Циклопептидные производные

Циклопептидные производные

Реферат

 

Описываются новые соединения формулы I R¹-Q¹-Х-Q²-R² I, где Q¹, Q² в каждом случае независимо один от другого либо отсутствует, либо представляют собой -NН-(СН₂)_n-СО, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10; R¹, R² в каждом случае независимо друг от друга либо отсутствуют, либо представляют собой цикло-(Arg-Gly-Asp-Z), где Z связан в боковой цепи с Q¹ или Q², или, если Q¹ и/или Q² отсутствуют(ет), с Х и где по меньшей мере один из радикалов R¹ или R² должен всегда присутствовать, Х представляет собой -СО-R¹⁸-СО-, и, если R¹-Q¹- или R² -Q² - отсутствует, R¹⁰, R¹³, R¹⁶, остаток флуоресцентного красителя, который связывается посредством СОNН-, -СОО-, -NН-С-(=S)-NН- связей или салицилоил; Z в каждом случае независимо представляет собой остаток аминокислоты, или ди-, или три-пептида, аминокислоты независимо выбирают из группы, включающей Ala, Asn, Asp, Arg, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val или М, где указанные аминокислоты могут быть производными и остатками аминокислот, соединенными один с другим подобно пептиду при помощи -амино- и -карбоксильных групп, и где М всегда присутствует, М представляет собой NН(R⁸)СН(R³)СООН, R³ - -R⁵ - R⁴, -R⁶ - R⁴; R⁴ представляет собой ОН, SH; R⁵ - алкилен, содержащий 1 - 6 атомов углерода, R⁶ - алкиленфенилен, содержащий 7 - 14 атомов углерода, R⁸ - Н; R¹⁰ - алканоил, который содержит 1 - 18 атомов углерода и является незамещенным или замещенным и содержит один заместитель, выбранный из группы, включающей СООН, SR¹¹ или NR¹²R^12'; R¹¹ - Н или тритил; R¹², R^12' - каждый независимо один от другого представляет собой Н, алкил, содержащий 1 - 8 атомов углерода или защитную группу аминогруппы, R¹³ - ароил, который содержит 7 - 11 атомов углерода и является незамещенным или содержит один или два заместителя, выбранных из группы, включающей алкил, содержащий 1 - 6 атомов углерода, R¹⁶ представляет собой аралканоил, который содержит 7 - 19 атомов углерода и который не замещен или замещен в арильном фрагменте одним Hal заместителем; R¹⁸ отсутствует или представляет собой алкенил, содержащий 1 - 8 атомов углерода; Hal - F, Cl, Br или I. Новые соединения могут найти применение в качестве ингибиторов интегрина, в частности, для профилактики и лечения заболеваний кровообращения, тромбоза, сердечного инфаркта коронарных заболеваний сердца, артериосклероза и заболеваний, связанных с развитием сосудов, а также в терапии опухолей. 3 с. и 3 з.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к соединениям формулы I R¹-Q¹-X-Q²-R², (I) в которых Q¹, Q² в каждом случае, независимо от один от другого либо отсутствуют, либо представляют собой -NH-(CH₂)_n-CO-, R¹, R² в каждом случае, независимо друг от друга либо отсутствуют, либо представляют собой цикло-(Arg-Gly-Asp-Z), где Z связан в боковой цепи с Q¹ или Q², или, если Q¹ и/или Q² отсутствуют (ет), с X и где по меньшей мере один из радикалов R¹ или R² должен всегда присутствовать, X представляет собой -CO-R¹⁸-CO-, и если R¹-Q¹- или R²-Q²- отсутствует, то представляет собой R¹⁰, R¹³, R¹⁶, Het-CO- или остаток флуоресцентного красителя, который химически связан посредством CONH-, -COO-, -NH-C(=S)-NH- -NH-C(=O)-NH-, - SO₂NH- или -NHCO-связей, Z в каждом отдельном случае независимо представляет собой остаток аминокислоты или ди-, три- или тетрапептидный остаток, где аминокислоты независимо выбирают из группы, включающей Ala, Asn, Asp, Arg, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val или M, где указанные аминокислоты могут быть производными и остатками аминокислот, соединенными один с другим подобно пептиду при помощи -амино- и -карбоксильных групп, и где М всегда присутствует, М представляет собой NH(R⁸)-CH(R³)COOH, R³ - -R⁵-R⁴, -R⁶-R⁴ или -R⁷-R⁴ R⁴ представляет собой ОН, NH₂, SH или COOH, R⁵ - алкилен, содержащий 1-6 атомов углерода, R⁶ - алкиленфенилен, содержащий 7-14 атомов углерода, R⁷ - алкиленфенилалкилен, содержащий 8-15 атомов углерода, R⁸-H, A или алкиленфенил, содержащий 7-12 атомов углерода, A - алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, R¹⁰ - алканоил, содержащий 1-18 атомов углерода, который является незамещенным или содержит один заместитель из числа COOH, COOA, SR¹¹ или NR¹²R¹², R¹¹ - H или тритил, пиридил-2-тио- или алкилтиогруппа, содержащая 1-6 атомов углерода, R¹², R^12' - каждый, независимо друг от друга, представляет собой H, алкил, содержащий 1-8 атомов углерода или защитную группу аминогруппы, R¹³ - ароил, который содержит 7-11 атомов углерода и является незамещенным или замещенным и содержит один или два заместителя, выбранных из группы, включающей алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, алкоксигруппу, содержащую 1-4 атомов углерода, алканоил, содержащий 1-8 атомов углерода, Hal, SR¹⁴ или NR¹⁵R^15', R¹⁴ - H или A, R¹⁵, R^15' - в каждом случае независимо один от другого H или A, R¹⁶ представляет собой аралканоил, который содержит 7-19 атомов углерода и который не замещен или замещен в арильном фрагменте на один, два или три заместителя, включающих Hal, алкоксигруппу, содержащую 1-6 атомов углерода, или ОН, и в котором арильный фрагмент может также представлять собой группу: E - CH² или О, D - карбонил или [C(R¹⁷R^17')]_m, R¹⁷R^17' каждый независимо представляет собой H или A, R¹⁸ - отсутствует или представляет собой R¹⁹, R²⁰, R¹⁹-R²⁰-R¹⁹ или фенилен, который не замещен или замещен и содержит один или два заместителя R⁵, длина цепи у которого является в каждом случае независимой друг от друга, R¹⁹ представляет собой алкилен, содержащий 1-8 атомов углерода, где 1 или 2 метиленовых группы могут быть замещены S, -CH=CH- или , R²⁰ - циклоалкилен, содержащий 3-7 атомов углерода, Hal -F, Cl, Br или I, Het - моноциклический или бициклический насыщенный, ненасыщенный или ароматический гетероцикл, который содержит от 1 до 4 атомов N, О и/или S, присоединяется через атом N или С и является незамещенным или замещенным и содержит один, два или три заместителя, выбранных из группы, включающей Hal, A, R³, NR⁴R^4', CN, NO₂ и/или карбонильный кислород, n - 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 и m равно 1 или 2, где, при условии, что остатки представляют собой остатки оптически активных аминокислот и производных аминокислот, включаются обе D и L формы, и их соли.

