Производные n-триазолилметилпиперазина, способ их получения, лекарственное средство, производные пиперазина

Производные n-триазолилметилпиперазина, способ их получения, лекарственное средство, производные пиперазина

Реферат

Настоящее изобретение относится к новым, обладающим действием в качестве антагонистов рецепторов нейрокинина производным 2-индолилметил-пиперазина, замещенным у атома азота пиперазинового скелета триазолилметильной группой. Изобретение относится далее к лекарственным средствам, содержащим эти новые производные N-триазолилметилпиперазина. Кроме того, изобретение относится к способу получения этих новых производных пиперазина, а также к промежуточным продуктам, получаемым по этому способу.

Из заявки WO 98/57954 уже известны сходные с предлагаемыми соединениями по их структуре соединения, которым приписывают общие, оказывающие антагонистическое действие на тахикинин, нейрокинин А или также на нейрокинин В свойства и которые способны воздействовать на центральную нервную систему (ЦНС).

В ЕР 0899270 А1 описываются производные 2-индолилметилпиперазина с отличным от предлагаемых в настоящем изобретении соединений образцом замещения, которые обладают свойствами антагонистов рецепторов нейрокинина.

Известны далее описанные в ЕР 0655442 А1 другие производные 2-индолилметилпиперазина с отличным от предлагаемых в настоящем изобретении соединений образцом замещения, которым приписывают в принципе свойства антагонистов тахикинина, нейрокинина А или также нейрокинина В и которые считают пригодными для воздействия на ЦНС.

С учетом вышеизложенного в основу настоящего изобретения была положена задача получить новые активные вещества со свойствами антагонистов рецепторов нейрокинина (NK-рецепторов) и с более совершенным механизмом действия, которые могли бы применяться прежде всего для лечения периферических расстройств, таких как функциональные и вызываемые воспалениями расстройства желудочно-кишечного тракта.

Неожиданным образом было установлено, что группа новых производных N-триазолилметилпиперазина отличается наличием специфических свойств, присущих антагонистам NK-1-рецепторов, и проявляет свое действие предпочтительно в периферической области. Тем самым группа соединений по изобретению, как очевидно, пригодна прежде всего для лечения индуцированных NK-1 периферических расстройств, в частности для лечения функциональных и вызываемых воспалениями расстройств желудочно-кишечного тракта.

Объектом изобретения в соответствии с этим являются новые соединения общей формулы I

в которой

R¹ обозначает водород или (низш.)алкил,

R² обозначает (низш.)алкил, ди(низш.)алкиламино(низш.)алкил, (низш.)алкоксикарбонил(низш.)алкил, необязательно одно- либо двузамещенный (низш.)алкилом цикло(гетеро)алкил с 5-6 атомами цикла, содержащий необязательно 1-2 двойные связи, необязательно одно- либо двузамещенный в гетерофенильном кольце галогеном, (низш.)алкилом и/или (низш.)алкоксигруппой (гетеро)фенил(низш.)алкил, (низш.)алкильная цепь которого необязательно одно- либо двузамещена (низш.)алкилом или спиро-С₄-С₅алкиленом, или обозначает необязательно одно- либо двузамещенную в фенильном кольце галогеном, (низш.)алкилом и/или (низш.)алкоксигруппой фенил (низш.)алкоксигруппу и

R³ обозначает (низш.)алкил, (низш.)алкоксикарбонил(низш.)алкил или необязательно одно- либо двузамещенный (низш.)алкилом цикло(гетеро)алкил с 5-6 атомами цикла, или

R² и R³ оба вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют циклическую группу формулы а

в которой

А обозначает азот, кислород, метилен или метилиден, двойная связь которого образуется вместе со смежным атомом углерода в положении 3 группы а,

n обозначает целое число от 1 до 3,

R⁴ обозначает водород, (низш.)алкил, (низш.)алкокси(низш.)алкил, (низш.)алкоксикарбонил, (низш.)алкоксикарбонил(низш.)алкил, ди(низш.)алкиламино(низш.)алкил, необязательно одно- либо двузамещенный галогеном, (низш.)алкилом и/или (низш.)алкоксигруппой (гетеро)финил, необязательно одно- либо двузамещенный в (гетеро)финильном кольце галогеном, (низш.)алкилом и/или (низш.)алкоксигруппой (гетеро)фенил(низш.)алкил, (низш.)алкильная цепь которого необязательно одно- либо двузамещена (низш.)алкилом, цикло(гетеро)алкил с 5-6 атомами цикла или цикло(гетеро)алкил(низш.)алкил, цикло(гетеро)алкильная группа которого содержит 5-6 атомов цикла, и

