Способ получения липосом, обладающих иммунокорригирующим и гепатопротекторным действием

Способ получения липосом, обладающих иммунокорригирующим и гепатопротекторным действием

Реферат

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано при производстве лекарственных средств, корригирующих иммунную и гепатобилиарную системы организма.

Известен способ получения лецитин-холестериновых липосом, обладающих антиэкссудативной активностью, мембрана которых содержит дополнительное количество ненасыщенных жирных кислот [см. Е.М.Бородулина, В.М.Крейнес. Усиление антиэкссудативной активности липосом с помощью ненасыщенных жирных кислот // Патологич. физиология и эксперим. терапия. 1996 N3. М., Медицина, с. 18-20].

Однако в известном способе не выявлено влияние полученных липосом на иммунную и гепатобилиарную системы организма.

Известен способ получения липосом, изготавливаемых из лецитинов растительного и животного происхождений и смеси кислых (соевых) фосфолипидов, пригодных для инкапсулирования лекарств (цитостатиков, иммуномодуляторов, полиненасыщенных жирных кислот из морских животных, обладающих кардиопротекторными, антиоксидантными и гепатопротекторными свойствами) [Способ получения липосом. Патент РФ 02071765, опубл. 20.01.1997 г.].

Однако недостатком известного способа является то, что полученные средства используются только в качестве носителей лекарственных препаратов и биологически активных веществ, не обладают каким-либо самостоятельным биологически активным действием и применяются только для парентерального введения в организм, в то время как не была изучена их активность при пероральном введении.

Известен способ получения липосом, содержащих биологически активные вещества (негормональные противовоспалительные средства и др.), а также противовирусные и противогрибковые агенты [см. Liposomes containing biologically active compounds. EP 1515698 A2 N03761255. 23.03.2005].

Однако недостатком известного способа является то, что полученные липосомальные средства обладают только анальгетическими, противовоспалительными, противобактериальными и противовирусными свойствами, тогда как не было выявлено их иммунобиологическая и гепатопротекторная активность.

Известен способ получения липосом из яичных фосфолипидов, включающий экстракцию суммарных фосфолипидов из яичных желтков, растворение яичных фосфолипидов в органическом растворителе, высушивание тонкого слоя яичных фосфолипидов в круглодонной колбе на роторном испарителе, добавление буферного раствора, встряхивание смеси, обработку смеси ультразвуком, центрифугирование смеси и отделение верхних трех четвертей надосадочной жидкости [см. Биологические мембраны. Методы: Пер. с англ. /Под ред. Дж.Б.Финдлея, У.Г.Эванза. - М.: Мир, 1990, с.188-195].

Недостатком данного способа является то, что полученные липосомы используются только в качестве носителей лекарственных препаратов и не обладают каким-либо самостоятельным фармакологическим воздействием.

Известен способ получения липосом из яичных фосфолипидов, включающий экстракцию суммарных фосфолипидов из яичных желтков, растворение смеси яичных фосфолипидов и жира байкальской нерпы в соотношении 4:6 в органическом растворителе, высушивание тонкого слоя яичных фосфолипидов в круглодонной колбе на роторном испарителе, добавление раствора, содержащего 0.25 М сахарозу, 0.01 М трис-буфер, 0.001 М ЭДТА, рН 7.4, встряхивание смеси до получения однородной суспензии на механической качалке в течение 30 минут, обработку смеси в течение 7 минут ультразвуком на диспергаторе УЗДН-2Т при водяном охлаждении при частоте 22 кГц, центрифугирование смеси в течение 90 минут при 105000 g и отделение верхних трех четвертей надосадочной жидкости [см. Способ получения липосом. Патент РФ №2153328, опубл. 27.07.2000 г., Бюл. №21].

Полученные по известному способу липосомы обладают иммунокорригирующими свойствами, тогда как не выявлено их влияние на гепатобилиарную систему организма.

Задача, решаемая в предлагаемом изобретении, заключается в изменении фармакологических свойств липосом.

Технический результат, достигаемый при осуществлении заявляемого способа, - это создание липосомального средства, обладающего гепатопротекторными свойствами с высокими иммунокорригирующими свойствами.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что известный способ характеризуется тем, что проводят экстракцию фосфолипидов из печени байкальской нерпы, растворяют смесь полученных фосфолипидов и жир байкальской нерпы в органическом растворителе в соотношении 4:6 с антиоксидантом α-токоферолом, высушивают тонкий слой липидов на роторном испарителе, добавляют буферный раствор, встряхивают смесь до получения однородной суспензии, проводят обработку липидной смеси ультразвуком при водяном охлаждении, далее центрифугируют смесь и отделяют верхние три четверти надосадочной жидкости.