Аналогичные соединения - циклические пептиды - описываются в заявке Германии DE 4310643.

Изобретение основывается на новых соединениях, обладающих ценными свойствами, в частности соединениях, которые могут быть использованы для получения лекарственных средств.

Установлено, что соединения формулы I и их соли обладают очень ценными фармакологическими свойствами и притом хорошо переносятся. В частности, они действуют как ингибиторы интегрина, при соединении с которым они, в частности, ингибируют взаимодействия или рецепторов интегрина с лигандами, такие как связывание фибриногена с рецептором интегрина. Соединения проявляют специфическую активность в случае _v3, и _v5 и _IIb3 интегринов, а также _v1, _v6 и _v8 интегринов.

Это действие может быть продемонстрировано, например, при использовании способа, описанного в публикации J. M. Smith et al., J. Biol. Chem. 265, 12267-12271 (1990).

В публикации P.С.Brooks, R.A. Clark, D.A. Cheresh, Science 264, 569-71 (1994) сообщалось, что развитие кровеносных сосудов зависит от взаимодействия между интегринами сосудов и внеклеточными матричными белками.

Возможность применения циклического пептида для ингибирования этого взаимодействия и, таким образом, инициирования апротоза (программированной гибели клетки) ангиогенных клеток сосудов описана в публикации Р.С. Brooks, А. М. Montgomery, М. Rosenfeld, R.A Reisfeld, Т.-Hu, G. Klier, D.A. Cheresh, Cell 79, 1157-64 (1994).

Соединения формулы I, которые блокируют взаимодействие рецепторов интефина и лигандов, такое как взаимодействие фибриногена с рецептором фибриногена (Гликопротеид IIb/IIIa), предотвращают распространение опухолевых клеток в качестве результата метастаза. Это основывается на следующих наблюдениях: Соединения способны ингибировать связывание металлопротеиназ с интегринами и, следовательно, исключают то, что клетки могут использовать ферментативную активность протеиназ (proteinases). Это, например, описывается посредством ингибирования связывания матричной металлопротеиназы-2 (ММР) с витронекционным рецептором _V3 при помощи циклического RGD цептида в публикации Brooks et al. Cell 85, 683-693 (1996).

Распространение опухолевых клеток из локальной опухоли в сосудистую систему протекает посредством образования микроагрегатов (микротромбов) как результата взаимодействия опухолевых клеток с тромбоцитами крови. В результате защиты, предоставляемой микроагрегатом, клетки опухоли экранируются и не распознаются клетками иммунной системы. Микроагрегаты могут оседать на клетках сосуда, способствуя тем самым дальнейшему проникновению опухолевых клеток в ткань. Поскольку образование микротромба осуществляется посредством связывания фибриногена с фибриногеновыми рецепторами на активированных тромбоцитах крови, GPIIa/IIIb антагонисты могут оцениваться как эффективные ингибиторы метастаза.

