Ингибиторы клеточной адгезии, опосредованной 4-интегринами

Ингибиторы клеточной адгезии, опосредованной 4-интегринами

Реферат

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к новым производным фенилаланина, являющимся ингибиторами α ₄-интегринов (включая α ₄β ₇ и α ₄β ₁), которые могут быть пригодны для лечения таких состояний, как астма, диабет, ревматоидный артрит, воспалительные заболевания кишечника, и других болезней, приводящих к лейкоцитарной инфильтрации желудочно-кишечного тракта или других тканей, выстланных эпителием, таких как кожа, мочевыводящие пути, дыхательные пути или синовиальная полость.

Ингибиторы по настоящему изобретению могут также быть пригодны для лечения состояний, приводящих к лейкоцитарной инфильтрации других тканей, включая легкие, кровеносные сосуды, сердце и нервную систему, а также трансплантированные органы, такие как почка, печень, поджелудочная железа, сердце, кишечник и кровеносные сосуды.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Адгезия лейкоцитов к эндотелиальным клеткам или белкам внеклеточного матрикса является фундаментальным процессом для иммунитета и воспаления и включает множественные адгезивные взаимодействия. Начальные события в этом процессе включают роллинг лейкоцитов с последующими изменениями авидности интегринов, которые приводят к последующей крепкой адгезии (см. обзоры Butcher, Cell 67:1033-1036 (1991); Harlan, Stood 3:513-525 (1985); Hemler, Annu. Rev. Immunol. 8:365-400 (1990); Osborn, Cell 62:3-6 (1990); Shimuzu et al., Immunol. Rev. 114:109-143 (1990); Springer, Nature 346:425-434 (1990) и Springer, Сеll 76:301-314 (1994)). В ответ на факторы, вызывающие хемотаксис, лейкоциты должны мигрировать через две смежные эндотелиальные клетки в ткани, которые частично состоят из белка внеклеточного матрикса - фибронектина (ФН) (см. Wayner et al., J. Cell Biol. 105:1873-1884 (1987)) и коллагена (КН) (см. Bornstein et al., Ann. Rev. Biochem. 49:957-1003 (1980) и Miller, Chemistry of the collagens and their distribution (Химия коллагенов и их распределение), в "Extracellular Matrix Biochemistry" ("Биохимия внеклеточного матрикса"), К.А. Piez and A.H. Reddi, издатели, Elsevier, Амстердам, 41-78 (1983)). Важные молекулы распознавания, участвующие в этих реакциях, относятся к суперсемейству интегринов (см. обзоры Hemler, Annu. Rev. Immunol. 8:365-400 (1990); Hynes, Cell 48:549-554 (1987); Shimizu et al., Immunol. Rev. 114:109-143 (1990) и Springer, Nature 346:425-434 (1990)).

Интегрины - это гетеродимеры, состоящие из нековалентно связанных субъединиц, обозначаемых как альфа (α ) и бета (β ) субъединицы (см. обзоры Hemler, Annu. Rev. Immunol. 8:365-400 (1990); Hynes, Cell 48:549-554 (1987); Shimizu et al., Immunol. Rev. 114:109-143 (1990) и Springer, Nature 346:425-434 (1990)). К настоящему времени идентифицировано 8 β -субъединиц интегринов, которые могут соединяться с 16 различными α -субъединицами с образованием 23 различных интегринов. α ₄β ₁-интегрин, также известный под названием VLA-4 (Very Late Antigen-4, Очень Поздний Антиген-4), экспрессируется на различных клетках, в том числе на лимфоцитах, моноцитах и эозинофилах (см. Hemler et al., J. Bio. Chem. 262:11478-11485 (1987) и Bochner et al., J. Exp. Med. 173:1553-1556 (1991)), и может играть важную роль в миграции этих клеток во время воспаления. VLA-4 - это рецептор молекулы адгезии клеток сосудов-1 (VCAM-1, Vascular Cell Adhesion Molecule-1) (Elices et al., Cell 60:577-584 (1990)) и соединительный сегмент 1 (CS-1, Connecting Segment-1) - область альтернативного сплайсинга А-цепи ФН (Wayne et al., J. Cell Biol. 109:1321-1330 (1989)). β ₇-субъединица интегрина, впервые клонированная Erle et al. (Erle et al., J. Biol. Chem. 266:11009-11016 (1991)), экспрессируется только на лейкоцитах и, по имеющимся данным, соединяется с двумя различными α -субъединицами - α ₄ (Ruegg et al., J. Cell Biol. 117:179-189 (1992)) и α E (Cerf-Bensussan et al., Eur. J. Immunol. 22:273-277 (1992) и Kilshaw et al., Eur. J. Immunol. 21:2591-2597(1991)).

