Производные замещенного пуринила, обладающие иммуномодуляторной активностью, фармацевтическая композиция и способ замедления роста опухоли

Производные замещенного пуринила, обладающие иммуномодуляторной активностью, фармацевтическая композиция и способ замедления роста опухоли

Реферат

 

Изобретение относится к новым производным замещенного пуринила, обладающим иммуномодуляторной, в частности иммуностимуляторной, активностью как in vivo, так и in vitro и не проявляющих токсичности, к фармацевтической композиции и способу замедления роста опухоли. Производные замещенного пуринила или его фармацевтически приемлемые производные соответствуют общей формуле 1, где R₁ представляет замещенный амино, представленный формулой NR₅R₆, в которой R₅ и R₆ независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, C_1-4 алкила, циклопропила, 1-метил-2-ацетоксиэтила и незамещенного амино, или R₅ и R₆, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют азетидин или метилазиридин, при условии, что R₅ и R₆ оба не представляют водород, и далее, что R₅ и R₆ оба не представляют амино; R₂ и R₃ независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, C_1-4 алкила, амино, меркапто, тиола, замещенного C_1-4 алкилом, и галогена; и R₄ представлен формулой -(СН₂)-L-O-CO-X₁₂, где L выбирают из группы, состоящей из (CH₂)_n-, (СН₂)_m-Q-(СН₂)_m- и -(CH₂)_m-CC-(CH₂)_m-, где Q представляет О, S, NH или СН₂, где X₁₂ представляет низшую аминоалкильную группу, аминокислоту, выбранную из изолейцина, лейцина, пролина, аргинина, глицина, аланина, глутаминовой кислоты, валина, орнитина или цитруллина, связанной посредством ее -аминогруппы, или пептида, содержащего 2-5 указанных аминокислот, n является целым числом от 1 до 6 и m является целым числом от 1 до 3, при условии, что если R₁ представляет собой NH₂, a R₄ - пентилоксикарбонил-L-аргинин, то R₂ не является водородом. Фармацевтическая композиция содержит эффективное количество соединений формулы 1 и фармацевтически приемлемый носитель. Способ замедления роста включает введение млекопитающему соединения формулы 1. 3 с. и 11 з.п. ф-лы, 10 табл., 7 ил.

Изобретение относится к соединениям замещенного пуринила. Главным образом, настоящее изобретение имеет отношение к 6-замещенным пуринилалкоксикарбониламинокислотным соединениям, особенно к производным аргинина.

Описание уровня техники.

Основная функция иммунной системы относится к защите организма от заболеваний. Иммунная система обеспечивает защиту не только от тех заболеваний, которые являются следствием воздействия бактерий, вирусов и других патогенов, но и от рака, а также болезненных состояний, являющихся следствием иммунного дисбаланса, случайного инфицирования или аутоиммунных нарушений.

Модуляция иммунной системы в ходе фармацевтически индуцированной стимуляции или супрессии является важным подходом к контролированию заболевания. Соединения, которые не специфически стимулируют иммунную систему, обладают потенциально значимой медицинской ценностью и они в течение длительного времени служили объектом исследований. Часто результаты таких исследований показывали, что иммуномодулирующие соединения являлись слабыми иммуностимулянтами и, следовательно, оказывались не очень эффективными средствами или представляли собой мощные иммуностимулянты и поэтому оказывались эффективными средствами, но при этом проявляли токсичность, связанную с такой мощной иммуностимулирующей активностью. Среди многих классов соединений, обладающих способностью к не специфической стимуляции иммунной системы, следует отметить нуклеозиды, которые хорошо известны в данной области техники. Так, например, 7-тио-8-оксогуанозин описан D.F.Smee с сотр. в Journal of Biological Response Modifiers, 9, 24-32, 1990, как агент, проявляющий антивирусную активность при испытании на мышах. Активность такого соединения основана на его способности к активации NK и В клеток в иммунной системе и к индукции интерферона. Однако последующие исследования антивирусной активности на людях, сообщенные P. G. Higgins с сотр. в Antiviral Chemistry and Chemotheropy, 2, 61-63, 1991, дали лишь малообнадеживающие результаты. Одной из проблем оказалось отсутствие оральной биопригодности.

Были синтезированы и изучены другие нуклеозиды с целью разработки усовершенствованных медикаментозных препаратов. Так, например, H.F.Smee с сотр. сообщили в Antimicrobial Agents and Chemotheropy, 35, 152-157, 1991, что 7-деазагуанозин обладает значительной иммуностимуляторной и противовирусной активностью при оральном применении. Однако эти результаты были лишь предварительными. Для многих нуклеозидных соединений токсичность оказалась важным обстоятельством, также заслуживающим тщательного анализа.