Соединения формулы I могут применяться как фармацевтически активные соединения в медицине и в ветеринарии, в частности для профилактики и/или терапии тромбоза, инфаркта миокарда, артериросклероза, воспалений, приступа грудной жабы, опухолевых заболеваний, остеолитических заболеваний, таких как остеопороз, заболеваний, связанных с патологическим развитием сосудов (pathology angiogenic diseases), такие как воспаления, офтальмологические заболевания, диабетической ретинопатии, дегенерации желтого пятна, близорукости, глазного гистоплазмолиза, ревматического артрита, остеоартрита, rubeotic глаукомы, язвенного колита, болезни Кронха, атеросклероза, псориаза, рестеноза после пластической операции на сосудах, вирусной инфекции, бактериальной инфекции, грибковой инфекции, острой печеночной недостаточности и для поддержания процессов выздоровления при заживлении ран.

Соединения формулы I могут использоваться в качестве веществ, обладающих антимикробным действием в операциях, в которых используются биоматериалы, имплантаты, катетеры или кардиостимуляторы. В данном контексте они обладают антисептическим действием. Эффективность антимикробной активности может быть продемонстрирована с использованием способа, описанного в публикации P. Valentin-Weigund et al., Infection and Immunity; 2851-2855 (1988).

В приведенном выше тексте и далее остатки аминокислот обозначаются аббревиатурами, которые соответствуют следующим аминокислотам: Abu 4-Аминомасляная кислота Aha 6-Аминогексановая кислота, 6-аминокапроновая кислота Ala Аланин Asn Аспарагин Asp Аспарагиновая кислота Arg Аргинин Cys Цистеин Dab 2,4-Диаминомасляная кислота Dap 2,3-Диаминопропионовая кислота Gln Глутамин Glp Пироглутаминовая кислота Glu Глутаминовая кислота Gly Глицин His Гистидин homo-Phe гомо-Фенилаланин Ile Изолейцин Leu Лейцин Lys Лизин Met Метионин Nle Норлейцин Orn Орнитин Phe Фенилаланин Phg Фенилглицин 4-Hal-Phe 4-Галоген-фенилаланин Pro Пролин Ser Серин Thr Треонин Trp Триптофан Tyr Тирозин Val Валин Кроме того, приведенные ниже аббревиатуры имеют следующие значения: Ac Ацетил BOC трет-Бутоксикарбонил CBZ или Z Бензилоксикарбонил DCCI Дициклогексилкарбодиимид DFM Диметилформамид EDCI N-этил-N,N'-(диметиламинопропил)-карбодиимид Et Этил FCA Флуоресцеинкарбоновая кислота FITC Флуоресцеинизоцианат Fmoc 9-Флуоренилметоксикарбонил FTH Флуоресцеинтиомочевина HOBt 1-Гидроксибензотиазол Me Метил MBHA Метилбензгидриламин Mtr 4-Метокси-2,3,6-триметилфенилсульфонил HONSu N-Гидроксисукцинимид OBut Сложный трет-бутиловый эфир Oct Октаноил OMe Сложный метиловый эфир OEt Сложный этиловый эфир POA Феноксиацетил Sal Салицилоил TFA Трифторуксусная кислота Trt Тритил(трифенилметил).

В том случае, когда указанные выше аминокислоты способны давать несколько энантиомерных форм, все эти формы, а также их смеси (например, DL формы), включаются, ниже и выше, например, как неотъемлемая часть соединений формулы I. Кроме того, аминокислоты могут, например, как неотъемлемая часть соединений формулы I обеспечиваться подходящими защитными группами, которые известны.

Соединения в соответствии с данным изобретением также включают так называемые производные пролекарства, представляющие собой соединения формулы I, которые модифицированы, например, алкильной или ацильной группами, сахарами или олигопептидами и которые быстро расщепляются в организме с образованием эффективных соединений согласно данному изобретению. К ним относятся также способные разлагаться биологическим способом полимерные производные соединений данного изобретения, как описывается, например, в публикации Int. J. Pharm. 115, 61-67 (1995).

Кроме того, изобретение относится к способу получения соединений формулы I по Пункту 1 и их солей, отличающемуся тем, что а) соединение формулы II H-Q¹-R¹, (II) в котором Q¹ и R¹ принимают значения, указанные в Пункте 1, взаимодействует по реакции ацилирования с соединением формулы III X-L, (III) в котором X принимает значения, указанные в Пункте 1, и L-Cl, Br, I или представляет собой свободную или функционально модифицированную реакционноспособную ОН группу, или b) соединение формулы IV H-Q²-R², (IV) в котором Q² и R² принимают значения, указанные в Пункте 1, взаимодействует в соответствии с реакцией ацилирования с соединением формулы V R¹-Q¹-X-L, (V) в котором R¹, Q¹, X и L принимают указанные значения, или с) соединение формулы II H-Q¹-R¹, (II) в котором Q¹ и R¹ принимают значения, указанные в Пункте 1, взаимодействует в дополнительной реакции с соединением формулы VI X-U, (VI) в котором X принимает значения, указанные в Пункте 1, и U представляет собой -N=C= O, -N=C=S или малеимидил, или d) они выделяются из одной из их функциональных производных посредством обработки сольволизирующим или гидрогенолизирующим реагентом, и/или тем, что основное или кислотное соединение формулы I превращается в одну из его солей в результате обработки кислотой или основанием.

В приведенном выше тексте и в том, который следует далее, радикалы Q¹, Q², R, R, X и L, если не указаны другие значения, принимают значения, приведенные в формулах I, II и III.