У α ₄β ₇-комплекса есть три известных лиганда (VCAM-1, CS-1, MAdCAM-1). Одним из лигандов, проявляющим уникальную специфичность, является Молекула клеточной адгезии-1-адрессин слизистой (MAdCAM-1, Mucosal Addresin Cell Adhesion Molecule-1) (см. Andrew et al., J. Immunol. 153:3847-3861 (1994); Briskin et al., Nature 363:461-464 (1993); и Shyjan et al., J. Immunol. 156:2851-2857 (1996)). MAdCAM-1 в высокой степени экспрессирован на пейеровых бляшках высокоэндотелиальных венул, в брыжеечных лимфатических узлах и на венулах собственной пластинки кишечника и молочных желез (Berg et al., Immunol. Rev. 105:5-18 (1989)). Было показано, что α ₄β ₇-интегрин и MAdCAM-1 важны для регуляции перемещения лимфоцитов к нормальному кишечнику (Holzmann et al., Сеll 56:37-46 (1989)).

Вторым лигандом для α ₄β ₇-комплекса является CS-1 (соединительный сегмент 1) (см. Guan et al., Сеll 60:53-61 (1990); и Wayner et al., J. Сеll Biol. 109:1321-1330 (1989)). Участок связывания клеток внутри CS-1 состоит из 25 аминокислот, где аминокислотные остатки карбоксильного конца (EILDVPST) образуют мотив распознавания (см. Komoriya et al., J. Biol. Chem. 266:15075-15079 (1991); и Wayner et al., J. Cell Biol. 116:489-497 (1992)).

Третьим лигандом для α ₄β ₇-комплекса является сосудистая молекула клеточной адгезии-1 (VCAM-1) - индуцируемый цитокином белок, экспрессируемый на эндотелиальных клетках (см. Elices et al., Сеll 60:577-584 (1990); и Ruegg et al., J. Сеll Biol. 117:179-189 (1992)). Еще предстоит однозначно выяснить, связываются ли MAdCAM-1, VCAM-1 и CS-1 с одним и тем же участком α ₄β ₇-комплекса. С использованием панели моноклональных антител Andrew et al. показали, что во взаимодействии α ₄β ₇-комплекса с тремя его лигандами участвуют различные, но перекрывающиеся эпитопы (Andrew et al., J. Immunol. 153:3847-3861 (1994)). VCAM-1 и CS-1 - два лиганда, которые совместно используются α ₄β ₇- и α ₄β ₁-комплексами. Кроме того, известно, что α ₄β ₁-комплекс связывается с остеопонтином - белком, гиперэкспрессирующимся в атеросклеротических бляшках (см. Bayless et al., J. Cell Science 111:1165-1174 (1998)).

Практическое значение изобретения

Большое количество исследований in vivo показывают, что α ₄-интегрины (α ₄β ₁/α ₄β ₇) играют решающую роль в патогенезе различных болезней. Моноклональные антитела, направленные против α ₄-субъединицы, были исследованы на различных моделях болезней. Эффективность антител к α ₄-субъединице была продемонстрирована на моделях экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита у крыс и мышей (см. Baron et al., J. Exp. Med. 177:57-68 (1993) и Yednock et al., Nature 356:63-66 (1992)). Было выполнено значительное количество исследований для оценки роли α ₄-субъединицы в аллергических реакциях дыхательных путей (см. Abraham et al., J. Clin. Invest. 93:776-787 (1994); Bochner et al., J. Exp. Med. 173:1553-1556 (1991); Walsh et al., J. Immunol. 146:3419-3423 (1991) и Weg et al., J. Exp. Med. 177:561-566 (1993)). Например, моноклональные антитела к α ₄-субъединице были эффективны при некоторых моделях антигенной нагрузки легких (см. Abraham et al., J. Clin. Invest. 93:776-787 (1994); и Weg et al., J. Exp. Med. 177:561-566 (1993)). У эдиповых тамаринов, страдавших спонтанным хроническим колитом, было обнаружено значительное улучшение в течении колита после введения антитела к α ₄-субъединице или антитела к α ₄β ₇-комплексу (см. Bell et al., J. Immunol. 151:4790-4802 (1993); Podolsky et al., J. Clin. Invest. 92:372-380 (1993) и Hesterberg et al., Gastroenterology 111:1373-1380 (1996)). У мышей с тяжелым комбинированным иммунодефицитом (SCID), которым переливали CD45RB^high CD4⁺ Т-клетки, моноклональные антитела к β ₇-субъединице или MAdCAM-1 блокировали миграцию лейкоцитов в толстый кишечник и снижали тяжесть воспаления толстого кишечника, что было доказано гистологически (см. Picarelia et al., J. Immunol. 158:2099-2106 (1997)). Моноклональные антитела к α ₄-субъединице ингибировали инсулит и задерживали начало диабета у мышей с диабетом без ожирения (NOD) (см. Baron et al., J. Clin. Invest. 93:1700-1708 (1994); Burkly et al., Diabetes 43:529-534 (1994) и Yang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:10494-10498 (1993)). К другим болезням, в которых участвуют α ₄-интегрины, относятся ревматоидный артрит (см. Laffon et al., J. Clin. Invest. 88:546-552 (1991); и Morales-Ducret et al., J. Immunol. 149:1424-1431 (1992)), атеросклероз (см. Cybulsky et al., Science 251:788-791 (1991)), отторжение аллотрансплантата (Isobe et al., J. Immunol. 153:5810-5818 (1994)) и нефрит (Allen et al., J. Immunol. 162:5519-5527 (1999)). Реакция гиперчувствительности замедленного типа (см. Issekutz, J. Immunol. 147:4178-4184 (1991)), реакция контактной гиперчувствительности (см. Chisholm et al., Eur. J. Immunol. 23:682-688 (1993); и Ferguson et al., J. Immunol. 150:1172-1182 (1993)) и гиперплазия интимы (Lumsden et al., J. Vase. Surg. 26:87-93 (1997)) также блокируются антителами к α ₄-субъединице. Превосходный обзор исследований in vivo, посвященных участию α ₄-интегринов в развитии болезней, см. в работе Lobb et al., J. Clin. Invest. 94:1722-1728 (1995).