Особый класс нуклеозидных иммуностимулянтов базируется на инозине и других аналогичных гипоксантинсодержащих соединениях. Хорошо известным примером таких соединений может служить изопринозин, инозинсодержащий комплекс. Изопринозин был подвергнут тщательному исследованию на иммуномодуляторную активность, и С. D. Simone с сотр. ссылаются на это соединение, как на "золотой стандарт" в статье Thymus, 19, 51-55, 1992. Некоторые объяснения активности гипоксантин(инозин)содержащих соединений базируются на установлении факта аденозиндеаминазы, энзима, превращающего аденозин в инозин, что в результате приводит к тяжелым комбинированным иммунодефицитным заболеваниям (SС1Д).

Хотя изопринозин обладает очень низкой токсичностью, он не является эффективным иммуномодулятором и для улучшения его иммунофармакологических свойств было синтезировано большое число его аналогов, о чем сообщается J.W. Hadden с сотр. в International Journal of Immounophormacology, 13, 49-54, 1991 (приложение 1). В этой статье главным образом описывается пролекарство в виде 5'-монофосфата инозина (незакомплексованный инозин обладает незначительной in vivo активностью) и монофосфата метилинозина (М1МР). Однако М1МР не является достаточно активным иммуномодулятором.

С целью сохранения нетоксичных свойств изопринозина и усиления иммуностимуляторной активности был синтезирован иммуномодулятор, содержащий гипоксантин и аминокислоту, L-аргинин, ковалентно связанные через пентаметиленовый мостик. Такое соединение, SТ 789 (гипоксантин пентилоксикарбонил L-аргинин, ранее обозначаемый как PCF 39) было подробно описано в последнем выпуске Thymus 19, s.1-112 (1992). L-Aргинин был выбран на основании известного факта о его роли в иммунной активации и его наличия на окончаниях многих иммуномодуляторных пептидов, например, таких как туфтсин, вещество Р, тимопентин и спленопентин. ST 789 дополнительно раскрыт в заявке на Европейский патент #91830248, публикация #464009 от 2 января 1992 г. Аналоги SТ 789 также описаны в Европейских публикациях, в которых олигопептиды, состоящие из L-аминокислот природного происхождения, заменяют L-аргинин. Однако пуриновая часть таких молекул сохраняет гипоксантин.

Хотя иммунологическое сравнение с действием изопринозина не проводилось, наблюдалась аналогичная картина при исследовании родственных образцов. Такие соединения были нетоксичными, но, в лучшем случае, обладали умеренной иммуностимуляторной активностью. Так, например, не имеется сведений относительно способности SТ 789 или его аналогов к стимуляции такой важной подгруппы иммунных клеток, как цитотоксичные Т лимфоциты (СД8⁺ Т клетки). Такая подгруппа играет ключевую роль в защите организма от вирусных инфекций и рака.

Р. Cornaglia-Ferraris International Journal of Immunopharmacology, 13, 1005-1012, 1991, описывает еще один аналог ST 789. В таком соединении L-аргинин заменяли на бомбезин карбокси терминальный дипептидный L-лейцил L-метионин. В качестве пуриновой основы по-прежнему использовался гипоксантин. Фактически для такого класса соединений, в которых пуриновое основание ковалентно связано метилeновой цепочкой с аминокислотой или олигопептидом, имеется очень мало данных о соединениях, включающих пуриновое основание, отличное от гипоксантина. Кроме этого, в связи с требованиями к физиологически активным аминокислотам для млекопитающих систем, во всех работах, известных к настоящему времени, описываются аминокислоты (природной) L-конфигурации. Краткое описание, касающееся замены гипоксантина на такие пуриновые основания естественного происхождения, как аденин и гуанин, приведено R.Stradi с сотр. в Fl, Parmaco, 45, 39-47, 1990, однако не приводится сведений о существенной биологической активности.

Как отмечалось выше, аденозиндеаминаза и, косвенно, инозин необходимы для поддержания нормального иммунного статуса. В связи с этим в патенте США 5272151, выданном 21 декабря 1993 г. на имя M.Margi с сотр., сообщается, что в ST 789 гипоксантин заменяют на ингибитор ксантиноксидазы - аллопуринол. В результате получают SТ 689, аллопуринолпентанол. Ожидается, что такое замещение повысит концентрацию инозина in vivo, поскольку инозин катаболируется в ксантин и затем в мочевую кислоту в организме млекопитающих в присутствии ксантиноксидазного энзима. Однако было отмечено, что аллопуринол обладает иммуносупрессорными свойствами и что ST 689 незначительно превосходит по иммуностимуляторной активности SТ 789 в большинстве иммунологических анализов, о которых сообщается в патенте '151.

Левамизол представляет собой другой иммунорегулирующий агент, используемый против злокачественной меланомы. В настоящее время было обнаружено, что левамизол вызывает серьезную тромбоцитопению после начала иммуногенной левамизольной терапии злокачественной меланомы [Med. Pediator. Oncol. Apr., 1995, 24 (4), 262-264].