Байкальская нерпа - эндемик уникального озера Байкал, относится к отряду ластоногих семейства настоящих тюленей. В данное время нерпа - важнейший объект зверобойного промысла, добывается с единственной целью получения меха животного, а жир и другие виды тканей (в том числе и печень), в лучшем случае направляются на зверофермы для откорма животных либо на техническую переработку [В.Д.Пастухов Нерпа Байкала. - Новосиб.: ВО Наука. 1993, 271 с.].

Как известно, основную массу покровных жиров морских млекопитающих составляют простые липиды - триацилглицериды. Исследования химического состава жира выявили 60 жирных кислот, содержащих от 8 до 22 углеродных атомов. Из них на долю насыщенных кислот приходится 17-19%, мононенасыщенных 59-60%, полиненасыщенных 22-23% (в том числе диеновых 6.1-7.0%, триеновых 0.2-0.3%, тетраеновых 3.9-4.1%, пентаеновых 4.6-5.0%, гексаеновых 6.2-7.0%). Высокая биологическая ценность жира нерпы обусловлена в основном содержанием таких высоконенасыщенных кислот, как экозапентаеновой (2.65%) и докозагексаеновой (6.28%). Эти кислоты являются предшественниками особых гормоноподобных веществ - простагландинов и тромбоксанов. В результате исследований фракционного состава жира нерпы было показано, что доминирующей фракцией являются триацилглицериды (до 99%). Свободные жирные кислоты, эфиры стеаринов находятся в следовых количествах (до 0.2%). Количество неомыляемых соединений не превышает 0.3%, остальные 0.5% приходятся на сумму ди- и моноглицеринов. Витамины А, Д, К в жире нерпы не обнаружены. Токоферолы содержатся в следовых количествах.

Жирнокислотный состав липидов печени байкальской нерпы включает в себя более 25-и полиненасыщенных жирных кислот с длиной цепи более 14-и углеродных атомов, наиболее распространенными из которых являются олеиновая - 18:1n-9 (11.62%), линолевая - 18:2n-6 (4.31%), эйкозадиеновая - 20:2n-6 (1.55%), дихомо-гамма-линоленовая - 20:3n-6 (1.12%), арахидоновая - 20:4n-6 (20.15%), эйкозапентаеновая - 20:5n-3 (0.44%), докозагексаеновая - 22:6n-3 (6.73%). Анализ жирнокислотного состава липидов печени нерпы показал, что содержание насыщенных, мононенасыщенных и полиненасыщенных жирных кислот практически одинаково и составляет 31.85%, 33.15% и 35.70% соответственно. При этом соотношение жирных кислот семейств омега-6/омега-3 составляет 3.19:1, что позволяет отнести печень байкальской нерпы к числу перспективных источников сырья для использования в пищу и использования в качестве БАВ.

Преимуществом жира, содержащегося во внутренних органах, перед покровным, является наличие в нем фосфолипидов. Как показали исследования, содержание фосфолипидов в печени нерпы составило 4.7% от сухого остатка. Среди фосфолипидов в печени байкальской нерпы преобладают по количеству фосфатидилхолин и фосфатидилэтаноламин (41.07% и 37.22% по отношению к общему количеству фосфолипидов соответственно) [Кабирова И.Р. Характеристика и промышленное использование печени байкальской нерпы на пищевые цели. Дисс...к.т.н. - Улан-Удэ, 2005. - 107 с.].

Соотношение фосфолипидов печени нерпы и жира нерпы подбирали таким образом, чтобы обеспечить максимальное иммунокорригирующее действие.

Иммунокорригирующую активность изучали в реакциях, ответственных за клеточный (в реакциях «трансплантат против хозяина» - РТПХ и гиперчувствительность замедленного типа - ГЗТ) и гуморальный иммунитет (в реакции антителообразования).

Эксперименты проводились на мышах обоего пола линии F1 (СВАхС57В1/6), а также линии СВА массой 20-22 г. В работе были исследованы: 1) липосомы, приготовленные на основе яичных фосфолипидов с добавлением жира нерпы в соотношении 4:6; 2) липосомы, приготовленные на основе фосфолипидов печени нерпы с добавлением жира нерпы в соотношениях 4:6 и 6:4; 3) липосомы, приготовленные на основе фосфолипидов печени нерпы. Препараты вводились экспериментальным животным ежедневно перорально в течение 14 дней в объеме 0.2 мл. Действие экстракта было изучено на животных, находящихся в состоянии иммунодепрессии, которое вызывали введением азатиоприна в концентрации 50 мг/кг, что вызывало угнетение показателей клеточного и гуморального иммунитета.

