асбеста, был продемонстрирован высокий уровень образования ФНОКа (в сыворотке и в выделенных макрофагах) {Bissonnette et al., Inflammation 13 (3), 329-339 (1989)}. Было также обнаружено, что у пациентов с легочным саркоидозом в альвеолярные макрофаги спонтанно высвобождаются большие количества ФНОКа, в сравнении с макрофагами, полученными от здоровых доноров {Baughaman et al., J. Lab. Clin. Med. 115 (1), 36-42 (1990)}.

ФНОКа также принимает участие в воспалительной реакции, которая развивается при так называемом реперфузионном повреждении и возникает после реперфузии, представляя собой основную причину повреждения тканей при потере крови {Vedder et al., PNAS 87, 2643-2646 (1990)}. ФНОКа также изменяет свойства эндотелиальных клеток и обладает разнообразной прокоагулирующей активностью, такой как продуцирование повышенного количества тканевого фактора с прокоагулирующей активностью и супрессия метаболизма антикоагулирующего белка C, а также способен осуществлять отрицательную регуляцию экспрессии тромбомодулина {Sherry et al., J. Cell Biol. 107, 1269-1277 (1988)}. ФНОКа обладает противовоспалительной активностью, которая в связи с ранним ее появлением (в начальной стадии воспаления) определяет его функционирование как медиатора повреждения клеток в ряде серьезных заболеваний, включая, но не ограничиваясь, такие как инфаркт миокарда, инсульт и сосудистый шок. Определенную важность может представлять ФНОКа-индуцированная экспрессия молекул адгезии, таких как внутриклеточная молекула адгезии (ICAM) или молекула адгезии эндотелиальных лейкоцитов (ELAM) на эндотелиальных клетках {Munro et al., Am. J. Path. 135 (1), 121-132 (1989)}.

Кроме того, в настоящее время показано, что ФНОКа представляет собой мощный активатор репликации ретровирусов, включая активацию ВИЧ-1 {DUH et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 86, 5974-5978 (1989); Poll et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 87, 782-785 (1990); Monto et al., Blood 79, 2670 (1990); Clouse et al., J. Immunol. 142, 431-438 (1989); Poll et al., AIDS Res. Hum. Retrovirus, 191-197 (1992)} . СПИД возникает в результате инфекции T-лимфоцитов вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). Были идентифицированы по меньшей мере три типа, или штамма ВИЧ, а именно ВИЧ-1, ВИЧ-2 и ВИЧ-3. Вследствие ВИЧ-инфекции нарушается T-клеточный иммунитет и инфицируемый организм подвергается тяжелым условно патогенным инфекциям и/или инфекциям необычными неоплазмами. Для вторжения ВИЧ в T-лимфоцит требуется активация T-лимфоцита. Другие вирусы, такие как ВИЧ-1 и ВИЧ-2, инфицируют T-лимфоциты после активации T-клеток, при этом экспрессия и/или репликация таких вирусных белков опосредуется или поддерживается T-клеточной активацией. Как только активированный T-лимфоцит инфицируется ВИЧ, для осуществления экспрессии ВИЧ-гена и/или репликации ВИЧ T-лимфоцит должен постоянно поддерживаться в активированном состоянии. Цитокины, в частности ФНОКа, выполняют свою роль в экспрессии ВИЧ белка и/или репликации вируса, опосредованных активированными T-клетками, участвуя в поддержании T-лимфоцитов в активированном состоянии. Поэтому, препятствуя проявлению цитокиновой активности, такие как предотвращение или ингибирование продукции цитокина, в частности ФНОКа, у ВИЧ- инфицированных индивидуумов, помогает снизить уровень активирования T-лимфоцитов, вызванного ВИЧ-инфекцией.

В поддержании ВИЧ-инфекции принимают участие моноциты, макрофаги и родственные им клетки, такие как клетки Купфера и глиальные клетки. Такие клетки, как, например, T-клетки, являются клетками-мишенями, в которых происходит репликация вирусов, и уровень такой вирусной репликации зависит от уровня активирования этих клеток {Rozenberg et al., The Immunopathogenesis of HIV Infection, Advances in Immunology, 57, (1989)}. Было показано, что цитокины, такие как ФНОКа, активируют репликацию ВИЧ в моноцитах и/или макрофагах {Poli et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 87, 782-784 (1990)}, поэтому предотвращение или ингибирование продуцирования цитокинов или их активности помогает ограничить прогрессирование ВИЧ, аналогично тому, что было отмечено в отношении T-клеток. В дополнительных исследованиях было показано, что ФНОКа представляет собой обычно вовлекаемый в активацию ВИЧ in vitro фактор, при этом была предложена схема механизма его действия через регуляторные ядерные белки, обнаруженные в цитоплазме клеток (Osborn, et al., PNAS 86, 2336-2340). Имеются доказательства того, что снижение синтеза ФНОКа может оказывать антивирусное воздействие на ВИЧ-инфекцию за счет снижения транскрипции и, таким образом, продуцирования вируса.

