Рекомбинантная клетка-хозяин (варианты) и клон вас

Рекомбинантная клетка-хозяин (варианты) и клон вас

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение в целом относится к поликетидам и генам, участвующим в их синтезе. В частности настоящее изобретение относится к выделению и получению характеристик новой поликетид-синтазы и нерибосомных генов кислота-аминокислота-лигаз из Sorangium cellulosum, которые необходимы для биосинтеза эпотилонов А и В.

Предпосылки создания изобретения

Поликетиды представляют собой соединения, которые синтезируются из элементарных звеньев, содержащих два атома углерода, в которых β-углерод всегда несет кетогрупу, поэтому их называют поликетиды. К этим соединениям относятся многочисленные важные антибиотики, иммунодепрессанты, противораковые химиотерапевтические агенты и другие соединения, обладающие широким спектром биологических активностей. Чрезвычайно большое структурное разнообразие обусловлено различием длин поликетидных цепей, различием встроенных боковых цепей (либо в начале процесса синтеза в виде части элементарных звеньев, содержащих два атома углерода, либо после формирования каркаса поликетона) и стереохимическим строением таких групп. Кетогруппы также могут быть восстановлены до гидроксилов, еноилов или полностью удалены. Каждый цикл добавления двух атомов углерода осуществляется с помощью комплекса ферментов, называемых поликетид-синтазой (PKS), с помощью процесса, аналогичного биосинтезу жирных кислот.

Гены биосинтеза, обеспечивающие увеличение количества поликетидов, были выделены и секвенированы. Например, см. патенты US 5639949, 5693774 и 5716849, все они включены в настоящее описание в виде ссылки, в которых описаны гены биосинтеза сорафена. См., также публикацию Schupp и др., FEMS Microbiology Letters 159: 201-207 (1998) и WO 98/07868, где описаны гены биосинтеза рифамицина, и патент US 5876991, в котором описаны гены биосинтеза тилактона, все они включены в настоящее описание в виде ссылки. Кодируемые протеины обычно подразделяют на два типа: тип I и тип II. Протеины типа I являются полифункциональными с несколькими каталитическими доменами, осуществляющими различные ферментативные стадии, которые ковалентно связаны друг с другом (например, PKS эритромицина, сорафена, рифамицина и авермектина (MacNeil и др., в: Industrial Microorganisms: Basic and Applied Molecular Genetics, (ред. Baltz и др.), American Society for Microbiology, Washington D.С., стр.245-256 (1993)); в то время как протеины типа II являются монофункциональными (Hutchinson и др., в: Industrial Microorganisms: Basic and Applied Molecular Genetics, (ред. Baltz и др.), American Society for Microbiology, Washington D.С., стр.203-216 (1993)).

Для простых поликетидов, таких как актинородин (который продуцируется Streptomyces coelicolor), осуществляют несколько циклов добавлений двух атомов углерода с повторным использованием PKS-ферментов, кодируемых одним набором PKS-генов. В противоположность этому синтез более сложных соединений, таких как эритромицин и сорафен, включает PKS-ферменты, которые организованы в модули, причем каждый модуль осуществляет одни цикл добавления двух атомов углерода (обзор литературных данных см. у Hopwood и др., в: Industrial Microorganisms: Basic and Applied Molecular Genetics, (ред. Baltz и др.), American Society for Microbiology, Washington D. С., с.267-275 (1993)).

Сложные поликетиды и вторичные метаболиты обычно могут содержать подструктуры, происходящие из аминокислот, а не из простых карбоновых кислот. Включение этих элементарных звеньев осуществляют с помощью нерибосомных кислота-аминокислота-лигаз (NRPSs). NRPSs представляют собой полиферменты, организованные в модули. Каждый модуль ответствен за добавление (и при необходимости за дополнительное процессирование) одного элементарного аминокислотного звена. NRPSs активируют аминокислоты путем образования аминоациладенилатов и захвата ацилированных аминокислот по тиольным группам фосфопантетеинильных простатических групп доменов пептидильного протеина-носителя. Кроме того, NRPSs модифицируют аминокислоты с помощью эпимеризации, N-метилирования или при необходимости циклизации и катализируют образование пептидных связей между связанными с ферментом аминокислотами. NRPSs ответственны за биосинтез пептидных вторичных метаболитов, таких как циклоспорин, за образование терминирующих звеньев поликетидной цепи, например, в рапамицине, или могут формировать смешанные системы типа PKS, например, в пути биосинтеза йерсиниабактина.