R⁵ обозначает водород, (низш.)алкил или (низш.)алкокси(низш.)алкил, или

R⁴ и R⁵ оба вместе обозначают связанную с атомом углерода группы а спироэтилендиоксигруппу, связанный с двумя смежными атомами группы а С₃-С₄алкилен или аннелированный с помощью двух смежных атомов углерода группы а фенил, или

R² и R³ оба вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют пирролидиновое кольцо, двузамещенное С₄алкиленом, связанным соответственно через два смежных атома углерода,

а также физиологически приемлемые кислотно-аддитивные соли соединений формулы I.

Еще одним объектом изобретения являются содержащие соединения формулы I лекарственные средства.

Объектом изобретения являются далее способ получения соединений формулы I, а также промежуточные продукты, получаемые по этому способу.

Если заместители в соединениях формулы I представляют собой либо содержат низшие алкильные или алкоксигруппы, то эти группы могут быть прямоцепочечными или разветвленными и могут содержать от 1 до 4 атомов углерода. Если же заместители содержат галоген, то таковым может быть прежде всего фтор, хлор либо бром, предпочтительно фтор либо хлор.

Если заместители в соединениях формулы I представляют собой либо содержат цикло(гетеро)алкил, то таковым могут быть чистые карбоциклы или же карбоциклы, в которых соответственно 1-3 углеродных атома цикла заменены на азот, кислород и/или серу. В качестве гетероатомов предпочтительны азот и кислород. Если заместители в соединениях формулы I представляют собой либо содержат (гетеро) фенил, то таковым может быть фенил или же фенил, где соответственно 1-3 углеродных атома цикла заменены на азот.

R¹ обозначает предпочтительно водород. Если же R¹ представляет собой (низш.)алкил, то предпочтителен метил.

R² обозначает предпочтительно (низш.)алкил, прежде всего метил, этил, изопропил или трет-бутил; ди(низш.)алкиламино(низш.)алкил, прежде всего диметиламиноэтил или диметиламино-н-пропил; (низш.)алкоксикарбонил(низш.)алкил, прежде всего этоксикарбонилметил; необязательно однозамещенный (низш.)алкилом, прежде всего метилом, цикло (гетеро) алкил с 5-6 атомами цикла, прежде всего необязательно замещенный циклопентил, циклогексил или пиперидинил; необязательно одно- либо двузамещенный в гетерофенильном кольце (низш.)алкилом, прежде всего метилом, или (низш.)алкоксигруппой, прежде всего метоксигруппой, гетерофенил(низш.)алкил, прежде всего необязательно замещенный пиридил; или одно- либо двузамещенный в фенильном кольце (низш.)алкилом, прежде всего метилом, или (низш.)алкоксигруппой, прежде всего метоксигруппой, фенил С₂-С₄алкил.

R³ обозначает предпочтительно (низш.) алкил, прежде всего метил, этил или изопропил; или (низш.)алкоксикарбонил(низш.)алкил, прежде всего этоксикарбонилметил.

Предпочтительными являются такие соединения формулы I, в которых R² и R³ не обозначают одновременно изобутил.

Если R² и R³ оба вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют группу формулы а, то предпочтительными значениями R являются водород; (низш.)алкил, прежде всего метил или изопропил; (низш.)алкокси(низш.)алкил, прежде всего метоксиметил; (низш.)алкоксикарбонил(низш.)алкил, прежде всего этоксикарбонилметил; ди(низш.)алкиламино(низш.)алкил, прежде всего диметиламиноэтил; необязательно однозамещенный (низш.)алкилом, прежде всего метилом, или (низш.)алкоксигруппой, прежде всего метоксигруппой, (гетеро) фенил, прежде всего необязательно замещенный фенил, пиридил, пиримидил или пиразолил; необязательно однозамещенный в (гетеро) фенильном кольце галогеном, (низш.)алкилом, прежде всего метилом, или (низш.)алкоксигруппой, прежде всего метоксигруппой, (гетеро) фенил (низш.)алкил, прежде всего необязательно замещенный бензил или пиридил(низш.)алкил; цикло (гетеро) алкил с 5-6 атомами цикла, прежде всего циклогексил, пирролидинил или пиперидинил; или цикло(гетеро)алкил(низш.)алкил, цикло (гетеро) алкильное кольцо которого содержит 5-6 атомов цикла, прежде всего пирролидинил-С₁-С₂алкил, морфолиноэтил или циклогексилметил.