Предполагалось, что при адгезии лейкоцитов к воспаленной синовиальной мембране доминируют α ₄β ₁-взаимодействия, однако повышенное число α ₄β ₇-позитивных Т-клеток также было обнаружено в синовиальной мембране больных ревматоидным артритом (McMurray, Semin. Arthritis Rheum. 25:215-233 (1996)), и было выдвинуто предположение о том, что повышенная экспрессия α ₄β ₇ может участвовать в развитии и закреплении этой болезни (см. Lazarovits et al., J. Immunol. 151:6482-6489 (1993)). У NOD-мышей MAdCAM-1 экспрессировался в высокоэндотелиальных венулах воспаленных островков поджелудочной железы, что позволяет высказать предположение о роли α ₄β ₇-интегринов в диабете (см. Yang et al., Diabetes 46:1542-1547 (1997)). Экспрессия α ₄β ₁/α ₄β ₇ на разнообразных лейкоцитах и присутствие α ₄β ₁/α ₄β ₇-позитивных клеток в пораженных тканях подразумевает, что эти два рецептора могут играть важные роли в миграции клеток к разнообразным участкам воспаления. Например, моноклональные антитела к α ₄-субъединице были эффективны при нескольких моделях антигенной нагрузки легких, таких как индуцированная овальбумином астма у мышей, крыс и морских свинок (см. Pretolani et al., J. Exp. Med. 180:795-805 (1994), Fryer et al., J. Clin. Invest. 99:2036-2044 (1997) и Henderson et al., J. Clin. Invest. 100:3083-3092 (1997)). Экспрессия α ₄β ₇- и α ₄β ₁-интегринов на лимфоцитах и эозинофилах, а также исследования in vitro, показывающие, что α ₄β ₇- и α ₄β ₁-интегрины опосредуют адгезию эозинофилов человека KVCAM-1, CS-1 и MAdCAM-1 (Walsh et al., Immunology 9:112-119 (1996)), позволяют предположить, что α ₄-субъединица является подходящей мишенью для терапевтических средств при лечении астмы. Совместно эти данные позволяют высказать предположение, что α ₄β ₇- и α ₄β ₁-интегрины могут играть важную роль при различных воспалительных заболеваниях.

Использование моноклональных антител к интегринам in vivo продемонстрировало, что многие интегрины действительно являются эффективными мишенями для терапевтических средств при воспалительных, опосредованных иммунной системой, болезнях, заболеваниях сердечно-сосудистой системы и при трансплантации органов.

Также было описано, что биологически доступный перорально, не являющийся пептидом низкомолекулярный антагонист α ₄-субъединицы может быть использован для лечения или профилактики таких состояний, как астма, воспалительные заболевания кишечника, ревматоидный артрит, рассеянный склероз и другие болезни (см. WO 99/36393).

Целью настоящего изобретения было определение биологически доступного посредством перорального введения и эффективного низкомолекулярного антагониста α ₄-интегринов. Были открыты низкомолекулярные вещества, являющиеся эффективными ингибиторами опосредованной α ₄-интегринами адгезии к MAdCAM-1, VCAM-1 или CS, которые могут быть использованы для лечения или профилактики воспалительных заболеваний и/или аллергических заболеваний.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к новому производному фенилаланина, имеющему Формулу [I]:

где X¹ является атомом галогена, X² является атомом галогена, Q является -СН₂-группой или -(СН₂)₂- группой, Y является C_1-6-алкильной группой, a CO₂R является карбоксильной группой, которая может быть этерифицирована;

или к его фармацевтически приемлемой соли.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения с Формулой [I] или его фармацевтически приемлемой соли.