Эпотилоны А и В представляют собой 16-членные макроциклические поликетиды с являющимся производным ацилцистеина стартовым звеном, которые продуцируются штаммом бактерии Sorangium cellulosum So ce90 (Gerth и др., J. Antibiotics 49: 560-563 (1996), публикация включена в настоящее описание в виде ссылки). Строение эпотилона А и В, где R обозначает водород (эпотилон А) или метил (эпотилон В), представлено формулой

Эпотилоны имеют узкий спектр противогрибковой активности, и их основной особенностью является высокая цитотоксичность в отношении культур клеток животных (см., Höfle и др., DE 4138042 (1993), включен в настоящее описание в виде ссылки). Чрезвычайно важно, что эпотилоны имитируют биологическую активность таксола, как in vivo, так и в культуре клеток (Bollag и др., Cancer Research 55: 2325-2333 (1995), публикация включена в настоящее описание в виде ссылки). Таксол и таксотер, которые стабилизируют клеточные микротрубки, представляют собой противораковые химиотерапевтические агенты, обладающие высокой активностью в отношении различных твердых опухолей человека (Rowinsky и др., J. Natl. Cancer Inst. 83: 1778-1781 (1991)). Конкурентные исследования позволили установить, что эпотилоны действуют в качестве конкурентных ингибиторов связывания таксола с микротрубками, что согласуется с представлением о том, что они обладают таким же сайтом связывания микротрубок и таким же сродством к микротрубкам, что и таксол. Однако эпотилоны имеют значительное преимущество по сравнению с таксолом, состоящее в том, что эпотилоны существенно в меньшей степени, чем таксол, теряют эффективность в отношении линии клеток, обладающей множественной устойчивостью к лекарствам (Bollag и др. (1995)). Кроме того, эпотилоны в существенно меньшей степени по сравнению с таксолом экспортируются из клеток с Р-гликопротеином (Gerth и др. (1996)). Более того, было синтезировано несколько аналогов эпотилона, которые обладают более высокой цитотоксичностью по сравнению с эпотилоном А или эпотилоном В, что доказано по их более высокой способности индуцировать полимеризацию и стабилизацию микротрубок (WO 98/25929, документ включен в настоящее описание в виде ссылки).

Несмотря на доказанную перспективность эпотилонов в качестве противораковых агентов, их коммерческую доступность ограничивают существующие в настоящее время проблемы, связанные с получением этих соединений. Соединения являются слишком сложными для промышленного химического синтеза, и поэтому их необходимо получать с помощью ферментации. Методы генетической манипуляции с миксобактериями, такими как Sorangium cellulosum, описаны в патенте US 5686295, включенном в настоящее описание в виде ссылки. Однако Sorangium cellulosum, как известно, обладает слабой способностью к ферментации и в результате продуцирует низкие уровни эпотилонов. Рекомбинантное получение эпотилонов в гетерологичных хозяевах, которые обладают более высокой способностью к ферментации, может решить существующие в настоящее время проблемы, связанные с производством эпотилонов. Однако гены, которые кодируют полипептиды, ответственные за биосинтез эпотилона, к настоящему времени не выявлены. Кроме того, штамм, который продуцирует эпотилоны, т.е. So ce90, также продуцирует по меньшей мере один дополнительный поликетид, спирангиен, который, как ожидается, сильно затрудняет выделение генов, непосредственно участвующих в биосинтезе эпотилонов.

Таким образом, в свете вышеизложенного одним из объектов настоящего изобретения является выделение генов, которые участвуют в синтезе эпотилонов, прежде всего генов, которые участвуют в синтезе эпотилонов А и В в миксобактериях группы Sorangium/Polyangium, т.е. в штамме Sorangium cellulosum So ce90. Еще одним объектом изобретения является способ рекомбинантного получения эпотилонов с целью их применения в противораковых композициях.

Краткое изложение сущности изобретения

Для осуществления вышеуказанных и других объектов изобретения при создании изобретения неожиданно удалось преодолеть указанные выше трудности и впервые получить молекулу нуклеиновой кислоты, включающую нуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере один полипептид, участвующий в биосинтезе эпотилона. Согласно предпочтительному варианту осуществления нуклеотидную последовательность выделяют из видов, принадлежащих к Myxobacteria, наиболее предпочтительно Sorangium cellulosum.