Репликация при СПИДе латентных ВИЧ в T-клеточных и макрофаговых линиях может быть индуцирована ФНОКа {Folks et al., PNAS 86, 2365-2368 (1989)}. Был предложен молекулярный механизм осуществления вирус-индуцирующей активности, определяемый способностью ФНОКа активировать ген регуляторного белка (NFkB), обнаруженный в цитоплазме клеток, который усиливает ВИЧ-репликацию за счет связывания с регуляторной генной последовательностью вируса (LTR) {Osborn et al. , PNAS 86, 2336-2340 (1989)}. Наличие ФНОКа у больных СПИДом и раковой кахексией подтверждает повышенный уровень ФНОКа в сыворотке крови таких пациентов и высокий уровень спонтанного продуцирования ФНОКа в периферических моноцитах крови {Wright et al., J. Immunol. 141 (1), 99-104 (1988)}. { Eur J. Gastroen Hepat, 6(9), 821-829 (1994)}. {J. Exp. Med., 1121-1227 (1988)}.

ФНОКа по различным указанным выше причинам выполняет разнообразные функции и при других вирусных инфекциях, таких как инфекция вирусом цитомегалии (CMV), вирусом гриппа, аденовирусом и вирусами из семейства вирусов герпеса.

В связи с вышесказанным можно ожидать, что предотвращение или ингибирование продуцирования или активности ФНОКа может представлять собой эффективный способ лечения многих воспалительных, инфекционных, иммунологических заболеваний или злокачественных новообразований. Такие заболевания включают, не ограничиваясь ими, септический шок, сепсис, эндотоксический шок, гемодинамический шок и септический синдром, пост-ишемическое реперфузионное повреждение, малярию, микобактериальную инфекцию, менингит, псориаз, застойную сердечную недостаточность, фибротическое заболевание, кахексию, отторжение трансплантата, рак, аутоиммунное заболевание, условно патогенные инфекции при СПИДе, ревматоидный артрит, ревматоидный спондилит, остеоартрит, другие артритные состояния, болезнь Крона, язвенный колит, множественный склероз, системную красную волчанку, узловатую эритему при лепре, радиационное поражение и гипероксическое альвеолярное повреждение. Усилия, направленные на подавление действия ФНОКа, могут варьировать от использования стероидов, таких как дексаметазон и преднизолон, до использования поликлональных и моноклональных антител { Beutler et al. , Science 234, 470-474 (1985); WO 92/11383} . (Clinical and Experimental Rheumatology 1993, 11 (Suppl. 8), 5173-5175). (PNAS 1992, 89, 9784-88). (Annals of Rheumatic Diseases 1990, 49, 480-486).

Ядерный фактор kB (NFkB) представляет собой плейотропный активатор транскрипции (Lenardo, et al., Cell 1989, 58, 227-29). NFkB функционирует как активатор транскрипции в патогенезе множества заболеваний и воспалительных состояний и, по всей видимости, как регулятор уровня цитокинов, включая, но не ограничиваясь, ФНОКа, а также может принимать участие в этих процессах как активатор ВИЧ-транскрипции (Dbaibo, et al., J. Biol. Chem. 1993, 17762-66; Duh et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 1989, 86, 5974-78; Bachelerie et al. , Nature 1991, 350, 709-12; Boswas et al., J. Acquired Immune Deficiency Syndrome 1993, 6, 778-786; Suzuki et al., Biochem. And Biophys. Res. Comm. 1993, 193, 277-83; Suzuki et al., Biochem. And Biophys. Res. Comm. 1992, 189, 1709-15; Suzuki et al., Biochem. Mol. Bio. Int. 1993, 31(4), 693- 700; Shakhov et al., 1970, 171, 35-47; and Staal et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990, 87, 9943-47). Таким образом, ингибирование связывания NFkB может регулировать транскрипцию гена(ов) цитокина и посредством такой модуляции и других механизмов приводить к подавлению многих болезненных состояний. Заявленные в настоящем патенте соединения могут ингибировать активность NFkB в ядре и, таким образом, могут быть полезными при лечении множества заболеваний, включающих, но не ограничивающихся ими, ревматоидный артрит, ревматоидный спондилит, остеоартрит, другие артритные состояния, септический шок, сепсис, эндотоксический шок, болезнь "трансплантат против хозяина", истощение, болезнь Крона, язвенный колит, множественный склероз, системную красную волчанку, узловатую эритему при лепре, ВИЧ- инфекции, СПИД и условно патогенные инфекции при СПИДе.

Уровни ФНОКа и NFkB регулируются по принципу обратной связи. Как отмечалось выше, соединения по настоящему изобретению воздействуют на уровень и ФНОКа, и NFkB. В настоящее время неизвестно, однако, как соединения по настоящему изобретению регулируют уровень ФНОКа, NFkB или обоих из них.