Обзор имеющихся литературных данных показывает, что имеется необходимость в соединениях, обладающих способностью стимулировать ряд субпопуляций иммунных клеток и вследствие этого значительной иммуномодуляторной активностью при низкой токсичности.

Краткое изложение сущности изобретения.

В соответствии с настоящим изобретением обеспечивается соединение, обладающее значительной иммуностимуляторной способностью как in vitro, так и in vivo.

Главным образом, предлагается соединение, обладающее активностью в отношении увеличения количества цитотоксичных Т клеток in vitro и in vivo.

Согласно другому аспекту изобретения предусматривается иммуномодуляторное соединение, не обладающее значительной токсичностью и, в особенности, не проявляющее токсичности, взаимосвязанной с существенной или мощной иммуностимуляцией.

Согласно еще одному аспекту изобретения предусматривается иммуномодуляторное соединение, содержащее пуриновое производное, не являющееся природным основанием.

Другой аспект настоящего изобретения охватывает соединение, выполняющее функции агента, контролирующего рост опухоли.

Настоящее изобретение относится к соединениям общей формулы 1 или их фармацевтически приемлемым производным, в которой R₁ выбирают из группы, состоящей из водорода, С_1-16-алкила, галогена, замещенного или незамещенного тиола, незамещенной или замещенной аминогруппы и ОR₈, где R₈ выбирают из группы, состоящей из водорода, C_1-16 алкила, С_1-8 ацила и C_7-18 арила; R₂ и R₃, независимо друг от друга, выбирают из группы, состоящей из водорода, С_1-4 алкила, замещенного или незамещенного тиола, галогена, амино, и R₄ выбирают из группы, состоящей из линейной или циклической углеродной цепочки формулы (CH_0-2)_0-20-X₁₂, необязательно содержащей чередующиеся один или более гетероатомов и необязательно замещенной одной или более группами = O или = S, и в которой X₁₂ выбирают из группы, состоящей из гидрокси, аминоалкильной группы, аминокислотной группы, или пептида из 2-8 аминокислот при условии, что в том случае, когда R₁ представляет собой NH₂, a R₄ представляет собой пентилоксикарбонил-L-аргинин, R₂ не является водородом, а когда R₁ представляет собой ОН, а R₄ - пентилоксикарбонил-L-аргинин, R₂ не является группой NН₂.

В тексте используются следующие обозначения. Используемый термин "алкил" охватывает такие линейные и разветвленные радикалы, как метил, этил, пропил, изопропил, бутил, трет-бутил, изобутил, пентил, гексил, изогексил, гептил, 4,4-диметилпентил, октил, 2,2,4-триметилпентил, нонил, децил, ундецил, додецил, и их различные изомеры с разветвленной цепочкой. Такая цепочка может быть насыщенной или ненасыщенной и может содержать, например, двойные и тройные связи. Алкил может содержать или быть замещенным, например, одним или более галогеном, кислородом, гидрокси, силилом, амино или другими подходящими заместителями.

Используемый в тексте термин "ароматическое или неароматическое кольцо" относится к 5 и 6 членным ароматическим и неароматическим кольцам, содержащим или не содержащим один или более гетероатомов, например, таких как О, S, SО, SО₂ и N, либо такое кольцо может быть незамещено или замещено, например, галогеном, алкилом, ацилом, гидроксигруппой, арилом и аминогруппой, причем указанный гетероатом и заместитель могут также быть замещены, например, алкилом, ацилом, арилом, аралкилом.

Используемый в тексте термин "ацил" относится к карбонильным группам формулы -СОR, в которой R может иметь любой подходящий заместитель, например, такой как алкил, амино, галоген, тиол, кислород, гидрокси и водород.

Используемый в тексте термин "арил" относится к моноциклическим или бициклическим ароматическим группам, содержащим 6-10 углеродных атомов в кольцевой части, например, таким как фенил, нафтил, замещенный фенил, нафтил, замещенный фенил или замещенный нафтил, в которых заместитель на фениле или нафтиле может представлять собой, например, С_1-4 алкил, галоген, С_1-4 алкокси, гидрокси- или нитрогруппу.

Используемый в тексте термин "аралкил" относится к упомянутым выше алкильным группам, имеющим такой арильный заместитель, как бензил, п-нитробензил, фенетил, дифенилметил и трифенилметил.

Термин "замещенная аминогруппа", используемый в тексте, относится к аминогруппе, которая может быть замещена одним или более заместителями, например С_1-8 алкилом, С_1-8 ацилом, С_6-12 арилом, гидрокси и водородом.

Используемый в тексте термин "аминокислота" включает и охватывает все аминокислоты естественного происхождения, такие аминокислоты в их D- и L-конфигурациях, а также известные ненативные, синтетические и модифицированные аминокислоты, такие как гомоцистеин, орнитин, норлейцин и -аланин. Перечень аминокислот ненатурального происхождения может быть взят из книги D.С.Roberts и F.Yellaссio "Пептиды", т. 5, 1983, Академик Пресс, глава 6.