В приведенных выше формулах, алкил предпочтительно представляет собой метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил или трет-бутил и дополнительно также пентил, 1-, 2- или 3-метилбутил, 1,1-, 1,2- или 2,2-диметилпропил, 1- этилпропил, гексил, 1-, 2-, 3- или 4-метилпентил, 1,1-, 1,2-, 1,3- , 2,2-, 2,3- или 3,3-диметилбутил, 1- или 2-этилбутил, 1-этил-1-метилпропил, 1-этил-2-метилпропил или 1,1,2- или 1,2,2-триметилпропил.

Алкилен предпочтительно представляет собой метилен, этилен, пропилен, бутилен, пентилен или гексилен, Алкиленфенил предпочтительно представляет собой бензил или фенэтил. Алкиленфенилалкилен предпочтительно представляет собой 4-метиленбензил или 4-этиленбензил.

Q¹ и Q² предпочтительно в каждом случае независимо один от другого представляют собой 6-аминогексановую кислоту (6-аминокапроновую кислоту) или отсутствуют, где предпочтительно, например, Q¹ представляет собой 6-аминогексановую кислоту и Q² отсутствует.

М предпочтительно представляет собой Dap, Ser, Cys, Asp, D-Asp, Dab, гомосерин, гомоцистеин, Glu, D-Glu, Thr, Orn, Lys, D-Lys, 4-аминометил-Phe или 4-аминометил-D-Phe.

Аминокислоты и остатки аминокислот, которые указаны для значений Z, также могут быть функциональными производными, причем предпочтительны N-метил, N-этил, N-пропил, N-бензил или C-метилпроизводные. Предпочтение также отдается производным Asp и Glu, в частности метиловому, этиловому, пропиловому, бутиловому, трет-бутиловому, неопентиловому или бензиловому сложным эфирам карбоксильных групп, находящихся в боковых цепях, а также производным Arg, которые могут быть замещены в группе -NH=C(=NH)-NH₂ ацетильным, бензоильным, метоксикарбонильным или этоксикарбонильным радикалом.

Z предпочтительно представляет собой М, причем предпочтение отдается D-Phe-M, D-Trp-M, D-Tyr-M, D-Phe-Lys, D-Phe-D-Lys, D-Trp-Lys, D-Trp-D-Lys, D-Tyr-Lys, D-Tyr-D-Lys, D-Phe-Orn, D-Phe-Dab, D-Phe-Dap, D-Phe-D-Orn, D-Phe-D-Dab, D-Phe-D-Dap, D-Phe-4-аминометил-Phe, D-Phe-4-аминометил-D-Phe, D-Trp-4-аминометил-Phe, D-Trp-4-аминометил-D-Phe, D-Tyr-4-аминометил-Phe, D-Tyr-4 аминометил-D-Phe, D-Phe-Asp, D-Phe-D-Asp, D-Trp-Asp, D-Trp-D-Asp, D-Tyr-Asp, D-Tyr-D-Asp, D-Phe-Cys, D-Phe-D-Cys, D-Trp-Cys, D-Trp-D-Cys, D-Tyr-Cys, D-Tyr-D-Cys, Phe-D-Lys, Trp-D-Lys, Phe-Orn, Phe-Dab, Phe-Dap, Trp-Orn, Trp-Dab, Trp-Dap, Tyr-Orn, Tyr-Dab, Tyr-Dap, Phe-4-аминометил-О-Phe, Trp-4-аминометил-D-Phе, Tyr-4-аминометил-D-Phe, Phe-D-Asp, Trp-D-Asp, Tyr-D-Asp, Phe-D-Cys, Trp-D-Cys, Tyr-D-Cys, D-Phe-Lys-Gly, D-Phe-M-Gly, D-Trp-Lys-Gly, D-Trp-M-Gly, D-Tyr-Lys-Gly, D-Tyr-M-Gly, D-Phe-Val-Lys, D-Phe-Gly-Lys, D-Phe-Ala-Lys, D-Phe-Ile-Lys, D-Phe-Leu-Lys, D-Trp-Val-Lys, D-Trp-Gly-Lys, D-Trp-Ala-Lys, D-Trp-Ile-Lys, D-Trp-Leu-Lys, D-Tyr- Vai-Lys, D-Tyr-Gly-Lys, D-Tyr-Ala-Lys, D-Tyr-Ile-Lys, D-Tyr-Leu- Lys, а также M-Pro-Ala-Ser-Ser.

Радикал -R⁶-R⁴ предпочтительно представляет собой 2-3- или 4-гидроксибензил, 2-, 3- или 4- аминобензил, 2-, 3- или 4-меркаптобензил, 2-, 3- или 4- карбоксибензил, a также предпочтительно 2-, 3- или 4- гидроксифенэтил, 2-, 3- или 4-аминофенэтил, 2-, 3- или 4- меркаптофенэтил или 2-, 3- или 4-карбоксифенэтил.

Алканоил предпочтительно представляет собой формил, ацетил, пропионил, бутирил, пентаноил, гексаноил, гептаноил, октаноил, нонаноил, деканоил, ундеканоил, додеканоил, тридеканоил, тетрадеканоил, пентадеканоил, гексадеканоил, гептадеканоил или октадеканоил.

Ароил предпочтительно представляет собой бензоил или нафтоил.