Настоящее изобретение основывается на открытии того факта, что класс не-полипептидных имидов/амидов, наиболее полно описанных в данной заявке, ингибирует действие ФНОКа.

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) где R¹ обозначает (i) линейный, разветвленный или циклический, замещенный или незамещенный, алкил, содержащий от 1 до 12 атомов углерода, (ii) фенил, или фенил, замещенный одним или несколькими заместителями, каждый из которых, независимо, выбран из нитро, циано, трифторметила, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетила, карбамоила, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, замещенной аминогруппы, алкила, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, алкокси, содержащего от 1 до 10 атомов углерода, или галогена; R² обозначает -H, алкил, содержащий от 1 до 8 атомов углерода; R³ представляет собой i) этилен; ii) винилен; iii) разветвленный алкилен, содержащий от 3 до 10 атомов углерода; iv) разветвленный алкенилен, содержащий от 3 до 10 атомов углерода; v) циклоалкилен, содержащий от 4 до 9 атомов углерода, незамещенный или замещенный одним или несколькими заместителями, каждый из которых, независимо, выбран из нитро, циано, трифторметила, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетила, карбамоила, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, замещенной аминоалкильной группы, содержащей от 1 до 4 атомов углерода, алкокси, содержащего от 1 до 4 атомов углерода, или галогена; vi) циклоалкенилен, содержащий от 4 до 9 атомов углерода, незамещенный или замещенный одним или несколькими заместителями, каждый из которых, независимо, выбран из нитро, циано, трифторметила, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетила, карбамоила, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, замещенного аминоалкила, содержащего от 1 до 4 атомов углерода, алкокси, содержащего от 1 до 4 атомов углерода, или галогена; или vii) о-фенилен, незамещенный или замещенный одним или несколькими заместителями, каждый из которых, независимо, выбран из нитро, циано, трифторметила, карбэтокси, карбометокси, карбопропокси, ацетила, карбамоила, ацетокси, карбокси, гидрокси, амино, замещенного аминоалкила, содержащего от 1 до 4 атомов углерода, алкокси, содержащего от 1 до 4 атомов углерода, или галогена; R⁴ обозначает -CX- или -CH₂-; X обозначает O или S; и n принимает значения 0, 1, 2 или 3.

Первый предпочтительный подкласс соединений формулы I относится к соединениям, в которых R³ представляет собой замещенный o-фенилен, R¹ обозначает 3,4-диэтоксифенил; R⁴ обозначает -CO-.

Типичные соединения по настоящему изобретению включают: 3-фталимидо-3-(3',4'-диметоксифенил)пропан-1-ол; 2-фталимидо-2-(3',4'-диметоксифенил)этанол; 3-фталимидо-3-(3',4'-диэтоксифенил)пропан-1-ол; 3-фталимидо-3-(3',4-диметоксифенил)-1-метоксипропан; 2-фталимидо-2-(3',4'-диметоксифенил)-1-метоксиэтан; 3-фталимидо-3-(3',4'-диэтоксифенил)-1-метоксипропан; 3-фталимидо-3-(3',4'-диметоксифенил)-1-этоксипропан; 3-фталимидо-3-(3',4'-диметоксифенил)-1-(3-пиридилметокси)пропан; 3-фталимидо-3-(3',4'-диэтоксифенил)-1-(3-пиридилметоксил)пропан; 3-фталимидо-3-нафтилпропан-1-ол; 3-фталимидо-3-(3',4'-диэтилфенил)пропан-1-ол; 3-фталимидо-3-(3',4'-дипропилфенил)пропан-1-ол; 3-фталимидо-3-(3',4'-диэтилфенил)-1-метоксипропан; 3-фталимидо-3-(3',4'-диэтоксифенил)-1-этоксипропан; 3-фталимидо-3-циклогексил-1-метоксипропан; 3-фталимидо-3-(3',4'-диэтилциклогексил)-1-метоксипропан; 3-(1'-оксоизоиндолинил)-3-(3',4'-диметоксифенил)пропан-1-ол; 2-(1'-оксоизоиндолинил)-2-(3',4'-диметоксифенил)этанол; 3-(1'-оксоизоиндолинил)-3-(3',4'-диэтоксифенил)пропан-1-ол; 3-(1'-оксоизоиндолинил)-3-(3',4'-диметоксифенил)-1-метоксипропан; 2-(1'-оксоизоиндолинил)-2-(3',4'-диметоксифенил)-1-метоксиэтан; 3-(1'-оксоизоиндолинил)-3-(3',4'-диэтоксифенил)-1-метоксипропан; 3-(1'-оксоизоиндолинил)-3-(3',4'-диметоксифенил)-этоксипропан; 3-(1'-оксоизоиндолинил)-3-(3', 4'-диметоксифенил)-1-(3-пиридилметокси) пропан; 3-(1'-оксоизоиндолинил)-3-(3', 4'-диэтоксифенил)-1-(3-пиридилметокси)пропан; 3-(1'-оксоизоиндолинил)-3-нафтилпропан-1-ол; 3-(1'-оксоизоиндолинил)-3-(3',4'-диэтилфенил)пропан-1-ол; 3-(1'-оксоизоиндолинил)-3-(3',4'-дипропилфенил)пропан-1-ол; 3-(1'-оксоизоиндолинил)-3-(3',4'-диэтилфенил)-1-метоксипропан; 3-(1'-оксоизоиндолинил)-3-(3',4'-диэтоксифенил)-1-этоксипропан.