При наличии группы формулы а R⁵ обозначает предпочтительно водород; (низш.)алкил, прежде всего метил; или (низш.)алкокси(низш.)алкил, прежде всего метоксиметил.

К предпочтительным относятся такие соединения формулы I, в которых при наличии группы формулы а R⁴ и R⁵ не связаны с одним и тем же атомом группы а, за исключением указанных в качестве предпочтительных соединений формулы I, где R⁴ и R⁵ оба вместе обозначают связанную с атомом углерода группы а спироэтилендиоксигруппу. Предпочтительными являются также соединения формулы I, где R⁴ и R⁵ обозначают связанный с двумя смежными атомами циклической группы а С₃-С₄алкилен.

При наличии группы формулы а n обозначает целое число от 1 до 3. Если же R⁴ и R⁵ оба вместе обозначают водород и А одновременно представляет собой метилен, то n предпочтительно обозначает 2 или 3.

В принципе заместители R⁴ и R⁵ в группе а могут быть связаны с любым атомом этой группы, включая образованные с помощью А атомы цикла, которые в рассматриваемом случае не являются кислородом. Если один из кольцевых атомов группы а замещен R⁴ или R⁵, то либо R⁴, либо R⁵ заменяет на том же самом месте атом водорода, присутствующий в других случаях на этом месте, что позволяет таким образом сохранить ковалентность кольцевых атомов группы а. Если А представляет собой метилиден, то его двойная связь образуется предпочтительно со смежным атомом углерода в положении 3 группы а, который в этом случае также образует метилиденовую группу.

К предпочтительным относятся далее такие соединения формулы I, где необязательно присутствующая группа а представляет собой замещенный заместителями R⁴ и R⁵ пирролидин, при этом оба заместителя R⁴ и R⁵ не обозначают одновременно водород, или где необязательно присутствующая группа а представляет собой замещенный соответственно заместителями R⁴ и R⁵ 2,5-дигидропиррол, пиперидин, пиперазин, морфолин или диазепан.

Особенно предпочтительным является соединение формулы I (2R)-1[3,5-бис(трифторметил)бензоил]-2(1H-индол-3-илметил)-4[[5(морфолинометил)-2Н-1,2,3-триазол-4-ил]метил}пиперазин.

Соединения формулы I, равно как и их кислотно-аддитивные соли, могут быть получены следующим образом:

а) соединение общей формулы II

где R¹ имеет указанные выше значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы III

где R² и R³ имеют указанные выше значения и где присутствующие реакционноспособные группы блокированы соответствующими защитными группами, или

б) соединение общей формулы IV

где R¹ имеет указанные выше значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы V

где R² и R³ имеют указанные выше значения и где присутствующие реакционноспособные группы блокированы соответствующими защитными группами,

и затем необязательно используемые защитные группы снова отщепляют, после чего полученное соединение формулы при необходимости переводят в его кислотно-аддитивную соль или кислотно-аддитивную соль переводят в свободное соединение формулы I.

Согласно варианту а) способа с целью получить соединение формулы I вторичную аминофункцию замещенного производного пиперазина формулы II можно подвергать взаимодействию с N,N-двузамещенным азидобутинамином формулы III. Эту реакцию можно проводить в инертном в условиях реакции растворителе, таком как диполярно-апротонный растворитель, например этилацетат или диметилформамид (ДМФ), либо предпочтительно в смеси таких растворителей. Особенно предпочтительна смесь из этилацетата и ДМФ. Реакцию рекомендуется проводить при температурах в интервале от комнатной температуры до температуры кипения растворителя, соответственно смеси растворителей. При использовании соединений формулы III, содержащих дополнительные, реакционноспособные в условиях реакции функциональные группы, эти последние целесообразно блокировать известными защитными группами. Пригодными в этих целях защитными группами, которые вводят по известным методам и затем снова отщепляют также по известным методам, являются, например, группы, известные из публикаций J.A.W.McOmie «Protective Groups in Organic Chemistry», изд-во Plenum Press (1973) или T.W.Green и P.G.M.Wuts «Protective Groups in Organic Synthesis», изд-во Wiley and Sons (1991). Специалист может сам, руководствуясь обычными методами, выбрать соответствующие защитные группы.