Кроме того, настоящее изобретение также относится к способу лечения или профилактики состояний, вызванных клеточной адгезией, опосредованной α ₄-интегринами (в том числе α ₄β ₇ и α ₄β ₁-интегринами), который включает введение соединения с Формулой [I] или его фармацевтически приемлемой соли.

СВЕДЕНИЯ, ПОДТВЕРЖДАЮЩИЕ ВОЗМОЖНОСТЬ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Соединение по настоящему изобретению может существовать в форме оптических изомеров, в основе которых лежит асимметрический атом этого соединения, и настоящее изобретение включает эти оптические изомеры и их смеси.

В примере осуществления настоящего изобретения карбоксильная группа, которая может быть этерифицирована, включает карбоксильную группу и этерифицированную карбоксильную группу, которая может быть гидролизована в организме с образованием карбоксильной группы. Примерами такой этерифицированной карбоксильной группы могут быть замещенные или незамещенные С_2-7 алкоксикарбонильные группы, например - метоксикарбонильная группа, бензилоксикарбонильная группа, р-аминобензилоксикарбонильная группа и тому подобные.

В примере осуществления настоящего изобретения не обязательно фиксировать R/S конфигурацию связи. Соединение по настоящему изобретению может быть соединением с единственной конфигурацией или смесью соединений с различными конфигурациями.

Среди соединений по настоящему изобретению предпочтительными соединениями являются соединения с Формулой [I-1]:

где символы соответствуют определенным выше.

В более предпочтительном варианте осуществления соединения [I-1] X¹ является атомом хлора или атомом фтора, X² является атомом хлора или атомом фтора, Y является C_1-4-алкильной группой, a CO₂R является карбоксильной группой или С_2-7-алкоксикарбонильной группой.

В более предпочтительном варианте осуществления соединения [I-1] X¹ является атомом хлора или атомом фтора, X² является атомом хлора или атомом фтора, Q является -CH₂-группой, Y является метильной группой, этильной группой или n-пропильной группой, a CO₂R является карбоксильной группой, метоксикарбонильной группой, этоксикарбонильной группой или трет-бутоксикарбонильной группой.

Особо предпочтительными соединениями являются соединения с Формулой [I-1], где X¹ является атомом фтора, X² является атомом хлора или атомом фтора, Q является -CH₂- группой, Y является метильной или этильной группой, a CO₂R является карбоксильной группой или С_2-7 алкоксикарбонильной группой, например метоксикарбонильной группой или этоксикарбонильной группой.

Наиболее предпочтительные соединения по настоящему изобретению могут быть выбраны из:

N-(2,6-Дифторбензоил)-4-(2,6-диметокси-4-этоксиметилфенил)-L-фенилаланина [то есть (2S)-2-[(2,6-дифторбензоил)амино]-3-[4-(2,6-диметокси-4-этоксиметилфенил)фенил]пропионовой кислоты];

N-(2-Хлор-6-фторбензоил)-4-(2,6-диметокси-4-этоксиметилфенил)-L-фенилаланина [то есть (2S)-2-[(2-хлор-6-фторбензоил)амино]-3-[4-(2,6-диметокси-4-этоксиметилфенил)фенил]пропионовой кислоты];

N-(2-Хлор-6-фторбензоил)-4-(2,6-диметокси-4-метоксиметилфенил)-L-фенилаланина [то есть (2S)-2-[(2-хлор-6-фторбензоил)амино]-3-[4-(2,6-диметокси-4-метоксиметилфенил)фенил]пропионовой кислоты];

N-(2,6-Дифторбензоил)-4-(2,6-диметокси-4-метоксиметилфенил)-L-фенилаланина [то есть (2S)-2-[(2,6-дифторбензоил)амино]-3-[4-(2,6-диметокси-4-метоксиметилфенил)фенил]пропионовой кислоты],

или их С_1-6 алкиловых эфиров;

или их фармацевтически приемлемых солей.

Соединение по настоящему изобретению может быть использовано либо в свободной форме, либо в форме его фармацевтически приемлемых солей. Фармацевтически приемлемые соли включают соль с неорганическим основанием, органическим основанием или основной аминокислотой (например, соль щелочного металла, такую как натриевая соль или калиевая соль; соль щелочноземельного металла, такую как магниевая соль или кальциевая соль; или соль с амином, такую как аммониевая соль, триэтиламмониевая соль, соль с лизином и тому подобные) и соль с неорганической кислотой или органической кислотой (например, гидрохлорид, сульфат, нитрат, гидробромид, метансульфонат, р-толуолсульфонат, ацетат, малеат). Фармацевтически приемлемые соли также включают внутримолекулярную соль соединения или его сольват или гидрат.