Используемый в тексте термин "линейная или циклическая" относится, например, к линейной цепочке, которая необязательно может содержать ароматическое или неароматическое кольцо. Циклическая цепочка включает, например, ароматическое или неароматическое кольцо, которое может быть связано, например, с углеродной цепочкой, которая предшествует такому кольцу или следует за ним.

Используемый в тексте термин "фармацевтически приемлемое производное" охватывает любую фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или соль такого эфира соединения формулы 1 или любое другое соединение, которое при применении на реципиенте способно обеспечивать (непосредственно или косвенно) соединение формулы 1 либо его активный метаболит или остаток.

Краткое описание чертежей.

Фиг. 1 иллюстрирует изменения опухолевого роста у мышей, обработанных циклофосфамидом или соединением #1, либо обоими указанными веществами.

Фиг.2 иллюстрирует изменения веса тела мышей, обработанных в том же режиме, что и на фиг.1.

Фиг.3 иллюстрирует изменения объема опухоли у мышей, обработанных цитоксаном или соединением #1, либо двумя такими агентами.

Фиг. 4 иллюстрирует изменения веса тела у мышей, обработанных в том же режиме, что и на фиг.3.

Фиг. 5 иллюстрирует изменение объема опухоли у мышей, обработанных 5FU, смесью 5FU и левамизола и смесью 5FU и соединения #1.

Фиг.6 иллюстрирует кривые роста самцов крыс Фишера, обработанных высокими дозировками соединения #1.

На фиг.7 приведены кривые роста самок крыс Фишера, обработанных высокими дозировками соединения #1.

Описание.

В соответствии с одним из аспектов настоящего изобретения обеспечивается соединение формулы 1, в которой R₄ представляет собой (СН_0-2)_1-8-X₁₂, где X₁₂ представляет собой ОН.

Согласно другому аспекту изобретения предусматривается соединение формулы 1, в которой R₄ представляет собой (СН₂)-L-О-СО-X₁₂, где L представляет собой линейную или циклическую углеродную цепочку, необязательно включающую один или более атомов О, S или группу NH.

Предпочтительно, чтобы X₁₂ представлял собой (СН₂)_n-NН₂, где n представляет собой целое число в интервале 1-6. Более предпочтительно значение n, равное 2.

Более предпочтительно, когда X₁₂ представляет собой аминокислоту естественного происхождения в D- или L-конфигурации. Предпочтительно, чтобы такие аминокислоты выбирались из группы, состоящей из аргинина, глицина, аланина, глютаминовой кислоты, валина, орнитина или цитруллина или их консервативных заместителей.

Еще более предпочтительно, когда аминокислота представляет собой L-аргинин. И еще более предпочтительно, когда аминокислота является D-аргинином.

В соответствии с альтернативным техническим решением изобретения X₁₂ может представлять собой пептид из 2-8 аминокислот.

Предпочтительно такой пептид представляет собой Vаl-Prо-Leu или Ile-Pro-Ile, либо их консервативные заместители.

Согласно другому воплощению настоящего изобретения L можно выбирать из -(СН₂)_n-, -(СН₂)_m-Н-(СН₂)_m- и , где Н представляет собой О, S или NH, n - целое число в интервале 1-6, a m представляет собой целое число, имеющее значение 1-3.

Предпочтительно L можно выбирать из фенила, циклогексила, диоксоланила, оксатиоланила и циклопентила.

Согласно другой альтернативе настоящего изобретения в том случае, когда R₁ представляет собой C_1-16 алкил, R₁ может представлять собой ароматическое или неароматическое кольцо, необязательно содержащее один или более гетероатомов и необязательно замещенной одним или более гетероатомами, гидрокси, галогеном, С_1-16 алкилом, С_1-16 ацилом, C_6-12 арилом, нитро или замещенной, либо незамещенной аминогруппой.

Более предпочтительно R₁ может представлять собой ОН, ОСН₃, SH или SСН₃.

С другой стороны, R₁ можно выбирать из группы, состоящей из водорода, галогена, _1-6 алкила, незамещенной или замещенной аминогруппы, ОН и ОС_1-6 алкила, SН или SС_1-6 алкила.

Предпочтительно, чтобы R₁ представлял собой хлор.

С другой стороны, R₁ может представлять собой радикал формулы NR⁵R⁶, в которой R⁵ и R⁶, независимо друг от друга, выбирают из группы, состоящей из водорода, С_1-4 алкила, С_1-4 алкокси, С_1-4 ацила, замещенной или незамещенной аминогруппы и С_6-10 арила.

Предпочтительно R₁ может быть выбран из группы, состоящей из -N(СН₃)₂, -NНNН₂, -NНСН₃, -NH₂, -N(NН₂)СН₃, -NН-СН-(СН₃)СН₂-О-(СО)СН₃, группы или , в которой R₂₀ представляет собой Н или метил.