Соединения формулы II и их стереоизомерные формы известны из ЕР 0655442 А1 и могут быть получены с помощью описанных в этой заявке способов либо аналогичных им.

Соединения формулы III можно получать, подвергая обычным путем соединение общей формулы VI

где R² и R³ имеют указанные выше значения и где Y обозначает отщепляемую уходящую группу, взаимодействию с азидом щелочного металла, предпочтительно азидом натрия, с образованием азидной связи. В качестве уходящей группы Y могут рассматриваться прежде всего галоген, предпочтительно хлор, либо сульфонилоксигруппы, образующие легко отщепляемые уходящие группы, например (низш.)алкансульфонилоксигруппа, такая как метансульфонилоксигруппа, либо необязательно замещенная в бензольном кольце галогеном или (низш.)алкилом бензолсульфонилоксигруппа, такая как п-толуолсульфонилоксигруппа.

Соединения формулы VI можно получать, подвергая обычным путем соединения формулы V взаимодействию с соединением формулы VII

где Y имеет указанное выше значение. Полученные соединения формулы VI при необходимости можно подвергать очистке. Для такой очистки соединения формулы VI можно, например, переводить в соответствующие соли, такие как оксалаты, и затем очищать с помощью известных методов кристаллизации. Вместе с тем вышеназванные соли соединений формулы VI могут непосредственно использоваться в последующих реакциях.

Вторичные амины формулы V в принципе известны, равно как и соединения формулы VII. В качестве соединения формулы VII предпочтительно использовать 1,4-дихлор-2-бутин.

Согласно варианту б) способа с целью получить соединение формулы I пиперазин-N-бутиназид формулы IV можно подвергать взаимодействию с вторичным амином формулы V. Эту реакцию можно осуществлять известным образом, например, по описанному K.Banert в Chemische Berichte 122, стр.1963-1967 (1989) методу или по аналогичным ему методам в инертном в условиях реакции растворителе, таком как этилацетат или простой эфир, например в тетрагидрофуране (ТГФ) или диоксане. Согласно одному из предлагаемых предпочтительных вариантов способа вторичный амин формулы V, например морфолин, можно как таковой использовать в качестве растворителя. Соответствующую температуру реакции следует выбирать в зависимости от используемого вторичного амина формулы V. Если амин формулы V представлен при комнатной температуре в жидком или твердом виде, то, как правило, работают при температурах в интервале от комнатной температуры до температуры кипения обычных растворителей, например до порядка 100° С. При использовании легколетучих аминов формулы V, например диметиламина или диэтиламина, целесообразно работать при низких температурах, например в интервале от -78 до -10°С, и предпочтительно при повышенном давлении, например от 1,5 до 3 бар. Реакции при повышенном давлении осуществляют в автоклавах известной конструкции. Если применяют амины формулы V, содержащие дополнительные, реакционноспособные в условиях реакции функциональные группы, например еще одну вторичную аминофункцию, в частности при использовании пиперазина, то эти дополнительные функциональные группы целесообразно блокировать известными защитными группами. Пригодные в этих целях защитные группы, которые можно вводить по известным методам и затем снова отщеплять также по известным методам, известны, например, из публикаций, указанных выше в варианте а) способа. При использовании в качестве амина формулы V пиперазина предпочтительна в качестве защитной группы трет-бутоксикарбонильная группа. Специалист, руководствуясь обычными методами, может сам выбрать соответствующие защитные группы.

Соединения формулы IV являются новыми соединениями, которые могут использоваться в качестве промежуточных продуктов для получения новых активных веществ, в частности для получения соединений формулы I. Одна из возможностей получения соединений формулы IV состоит в том, что соединения общей формулы VIII

где R¹ и Y имеют указанные выше значения, подвергают обычным путем взаимодействию с азидом щелочного металла, предпочтительно азидом натрия, с образованием азидной связи.

Соединения формулы VIII могут быть получены осуществляемым по обычной технологии взаимодействием соединений формулы II с соединениями формулы VII.

Соединения формулы I можно обычным путем выделять из реакционной смеси и очищать. Кислотно-аддитивные соли можно обычным образом переводить в свободные основания и эти последние при необходимости также известным путем можно переводить в физиологически приемлемые кислотно-аддитивные соли.