Используемый в описании настоящего изобретения термин алкил обозначает моновалентную насыщенную разветвленную или линейную углеводородную цепь. Если особо не оговорено иное, такие цепи могут содержать от 1 до 18 атомов углерода. Представителями таких алкильных групп являются метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, неопентил, трет-пентил, гексил, изогексил, гептил, октил, нонил, децил, ундецил, додецил, тридецил, тетрадецил, пентадецил, гексадецил, гептадецил, октадецил и др. В том случае, когда алкильная группа квалифицируется как "низшая", она содержит от 1 до 6 атомов углерода. То же самое количество атомов углерода относится к родительскому термину "алкан" и к производным терминам, таким как "алкокси".

Соединения могут использоваться под наблюдением квалифицированных специалистов для подавления нежелательных явлений, вызванных ФНОКа. Соединения могут вводиться в организм млекопитающего, при необходимости лечения, перорально, ректально или парентерально, сами по себе или в сочетании с другими терапевтическими средствами, включая антибиотики, стероиды и др. Пероральные дозированные формы включают таблетки, капсулы, драже и другие подобные им прессованные фармацевтические формы. Изотонические солевые растворы, содержащие 20-100 миллиграмм/миллилитр, могут использоваться для парентерального введения, включая внутримышечный, внутриоболочечный, внутривенный и внутриартериальный способы введения. Ректальное введение может быть осуществлено с помощью суппозиториев, приготовленных с использованием традиционных носителей, таких, как масло какао.

Режим дозирования должен быть подобран в соответствии с показаниями для лечения, с учетом возраста, массы и общего физического состояния пациента, а также желательной реакции, и обычно составляет от около 1 до около 500 миллиграмм/день, по потребности, в виде разовых или многократных ежедневных введений. В целом на начальном этапе лечения может практиковаться тот режим, для которого была показана эффективность соединений настоящего изобретения по сдерживанию проявления активности ФНОКа в случае других опосредованных ФНОКа болезненных состояний. При лечении у пациентов следует регулярно отслеживать уровень T-клеток и соотношение Т4/Т8 и/или измерять показатели вирусемии, такие как уровень обратной транс-криптазы или уровень вирусных белков, и/или проводить мониторинг осложнений, связанных с прогрессированием цитокин-опосредованных заболеваний, таких как кахексия или мышечная дегенерация. Если при использовании обычного режима лечения не достигается нужный эффект, количество средства, мешающего проявлению цитокиновой активности, увеличивают, например, на 50% в неделю.

Соединения по настоящему изобретению можно использовать также наружно при лечении или профилактике местных заболеваний, опосредованных или обостренных в результате избыточного продуцирования ФНОКа, соответственно, таких как вирусные инфекции, например, инфекции, вызванные вирусами герпеса, или вирусный конъюнктивит и др.

Соединения по настоящему изобретению могут также найти применение в ветеринарии при лечении млекопитающих, отличных от человека, когда возникает необходимость предупреждения или подавления продуцирования ФНОКа. ФНОКа-опосредованные заболевания, в случае которых показано терапевтическое или профилактическое применение указанных соединений у животных, включают отмеченные выше болезненные состояния, но в особенности это вирусные инфекции. Примерами таких инфекций являются вирус кошачьего иммунодефицита, вирус лошадиной инфекционной анемии, вирус козлиного артрита, вишна вирус и меди вирус, а также другие лентивирусы.

Некоторые из указанных соединений имеют центры хиральности и могут существовать в виде оптических изомеров. В объем настоящего изобретения входят как рацематы этих изомеров, так и индивидуальные изомеры, а также диастереомеры, которые имеют два хиральных центра. Рацематы могут использоваться сами по себе или могут быть разделены на индивидуальные изомеры механически или хроматографически с применением хирального абсорбента. Альтернативно, индивидуальные изомеры можно получить в хиральной форме или разделить химически из смеси за счет образования солей с хиральной кислотой, такой как индивидуальные энантиомеры 10-камфорсульфоновой кислоты, камфорной кислоты, альфа-бромкамфорной кислоты, метоксиуксусной кислоты, винной кислоты, диацетилвинной кислоты, яблочной кислоты, пирролидон-5-карбоновой кислоты и других, и затем выделения в свободном виде одного или обоих разрешенных оснований, не обязательно при повторении процесса, так чтобы получить либо один, либо оба из них, по существу свободных от примесей каждого другого из двух изомеров, т.е. в форме, имеющей оптическую чистоту > 95%.