Еще более предпочтительно, когда R₁ представляет собой -N(СН₃)₂. Еще более предпочтительно, когда R₁ представляет собой -NНNН₂. Еще более предпочтительно, когда R₁ представляет собой -NНСН₃. Еще более предпочтительно, когда R₁ представляет собой -NН₂ и еще более предпочтительно, когда R₁ может представлять собой -N(NН₂)-СН₃.

Наиболее предпочтительным значением R₁ является радикал формулы -N(СН₃)₂.

В соответствии с еще одним альтернативным решением настоящего изобретения R₂ и R₃, независимо друг от друга, могут быть выбраны из группы, состоящей из С1, Вr, I и F.

Предпочтительно, чтобы R₂ и R₃, независимо друг от друга, представляли собой С1 или Вr.

Более предпочтительно, когда R₂ может представлять собой Н, С1 или NН₂.

Более предпочтительно, когда R₂ может представлять собой Н, Вr или SН, либо SСН₃.

Наиболее предпочтительно, когда соединение изобретения отвечает общей формуле 1, в которой R₁ представляет собой N(СН₃)₂; R₂ и R₃ каждый представляют собой водород, а R₄ представляет собой пентилоксикарбонил-D-аргинин, или предпочтительными являются фармацевтически приемлемые производные такого соединения.

Предпочтительные соединения настоящего изобретения выбирают из группы следующих соединений: Соединение #III N-(6-xлорпурин-9-ил)-5-пентанол; Соединение #V N-(6-N,N-диметиламинопурин-9-ил)пентанол; Соединение #1 N, N-диметиламинопуринил пентоксикарбонил D-аргинин; Соединение #2 N,N-диметиламинопуринил пентоксикарбонил L-аргинин; Соединение #3 N-монометиламинопуринил пентоксикарбонил D-аргинин; Соединение #3а N-(6-N-метиламинопурин-9-ил)пентанол; Соединение #4 N-монометиламинопуринил пентоксикарбонил L-аргинин; Соединение #5 аминопуринил пентоксикарбонил D-аргинин; Соединение #5а N-(6-аминопурин-9-ил)-5-пентанол; Соединение #6 аминопуринил пентоксикарбонил L-аргинин; Соединение #7 гидразинопуринил пентоксикарбонил D-аргинин, Соединение #7а N-(6-гидразинопурин-9-ил)-5-пентанол; Соединение #8 гидразинопуринил пентоксикарбонил L-аргинин.