Характеристиками данного соединения являются включение С_1-6 алкоксизамещенной C_1-2 алкильной группы в 4'-положение бифенильного ядра и соединение двугалоидзамещенной бензоильной группы и 2',6'-ди(С_1-6алкокси)-4'-(C_1-6 алкоксизамещенного C_1-2алкил)бифенильного ядра, причем эти характеристики не были конкретно описаны в предшествующих публикациях.

Соединение по настоящему изобретению обладает сильной ингибиторной активностью по отношению к опосредованной α ₄-интегринами клеточной адгезии и проявляет превосходную биодоступность после перорального введения, что отражает общее повышение:

а) метаболической стабильности,

б) связывания с белками плазмы и

в) растворимости в воде.

В частности, введение C_1-6 алкоксизамещенной C_1-2 алкильной группы в 4'-положение бифенильного ядра снижает быстрый метаболизм, который наблюдался у некоторых соединений, описанных в предшествующих публикациях. Соединение по настоящему изобретению снижает печеночный клиренс, за счет чего повышается биодоступность.

Поэтому соединение по настоящему изобретению проявляет превосходную способность действовать in vivo против неблагоприятных условий, возникающих в результате опосредованной α ₄-интегринами (в том числе α ₄β ₁- и α ₄β ₇-интегринами) клеточной адгезии.

Соединение по настоящему изобретению можно использовать в способе лечения или профилактики состояний, обусловленных опосредованной α ₄-интегринами (в том числе α ₄β ₁- и α ₄β ₇-интегринами) адгезией, у млекопитающих, например у человека.

В другом аспекте соединение по настоящему изобретению может быть использовано в способе лечения индивидуума (например, млекопитающего, такого как человек или другой примат), страдающего заболеванием, связанным с инфильтрацией тканей (включая миграцию и/или аккумуляцию лейкоцитов в тканях) лейкоцитами (например, лимфоцитами, моноцитами), экспрессирующими молекулы MAdCAM-1 и/или VCAM-1. Например, воспалительные заболевания, в том числе заболевания, связанные с лейкоцитарной инфильтрацией желудочно-кишечного тракта (в том числе эпителия, имеющего отношение к кишечнику), других слизистых тканей или тканей, экспрессирующих молекулу MAdCAM-1 (например, тканей, имеющих отношение к кишечнику, таких как венулы собственной пластинки тонкого и толстого кишечника; и молочной железы (например, лактирующей молочной железы)), можно лечить согласно данному способу. Сходным образом, индивидуума, страдающего заболеванием, связанным с лейкоцитарной инфильтрацией тканей, обусловленной связыванием лейкоцитов с клетками (например, эндотелиальными клетками), экспрессирующими молекулу VCAM-1, можно лечить согласно настоящему изобретению.

Способ лечения или профилактики состояний или болезней, опосредованных α ₄-зависимой (в том числе α ₄β ₁ и α ₄β ₇-зависимой) адгезией и связанных с лейкоцитарной инфильтрацией, может включать введение больному млекопитающему или человеку эффективного количества соединения по настоящему изобретению в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.

Соединение по настоящему изобретению, соответственно, может применяться для лечения или профилактики таких воспалительных состояний, как ревматоидный артрит (РА); астма; аллергических состояний, таких как ринит; респираторного дистресс-синдрома взрослых; деменции, вызванной СПИДом; болезни Альцгеймера; заболеваний сердечно-сосудистой системы; тромбоза или патологической агрегации тромбоцитов; реокклюзии после тромболизиса: реперфузионных поражений; псориаза; воспалительных заболеваний кожи, таких как экзема, контактный дерматит и атопический дерматит; диабета (например, инсулинзависимого сахарного диабета, аутоиммунного диабета); рассеянного склероза; системной красной волчанки (СКВ); воспалительных заболеваний кишечника, таких как язвенный колит, болезнь Крона (региональный энтерит) и резервуарный илеит (например, возникший после проктоколэктомии и илеоанального анастомоза); болезней, связанных с лейкоцитарной инфильтрацией желудочно-кишечного тракта, таких как целиакия, нетропическая спру, энтеропатия, сочетающаяся с серонегативными артропатиями, лимфоцитарный или коллагенозный колит и эозинофильный гастроэнтерит; болезней, связанных с лейкоцитарной инфильтрацией других тканей, выстланных эпителием, таких как кожа, мочевыводящие пути дыхательные пути и синовиальная оболочка суставов; панкреатита; мастита (воспаления молочной железы); гепатита; холецистита; холангита или перихолангита (воспаления желчных протоков и окружающей их ткани печени); бронхита; синусита; воспалительных заболеваний легких, которые приводят к интерстициальному фиброзу, таких как пневмония на фоне гиперчувствительности; коллагенозов (при СКВ и РА); саркоидоза; остеопороза; остеоартрита; атеросклероза; неопластических заболеваний, включая метастазирование опухолевого или ракового роста); ран (стимуляция заживления ран); некоторых заболеваний глаз, таких как отслойка сетчатки, аллергический конъюнктивит и аутоиммунный увеит; синдрома Шегрена (сухого кератоконъюнктивита); отторжения трансплантата (хронического и острого); болезней "хозяин против трансплантата" и "трансплантат против хозяина"; гиперплазии интимы; артериосклероза (включая артериосклероз трансплантата после трансплантации); повторного инфаркта или повторного стеноза после хирургических операций, таких как чрескожная транслюминальная коронарная ангиопластика (ЧТКА) и чрескожная транслюминальная реканализация артерий; нефрита; опухолевого ангиогенеза; злокачественных опухолей; множественной миеломы и резорбции костей, индуцированной миеломой; и поражений центральной нервной системы, таких как инсульт, травматические поражения мозга и поражения спинного мозга.