Согласно другому предпочтительному варианту осуществления настоящее изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, которая включает нуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере один полипептид, участвующий в биосинтезе эпотилона, где этот полипептид содержит аминокислотную последовательность, практически аналогичную аминокислотной последовательности, выбранной из ряда, включающего: SEQ ID NO:2, аминокислоты 11-437 SEQ ID NO:2, аминокислоты 543-864 SEQ ID NO:2, аминокислоты 974-1273 SEQ ID NO:2, аминокислоты 1314-1385 SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, аминокислоты 72-81 SEQ ID NO:3, аминокислоты 118-125 SEQ ID NO:3, аминокислоты 199-212 SEQ ID NO:3, аминокислоты 353-363 SEQ ID NO:3, аминокислоты 549-565 SEQ ID NO:3, аминокислоты 588-603 SEQ ID NO:3, аминокислоты 669-684 SEQ ID NO:3, аминокислоты 815-821 SEQ ID NO:3, аминокислоты 868-892 SEQ ID NO:3, аминокислоты 903-912 SEQ ID NO:3, аминокислоты 918-940 SEQ ID NO:3, аминокислоты 1268-1274 SEQ ID NO:3, аминокислоты 1285-1297 SEQ ID NO:3, аминокислоты 973-1256 SEQ ID NO:3, аминокислоты 1344-1351 SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, аминокислоты 7-432 SEQ ID NO:4, аминокислоты 539-859 SEQ ID NO:4, аминокислоты 869-1037 SEQ ID NO:4, аминокислоты 1439-1684 SEQ ID NO:4, аминокислоты 1722-1792 SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, аминокислоты 39-457 SEQ ID NO:5, аминокислоты 563-884 SEQ ID NO:5, аминокислоты 1147-1399 SEQ ID NO:5, аминокислоты 1434-1506 SEQ ID NO:5, аминокислоты 1524-1950 SEQ ID NO:5, аминокислоты 2056-2377 SEQ ID NO:5, аминокислоты 2645-2895 SEQ ID NO:5, аминокислоты 2932-3005 SEQ ID NO:5, аминокислоты 3024-3449 SEQ ID NO:5, аминокислоты 3555-3876 SEQ ID NO:5, аминокислоты 3886-4048 SEQ ID NO:5, аминокислоты 4433-4719 SEQ ID NO:5, аминокислоты 4729-4974 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5010-5082 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5103-5525 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5631-5951 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5964-6132 SEQ ID NO:5, аминокислоты 6542-6837 SEQ ID NO:5, аминокислоты 6857-7101 SEQ ID NO:5, аминокислоты 7140-7211 SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, аминокислоты 35-454 SEQ ID NO:6, аминокислоты 561-881 SEQ ID NO:6, аминокислоты 1143-1393 SEQ ID NO:6, аминокислоты 1430-1503 SEQ ID NO:6, аминокислоты 1522-1946 SEQ ID NO: 6, аминокислоты 2053-2373 SEQ ID NO:6, аминокислоты 2383-2551 SEQ ID NO:6, аминокислоты 2671-3045 SEQ ID NO:6, аминокислоты 3392-3636 SEQ ID NO:6, аминокислоты 3673-3745 SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, аминокислоты 32-450 SEQ ID NO:7, аминокислоты 556-877 SEQ ID NO:7, аминокислоты 887-1051 SEQ ID NO:7, аминокислоты 1478-1790 SEQ ID NO:7, аминокислоты 1810-2055 SEQ ID NO:7, аминокислоты 2093-2164 SEQ ID NO:7, аминокислоты 2165-2439 SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11 и SEQ ID NO:22.

Согласно наиболее предпочтительному варианту осуществления настоящее изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, которая включает нуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере один полипептид, участвующий в биосинтезе эпотилона, где этот полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из ряда, включающего: SEQ ID NO:2, аминокислоты 11-437 SEQ ID NO:2, аминокислоты 543-864 SEQ ID NO:2, аминокислоты 974-1273 SEQ ID NO:2, аминокислоты 1314-1385 SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, аминокислоты 72-81 SEQ ID NO:3, аминокислоты 118-125 SEQ ID NO:3, аминокислоты 199-212 SEQ ID NO:3, аминокислоты 353-363 SEQ ID NO:3, аминокислоты 549-565 SEQ ID NO:3, аминокислоты 588-603 SEQ ID NO:3, аминокислоты 669-684 SEQ ID NO:3, аминокислоты 815-821 SEQ ID NO:3, аминокислоты 868-892 SEQ ID NO:3, аминокислоты 903-912 SEQ ID NO:3, аминокислоты 918-940 SEQ ID NO:3, аминокислоты 1268-1274 SEQ ID NO:3, аминокислоты 1285-1297 SEQ ID NO:3, аминокислоты 973-1256 SEQ ID NO:3, аминокислоты 1344-1351 SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, аминокислоты 7-432 SEQ ID NO:4, аминокислоты 539-859 SEQ ID NO:4, аминокислоты 869-1037 SEQ ID NO:4, аминокислоты 1439-1684 SEQ ID NO:4, аминокислоты 1722-1792 SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, аминокислоты 39-457 SEQ ID NO:5, аминокислоты 563-884 SEQ ID NO:5, аминокислоты 1147-1399 SEQ ID NO:5, аминокислоты 1434-1506 SEQ ID NO:5, аминокислоты 1524-1950 SEQ ID NO:5, аминокислоты 2056-2377 SEQ ID NO:5, аминокислоты 2645-2895 SEQ ID NO:5, аминокислоты 2932-3005 SEQ ID NO:5, аминокислоты 3024-3449 SEQ ID NO:5, аминокислоты 3555-3876 SEQ ID NO:5, аминокислоты 3886-4048 SEQ ID NO:5, аминокислоты 4433-4719 SEQ ID NO:5, аминокислоты 4729-4974 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5010-5082 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5103-5525 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5631-5951 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5964-6132 SEQ ID NO:5, аминокислоты 6542-6837 SEQ ID NO:5, аминокислоты 6857-7101 SEQ ID NO:5, аминокислоты 7140-7211 SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, аминокислоты 35-454 SEQ ID NO:6, аминокислоты 561-881 SEQ ID NO:6, аминокислоты 1143-1393 SEQ ID NO:6, аминокислоты 1430-1503 SEQ ID NO:6, аминокислоты 1522-1946 SEQ ID NO: 6, аминокислоты 2053-2373 SEQ ID NO:6, аминокислоты 2383-2551 SEQ ID NO:6, аминокислоты 2671-3045 SEQ ID NO:6, аминокислоты 3392-3636 SEQ ID NO:6, аминокислоты 3673-3745 SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, аминокислоты 32-450 SEQ ID NO:7, аминокислоты 556-877 SEQ ID NO:7, аминокислоты 887-1051 SEQ ID NO:7, аминокислоты 1478-1790 SEQ ID NO:7, аминокислоты 1810-2055 SEQ ID NO:7, аминокислоты 2093-2164 SEQ ID NO:7, аминокислоты 2165-2439 SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11 и SEQ ID NO:22.

Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящее изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, которая включает нуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере один полипептид, участвующий в биосинтезе эпотилона, где эта нуклеотидная последовательность практически аналогична нуклеотидной последовательности, выбранной из ряда, включающего: комплемент нуклеотидов 1900-3171 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 3415-5556 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 7610-11875 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 7643-8920 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 9236-10201 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 10529-11428 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 11549-11764 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 11872-16104 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 12085-12114 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 12223-12246 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 12466-12507 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 12928-12960 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 13516-13566 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 13633-13680 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 13876-13923 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 14313-14334 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 14473-14547 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 14578-14607 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 14623-14692 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 15673-15693 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 15724-15762 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 14788-15639 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 15901-15924 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 16251-21749 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 16269-17546 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 17865-18827 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 18855-19361 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 20565-21302 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 21414-21626 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 21746-43519 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 21860-23116 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 23431-24397 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 25184-25942 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 26045-26263 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 26318-27595 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 27911-28876 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 29678-30429 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 30539-30759 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 30815-32092 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 32408-33373 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 33401-33889 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 35042-35902 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 35930-36667 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 36773-36991 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 37052-38320 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 38636-39598 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 39635-40141 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 41369-42256 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 42314-43048 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 43163-43378 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 43524-54920 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 43626-44885 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 45204-46166 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 46950-47702 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 47811-48032 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 48087-49361 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 49680-50642 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 50670-51176 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 51534-52657 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 53697-54431 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 54540-54758 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 54935-62254 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 55028-56284 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 56600-57565 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 57593-58087 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 59366-60304 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 60362-61099 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 61211-61426 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 61427-62254 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 62369-63628 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 67334-68251 SEQ ID NO:1 и нуклеотидов 1-68750 SEQ ID NO:1.

Согласно особенно предпочтительному варианту осуществления настоящее изобретение относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая включает нуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере один полипептид, участвующий в биосинтезе эпотилона, где нуклеотидную последовательность выбирают из ряда, включающего: комплемент нуклеотидов 1900-3171 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 3415-5556 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 7610-11875 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 7643-8920 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 9236-10201 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 10529-11428 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 11549-11764 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 11872-16104 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 12085-12114 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 12223-12246 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 12466-12507 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 12928-12960 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 13516-13566 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 13633-13680 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 13876-13923 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 14313-14334 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 14473-14547 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 14578-14607 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 14623-14692 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 15673-15693 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 15724-15762 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 14788-15639 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 15901-15924 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 16251-21749 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 16269-17546 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 17865-18827 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 18855-19361 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 20565-21302 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 21414-21626 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 21746-43519 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 21860-23116 of SEQ ID NO:1, нуклеотидов 23431-24397 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 25184-25942 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 26045-26263 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 26318-27595 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 27911-28876 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 29678-30429 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 30539-30759 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 30815-32092 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 32408-33373 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 33401-33889 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 35042-35902 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 35930-36667 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 36773-36991 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 37052-38320 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 38636-39598 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 39635-40141 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 41369-42256 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 42314-43048 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 43163-43378 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 43524-54920 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 43626-44885 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 45204-46166 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 46950-47702 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 47811-48032 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 48087-49361 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 49680-50642 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 50670-51176 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 51534-52657 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 53697-54431 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 54540-54758 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 54935-62254 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 55028-56284 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 56600-57565 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 57593-58087 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 59366-60304 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 60362-61099 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 61211-61426 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 61427-62254 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 62369-63628 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 67334-68251 SEQ ID NO:1 и нуклеотидов 1-68750 SEQ ID NO:1.

Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящее изобретение относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, которая включает нуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере один полипептид, участвующий в биосинтезе эпотилона, где эта нуклеотидная последовательность включает область нуклеотидной последовательности, состоящую из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований, идентичную области нуклеотидной последовательности, состоящей из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований нуклеотидной последовательности, выбранной из ряда, включающего: комплемент нуклеотидов 1900-3171 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 3415-5556 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 7610-11875 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 7643-8920 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 9236-10201 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 10529-11428 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 11549-11764 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 11872-16104 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 12085-12114 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 12223-12246 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 12466-12507 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 12928-12960 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 13516-13566 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 13633-13680 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 13876-13923 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 14313-14334 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 14473-14547 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 14578-14607 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 14623-14692 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 15673-15693 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 15724-15762 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 14788-15639 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 15901-15924 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 16251-21749 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 16269-17546 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 17865-18827 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 18855-19361 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 20565-21302 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 21414-21626 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 21746-43519 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 21860-23116 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 23431-24397 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 25184-25942 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 26045-26263 of SEQ ID NO:1, нуклеотидов 26318-27595 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 27911-28876 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 29678-30429 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 30539-30759 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 30815-32092 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 32408-33373 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 33401-33889 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 35042-35902 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 35930-36667 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 36773-36991 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 37052-38320 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 38636-39598 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 39635-40141 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 41369-42256 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 42314-43048 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 43163-43378 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 43524-54920 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 43626-44885 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 45204-46166 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 46950-47702 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 47811-48032 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 48087-49361 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 49680-50642 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 50670-51176 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 51534-52657 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 53697-54431 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 54540-54758 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 54935-62254 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 55028-56284 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 56600-57565 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 57593-58087 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 59366-60304 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 60362-61099 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 61211-61426 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 61427-62254 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 62369-63628 SEQ ID NO:1, нуклеотидов 67334-68251 SEQ ID NO:1 и нуклеотидов 1-68750 SEQ ID NO:1.

Настоящее изобретение также относится к химерному гену, включающему гетерологичную промоторную последовательность, функционально связанную с молекулой нуклеиновой кислоты по изобретению. Кроме того, настоящее изобретение относится к рекомбинантному вектору, включающему такой химерный ген, где вектор обладает способностью стабильно трансформировать клетку-хозяина. Настоящее изобретение также относится к рекомбинантной клетке-хозяину, включающей такой химерный ген, где клетка-хозяин обладает способностью экспрессировать нуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере один полипептид, необходимый для биосинтеза эпотилона. Согласно предпочтительному варианту рекомбинантная клетка-хозяин представляет собой бактерию, принадлежащую к отряду Actinomycetales, и согласно более предпочтительному варианту рекомбинантная клетка-хозяин представляет собой штамм Streptomyces. Согласно другому предпочтительному варианту рекомбинантная клетка-хозяин представляет собой любую другую бактерию, способную к ферментации, такую как псевдомонада или Е.coli. Кроме того, настоящее изобретение относится к клону Вас (бактериальная искусственная хромосома), включающему молекулу нуклеиновой кислоты по изобретению, предпочтительно к Вас-клону рЕРO15.

Другим объектом настоящего изобретения является выделенная молекула нуклеиновой кислоты, включающая нуклеотидную последовательность, которая кодирует домен эпотилон-синтазы.

Согласно одному из вариантов осуществления домен эпотилон-синтазы представляет собой домен β-кетоацилсинтазы (KS), содержащий аминокислотную последовательность, практически аналогичную аминокислотной последовательности, выбранной из ряда, включающего: аминокислоты 11-437 SEQ ID NO:2, аминокислоты 7-432 SEQ ID NO:4, аминокислоты 39-457 SEQ ID NO:5, аминокислоты 1524-1950 SEQ ID NO:5, аминокислоты 3024-3449 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5103-5525 SEQ ID NO:5, аминокислоты 35-454 SEQ ID NO:6, аминокислоты 1522-1946 SEQ ID NO: 6 и аминокислоты 32-450 SEQ ID NO:7. Согласно этому варианту осуществления KS-домен предпочтительно содержит аминокислотную последовательность, выбранную из ряда, включающего: аминокислоты 11-437 SEQ ID NO:2, аминокислоты 7-432 SEQ ID NO:4, аминокислоты 39-457 SEQ ID NO:5, аминокислоты 1524-1950 SEQ ID NO:5, аминокислоты 3024-3449 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5103-5525 SEQ ID NO:5, аминокислоты 35-454 SEQ ID NO:6, аминокислоты 1522-1946 SEQ ID NO: 6 и аминокислоты 32-450 SEQ ID NO:7. Кроме того, согласно этому варианту осуществления указанная нуклеотидная последовательность предпочтительно практически аналогична нуклеотидной последовательности, выбранной из ряда, включающего: нуклеотиды 7643-8920 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 16269-17546 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 21860-23116 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 26318-27595 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 30815-32092 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 37052-38320 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 43626-44885 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 48087-49361 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 55028-56284 SEQ ID NO:1. Согласно этому варианту осуществления эта нуклеотидная последовательность более предпочтительно содержит область нуклеотидной последовательности, состоящую из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований, идентичную области нуклеотидной последовательности, состоящей из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований нуклеотидной последовательности, выбранной из ряда, включающего: нуклеотиды 7643-8920 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 16269-17546 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 21860-23116 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 26318-27595 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 30815-32092 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 37052-38320 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 43626-44885 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 48087-49361 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 55028-56284 SEQ ID NO:1. Кроме того, согласно этому варианту осуществления эту нуклеотидную последовательность наиболее предпочтительно выбирают из ряда, включающего: нуклеотиды 7643-8920 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 16269-17546 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 21860-23116 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 26318-27595 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 30815-32092 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 37052-38320 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 43626-44885 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 48087-49361 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 55028-56284 SEQ ID NO:1.