В качестве физиологически приемлемых солей соединений формулы I могут рассматриваться их соли с неорганическими кислотами, такими, например, как серная кислота, фосфорные кислоты или галогеноводородные кислоты, предпочтительно хлористоводородная кислота, либо с органическими кислотами, например низшими алифатическими моно-, ди- или трикарбоновыми кислотами, такими как малеиновая кислота, фумаровая кислота, молочная кислота, винная кислота, лимоновая кислота, или с сульфокислотами, например с (низш.)алкансульфокислотами, такими как метансульфокислота, либо необязательно замещенными в бензольном кольце галогеном или низшим алкилом бензосульфокислотами, такими как п-толуолсульфокислота. Предпочтительной солью соответствующего соединения формулы I является дигидрохлорид (2R)-1-[3,5-бис(трифторметил)бензоил]-2-(1Н-индол-3-ил]метил)-4-{[5-(морфолинометил)-2-Н-1,2,3-триазол-4-ил]метил}пиперазина, поскольку эта соль способна относительно хорошо растворяться в воде.

Соединения формулы I содержат в любом случае хиральный атом углерода, а именно, несущий 1H-индол-3-илметильную группу атом углерода в положении 2 пиперазинового скелета. Тем самым соединения формулы I могут быть представлены в нескольких стереоизомерных формах. Настоящее изобретение включает как смеси оптических изомеров, так и чистые изомеры соединений формулы I. К предпочтительным относятся соединения формулы I, где индолилметильная группа находится в 2R-положении пиперазинового кольца. Если при синтезе соединений формулы I применяют смеси оптических изомеров исходного соединения, например соединений формулы II или соединений формулы IV, то и соединения формулы I получают также в виде смесей оптических изомеров. Используя однородные в стереохимическом отношении формы исходного соединения, можно получать также стереохимически однородные соединения формулы I. Стереохимически однородные соединения формулы I могут быть получены из смесей оптических изомеров по известной технологии, например путем хроматографического разделения с использованием хиральных разделительных материалов или взаимодействием с соответствующими оптически активными кислотами, например винной кислотой или камфор-10-сульфокислотой, и последующим разделением на оптически активные антиподы путем фракционной кристаллизации полученных диастереомерных солей.

В соединениях формулы I 1,2,3-триазольное кольцо может быть представлено в нескольких таутомерных формах, вследствие чего атом водорода может быть связан с разными атомами 1,2,3-триазольного кольца. Согласно изобретению соединения формулы I включают все возможные таутомеры триазольного кольца.

Соединения формулы I, равно как и их кислотно-аддитивные соли, обладают свойствами антагонистов рецепторов нейрокинина (NK-рецепторов) и пригодны для лечения болезненных состояний у крупных млекопитающих, прежде всего человека, при которых нейрокинины играют роль медиаторов. При этом группа предлагаемых в изобретении соединений отличается особенно эффективным механизмом действия, характеризующимся прежде всего высоким селективным сродством с NK-1-рецепторами. Кроме того, группа соединений по изобретению отличается также хорошей совместимостью при их применении в течение длительного периода времени и сравнительно высокой биодоступностью при оральном введении.

Благодаря механизму их действия и их избирательной и обратимой способности связываться с NK-1-рецепторами группа соединений по изобретению может применяться прежде всего для подавления процессов, в которых участвуют связывающиеся с NK-1-рецепторами нейрокинины, такие как вещество П. Тем самым указанные соединения пригодны для применения при избирательном лечении болезненных состояний, связанных с участием вещества Р. Так, например, вещество Р играет определенную роль при передаче болей, рвоте, нейрогенных воспалениях, воспалениях мочевого пузыря, воспалительных заболеваниях суставов и астматических жалобах. Благодаря их свойствам соединениями по изобретению удается целенаправленно и эффективно воздействовать на соответствующую область организма и поэтому они могут применяться для лечения периферических патологических расстройств, прежде всего для лечения функциональных и связанных с воспалениями расстройств желудочно-кишечного тракта. К таким функциональным расстройствам, при лечении которых можно использовать предлагаемые соединения, относятся прежде всего расстройства нижних областей кишечника, известные как так называемый синдром раздражимого кишечника (СРК). Характерными симптомами СРК являются боли подчревной области, обусловленные предположительно сверхчувствительностью висцеральной афферентной нервной системы, и расстройства стула, прежде всего аномально ускоренная дефекация из прямой кишки. Повышенная чувствительность к висцеральным болям по сравнению с механическими или химическими раздражениями в желудочно-кишечном тракте приводит к тому, что пациенты, страдающие СРК, даже при незначительных расширениях прямой кишки, связанных с процессом нормального пищеварения, например, уже при незначительном газообразовании и легких вздутиях, на которые здоровый человек практически не реагирует, испытывают сильные висцеральные боли. К обусловленным воспалениями расстройствам в желудочно-кишечном тракте, на которые эффективно можно воздействовать соединениями по изобретению, относятся воспалительные расстройства в области тонкого и толстого кишечника, принятые под общим названием «воспалительное заболевание кишечника» (ВЗК), в частности язвенный колит и болезнь Крона. В отличие от других терапевтических средств, целенаправленно применяемых прежде всего для лечения соответствующей периферической области и вызывающих нежелательные побочные эффекты, механизм действия соединений по изобретению отличается их сравнительно высокой оральной биодоступностью при одновременно эффективной избирательности антагонистического по отношению к рецепторам нейрокинина воздействия. Так, в частности, при фармакологических исследованиях с использованием соединений в различных дозировках, блокировавших NK-1-рецептор, не было выявлено никакого антагонистического по отношению к кальцию действия в сердечно-сосудистой системе. Кроме того, можно предположить, что предлагаемые в изобретении соединения не оказывают сколько-нибудь заметных побочных действий на центральную нервную систему.