Действенность профилактики или подавления образования ФНОКа указанными соединениями можно успешно оценить при проведении анализа с использованием антител к ФНОКа. Например, пластинки (Nunc Immunoplates, Roskilde, DK) обрабатывают 5 мкл/миллилитр очищенных антител из кролика к ФНОКа при 4^oC в течение времени от 12 до 14 часов. После этого пластинки блокируют в течение 2 часов при 25^oC добавлением ФБР/0,05% Твина, содержащего 5 миллиграмм/миллилитр БСА. После промывания пластинок вносят по 100 мкл исследуемых образцов и контролей и пластинки инкубируют при 4^oC в течение времени от 12 до 14 часов. Затем пластинки промывают и анализируют на наличие конъюгата пероксидазы (из хрена) и моноклональных мышиных антител к ФНОКа, измеряя при 492 нм развившееся при взаимодействии их с о-фенилендиамином в фосфат-цитратном буфере, содержащем 0,012% перекиси водорода, окрашивание. Данные представлены в табл. 1.

Описываемые соединения можно получить с помощью известных методов, применяемых для получения имидов. Общая реакционная схема включает взаимодействие замещенного амина с ангидридом фталевой кислоты, N-карбэтоксифталимидом или с фталевым дикарбоксальдегидом в соответствии с приведенными ниже формулами: A) B) C) Приведенные ниже примеры служат для описания настоящего изобретения и не должны трактоваться как ограничительные в отношении объема настоящего изобретения, который определяется только формулой изобретения.

ПРИМЕР 1 1-Фталимидо-1-(3',4'-диметоксифенил)пропан-1-ол а) 3-Амино-3-(3', 4'-диметоксифенил)-пропан-1-ол. К боргидриду натрия (6,51 г, 17,2 ммоль) медленно добавляют при перемешивании раствор 3-амино-3-(3',4'-диметоксифенил)-пропионата (4,12 г, 17,2 ммоль) в метаноле (50 миллилитров). После прекращения возникшего вначале вспенивания смесь нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 1 часа. Ход реакции отслеживают с помощью ТСХ (20% этилацетат/гексан, УФ) и завершают реакцию через 1 час. Реакционной смеси дают охладиться и добавляют 20 миллилитров воды. Метанол удаляют в вакууме, что приводит к образованию смолы, экстрагируемой метиленхлоридом (3 х 20 миллилитров). Объединенные экстракты высушивают над сульфатом магния и концентрируют с получением масла, которое охлаждают. Образуемое восковидное твердое вещество высушивают в вакууме (60^oC, < 1 мм) с получением 3,30 г (86%) белого твердого продукта.

¹H ЯМР (CDCl₃) 6,91-6,78 (м, 3H), 4,15-4,04 (м, 1H), 3,89 (с, 3H), 3,88 (с, 3H), 3,84-3,71 (с, 2H), 3,91-2,45 (ушир. м, 1H), 1,95-1,78 (м, 2H).

b) 1-Фталимидо-1-(3',4'-диметоксифенил)пропанол. Расплавляют вместе смесь 3-амино-3-(3',4'-диметоксифенил)-пропан-1-ола (1,11 г, 5 ммоль) и ангидрида фталевой кислоты (0,74 г, 5 ммоль) и затем перемешивают полученную смесь в течение 5 минут. После охлаждения образуется зеленое/желтое стеклообразное полутвердое вещество, которое перемешивают в эфире с получением 1,62 г (95%) белого твердого сырого продукта. Сырой продукт очищают флэш-хроматографией (силикагель, 40% этилацетат/метиленхлорид) с получением 1,25 г (73%) белого твердого продукта.

¹H ЯМР (CDCl₃) 7,85-7,63 (м, 4H), 7,18-7,07 (м, 2H), 6,86-6,76 (м, 1H), 5,62-5,49 (м, 1H), 3,88 (с, 3H), 3,85 (с, 3H), 3,79-3,63 (м, 2H), 2,89-2,71 (м, 1H), 2,64-2,47 (м, 1H), 1,87-1,73 (ушир. м, 1H); ¹³C ЯМР (CDCl₃) 168,5, 148,8, 148,6, 133,9, 131,8, 131,7, 123,2, 120,7, 111,6, 110,8, 59,8, 55,0, 55,8, 51,4, 33,9.

Аналитические данные по C₁₉H₁₉NO₅: Вычислено: C 66,85; H 5,61; N 4,10.

Найдено: C 66,70; H 5,60; N 4,06. Данные ВЭЖХ: 100%.