Согласно еще одному варианту осуществления домен эпотилон-синтазы представляет собой домен ацилтрансферазы (AT), содержащий аминокислотную последовательность, практически аналогичную аминокислотной последовательности, выбранной из ряда, включающего; аминокислоты 543-864 SEQ ID NO:2, аминокислоты 539-859 SEQ ID NO:4, аминокислоты 563-884 SEQ ID NO:5, аминокислоты 2056-2377 SEQ ID NO:5, аминокислоты 3555-3876 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5631-5951 SEQ ID NO:5, аминокислоты 561-881 SEQ ID NO:6, аминокислоты 2053-2373 SEQ ID NO:6 и аминокислоты 556-877 SEQ ID NO:7. Согласно этому варианту осуществления этот АТ-домен предпочтительно содержит аминокислотную последовательность, выбранную из ряда, включающего: аминокислоты 543-864 SEQ ID NO:2, аминокислоты 539-859 SEQ ID NO:4, аминокислоты 563-884 SEQ ID NO:5, аминокислоты 2056-2377 SEQ ID NO:5, аминокислоты 3555-3876 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5631-5951 SEQ ID NO:5, аминокислоты 561-881 SEQ ID NO:6, аминокислоты 2053-2373 SEQ ID NO:6 и аминокислоты 556-877 SEQ ID NO:7. Кроме того, согласно этому варианту осуществления указанная нуклеотидная последовательность практически аналогична нуклеотидной последовательности, выбранной из ряда, включающего: нуклеотиды 9236-10201 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 17865-18827 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 23431-24397 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 27911-28876 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 32408-33373 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 38636-39598 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 45204-46166 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 49680-50642 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 56600-57565 SEQ ID NO:1. Согласно этому варианту осуществления эта нуклеотидная последовательность более предпочтительно содержит область нуклеотидной последовательности, состоящую из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований, идентичную области нуклеотидной последовательности, состоящей из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований нуклеотидной последовательности, выбранной из ряда, включающего: нуклеотиды 9236-10201 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 17865-18827 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 23431-24397 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 27911-28876 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 32408-33373 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 38636-39598 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 45204-46166 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 49680-50642 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 56600-57565 SEQ ID NO:1.

Кроме того, согласно этому варианту осуществления эту нуклеотидную последовательность наиболее предпочтительно выбирают из ряда, включающего: нуклеотиды 9236-10201 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 17865-18827 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 23431-24397 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 27911-28876 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 32408-33373 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 38636-39598 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 45204-46166 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 49680-50642 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 56600-57565 SEQ ID NO:1.

Согласно еще одному варианту осуществления домен эпотилон-синтазы представляет собой домен еноилредуктазы (ER), содержащий аминокислотную последовательность, практически аналогичную аминокислотной последовательности, выбранной из ряда, включающего: аминокислоты 974-1273 SEQ ID NO:2, аминокислоты 4433-4719 SEQ ID NO:5, аминокислоты 6542-6837 SEQ ID NO:5 и аминокислоты 1478-1790 SEQ ID NO:7. Согласно этому варианту осуществления этот ER-домен предпочтительно содержит аминокислотную последовательность, выбранную из ряда, включающего: аминокислоты 974-1273 SEQ ID NO:2, аминокислоты 4433-4719 SEQ ID NO:5, аминокислоты 6542-6837 SEQ ID NO:5 и аминокислоты 1478-1790 SEQ ID NO:7. Кроме того, согласно этому варианту осуществления указанная нуклеотидная последовательность предпочтительно практически аналогична нуклеотидной последовательности, выбранной из ряда, включающего: нуклеотиды 10529-11428 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 35042-35902 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 41369-42256 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 59366-60304 SEQ ID NO:1. Согласно этому варианту осуществления эта нуклеотидная последовательность более предпочтительно содержит область нуклеотидной последовательности, состоящую из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований, идентичную области нуклеотидной последовательности, состоящей из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований нуклеотидной последовательности, выбранной из ряда, включающего: нуклеотиды 10529-11428 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 35042-35902 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 41369-42256 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 59366-60304 SEQ ID NO:1. Кроме того, согласно этому варианту осуществления эту нуклеотидную последовательность наиболее предпочтительно выбирают из ряда, включающего: нуклеотиды 10529-11428 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 35042-35902 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 41369-42256 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 59366-60304 SEQ ID NO:1.