Соединение #9 хлорпуринил пентоксикарбонил D-аргинин; Соединение #10 хлорпуринил пентоксикарбонил L-аргинин; Соединение #11 гидроксипуринил пентоксикарбонил D-аргинин; Соединение #12 меркаптопуринил пентоксикарбонил D-аргинин; Соединение #13 меркаптопуринил пентоксикарбонил L-аргинин; Соединение #14 N,N-диметиламинопуринил пентоксикарбонил глицин; Соединение # 15 N, N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-7'-этокси-этоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #l6 (2S,4S)-2-(N,N-диметиламинопурин-9-ил)-4-(метилоксикарбонил-D-аргинин)-1,3-диоксолан; Соединение # 17 N-(6-диметиламино-8-бромпуринил-пентоксикарбонил-L-аргинин; Соединение #18 N-(6-диметиламино-8-бромпурин-9-ил)-7-пентоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #19 N-9-пуринил-5-пентанол; Соединение #20 N-9-пуринил-7-пентилоксикарбонил-Д-аргинин; Соединение #21 N-9-пуринил-7-пентилоксикарбонил-L-аргинин; Соединение #22 N,N-диметиламинопуринил-пентоксикарбонил L-Валил-L-Пролил-L-Лейцин; Соединение #23 N,N-диметиламинопуринил пентоксикарбонил L-изолейцил-L-пролил-L-изолейцин; Соединение #24 N-(6-циклопропиламинопурин-9-ил)-5-пентанол; Соединение # 25 N-(6-циклопропиламинопурин-9-ил)-7-пентилоксикарбонил-D-аргинин; Соединение # 26 N-(6-циклопропиламинопурин-9-ил)-7-пентилоксикарбонил-L-аргинин; Соединение #27 N-(6-азетидинпурин-9-ил)-5-пентанол; Соединение #28 N-(6-азетидинпурин-9-ил)-7-пентилоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #29 N-(6-азетидинпурин-9-ил)-7-пентилоксикарбонил-L-аргинин; Соединение #30 транс-(N-6-хлорпурин-9-ил)-4-метилциклогексилметанол; Соединение # 31 транс-(N-6-диметиламинопурин-9-ил)-4-метилциклогексилметанол Соединение # 32 транс-(N-6-диметиламинопурин-9-ил)-4-метилциклогексилметилоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #33 транс-(N-6-гидроксипурин-9-ил)-4-метилциклогексилметанол; Соединение #34 транс-(N-6-метоксипурин-9-ил)-4-метилциклогексилметанол; Соединение # 35 цис-(N-6-диметиламинопурин-9-ил)-4-метилциклогексилметанол; Соединение # 36 цис-(N-6-диметиламинопурин-9-ил)-4-метилциклогексилметилоксикарбонил-D-аргинин; Соединение # 37 N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-7-пентоксикарбонил-D-цитруллин; Соединение #38 N-(6-метилазиридинпурин-9-ил)-5-пентанол; Соединение # 39 рацемический N-(6-метилазиридинпурин-9-ил)-7-пентилоксикарбонил-D-аргинин Соединение #40 N,N-(6-диметиламинопуринил-9-ил-(7-тиоэтокси- этоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #41 мета-N-6-диметиламинопурин-9-ил)метилбензилоксикарбонил-D-аргинин; Соединение # 42 5-(N-6-диметиламинопуринил-9-ил)-3-пентинил-1-оксикарбонил-D-аргинин; Соединение #43 рацемический N-[6-(1-метил-2-ацетокси)этиламинопурин-9-ил]-5-пентанол; Соединение #44 рацемический N-[6(1-метил-2-ацетокси)этиламинопурин-9-ил] -7-пентилоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #45 N-(2,6-дихлорпурин-9-ил)-5-пентанол; Соединение #46 N-(2,6-дихлорпурин-9-ил)-7-пентилоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #47 N-(2,6-дихлорпурин-9-ил)-7-пентилоксикарбонил-L-аргинин; Соединение #48 N-(2-амино, 6-N,N-диметиламинопурин-9-ил)-5-пентанол; Соединение #49 N-(6-диметиламино-8-метилтиопурин-9-ил)-5-пентанол; Соединение # 50 N-(6-диметиламино-8-метилтиопурин-9-ил)-7-пентоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #51 N-(6-метоксипурин-9-ил)-5-пентанол; Соединение #52 N-(6-метоксипурин-9-ил)-7-пентоксикарбонил-D-аргинин; Соединение # 53 N-(2-хлор-6-метоксипурин-9-ил)-7-пентилоксикарбонил-D-аргинин; Соединение # 54 N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-7-пентоксикарбонил-D-орнитин; Соединение # 55 N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-7-пентоксикарбонил-L-орнитин; Соединение #56 N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-7-пентоксикарбонил-L-валин; Соединение #57 N-(6-диметиламино-9-ил)-7-пентоксикарбонил-D-валин; Соединение # 58 N-(N,N-диметиламинопурин-9-ил)-7-пентилоксикарбонилэтиламингидрохлорид; Соединение #59 N-(6-меркаптопурин-9-ил)пентанол; Соединение #60 N-(6-N-метилтиопурин-9-ил)пентанол; Соединение #61 N-(6-хлорпурин-9-ил)-4-бутанол; Соединение #62 N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-4-бутанол; Соединение #63 N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-6-бутоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #64 N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-6-бутоксикарбонил-L-аргинин; Соединение #65 N-(6-хлорпурин-9-ил)-6-гексанол; Соединение #66 N-(6-N,N-диметиламинопурин-9-ил)-6-гексанол; Соединение # 67 N-(6-N,N-диметиламинопурин-9-ил)-8-гексилоксикарбонил-D-аргинин; Соединение # 68 N-(6-N,N-диметиламинопурин-9-ил)-8-гексилоксикарбонил-L-аргинин; Соединение #69 цис-(N-6-гидроксипурин-9-ил)-4-метилциклогексилметанол; Соединение # 70 цис-(N-6-гидроксипурин-9-ил)-4-метилциклогексилметилоксикарбонил-D-аргинин; Соединение # 71 транс-(N-6-гидроксипурин-9-ил)-4-метилциклогексилметилоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #72 N-(6-N,N-диметиламинопурин-9-ил)-5-пентиламингидрохлорид; Соединение # 73 N-(6-метилазиридинпурин-9-ил)-7-пентилоксикарбонил-L-аргинин Соединение #74 (2S,4S)-2-(N,N-диметиламинопурин-9-ил)-4-гидроксиметил-1,3-диоксолан; Соединение # 75 (1S,3R) и (1R,3S)-1-(N-6-диметиламинопурин-9-ил)метил-3-циклопентанметанол; Соединение # 76 (1S,3R) и (1R,3S)-1-(N-6-диметиламинопурин-9-ил)метил-3-(метоксикарбонил-D-аргинин)циклопентан; Соединение #77 N,N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-7-этиламиноэтанол; Соединение # 78 N,N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-7-этиламиноэтоксикарбонил-D-аргинин; Соединение # 79 N,N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-7-этиламиноэтоксикарбонил-L-аргинин; Соединение #80 5-(N-6-диметиламинопурин-9-ил)-3-пентин-1-ол; Соединение # 81 5-(N-6-диметиламинопурин-9-ил)-3-пентинил-1-оксикарбонил-L-аргинин; Соединение #82 N,N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-7-тиоэтоксиэтанол; Соединение # 83 N,N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-7-тиоэтокси-этоксикарбонил-L-аргинин; Соединение # 84 (2S,4S) и (2R,4R)-2-(N,N-диметиламинопурин-9-ил)-4-метоксикарбонил-D-аргинин)-1,3-оксатиолан; Соединение #85 N,N-(6-диметаминопурин-9-ил)-7-этокси-этоксиэтанол; Соединение #86 N,N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-7-этокси-этоксикарбонил-Д-аргинин; Соединение #87 N,N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-7-этокси-этоксикарбонил-L-аргинин и Соединение #88 N-(6-диметиламино-8-бромпурин-9-ил)-5-пентанол.