Способ предпочтительно может применяться для лечения или профилактики астмы, аллергических состояний, таких как ринит, воспалительных заболеваний кишечника, таких как язвенный колит и болезнь Крона, ревматоидного артрита, атопического дерматита, рассеянного склероза и отторжения после трансплантации.

Соединения, пригодные для применения в терапии, можно оценивать in vivo с использованием подходящих модельных животных. Подходящие модели воспаления на животных были описаны в публикациях. Например, NOD-мыши являются модельными животными для инсулинзависимого сахарного диабета. CD45RB^Hi SCID мыши обеспечивают модель, имеющую сходство как с болезнью Крона, так и с язвенным колитом (Powrie et al., Immunity 1:553-562 (1994)). У эдиповых тамаринов развивается спонтанный, часто хронический, колит, который клинически и гистологически напоминает язвенный колит у людей (Madara et al., Gastroenterology 88:13-19 (1985)). Модель колита у мышей на введение декстрана сульфата натрия (ДСН) была получена при добавлении ДСН в питьевую воду. Физиологические и гистологические изменения в ободочной кишке при ДСН-колите были подробно описаны в литературе и напоминают язвенный колит у людей (Cooper et al., Laboratory Investig. 69:238-249 (1993)). Также были описаны мыши после ударной дозы ИЛ-10, у которых развивались поражения кишечника, сходные с воспалительными заболеваниями кишечника у человека (Strober et al., Cell 75:203-205 (1993)).

Хотя соединение по настоящему изобретению можно вводить отдельно, предпочтительно представлять его в виде фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения с Формулой [I] и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

Носитель должен быть приемлем в том смысле, что он не должен быть вредным для реципиента. Фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем могут быть, например, связующие вещества (например, сироп, аравийская камедь, желатин, сорбит, трагакант, поливинилпирролидон), наполнители (например, лактоза, сахароза, кукурузный крахмал, фосфат калия, сорбит, глицин), вещества, улучшающие скольжение (например, стеарат магния, тальк, полиэтиленгликоль, диоксид кремния), дезинтеграторы (например, картофельный крахмал), увлажняющие средства (например, лаурилсульфат натрия) и тому подобные.

Фармацевтические композиции включают составы в форме, пригодной для перорального, внутрилегочного, внутриглазного, ректального, парентерального (включая подкожное, внутримышечное и внутривенное), внутрисуставного, местного, назального ингаляционного (например, в виде аэрозоля) или буккального введения. Эти композиции следует понимать, как включающие рецептуры длительного действия, известные в области фармации. Предпочтительными способами введения являются пероральное и парентеральное введение.

Фармацевтическая композиция может быть представлена в виде единичной дозировочной формы и может быть приготовлена с помощью любого из способов, хорошо известных в области фармации. В общем, композиции готовят посредством равномерного и тщательного перемешивания активного ингредиента с жидким носителем или тонко диспергированным твердым носителем (или с обоими носителями), а затем, при необходимости, придания продукту желаемой формы.

Композиции по настоящему изобретению, пригодные для перорального введения, могут быть в форме дискретных единиц, таких как капсулы, облатки, таблетки или лепешки, каждая из которых содержит предварительно определенное количество соединения по настоящему изобретению, в форме порошка или гранул или в форме раствора или суспензии в водосодержащей жидкости. Композиции для других применений могут включать неводную жидкость, иметь форму эмульсии типа "масло в воде" или эмульсии типа "вода в масле", иметь форму аэрозоля или форму крема или мази или быть импрегнированными в трансдермальные пластыри для использования с целью трансдермального введения препарата по настоящему изобретению нуждающемуся в нем больному. Соединение по настоящему изобретению также может быть введено нуждающемуся в нем больному в форме болюса, электуария или пасты.