Согласно еще одному варианту осуществления домен эпотилон-синтазы представляет собой домен протеина-носителя ацила (АСР), содержащий аминокислотную последовательность, практически аналогичную аминокислотной последовательности, выбранной из ряда, включающего: аминокислоты 1314-1385 SEQ ID NO:2, аминокислоты 1722-1792 SEQ ID NO:4, аминокислоты 1434-1506 SEQ ID NO:5, аминокислоты 2932-3005 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5010-5082 SEQ ID NO:5, аминокислоты 7140-7211 SEQ ID NO:5, аминокислоты 1430-1503 SEQ ID NO:6. аминокислоты 3673-3745 SEQ ID NO:6 и аминокислоты 2093-2164 SEQ ID NO:7. Согласно этому варианту осуществления этот АСР-домен предпочтительно содержит аминокислотную последовательность, выбранную из ряда, включающего: аминокислоты 1314-1385 SEQ ID NO:2, аминокислоты 1722-1792 SEQ ID NO:4, аминокислоты 1434-1506 SEQ ID NO:5, аминокислоты 2932-3005 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5010-5082 SEQ ID NO:5, аминокислоты 7140-7211 SEQ ID NO:5, аминокислоты 1430-1503 SEQ ID NO:6, аминокислоты 3673-3745 SEQ ID NO:6 и аминокислоты 2093-2164 SEQ ID NO:7. Кроме того, согласно этому варианту осуществления указанная нуклеотидная последовательность практически аналогична нуклеотидной последовательности, выбранной из ряда, включающего: нуклеотиды 11549-11764 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 21414- 21626 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 26045-26263 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 30539-30759 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 36773-36991 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 43163-43378 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 47811-48032 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 54540-54758 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 61211-61426 SEQ ID NO:1. Согласно этому варианту осуществления эта нуклеотидная последовательность более предпочтительно содержит область нуклеотидной последовательности, состоящую из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований, идентичную области нуклеотидной последовательности, состоящей из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований нуклеотидной последовательности, выбранной из ряда, включающего: нуклеотиды 11549-11764 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 21414-21626 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 26045-26263 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 30539-30759 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 36773-36991 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 43163-43378 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 47811-48032 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 54540-54758 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 61211-61426 SEQ ID NO:1. Кроме того, согласно этому варианту осуществления эту нуклеотидную последовательность наиболее предпочтительно выбирают из ряда, включающего: нуклеотиды 11549-11764 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 21414-21626 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 26045-26263 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 30539-30759 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 36773-36991 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 43163-43378 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 47811-48032 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 54540-54758 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 61211-61426 SEQ ID NO:1.

Согласно еще одному варианту осуществления домен эпотилон-синтазы представляет собой домен дегидратазы (DH), содержащий аминокислотную последовательность, практически аналогичную аминокислотной последовательности, выбранной из ряда, включающего: аминокислоты 869-1037 SEQ ID NO:4, аминокислоты 3886-4048 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5964-6132 SEQ ID NO:5, аминокислоты 2383-2551 SEQ ID NO:6 и аминокислоты 887-1051 SEQ ID NO:7. Согласно этому варианту осуществления этот DH-домен предпочтительно содержит аминокислотную последовательность, выбранную из ряда, включающего: аминокислоты 869-1037 SEQ ID NO:4, аминокислоты 3886-4048 SEQ ID NO:5, аминокислоты 5964-6132 SEQ ID NO:5, аминокислоты 2383-2551 SEQ ID NO:6 и аминокислоты 887-1051 SEQ ID NO:7. Кроме того, согласно этому варианту осуществления указанная нуклеотидная последовательность предпочтительно практически аналогична нуклеотидной последовательности, выбранной из ряда, включающего: нуклеотиды 18855-19361 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 33401-33889 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 39635-40141 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 50670-51176 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 57593-58087 SEQ ID NO:1. Согласно этому варианту осуществления эта нуклеотидная последовательность более предпочтительно содержит область нуклеотидной последовательности, состоящую из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований, идентичную области нуклеотидной последовательности, состоящей из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований нуклеотидной последовательности, выбранной из ряда, включающего: нуклеотиды 18855-19361 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 33401-33889 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 39635-40141 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 50670-51176 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 57593-58087 SEQ ID NO:1. Кроме того, согласно этому варианту осуществления эту нуклеотидную последовательность наиболее предпочтительно выбирают из ряда, включающего: нуклеотиды 18855-19361 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 33401-33889 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 39635-40141 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 50670-51176 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 57593-58087 SEQ ID NO:1.