ПРИМЕР 2 Таблетки, каждая содержащая по 50 миллиграмм активного ингредиента, могут быть получены следующим образом: Компоненты (из расчета на 1000 таблеток) активный ингредиент - 50,0 г лактоза - 50,7 г пшеничный крахмал - 7,5 г полиэтиленгликоль 6000 - 5,0 г тальк - 5,0 г стеарат магния - 1,8 деминерализованная вода - q.s Твердые вещества вначале продавливают через сито с размером меш 0,6 мм. Затем смешивают активный ингредиент, лактозу, тальк, стеарат магния и половину крахмала. Другую половину крахмала суспендируют в 40 мл воды и добавляют полученную суспензию к кипящему раствору полиэтиленгликоля в 100 мл воды. Полученную пасту добавляют к измельченным веществам и гранулируют смесь, если необходимо, при добавлении воды. Гранулят высушивают в течение ночи при 35^oC, продавливают через сито с размером меш 1,2 мм и прессуют в таблетки диаметром около 6 мм, имеющие на обеих сторонах вогнутость.

ПРИМЕР 3 Таблетки, каждая содержащая по 100 миллиграмм активного ингредиента, могут быть получены следующим образом: Компоненты (из расчета на 1000 таблеток) активный ингредиент - 100,0 г лактоза - 100,0 г пшеничный крахмал - 47,0 г стеарат магния - 3,0 г Твердые вещества вначале продавливают через сито с размером меш 0,6 мм. Затем смешивают активный ингредиент, лактозу, стеарат магния и половину крахмала. Другую половину крахмала суспендируют в 40 мл воды и добавляют полученную суспензию к 100 мл кипящей воды. Полученную пасту добавляют к измельченным веществам и гранулируют смесь, если необходимо, при добавлении воды. Гранулят высушивают в течение ночи при 35^oC, продавливают через сито с размером меш 1,2 мм и прессуют в таблетки диаметром около 6 мм, имеющие на обеих сторонах вогнутость.

ПРИМЕР 4 Жевательные таблетки, каждая содержащая по 75 миллиграмм активного ингредиента, могут быть получены следующим образом: Композиция (из расчета на 1000 таблеток) активный ингредиент - 75,0 г маннит - 230,0 г лактоза - 150,0 г тальк - 21,0 г глицин - 12,5 г стеариновая кислота - 10,0 г сахарин - 1,5 г 5% раствор желатина - q.s Все твердые вещества вначале продавливают через сито с размером меш 0,25 мм. Смешивают маннит и лактозу, гранулируют при добавлении желатинового раствора, продавливают через сито с размером меш 2 мм, высушивают при 50^oC и снова продавливают через сито с размером меш 1,7 мм. Активный ингредиент, глицин и сахарин тщательно перемешивают, добавляют ко всей массе гранулят маннита и лактозы, стеариновую кислоту и тальк, все хорошо перемешивают и прессуют полученную массу в таблетки диаметром около 10 мм, имеющие на обеих сторонах вогнутость и разделяющую бороздку на верхней стороне.

ПРИМЕР 5 Таблетки, каждая содержащая по 10 миллиграмм активного ингредиента, могут быть получены следующим образом: Композиция (из расчета на 1000 таблеток) активный ингредиент - 10,0 г лактоза - 328,5 г кукурузный крахмал - 17,5 г полиэтиленгликоль 6000 - 5,0 г тальк - 25,0 г стеарат магния - 4,0 г деминерализованная вода - q.s Твердые вещества вначале продавливают через сито с размером меш 0,6 мм. Затем хорошо перемешивают активный ингредиент, лактозу, тальк, стеарат магния и половину крахмала. Другую половину крахмала суспендируют в 65 мл воды и добавляют полученную суспензию к кипящему раствору полиэтиленгликоля в 260 мл воды. Полученную пасту добавляют к измельченным веществам и гранулируют всю смесь, если необходимо, при добавлении воды. Гранулят высушивают в течение ночи при 35^oC, продавливают через сито с размером меш 1,2 мм и прессуют в таблетки диаметром около 10 мм, имеющие на обоих сторонах вогнутость и разделяющую насечку на верхней стороне.

ПРИМЕР 6 Желатиновые капсулы с сухим содержимым, каждая содержащая по 100 миллиграмм активного ингредиента, могут быть получены следующим образом: Композиция (из расчета на 1000 таблеток) активный ингредиент - 100,0 г микрокристаллическая целлюлоза - 30,0 г лаурилсульфат натрия - 2,0 г стеарат магния - 8,0 г Лаурилсульфат натрия пропускают через сито с размером меш 0,2 мм в активный ингредиент, хорошо перемешивают оба компонента в течение 10 минут. Затем через сито с размером меш 0,9 мм вносят микрокристаллическую целлюлозу и снова все тщательно перемешивают в течение 10 минут. Наконец, добавляют стеарат магния, пропуская его через сито с размером меш 0,8 мм и, после перемешивания в течение 3 минут, смесь вводят отдельными порциями по 140 миллиграмм каждая в желатиновые капсулы для сухих веществ размера 0 (удлиненные).