Соединение по настоящему изобретению может быть введено нуждающемуся в нем больному в количестве, достаточном для снижения или предотвращения опосредованной α _4-интегринами клеточной адгезии. В другом аспекте, соединение по настоящему изобретению может быть введено больному в количествах, достаточных для получения желаемого терапевтического и/или профилактического эффекта, или в количествах, достаточных для снижения или предотвращения опосредованного MAdCAM-1/VCAM-l связывания с лигандом MAdCAM-1/VСАМ-1 и ингибирования за счет этого адгезии лейкоцитов и лейкоцитарной инфильтрации и сочетанных клеточных реакций.

Соединения и композиции по настоящему изобретению могут быть введены больным, страдающим состояниями, перечисленными выше, в количестве, которое будет оказывать эффект полного или частичного устранения нежелательных симптомов состояния. Симптомы могут быть вызваны адгезией лейкоцитов или активацией клеток, возникновения которых обычно можно ожидать в результате повышенной экспрессии VCAM-1 и/или MAdCAM-1 на поверхности эндотелиальных клеток. Повышение экспрессии VCAM-1, MAdCAM-1 и/или CS-1 может быть вызвано нормальной воспалительной реакцией или аномальными воспалительными состояниями. В любом случае, эффективная доза соединения по настоящему изобретению может снизить повышенную клеточную адгезию, вызванную повышенной экспрессией VCAM-1 и/или MAdCAM-1 эндотелиальными клетками. Снижение адгезии, наблюдаемой в состоянии болезни, на 50% можно считать эффективным снижением адгезии. Более предпочтительно, достигается снижение адгезии ex vivo на 90%. Наиболее предпочтительно адгезия, опосредованная VCAM-1, MAdCAM-1 и/или CS-1 устраняется эффективной дозой. Клинически, в некоторых случаях, эффекты соединения можно наблюдать как снижение лейкоцитарной инфильтрации в тканях или на участках повреждения или воспаления. Поэтому для достижения терапевтической эффективности соединения или композиции по настоящему изобретению вводят так, чтобы они обеспечили дозу, эффективно снижающую или устраняющую адгезию лейкоцитов или активацию клеток с целью снижения нежелательных симптомов.

Количество соединения [I], необходимое для получения терапевтического эффекта, будет различным в зависимости от конкретного соединения, пути введения, возраста, пола, веса и состояния субъекта, подлежащего лечению, а также от конкретного нарушения или заболевания, подлежащего лечению. Подходящая дневная доза соединения [I] или его фармацевтически приемлемой соли для млекопитающего, страдающего или вероятно страдающего любым состоянием, описанным выше, составляет от 0,1 до 100 мг на кг веса тела млекопитающего, предпочтительно от 0,3 до 30 мг/кг веса тела млекопитающего. В случае пероральной дозировки подходящая (дневная) доза может находиться в диапазоне от 1 до 100 мг соединения на килограмм веса тела, но предпочтительно она составляет от 2 до 30 мг соединения на килограмм, а наиболее предпочтительная дозировка составляет от 1 до 10 мг/кг веса тела млекопитающего при введении два-три раза в день. В случае местного применения, например нанесения на кожу или закапывания в глаза, подходящая доза соединения с Формулой [I] или его фармацевтически приемлемой соли может находиться в диапазоне от 0,1 до 100 мкг соединения на килограмм.

Соединение с Формулой [I] или его фармацевтически приемлемая соль могут быть получены с использованием следующих стадий, включающих:

(1) преобразование соединения с Формулой [ II ]:

где CO₂R¹ является этерифицированной карбоксильной группой, а другие символы являются такими же, как определено выше, в соединение с Формулой [Ia]:

где символы являются такими же, как определено выше,

(2) преобразование этерифицированной карбоксильной группы соединения [Iа] в карбоксильную группу (при необходимости), и

(3) преобразование результирующего соединения в его фармацевтически приемлемую соль, если это желательно.

Стадия 1: Преобразование соединения [I ] в соединение [Ia] можно выполнить посредством одного из способов А-Г, описанных ниже.

Стадия 2: Преобразование этерифицированной карбоксильной группы CO₂R¹ в карбоксильную группу может быть выполнено стандартным способом, который выбирают согласно типу этерифицированной карбоксильной группы, которую необходимо преобразовать, например гидролиз с использованием основания (например, гидроокиси щелочного металла, такой как LiOH или NaOH) или кислоты (например, HCl), обработка кислотой (например, ТФУК) и тому подобные способы.

Стадия 3: Преобразование результирующего соединения [I] в его фармацевтически приемлемую соль можно выполнить стандартным способом с использованием основания (например, неорганического основания, такого как NaOH, органического основания, такого как триэтиламин, или основной аминокислоты, такой как лизин) или кислоты (например, неорганической кислоты, такой как НСl, НNО₃ и Н₂SO₄, органической кислоты, такой как уксусная кислота и малеиновая кислота, или кислотной аминокислоты, такой как аспарагиновая кислота и глютаминовая кислота).