Описание методов фармакологических исследований

Указанные номера примеров соединений, применявшихся в фармакологических исследованиях в качестве тестируемых веществ, относятся к описанным ниже примерам получения.

1. Определение in vitro связываемости исследуемых веществ с NK-1-рецепторами

Сродство исследуемых веществ к NK-1-рецепторам человека определяли in vitro. При этом выявляли ингибирование связывания физиологического нейрокинина (вещества Р) с рецепторами нейрокинина 1.

Исследования по связыванию с рецепторами проводили с использованием [³Н]-вещества Р в качестве лиганда. В опыте на связывание различные образцы препаратов мембран клеток яичника китайского хомячка, экспрессирующих NK-1-рецептор человека (регистрационный номер соответствующей нуклеотидной последовательности в нуклеиновых кислотах М74290; регистрационный номер соответствующей аминокислотной последовательности белка Р25103; (ср. Y.Takeda; K.B.Chou, J.Takeda; B.S.Sachais и J.E.Krause, Biochemical and Biophysical Research Communications, 179 (3), стр.1232-1240 (1991)), инкубировали в растворе меченого лиганда, при этом инкубируемые смеси не содержали исследуемое вещество либо содержали добавки последнего в различных концентрациях. Затем связанные в образцах и свободные лиганды разделяли соответственно путем фильтрации через стекловолокнистый фильтр. Осадок на фильтре несколько раз промывали буферным раствором, после чего с помощью сцинтиляционного счетчика β-излучения измеряли радиоактивность этого осадка на фильтре.

Сродство соединений из примеров 1 и 8-65 к NK-1-рецепторам человека определяли соответственно путем однократного измерения на исследуемых веществах, взятых в концентрации 10^-7 моль/л. Выявленная в этих исследованиях степень вытеснения физиологического лиганда NK-рецепторов, вещества Р, всеми вышеназванными исследуемыми веществами составляла ≥75%. У соединений из примеров 1, 8-15, 17-29, 34-47, 49-55, 57, 59-60 и 62-65 этот показатель вытеснения составлял соответственно ≥90%.

Значение IC₅₀ для каждого из исследуемых веществ из примеров 2 и 4-6 определяли по концентрации, которая обеспечивает 50%-ное вытеснение связанного лиганда от максимального. Исходя из этого для исследуемого вещества рассчитывали соответствующую константу ингибирования (К_i-значение), которую выражали в виде десятичного кологарифма К_i-значения (рК_i-значение). рК_i-Значение является мерой определения сродства исследуемых веществ к NK-1-рецепторам человека. Для использовавшихся в исследованиях соединений, указанных ниже в таблице 1, были получены следующие рК_i-значения, приведенные в табл.1.

Таблица 1Сродство исследуемых веществ к NK-1-рецепторам человека
Пример №	pKi
2	8,4
4	8,3
5	8,3
6	8,4

2. Определение in vitro функционального NK-1-антагонизма исследуемых веществ на выделенной ткани морской свинки

Действие исследуемых веществ в качестве антагонистов NK-1-рецепторов определяли in vitro на выделенных, выдержанных в оксигенированном питательном растворе колечках из аорты морских свинок линии Pirbright-White. На этих препаратах выявляли эффективность исследуемых веществ по ингибированию релаксации тонуса, вызванной после стимуляции NK-1-агонистом, веществом Р.