R¹³ представляет собой незамещенный, предпочтительно, как указывается, монозамещенный бензоил, причем отдельное предпочтение отдается следующим группам: бензоил, о-, м- или п-метилбензоил, о-, м- или п-этилбензоил, о-, м- или п-пропилбензоил, о-, м- или п-изопропилбензоил, о, м- или п-трет-бутилбензоил, о-, м- или п-аминобензоил, о-, м- или п-(N-метиламино) бензоил, о-, м- или п-метоксибензоил, о-, м- или п-этоксибензоил, о-, м- или п-(N, N-диметиламино) бензоил, о-, м- или п-(М,М-диэтиламино) бензоил, о-, м- или п-фторбензоил, о-, м- или п-бромбензоил, о-, м- или п-хлорбензоил, о-, м-или п-формилбензоил, о-, м- или п-ацетилбензоил, о-, м-или п-пропионилбензоил, о-, м- или п-бутирилбензоил, о-, м- или п-пентаноилбензоил, о-, м- или п-метилтиобензоил, причем предпочтение также отдается следующим группам 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-дифторбензоил, 2,3- 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-дихлорбензоил, 2,3-, 2,4- 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-дибромбензоил, 2-хлор-3-метил-, 2-хлор-4-метил-, 2-хлор-5-метил-, 2-хлор-6-метил-, 2-метил-3-хлор-, 2-метил-4-хлор-, 2-метил-5-хлор-, 2-метил-6-хлор-, 3-хлор-4-метил-, 3-хлор-5-метил- или 3-метил-4-хлорбензоил, 2-бром-3-метил-, 2-бром-4-метил-, 2- бром-5-метил-, 2-бром-6-метил-, 2-метил-3-бром-, 2-метил-4-бром-, 2-метил-5-бром-, 2-метил-6-бром-, 3-бром-4-метил-, 3-бром-5-метил- или 3-метил-4-бромбензоил или 2,5- или 3,4-диметоксибензоил.

R¹⁶ представляет собой незамещенный, предпочтительно, как указывается, монозамещенный фенилацетил, причем предпочтение отдается следующим группам: фенилацетил, о-, м- или п-метоксифенилацетил, о-, м- или п-гидроксифенилацетил, о-, м- или п-этоксифенилацетил, о-, м- или п-фторфенилацетил, о-, м- или п-бромфенилацетил, о-, м- или п-хлорфенилацетил, причем предпочтение отдается также следующим группам: 3-фенилпропионил, 4-фенилбутирил, 5-фенилпентаноил, 6-фенилгексаноил, 7-фенилгептаноил, 8-фенилоктаноил, 9-фенилнонаноил, 10-фенилдеканоил, 11-фенилундеканоил, 12-фенилдодеканоил или 13-фенилтридеканоил и, дополнительно, 2,3-метилендиоксифенил, 3,4-метилендиоксифенил, 2,3-дигидробензофуранил или 2,3-дигидро-2-оксобензофуранил.

Циклоалкилен предпочтительно представляет собой циклопропилен, 1,2- или 1,3-циклобутилен, 1,2- или 1,3-циклопентилен, 1,2-, 1,3- или 1,4-циклогексилен и, дополнительно, 1,2-, 1,3- или 1,4-циклогептилен.

D предпочтительно представляет собой CH₂, причем предпочтителен также карбонил.

Het предпочтительно представляет собой 2- или 3-фурил, 2- или 3-тиенил, 1-, 2- или 3-пирролил, 1-, 2-, 4- или 5-имидазолил, 1-, 3-, 4- или 5-пиразолил, 2-, 4- или 5- оксазолил, 3-, 4- или 5-изоксазолил, 2-, 4- или 5-тиазолил, 3-, 4- или 5-изотиазолил, 2- 3- или 4-пиридил, 2-, 4-, 5- или 6-пиримидинил, и предпочтительно также 1,2,3-триазол-1-, -4- или -5-ил, 1,2,4-триазол-1-, -3- или 5-ил, 1- или 5-тетразолил, 1,2,3-оксадиазол-4- или 5-ил, 1,2,4-оксадиазол-3- или 5-ил, 1,3,4-тиадиазол-2- или -5-ил, 1,2,4-тиадиазол-3- или -5-ил, 1,2,3-тиадиазол-4- или -5-ил, 2-, 3-, 4-, 5- или 6-2H-тиопиранил, 2-, 3- или 4-4-Н-тиопиранил, 3- или 4-пиридазинил, пиразинил, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- или 7-бензофурил, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- или 7-бензотиенил, 1-, 2-3-, 4-, 5-, 6-или 7-индолил, 1-, 2-, 4- или 5-бензимидазолил, 1-, 3-, 4-, 5-, 6- или 7-бензопиразолил, 2-, 4-, 5-, 6- или 7-бензоксазолил, 3-,4-, 5-, 6- или 7-бензизоксазолил, 2-, 4-, 5-, 6- или 7-бензотиазолил, 2-, 4-, 5-, 6- или 7- бензизотиазолил, 4-, 5-, 6- или 7-бенз-2,1,3-оксадиазолил, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-хинолил, 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8- изохинолил, 3-, 4-5-, 6-, 7- или 8-циннолинил или 2-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-хиназолинил. Гетероциклические радикалы могут быть также частично или полностью гидрированы. Следовательно, Het может также представлять собой, например, 2,3-дигидро-2-, -3-, -4- или -5-фурил, 2,5-дигидро-2-, -3-, -4- или -5-фурил, тетрагидро-2- или -3-фурил, 1,3-диоксолан-4-ил, тетрагидро-2- или -3-тиенил, 2,3-дигидро-1-, -2-, -3, -4- или -5-пирролил, 2,5-дигидро-1-2-, -3-, 4- или -5-пирролил, 1-, 2- или 3-пирролидинил, тетрагидро-1-, -2- или -4-имидазолил, 2,3- дигидро-1-, -2-, -3-, -4- или -5-пиразолил, тетрагидро-1-, -3- или -4-пиразолил, 1,4-дигидро-1-, -2-, -3- или -4-пиридил, 1,2,3,4-тетрагидро-1-, -2-, -3-, -4-, -5- или -6-пиридил, 1-, 2-, 3- или 4-пиперидинил, 2-, 3- или 4-морфолинил, тетрагидро-2-, -3- или 4-пиранил, 1,4- диоксанил, 1,3-диоксан-2-, -4- или -5-тл, гексагидро-1-, -3- или - 4-пиридазинил, гексагидро-1-, -2-, -4- или -5-пиримидинил, 1-, 2- или 3-пиперазинил, 1,2,3,4-тетрагидро-1-, -2-, -3-, -4-, -5-, -6-, -7- или -8-хинолил, 1,2,3,4-тетрагидро-1-, -2-, -3-, -4-, -5-, -6-, -7- или -8-изохинолил.