ПРИМЕР 7 0,2% раствор для инъекций или вливаний может быть приготовлен, например, следующим образом: активный ингредиент - 5,0 г хлорид натрия - 22,5 г фосфатный буфер, pH 7,4 - 300,0 г деминерализованная вода - до 2500,0 мл Активный ингредиент растворяют в 1000 миллилитрах воды и фильтруют через микрофильтр. Затем добавляют буферный раствор и объем всей смеси доводят до 2500 миллилитров водой.

Для приготовления единичных дозированных форм порции объемом от 1,0 до 2,5 мл вводят в стеклянные ампулы (каждая содержит соответственно 2,0 или 5,0 миллиграмм активного ингредиента).

ПРИМЕР 8 3-Амино-3-(3',4'-диметоксифенил)пропионовая кислота Перемешиваемую суспензию 3,4-диметоксибензальдегида (151 г, 788 ммоль) и ацетата аммония (121,5 г, 1576 ммоль) в этаноле (95%, 400 мл) нагревают до 45-50^oC, получая оранжевый раствор. К этому раствору добавляют малоновую кислоту (82,0 г, 788 ммоль) и раствор нагревают при температуре кипения с обратным холодильником всю ночь. Белое твердое вещество осаждается при нагревании, мутный раствор охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Твердое вещество промывают этанолом, сушат на воздухе, затем в вакууме (60^oC, < 1 мм) и получают 3-амино-3-(3',4'-диметоксифенил)пропионовую кислоту в виде белого твердого вещества (100,14 г, выход 56%), никакой дальнейшей очистки не проводят: т. пл. 208,0-210,0^oC; ¹H ЯМР (D₂O/NaOD/TSP) 7,08-6,91 (м, 3H), 4,22 (т, J=7 Гц, 1H), 3,87 (с, 3H), 3,83 (с, 3H), 2,55 (дд, J=2,7 Гц, 2H); ¹³C ЯМР (D₂O/NaOD/TSP) 182,9, 150,8, 149,8, 140,7, 121,6, 114,6, 112,8, 58,6, 55,4. 49,8.

ПРИМЕР 9 3-Амино-3-(3',4'-диметоксифенил)метилпропионат К перемешиваемой суспензии 3-амино-3-(3', 4'-диметоксифенил)пропионовой кислоты (70,1 г, 312 ммоль) в метаноле (400 мл) при 0^oC добавляют по каплям ацетилхлорид (47,6 мл, 667 ммоль). Через дополнительных 15 минут ледяную баню удаляют. Полученный чистый раствор перемешивают при комнатной температуре 2 часа. Систему открывают и растворитель выдувают N₂ в течение ночи. К твердому остатку добавляют метанол (50 мл) и эфир (300 мл). Полученную суспензию перемешивают при комнатной температуре 1 час. Суспензию фильтруют и твердый остаток промывают эфиром (100 мл). Твердый остаток растворяют в смеси карбоната натрия (200 мл, нас.) воды и метиленхлорида (250 мл). Органический слой отделяют. Водный слой экстрагируют метиленхлоридом (3х250 мл). Объединенные органические слои сушат над сульфатом магния. Удаление растворителя дает 3-амино-3-(3', 4'-диметоксифенил)метилпропионат в виде масла (60,2 г, выход 81%); ¹H ЯМР (CDCl₃) 1,77 (с, 2H, NH₂), 2,65 (д, J=7 Гц, 2H, CH₂), 3,68 (с, 3H, CH₃), 3,87 (с, 3H, CH₃), 3,89 (с, 3H, CH₃), 4,39 (т, J= 7 Гц, 1H, CH), 6,81-6,93 (м, 3H, Ar); ¹³C ЯМР (CDCl₃) 44,00, 51,48, 52,18, 55,72, 55,76, 109,20, 111,02, 118,02, 137,21, 148,11, 148,93, 172,34. Анализ: Вычислено для C₁₂H₁₇NO₄ 0,1 H₂O: C 59,19 H 7,19 N 5,81; Найдено: C 59,38 H 7,09 N 5,91.