Для измерения сократительной способности мышц гладкой мускулатуры сосудов препараты закрепляли на крючке и соединяли нитью с динамометром, показания которого регистрировали в каждом случае с помощью самописца. Препараты тонизировали фенилэфрином. Затем NK-1-рецепторы препаратов стимулировали до и после введения исследуемого вещества 0,01 мкмоля вещества Р, что вызывало релаксацию тонуса. Количественное соотношение между релаксацией до и после введения исследуемого вещества выражали в процентах. Далее рассчитывали эффективную концентрацию, которая обеспечивает 50%-ное ингибирование релаксации тонуса от максимального (ЕС₅₀). В качестве показателя использовали десятичный кологарифм значения ЕС₅₀ (рЕС₅₀). Это значение рЕС₅₀ является мерой определения функциональной эффективности исследуемых веществ по отношению к NK-1-рецепторам.

Для использовавшихся в исследованиях соединений, указанных ниже в таблице 2, были получены следующие рЕС₅₀-значения.

Таблица 2Функциональный NK-1-антагонизм исследуемых веществ на выделенной ткани морской свинки
Пример №	рЕС50
1	9,0
2	9,1
2	8,4
4	8,6
5	8,7
6	8,9

3. Определение in vivo действия исследуемых веществ в качестве антагонистов вещества Р

С целью выявить антагонистическое по отношению к веществу Р действие исследуемых веществ в качестве стандартной тестовой модели для достижения индуцированных веществом Р фармакологических эффектов использовали морских свинок, которым внутривенно вводили вещество Р, вызывая тем самым временную гипотензию. При этом определяли ингибирующее действие исследуемых веществ, сравнивая понижение кровяного давления, индуцированное веществом Р после внутривенного введения с одной стороны, и после орального введения исследуемых субстанций с другой стороны.

Самцам морских свинок под наркозом (кетамин 67 мг/кг, ксилазин 13 мг/кг) имплантировали соответственно катетер в общую сонную артерию и в яремную вену. Артериальный катетер служил для измерения кровяного давления, тогда как венозный катетер использовали для введения вещества Р, соответственно для внутривенного введения и тестируемой субстанции. После 20-минутной равновесной фазы в качестве стимула (раздражителя) вводили вещество Р в количестве 50 пмоль/животное (струйное введение внутривенно). Через минуту после введения исследуемого раздражителя в каждом случае определяли индуцированное им максимальное понижение кровяного давления, служившее контролем при последующей стимуляции NK-1-рецепторов исследуемым веществом. После этого вводили исследуемую субстанцию. При внутривенном применении исследуемое вещество вводили в дозах от 0,01 до 0,1 мкмоля/кг. При пероральном применении тестируемое вещество вводили в дозах от 0,1 до 3,2 мкмоля/кг. В качестве инертного наполнителя при пероральном введении служили тилоза, соответственно спиртовой раствор тилозы (в этаноле). Затем, начиная с 1^ой и кончая 90^ой минутой после введения тестируемого вещества, с интервалами по 15 минут каждый измеряли степень понижения кровяного давления, индуцированного соответствующим тестируемым веществом. На основании полученных данных выявляли те дозировки, при которых в зависимости от времени введения исследуемого вещества достигалось 50%-ное ингибирование понижения кровяного давления, индуцированного веществом Р, и исходя из этого, определяли ED₅₀-значения, которые выражали в виде десятичного кологарифма ED₅₀ (pED₅₀).

В этой тестовой модели pED₅₀-значение вещества из примера 1 через час после внутривенного введения составляло 7,6: pED₅₀-Значение того же вещества из примера 1 через час после перорального введения составляло 6,2. pED₅₀-Значение соединения из примера 6 через час после внутривенного введения составляло 7,0. Эти значения подтверждают высокую фармакологическую эффективность соединений формулы I, прежде всего при их оральном применении.