Аминозащитной группой предпочтительно является ацетил, пропионил, бутирил, фенилацетил, бензоил, толуил, РОА, метоксикарбонил, этоксикарбонил, 2,2,2-трихлорэтоксикарбонил, ВОС, 2-йодэтоксикарбонил, CBZ ("карбобензокси"), 4-метоксибензилоксикарбонил, FMOC, Mtr или бензил.

Остаток флуоресцентного красителя предпочтительно представляет собой 7-ацетоксикумарин-3-ил, флуоресцеин-5-(и/или 6-) ил, 2',7'- дихлорфлуоресцеин-5-(и 6-) ил, дигидротетраметилрозамин-4-ил, тетраметилродамин-5- (и/или 6-)ил, 4,4-дифтор-5,7-диметил-4-бор- 3a,4a-диаза-s-индацен-3-этил или 4,4-дифтор-5,7-дифенил-4-бор- 3a,4a-диаза-с-индацен-3-этил.

Подходящие остатки флуоресцентного красителя, содержащие в качестве заместителей функциональные группы, которые могут использоваться в качестве реагентов для получения соединений формулы I в соответствии с данным изобретением, описываются, например, в публикации R.P. Haugland, "Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals, 5^th Edition, 1992- 1994", Molecular Probes, Inc.

m предпочтительно равно 1, причем предпочтительно также 2.

Hal предпочтительно представляет собой F, Cl или Br, а также I.

Соединения формулы I могут иметь один или более хиральных центров и, следовательно, могут находиться в различных стереоизомерных формах. Формула I охватывает все эти формы.

Соответственно, изобретение относится, в частности, к тем соединениям формулы I, в которых по меньшей мере один из указанных радикалов принимает одно из указанных выше предпочтительных значений. Некоторые предпочтительные группы соединений могут быть представлены следующими частными формулами с Ia по Ih, которые соответствуют формуле I и в которых не указанные конкретно радикалы принимают значения, приведенные в формуле I, но в которых в a) Q¹, Q² и R² - отсутствуют, R¹ - цикло-(Arg-Cly-Asp-Z) и X - алканоил; в b) Q¹, Q² и R² - отсутствуют, R¹ - цикло-(Arg-Cly-Asp-M) и X - алканоил; в c) Q¹, Q² и R² - отсутствуют, R¹ - цикло (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys) и X - алканоил; в d) Q¹ и Q² - отсутствуют, R¹ и R² - представляют собой цикло (Arg-Cly-Asp-D-Phe-Lys), и X -CO-(CH₂)_n-CO-; в e) Q² и R² - отсутствуют, Q¹ -NH-(CH₂)₅-CO- R¹ - цикло-(Arg-Gly-Asp-Z) и X - флуоресцентно-окрашенный остаток; в f) Q² и R² - отсутствуют, Q¹ - NH-(CH₂)₅-CO-, R¹ - цикло (Arg-Gly-Asp-M), и X - флуресцеиноил; в g) Q¹ и Q² - отсутствуют, R¹ и R² - представляют собой цикло-(Arg-Cly- Asp-M), X - -CO-(GH₂)₈-CO-; в h) Q¹, Q² и R² - отсутствуют, R¹ - цикло-(Arg-Gly-Asp-Z) и X - CH₃- (CH₂)₁₆-CO- Особое предпочтение отдается соединениям формулы VII цикло-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(Q¹-X), (VII) в которой Q¹ принимает значения, указанные в Пункте 1, и где Q¹ присоединяется к боковой цепи лизина или, если Q¹ отсутствует, X присоединяется к боковой цепи лизина, и в которых X предпочтительно представляет собой алканоил, содержащий 1-18 атомов углерода, который является незамещенным или замещенным и содержит один заместитель, выбранный из группы, включающей COOH, COOA, SR¹⁴ или NR¹⁵R^15', FCA или FTH, или ароил, содержащий 7-11 атомов углерода, который является незамещенным или замещенным и содержит один или два заместителя, выбранных из группы, включающей алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, алкоксигруппу, содержащую 1-4 атома углерода, Hal, SR¹⁴ или NR¹⁵R^15', где R¹⁴, R¹⁵ и R^15' принимают значения, указанные в Пункте 1.