ПРИМЕР 10 3-Амино-3-(3',4'-диметоксифенил)-1-пропанол К перемешиваемому твердому боргидриду натрия (94,18 г, 2,49 моль) при 0^oC добавляют метанол (50 мл). К этой смеси при 0^oC добавляют 3-амино-3-(3', 4'-диметоксифенил)метилпропионат (59,5 г, 249 ммоль) в метаноле (950 мл) свыше 1 часа. Смесь перемешивают в той же водно-ледяной бане, пока температура реакционной смеси не станет 35^oC или ниже в течение 30 минут. (Пояснение: если водно-ледяную баню убрать слишком рано, может произойти высоко экзотермическая реакция). Водяную баню затем удаляют и раствор нагревают при температуре кипения с обратным холодильником 16 часов. Раствору дают охладиться до комнатной температуры. К раствору добавляют воду (300 мл), затем метиленхлорид (250 мл) при 0^oC. Полученную суспензию фильтруют. Половину фильтрата удаляют в вакууме. Полученный раствор растворяют в метиленхлориде (500 мл) и воде (300 мл). Органический слой отделяют. Водный слой экстрагируют метиленхлоридом (3х500 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором (100 мл) и затем сушат над сульфатом магния. Удаление растворителя дает масло. Это масло сушат в вакууме, получая 3-амино-3-(3', 4'-диметоксифенил)-1-пропанол в виде белого твердого вещества (42,15 г, выход 80%); т.пл. 63,5-65,5^oC; ¹H ЯМР (CDCl₃) 6,91-6,78 (м, 3H), 4,15-4,04 (м, 1H), 3,88 (с, 3H), 3,89 (с, 3H), 3,84-3,71 (с, 2H), 2,91-2,45 (м, 1H), 1,95-1,78 (м, 2H); Вычислено для C₁₁H₁₇NO₃: C 62,54 H 8,11 N 6,63; Найдено: C 62,01 H 7,80 N 6,49.

ПРИМЕР 11 3-Амино-3-(3'-этокси-4'-метоксифенил)пропионовая кислота Перемешиваемую суспензию 3-этокси-4-метоксибензальдегида (119,5 г, 664 ммоль) и ацетата аммония (148,3 г, 1,92 моль) в этаноле (95%, 300 мл) нагревают при 45^oC. К этой смеси добавляют малоновую кислоту (69 г, 664 ммоль) и затем этанол (100 мл, 95%). Смесь нагревают при температуре кипения с обратным холодильником 18 часов. Смесь охлаждают до комнатной температуры и перемешивают в течение 2 часов. Суспензию фильтруют и твердое вещество промывают холодным этанолом (5х50 мл), получая 3-амино-3-(3'-этокси-4'-метоксифенил)пропионовую кислоту в виде белого твердого вещества, которое сушат в вакууме всю ночь (94,75 г, выход 60%): т. пл. 224,0-225,5^oC; ¹H ЯМР (D₂O/NaOD) 1,41 (т, J=7 Гц, 3H, CH₃), 2,52-2,56 (м, 2H, CH₂), 3,83 (с, 3H, CH₃), 4,14 (к, J=7 Гц, 2H, CH₂), 4,19 (т, J=7 Гц, 1H, NCH), 6,98-7,04 (м, 3H, Ar); ¹³C ЯМР (D₂O/NaOD) 16,75, 49,81, 55,45, 58,46, 67,63, 114,17, 114,71, 121,76, 140,69, 149,91, 150,09, 182,97. Анализ: Вычислено для C₁₂H₁₇NO₄: C 60,24 H 7,16 N 5,85; Найдено: C 60,21 H 7, N 5,88.

ПРИМЕР 12 3-Амино-3-(3'-этокси-4'-диметоксифенил)метилпропионат К перемешиваемой суспензии 3-амино-3-(3'-этокси-4'-диметоксифенил)пропионовой кислоты (89,47 г, 374,4 ммоль) в метаноле (500 мл) при 0^oC добавляют по каплям ацетилхлорид (54 мл, 757 ммоль). Через 15 минут водно-ледяную баню удаляют. Полученный чистый раствор перемешивают при комнатной температуре 2 часа. Систему открывают и растворитель выдувают N₂ в течение ночи. К твердому остатку добавляют метанол (50 мл) и эфир (300 мл). Полученную суспензию перемешивают при комнатной температуре 1 час. Суспензию фильтруют и твердый остаток промывают эфиром (100 мл). Твердый остаток растворяют в смеси насыщенного раствора карбоната натрия (200 мл), воды (200 мл) и метиленхлорида (250 мл). Органический слой отделяют. Водный слой экстрагируют метиленхлоридом (3х250 мл). Объединенные органические слои сушат над сульфатом магния. Удаление растворителя дает 3-амино-3-(3'-этокси-4-метоксифенил)метилпропионат в виде масла (80,84 г, выход 85%); ¹H ЯМР (CDCl₃) 1,46 (т, J= 7 Гц, 3H, CH₃), 1,75 (с, 2H, NH₂), 2,64 (д, J=7 Гц, 2H, CH₃), 3,68 (с, 3H, CH₃), 3,86 (с, 3H, CH₃), 4,10 (к, J=7 Гц, 2H, CH₂), 5,36 (т, J= 7 Гц, 1H, NCH), 6,80-6,91 (м, 3H, Ar); ¹³C ЯМР (CDCl₃) 14,74, 44,09, 51,55, 52,23, 55,91, 64,23, 110,77, 111,39, 118,07, 137,21, 148,31, 148,49, 172,44.

ПРИМЕР 13 3-Амино-3-(3'-этокси-4'-метоксифенил)-1-пропанол К перемешиваемому твердому боргидриду натрия (121 г, 3,19 моль) при 0^oC добавляют метанол (50 мл). К этой смеси при 0^oC добавляют раствор 3-амино-3-