Более предпочтительно соединение настоящего изобретения выбирают из следующих соединений: Соединение #III N-(6-хлорпурин-9-ил)-5-пентанол; Соединение #V N-(6-N,N-диметиламинопурин-9-ил)пентанол; Соединение #1 N,N-диметиламинопуринилпентоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #2 N,N-диметиламинопуринилпентоксикарбонил-L-аргинит; Соединение #3 N-монометиламинопуринилпентоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #3а N-(6-N-метиламинопурин-9-ил)пентанол; Соединение #5 аминопуринил-пентоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #5а N-(6-аминопурин-9-ил)-5-пентанол; Соединение #6 аминопуринилпентоксикарбонил-L-аргинин; Соединение #7 гидразинопуринилпентоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #7а N-(6-гидразинопурин-9-ил)-5-пентанол; Соединение #8 гидразинопуринилпентоксикарбонил-L-аргинин; Соединение #11 гидроксипуринилпентоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #19 N-9-пуринил-5-пентанол; Соединение #20 N-9-пуринил-7-пентилоксикарбонил-D-аргинин; Соединение #51 N-(6-метоксипурин-9-ил)-5-пентанол; Соединение #59 N-(6-меркаптопурин-9-ил)пентанол и Соединение #60 N-(6-N-метилтиопурин-9-ил)пентанол.

Наиболее предпочтительно соединение настоящего изобретения представляет собой N,N-(6-диметиламинопурин-9-ил)-7-пентоксикарбонил-D-аргинин.

В тексте используются следующие сокращения и определения: РНА - фитогемаглютинин, СоnА - конканавалин А, СY - циклофосфамид, PWM - митоген фитолакки американской, LPS - липополисахарид, ДЕАД - диэтилазодикарбоксилат, РВS - фосфатный буфферный раствор, ТВДРSС1 - хлористый трет-бутилдифенилсилил, СТХ - Цитоксан.

Используемый в тексте термин "консервативное замещение" относится к модификациям и замещениям аминокислот являющихся консервативными, т.е. такими, которые оказывают минимальное влияние на вторичную структуру и гидропатическую природу аминокислоты или пептида. Они включают такие замещения, что описаны Dayhoff в "Атласе последовательностей и структур протеинов" 5, 1978, и Argos в ЕМВО J., 8, 779-785, 1989. Так, например, аминокислоты, принадлежащие к следующим группам, демонстрируют консервативные изменения: ala, pro, gly, glu, аsp, gln, аsn, ser, thr, cyr, ser, tyr, thr, val, ile, leu, met, ala, phe, lys, arg, his и phe, tyr, trp, his. Предпочтительные замещения также включают замещения D-изомеров соответствующими L-аминокислотами.

Неожиданно было обнаружено, что вопреки хорошо известным литературным данным, гипоксантин или другие пуриновые основания естественного происхождения, такие, как аденин или гуанин, необязательно должны использоваться для получения иммуностимулянта, относящегося к типу, аналогичному SТ 789. Фактически замена гипоксантина на 6-замещенное пуриновое основание не встречающееся в биологических системах, может обеспечить равную или даже более высокую степень иммуностимуляции. Кроме того, неожиданно было установлено, что аминокислота необязательно должна иметь (естественную) L-конфигурацию.

Было обнаружено, что предназначение аминокислот природного происхождения не препятствует использованию рацемических смесей Д-энантиомеров и, согласно одному из аспектов изобретения, особенно предпочтительно использовать аминокислоты в Д-конфигурации.

Неожиданно было обнаружено, что соединения изобретения обладают in vitro и in vivo активностью в отношении увеличения числа цитотоксичных Т лимфоцитов у подвергаемых обработке млекопитающих.

Кроме этого было обнаружено, что соединения настоящего изобретения неожиданно оказались активными агентами, препятствующими росту опухолей. Соединения настоящего изобретения представляют собой нетоксичные заменители левамизола при лечении злокачественной меланомы.

При испытании на мышах в сравнении с контрольной группой было показано, что соединения настоящего изобретения в значительной мере ингибируют рост опухоли при использовании в комбинации с циклофосфамидом или 5-фторурацилом, особенно в отношении карциномы грудной железы и толстой кишки соответственно.