В аналогичных исследованиях предлагаемые соединения тестировали также на их понижающее кровяное давление действие, основанное на их свойствах как антагонистов кальция. С этой целью исследовали возможное влияние тестируемых веществ на базальное кровяное давление. При применении соединения из примера 1 в исследовавшемся диапазоне дозировок (внутривенно вводили дозы вплоть до 0,1 мкмоля/кг и перорально вводили дозы вплоть до 3,2 мкмоля/кг) не наблюдалось сколько-нибудь заметного понижения давления. Это свидетельствует об отсутствии побочных действий со стороны предлагаемых соединений при их использовании в указанном диапазоне дозировок, которые они могли бы в противном случае проявлять в качестве антагонистов кальция. Отсутствие при применении соединений по изобретению указанных побочных эффектов в отношении кальция может быть подтверждено и на стандартной in vitro-модели, где используют, например, ткань, выделенную из подвздошной кишки морских свинок.

В стандартном тесте по выявлению способных проникать в ЦНС соединений, обладающих действием антагонистов NK-1-рецепторов («gerbil foot tapping test», см. N.M.Rupniak, A.R.Williams, European Journal of Pharmacology 265, стр.179-183 (1994)), соединение из примера 1 даже при введении в высоких дозах вплоть до 30 мг/кг перорально не проявило никаких эффектов, типичных для способных проникать в ЦНС антагонистов NK-1-рецепторов.

Соединения формулы I могут применяться в виде обычных фармацевтических композиций. Они могут назначаться в индивидуально подобранной дозировке, зависящей от состояния пациента, которое требует данной терапии, и от применяемой субстанции. Как правило, однако, при введении человеку и крупным млекопитающим рекомендуются лекарственные формы с содержанием активного вещества от 0,1 до 80 мг, прежде всего от 1 до 10 мг на одну разовую дозу.

Согласно изобретению соединения формулы I могут включаться в состав твердых или жидких фармацевтических композиций совместно с обычными фармацевтическими вспомогательными веществами и/или носителями. В качестве твердых лекарственных форм можно назвать предназначенные для орального применения препараты, такие как таблетки, драже, капсулы, порошки или грануляты, а также суппозитории. Такие препараты наряду с обычными фармацевтическими вспомогательными веществами, например замасливателями или разрыхлителями (в таблетках) могут содержать в своем составе обычные неорганические и/или органические носители, такие, например, как тальк, молочный сахар или крахмал. Жидкие препараты, такие как суспензии или эмульсии активных веществ, могут содержать обычные разбавители, такие как вода, масла и/или суспендирующие агенты, например полиэтиленгликоли и т.п. В состав препаратов могут дополнительно добавляться другие вспомогательные вещества, такие, например, как консерванты, вкусовые добавки и т.п.

Активные вещества можно по обычной технологии смешивать с фармацевтическими вспомогательными веществами и/или носителями и затем изготавливать соответствующие композиции. Так, в частности, для изготовления твердых лекарственных форм, например, после смешения активных веществ обычным путем с вспомогательными веществами и/или носителями эти смеси можно мокрым либо сухим методом гранулировать. Полученный гранулят или порошок можно непосредственно использовать при изготовлении капсул или по обычной технологии таблетировать. При необходимости возможно изготовление также по известной технологии драже.

Ниже изобретение более подробно поясняется на примерах, которые никоим образом не ограничивают его объем.

Пример 1

(2R)-1[3,5-бис(трифторметил)бензоил]-2-(1Н-индол-3-илметил)-4-{[5(морфолинометил)-2Н-1,2,3-триазол-4-ил]метил}пиперазин

Вариант 1 синтеза

А) К суспензии из 43 г К₂СО₃ в 100 мл ДМФ при 20°С в атмосфере защитного газа добавляли 22 мл 1.4-дихлор-2-бутина. Смесь нагревали до 50°С, после чего к ней добавляли по каплям 50 г (2R)-1[3,5-бис(трифторметил)бензоил]-2-(1Н-индол-3-илметил)пиперазина в 200 мл ДМФ. Полученную смесь в течение 5 ч перемешивали при 50°С. Перемешивание продолжали в течение ночи при комнатной температуре, затем отфильтровывали от нерастворившегося осадка и этот осадок дважды промывали порциями по 200 мл этилацетата соответственно. Объединенные фильтраты упаривали досуха под вакуумом и полученное масло очищали посредством колоночной хроматографии (силикагель; элюенты: н-гексан/этилацетат в соотношении 60:40-30:70). Объединенные продуктовые фракции повторно упаривали досуха. В результате получили 40,4 г (2R)-1-[3,5-бис(трифторметил)бензоил]-2-(1Н-индол-3-илметил)-4-(4-хлор-2-бутин-1-ил)пипе