Преобразование соединения [I] в соединение [Iа] может быть выполнено одним из следующих способов (Способы А-Г):

Способ А:

Соединение [Iа], в котором Q является -CH₂-группой, может быть получено посредством:

(1) окисления соединения [II] с получением соединения с Формулой [III]:

где символы являются такими же, как определенные выше, и

(2) восстановительной конденсации соединения [III] с соединением с Формулой [IV]:

Y-OH [IV]

где Y является таким же, как определено выше.

Стадия 1: Реакция окисления может быть выполнена стандартным способом с использованием окислителя с основанием или без основания в подходящем растворителе.

Окислитель может быть выбран из стандартных реагентов-окислителей, таких как МnO₂, SO₃·пиридин, KMnO₄, PCC, PDC и тому подобные.

Основание может быть выбрано из стандартных органических оснований, таких как триалкиламины (например, триэтиламин (Et₃N), DIEA).

Растворитель может быть выбран из любых растворителей, которые не нарушают реакцию окисления, например из галогенометанов (например, CH₂Cl₂, СНСl₃), ароматических углеводородов (например, бензол, толуол), ДМСО, H₂O или их смесей.

Реакция может быть проведена при температурах от -50° С до 50° С, предпочтительно при комнатной температуре.

Стадия 2: Конденсация соединения [III] с соединением [IV] может быть выполнена в присутствии восстановителя и дегидратирующего реагента в растворителе или без растворителя.

Восстановитель может быть выбран из стандартных восстановителей, таких как триалкилсиланы (например, триэтилсилан) и подобных.

Дегидратирующие реагенты включают серную кислоту, трифторуксусную кислоту и тому подобные.

Растворитель может быть выбран из любых растворителей, не мешающих реакции, например, из эфиров (например, диоксан, тетрагидрофуран), ароматических углеводородов (например, бензол, толуол), галогенометанов (например, CH₂Cl₂ и СНСl₃) или их смесей.

Реакция может быть проведена при температурах от -50° С до 50° С, предпочтительно от 0° С до комнатной температуры.

Способ Б:

Соединение [Iа] может быть получено путем:

(1) преобразования соединения [II] в соединение с Формулой [V]:

где Z является удаляемой группой, а остальные символы являются такими же, как определено выше, и

(2) реакции соединения [V] с соединением [IV].

В качестве удаляемой группы Z предпочтительно может быть использован атом галогена (например, атом хлора, атом брома и атом йода), алкансульфонилоксигруппа (например, метансульфонильная группа) или арилсульфонилоксигруппа (например, бензолсульфонильная группа и р-толуолсульфонильная группа).

Стадия 1: Преобразование соединения [II] в соединение [V] может быть произведено посредством галогенирования или сульфонирования соединения [II].

Реакцию галогенирования можно выполнить стандартным способом с использованием галогенирующего реагента с основанием или без основания в подходящем растворителе.

Галогенирующий реагент может быть выбран из обычных галогенирующих реагентов, таких как тригалоиды фосфора (например, трехбромистый фосфор, треххлористый фосфор) и комбинаций тетрагалоидметанов (например, СВr₄) и трифенилфосфина.

Основание может быть выбрано из стандартных неорганических оснований, таких как карбонаты щелочных металлов (например, Na₂CO₃, К₂СО₃), бикарбонаты щелочных металлов (например, NaHCO₃, КНСО₃) и тому подобные.

Растворитель может быть выбран из любых растворителей, которые не нарушают реакцию конденсации, например из галогенометанов (например, СН₂Сl₂, СНСl₃), эфиров (например, диоксан, диэтиловый эфир, ТГФ), ДМФ, ДМСО или их смесей.

Реакция может быть проведена при температурах от -50° С до 50° С, предпочтительно при температурах от 0° С до комнатной температуры.

Реакцию сульфонирования можно произвести стандартным способом с использованием сульфонирующего реагента с основанием в подходящем растворителе.

Сульфонирующий реагент может быть выбран из алкансульфонилгалоидов или арилсульфонилгалоидов, таких как хлористый метансульфонил, хлористый бензолсульфонил, хлористый р-толуолсульфонил и тому подобные.

Основание может быть выбрано из органических оснований (например, триалкиламинов, таких как триэтиламин (Et₃N), DIEA, DBU и 4-метилморфолин, и пиридинов), карбонатов щелочных металлов (например, Nа₂СО₃, К₂СО₃), бикарбонатов щелочных металлов (например, NаНСО₃, КНСО₃), гидроокисей щелочных металлов (например, NaOH, КОН), гидроокисей щелочноземельных металлов (например, Ва(ОН)₂) и тому подобных.

Растворитель может быть выбран из любых рас