Согласно еще одному варианту осуществления домен эпотилон-синтазы представляет собой домен β-кеторедуктазы (KR), содержащий аминокислотную последовательность, практически аналогичную аминокислотной последовательности, выбранной из ряда, включающего: аминокислоты 1439-1684 SEQ ID NO:4, аминокислоты 1147-1399 SEQ ID NO:5, аминокислоты 2645-2895 SEQ ID NO:5, аминокислоты 4729-4974 SEQ ID NO:5, аминокислоты 6857-7101 SEQ ID NO:5, аминокислоты 1143-1393 SEQ ID NO:6, аминокислоты 3392-3636 SEQ ID NO:6 и аминокислоты 1810-2055 SEQ ID NO:7. Согласно этому варианту осуществления KR-домен предпочтительно содержит аминокислотную последовательность, выбранную из ряда, включающего: аминокислоты 1439-1684 SEQ ID NO:4, аминокислоты 1147-1399 SEQ ID NO:5, аминокислоты 2645-2895 SEQ ID NO:5, аминокислоты 4729-4974 SEQ ID NO:5, аминокислоты 6857-7101 SEQ ID NO:5, аминокислоты 1143-1393 SEQ ID NO:6, аминокислоты 3392-3636 SEQ ID NO:6 и аминокислоты 1810-2055 SEQ ID NO:7. Кроме того, согласно этому варианту осуществления указанная нуклеотидная последовательность предпочтительно практически аналогична нуклеотидной последовательности, выбранной из ряда, включающего: нуклеотиды 20565-21302 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 25184-25942 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 29678-30429 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 35930-36667 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 42314-43048 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 46950-47702 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 53697-54431 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 60362-61099 SEQ ID NO:1. Согласно этому варианту осуществления эта нуклеотидная последовательность более предпочтительно содержит область нуклеотидной последовательности, состоящую из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований, идентичную области нуклеотидной последовательности, состоящей из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований нуклеотидной последовательности, выбранной из ряда, включающего: нуклеотиды 20565-21302 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 25184-25942 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 29678-30429 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 35930-36667 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 42314-43048 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 46950-47702 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 53697-54431 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 60362-61099 SEQ ID NO:1. Кроме того, согласно этому варианту осуществления эту нуклеотидную последовательность наиболее предпочтительно выбирают из ряда, включающего: нуклеотиды 20565-21302 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 25184-25942 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 29678-30429 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 35930-36667 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 42314-43048 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 46950-47702 SEQ ID NO:1, нуклеотиды 53697-54431 SEQ ID NO:1 и нуклеотиды 60362-61099 SEQ ID NO:1.

Согласно дополнительному варианту осуществления домен эпотилон-синтазы представляет собой домен метилтрансферазы (МТ), содержащий аминокислотную последовательность, практически аналогичную аминокислотам 2671-3045 SEQ ID NO:6. Согласно этому варианту осуществления МТ-домен предпочтительно содержит аминокислоты 2671-3045 SEQ ID NO:6. Кроме того, согласно этому варианту осуществления указанная нуклеотидная последовательность предпочтительно практически аналогична нуклеотидам 51534-52657 SEQ ID NO:1. Согласно этому варианту осуществления эта нуклеотидная последовательность более предпочтительно содержит область нуклеотидной последовательности, состоящую из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований, идентичную области нуклеотидной последовательности, состоящей из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований нуклеотидной последовательности, представленной нуклеотидами 51534-52657 SEQ ID NO:1. Кроме того, согласно этому варианту осуществления эта нуклеотидная последовательность наиболее предпочтительно представляет собой нуклеотиды 51534-52657 SEQ ID NO:1.

Согласно еще одному варианту осуществления домен эпотилон-синтазы представляет собой домен тиоэстеразы (ТЕ), содержащий аминокислотную последовательность, практически аналогичную аминокислотам 2165-2439 SEQ ID NO:7. Согласно этому варианту осуществления ТЕ-домен предпочтительно содержит аминокислоты 2165-2439 SEQ ID NO:7. Кроме того, согласно этому варианту осуществления указанная нуклеотидная последовательность предпочтительно практически аналогична нуклеотидам 61427-62254 SEQ ID NO:1. Согласно этому варианту осуществления эта нуклеотидная последовательность более предпочтительно содержит область нуклеотидной последовательности, состоящую из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований, идентичную области нуклеотидной последовательности, состоящей из 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 (предпочтительно 20) последовательных пар оснований нук