Другими словами, соединения формулы I, а также исходные соединения для их получения получают способами, которые хорошо известны, как описано в литературе (например, в стандартных работах, таких как Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, [Methods of organic chemistry], Georg-Thieme-Verlag, Stuttgard), конкретно в условиях реакций, которые известны и подходят для указанных реакций. В этом контексте могут использоваться также варианты, которые известны, но которые не описаны подробно в данном описании.

Исходные соединения могут быть получены, если это необходимо, непосредственно на месте таким образом, что их не выделяют из реакционной массы, но вместо этого немедленно подвергают дальнейшему превращению с получением соединений формулы I.

Соединения формулы I могут быть предпочтительно получены взаимодействием соединений формулы II с соединениями формулы III.

Как правило, соединения формул II и III известны. Если они не описаны, они могут быть получены способами, которые известны.

В соединениях формулы III радикал L предпочтительно предварительно активируют карбоновой кислотой, предпочтительно карбонилгалогенидом (галогенагидридом карбоновой кислоты), симметричным или смешанным ангидридом или активным сложным эфиром. Радикалы этой природы для активирования карбонильной группы в обычных реакциях ацилирования описаны в литературе (например, в стандартных работах, таких как Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, [Methods of organic chemistry] , Georg-Thieme-Verlag, Stuttgard).

Активированные сложные эфиры целесообразно получать на месте, например, добавлением HOBt или N-гидроксисукцинимида.

L предпочтительно представляет собой H, F, Cl, Br или -ON-сукцинимид.

Как правило, реакцию проводят в инертном растворителе в присутствии реагента, связывающего кислоту, предпочтительно органического основания, такого как триэтиламин, диметиланилин, пиридин или хинолин, или в избытке карбоксильного компонента формулы III.

Может быть преимущественным также добавление гидроксида щелочного или щелочноземельного металла, карбоната или бикарбоната или другой соли слабой кислоты и щелочных или щелочноземельных металлов, предпочтительно калия, натрия, кальция или цезия.

В каждом случае в зависимости от используемых условий время реакции заключается в интервале от нескольких минут до 14 дней, в то время как температура реакции находится в интервале приблизительно от -30 до 140^oC, обычно от -10 до 90^o, в частности, от приблизительно 0 до приблизительно 70^o.

Примерами подходящих инертных растворителей являются углеводороды, такие как гексан, петролейный эфир, бензол, толуол или ксилол; хлорированные углеводороды, такие как трихлорэтилен, 1,2-дихлорэтан, тетрахлоруглерод, хлороформ или дихлорметан, спирты, такие как метанол, этанол, изопропанол, н-пропанол, н- бутанол или трет-бутанол; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир, тетрагидрофуран (THF) или диоксан; простые гликолевые эфиры, такие как этиленгликольмонометиловый эфир или этиленгликольмоноэтиловый эфир (метилгликоль или этилгликоль), этиленгликольдиметиловый эфир (диглим); кетоны, такие как ацетон или бутанон; амиды, такие как ацетамид, диметилацетамид или диметилформамид (DMF); нитрилы, такие как ацетонитрил; сульфоксиды, такие как диметилфульфоксид (DMSO); дисульфид углерода; карбоновые кислоты, такие как муравьиная кислота или уксусная кислота; нитросоединения, такие как нитрометан или нитробензол, сложные эфиры, такие как этилацетат; вода или смеси указанных растворителей.

Кроме того, соединения формулы I могут быть получены взаимодействием соединений формулы IV с соединениями формулы V. Как правило, исходные соединения формулы IV и V являются известными соединениями. Если же они не известны, они могут быть получены способами, которые известны.

В соединениях формулы V радикал L предпочтительно предварительно активизируют карбоновой кислотой, предпочтительно галогенангидридом карбоновой кислоты, симметричным или смешанным ангидридом или активным сложным эфиром. Радикалы этой природы для активирования карбоксильной группы в обычных реакциях ацилирования описаны в литературе (например, в стандартных работах, таких как Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, (Methods of organic chemistry], Georg-Thieme-Verlag, Stuttgard).

L предпочтительно представляет собой F, Cl, Br или -ON-сукцинимид.

Взаимодействие соединений формулы IV с соединениями формулы V проводят в тех же условиях, т.е. при таких же времени реакции, температуре и растворителе, которые были описаны для взаимодействия соединений формулы II с соединениями формулы III.

Кроме того, соединения формулы I могут быть получены взаимодействием соединений формулы II с соединениями формулы VI. Как правило, исходные соединения формул II и VI являются известными соединениями. Если же они не известны, они могут быть получены способами, которые известны.

Взаимодействие соединений формулы II с соединениями формулы III составляет обычное присоединение к изоцианатам. Реакции присоединения такого характера описаны в литературе (например, в стандартных работах, таких как Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, [Methods of organic chemistry), Georg-Thieme-Verlag, Stuttgard).