Соединения настоящего изобретения могут быть получены с использованием хорошо известных синтетических методов. Так, например, можно использовать методику синтеза, описанную R.Stradi с сотр., в I1 Farmaco, 45, 39-47, 1990, при условии, что атом хлора в хлорпуриновом интермедиате должен быть замещен соответствующим заместителем, отличным от гидроксила. Однако предпочтительно осуществлять модификацию такой синтетической методики, как это описано в следующих ниже примерах, согласно которой пуриновое кольцо уже сконструировано с использованием 6-хлорпурина в качестве исходного материала. В результате такой операции исключается необходимость в построении пуринового кольца и вследствие этого обеспечивается более эффективное и высокопроизводительное получение целевого иммуностимулянта. Такой предпочтительный метод синтеза отображен схемой 1 (см. в конце описания).

На схеме 1 R^' ₄, представляющий собой указанную выше группу (СН_0-2)_1-8-О-CO-X₁₂, реагирует с защищающей группой в присутствии такого основания, как NаН/THF с образованием соединения V. L представляет собой уходящую группу, хорошо известную в данной области. Может использоваться любая подходящая уходящая группа. PG представляет собой защитную группу, хорошо известную в литературе. Могут использоваться любые защитные группы.

Соединение V вступает в реакцию сочетания с соединением IV, например, в присутствии ДЕАД и PPh₃/THF с образованием соединения III. Соединение IV может быть получено известными методами, описанными в литературе. ₁ может присоединяться до этой стадии или на последующей стадии реакции с использованием хорошо известных методов.

Соединение III может подвергаться реакции снятия защитной группы с использованием методик, хорошо известных специалистам в данной области, например с использованием (С₄Н₉)NF/ТНF и АсОН в случае ОТВДРS защитной группы, с образованием соединения II. Далее осуществляют необязательную реакцию такого соединения с аминокислотой или пептидной группой из 1-8 аминокислот, например, в присутствии C1COC1/THF и Н₂О. Полученное в результате вещество представляет собой соединение формулы 1.

Специалистам в данной области должно быть понятно, что соединение формулы 1, в которой R₄ не является аминокислотной или пептидной цепочкой, может быть синтезировано с использованием стадий 1-3 без дополнительной стадии 4.

Специалист в данной области должен принимать во внимание, что соединения настоящего изобретения включают все их фармацевтически применимые производные и аналоги, а также изомеры и энантиомеры.

Другой аспект настоящего изобретения состоит в использовании соединений формулы 1 или фармацевтических препаратов на их основе для производства медикамента.

Еще один аспект изобретения относится к способу лечения млекопитающих, предпочтительно людей, включающему стадию применения соединения формулы 1, фармацевтической композиции на его основе или его фармацевтически приемлемого производного для лечения иммунодефицитного состояния или регулирования роста опухоли.

Специалист в данной области должен иметь в виду, что сделанная в тексте ссылка на лечение распространяется на профилактику, а также лечение выраженных инфекционных состояний или его симптомов и поэтому включает регулирование опухолевого нароста.

Следует также иметь в виду, что количество соединения настоящего изобретения, требуемое для использования при лечении, будет изменяться в зависимости не только от конкретной природы выбранного соединения, но также от метода применения, природы болезненного состояния подвергаемого лечению, возраста и состояния пациента, и выбор такого количества определяется исключительно соображениями лечащего терапевта или ветеринара.

Однако, как правило, подходящая дозировка составляет от примерно 0,1 до примерно 250 мг/кг веса тела в день. Предпочтительно такие дозировки составляют примерно 1-100 мг/кг в день, более предпочтительно 2-20 мг/кг и наиболее предпочтительно около 2,5 мг/кг. Также наиболее предпочтительной дозировкой является примерно 450 мг/м².

Желаемая дозировка может в целях удобства применяться в виде разовой дозы или раздельных дозировок, применяемых через определенные промежутки времени, например в виде двух, трех, четырех или более субдоз в день.

Соединение изобретения обычно применяют в виде однократной дозировки, содержащей, например, 10-1500 мг, как правило 20-1000 мг и наиболее употребительно 50-700 мг активного ингредиента в расчете на единичную дозировочную форму.

В идеальном случае активный ингредиент следует применять таким образом, чтобы достичь максимальных концентраций активного соединения в плазме крови. Это может достигаться, например, путем внутривенной инъекции раствора активного ингредиента, необязательно в физиологическом растворе, или применения в виде шарообразной массы. Желаемые уровни содержания медикамента в крови могут поддерживаться непрерывными или периодическими вливаниями.

Хотя в терапевтических целях соединение изобретения может применяться в виде неочищенного химикалия, предпочтительно, чтобы активный ингредиент присутствовал в виде фармацевтической рецептуры.

Таким образом, настоящее изобретение дополнительно предусматривает фармацевтическую рецептуру, содержащую соединение формулы 1 или его фармацевтически применимое производное совместно с одним или более фармацевтически применимыми носителями и необязательно другими терапе