Циклические соединения формулы R¹ и/или R² могут быть получены циклизацией линейных соединений, как описано, например, в публикации DE 4310643 или в публикации Houben-Weyl, I.c., Volume 15/11, pages 1-806 (1974).

Соединения формулы I могут быть дополнительно получены выделением из их функциональных производных посредством сольволиза, в частности гидролиза, или посредством гидрогенолиза.

Исходные соединения, которые предпочтительны для сольволиза или гидрогенолиза, представляют собой соединения, которые вместо одной или более свободных амино- и/или гидроксильных групп содержат соответствующие защищенные амино- и/или гидроксильные группы, предпочтительно соединения, которые вместо атома H содержат группу, защищающую аминогруппу и присоединенную к атому N, например соединения, которые соответствуют формуле I, но которые содержат NHR' группу (в которой R' является защитной группой аминогруппы, например, BOC или CBZ) вместо NH₂ группы.

Кроме того, предпочтительными являются исходные соединения, которые вместо атома H гидроксильной группы содержат группу, защитную для гидроксильной группы, например, соединения, которые соответствуют формуле I, но содержат R''O-фенильную группу (в которой R" является защитной группой для гидроксильной группы) вместо гидроксифенильной группы.

Некоторые - идентичные или разные - защищенные амино и/или гидроксильные группы могут также присутствовать в молекуле исходного соединения. Если защитные группы, которые присутствуют, различаются одна от другой, они могут во многих случаях удаляться избирательно.

Выражение "защитная группа аминогруппы" хорошо известно и относится к группам, которые подходят для защиты (блокирования) аминогруппы от химических реакций, но которые могут легко удаляться после проведения нужной химической реакции на другие сайты в молекуле. Незамещенные или замещенные ацильные, арильные, аралкоксиметильные или аралкильные группы являются типичными группами этой природы. Поскольку защитные группы аминогрупп удаляются после нужной реакции (или последовательности реакций), их природа и размер не являются определяющими; однако, предпочтительны группы, содержащие 1-10, особенно 1-8 атомов углерода. В отношении данного процесса выражение "ацильная группа" следует понимать в самом широком смысле этого слова. Оно включает ацильные группы, которые получены из алифатических, аралифатических, ароматических или гетероциклических карбоновых кислот или сульфоновых кислот, а также, в частности, алкоксикарбонильные, арилоксикарбонильные и, особенно, аралкоксикарбонильные группы. Примерами таких ацильных групп являются алканоил, такой как ацетил, пропиноил и бутирил; аралканоил, такой как фенилацетил; ароил, такой как бензоил или толил; арилоксиалканоил, такой как РОА; алкоксикарбонил, такой как метоксикарбонил, этоксикарбонил, 2,2,5-тpиxлopэтoкcикapбoнил, BOC или 2-йодэтоксикарбонил; аралкоксикарбонил, такой как CBZ ("карбобензокси") 4-метоксибензилоксикарбонил или FMOC; арилсульфонил, такой как Mtr. Предпочтительными защитными группами аминогрупп являются BOC и Mtr, а также CBZ, Fmoc, бензил и ацетил.

Выражение "защитная группа гидроксильной группы" также хорошо известно и относится к группам, которые подходят для защиты гидроксильной группы от химических реакций, но которые могут быть легко удалены после проведения нужной химической реакции на других сайтах в молекуле. Упомянутые выше незамещенные или замещенные арильные, аралкильные или ацильные группы, а также алкильные группы являются типичными группами такого характера. Природа и размер защитных групп гидроксильной группы не являются определяющими, поскольку группы снова удаляют после проведения нужной химической реакции или последовательности реакция; причем группы, содержащие 1-20, в частности 1-10 атомов углерода являются предпочтительными. Примерами защитных групп гидроксильной группы являются помимо прочих бензил, п-нитробензоил, п-толуолсульфонил, трет-бутил и ацетил, причем бензил и трет-бутил особенно предпочтительны. COOH группы в аспарагиновой кислоте и глутаминовой кислоте являются предпочтительно защищенными в форме их трет-бутиловых эфиров (например, Asp(OBut)).

Соединения формулы I, в зависимости от применяемой защитной группы, выделяют из их функциональных производных, используя, например, сильные кислоты, целесообразно TFA или перхлорную кислоту, а также другие сильные неорганические кислоты, такие как соляная кислота или серная кислота, сильные органические карбоновые кислоты, такие как трихлоруксусная кислота, или сульфоновые кислоты, такие как бензолсульфоновая кислота или п-толуолсульфоновая кислота. Возможно, но не всегда необходимо присутствие дополнительного инертного растворителя. Подходящими инертными растворителями являются предпочтительно органические растворители, например, карбоновые кислоты, такие как уксусная кислота, простые эфиры, такие как тетрагидрофуран или диоксан, амиды, такие как DMF, галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, а также спирты, такие как метанол, этанол или изопропанол, а также вода. Смеси ранее упомянутых растворителей также являются приемлемыми. TFA предпочтительно используют в избытке без добавления любого другого растворителя, в то время как перхлорную кислоту используют в форме смеси уксусной кислоты и 70% перхлорной кислоты в соотношении 9:1. Приемлемые температуры реакций расщепления находятся в интервале значени