Использование липосом, содержащих разные соотношения фосфолипидов печени нерпы и жира нерпы, на фоне иммунной супрессии восстанавливало показатель РТПХ лабораторных животных до уровня интактных. Несколько больший (на 5-10%) по сравнению с остальными группами индекс реакции был отмечен в группе животных, получавших липосомы, содержащие фосфолипиды печени и жир нерпы в соотношении 4:6 (см. табл. 1).

Таблица 1Изменение показателя реакции «Трансплантат против хозяина» у мышей, получавших липосомальные средства
Группа животных	Индекс увеличения лимфоузлов
Интактные	2.51±0.11
Азатиоприн, 50 мг/кг	1.24±0.06*
Азатиоприн + липосомы Я/Ж (4:6)	2.4±0.08**
Азатиоприн + липосомы П/Ж (4:6)	2.42±0.14**
Азатиоприн + липосомы П/Ж (6:4)	2.30±0.07**
Азатиоприн + липосомы П	2.46±0.12**
Примечания (к табл. 1-4):1. липосомы Я/Ж (4:6) - липосомы, приготовленные на основе яичных фосфолипидов с добавлением жира нерпы в соотношении 4:6;

2. липосомы П/Ж (4:6) и (6:4) - липосомы, приготовленные на основе фосфолипидов печени нерпы с добавлением жира нерпы в соотношениях 4:6 и 6:4;3. липосомы П - липосомы, приготовленные на основе фосфолипидов печени нерпы;4. * - достоверное отклонение результатов по сравнению с группой интактных животных (р<0.05);5. ** - достоверное отклонение результатов по сравнению с группой животных «Азатиоприн» (р<0.05);6. *** - достоверное отклонение результатов по сравнению с группой животных «Азатиоприн + липосомы Я/Ж» (р<0.05).

Использование всех исследуемых липосомальных средств восстанавливало показатель клеточноопосредованной реакции ГЗТ лабораторных животных, находившихся в состоянии иммунной супрессии, до уровня показателя ГЗТ у интактных животных, причем максимальное значение индекса достигало в группе, получавшей липосомы, полученные на основе фосфолипидов печени нерпы с добавлением жира в соотношении 4:6 (см. табл.2).

Таблица 2Изменение индекса реакции ГЗТ под воздействием липосомальных средств
Группа животных	Индекс реакции, %
Интактные	27.29±0.78
Азатиоприн, 50 мг/кг	14.54±1.88*
Азатиоприн + липосомы Я/Ж (4:6)	30.39±1.90**
Азатиоприн + липосомы П/Ж (4:6)	31.85±2.52**
Азатиоприн + липосомы П/Ж (6:4)	24.4±1.85**
Азатиоприн + липосомы П	27.23±1.52**
Примечания: (см. табл.1).

Как показали результаты исследования, липосомы на основе фосфолипидов печени с добавлением жира нерпы, взятых во всех изучаемых соотношениях, проявляли большую активность по сравнению с липосомами на основе яичных фосфолипидов и липосомами на основе только фосфолипидов печени нерпы на фоне иммунодепрессии и вызывали достоверное увеличение количества АОК как в абсолютных значениях, так и при расчете на 10⁶ спленоцитов; при этом показатели антителообразующей активности клеток селезенки подопытных животных восстанавливались до уровня интактных животных (см. табл.3).

Таблица 3Количество антителообразующих клеток у животных под воздействием липосомальных средств
Группа животных	Число АОК на селезенку	Число АОК на 106 спленоцитов
Интактные	40042±2367	673.2±42.5
Азатиоприн, 50 мг/кг	16375±1451*	271.5±28.1*
Азатиоприн + липосомы Я/Ж (4:6)	33761±1493**	516.0±73.2**
Азатиоприн + липосомы П/Ж (4:6)	46705±1284**, ***	721.0±62.3 **, ***
Азатиоприн + липосомы П/Ж (6:4)	44167±2055**, ***	677.5±54.6**, ***
Азатиоприн + липосомы П	34500±3500**	521.7±33.5**
Примечания: (см. табл.1).

Полученные данные свидетельствуют о том, что оптимальным соотношением: фосфолипиды печени нерпы: жир нерпы, при котором наблюдалось максимальное иммуностимулирующее действие, является 4:6.

Изучение иммунобиологической активности липосом, полученных предложенным способом, проводили на мышах обоего пола линии F1 (СВАхС57В1/6) со средней массой тела 20-22 грамма в реакции фагоцитоза Staphylococcus aureus перитонеальными макрофагами in vitro по методике И.С.Фрейдлин [И.С.Фрейдлин. Использование культуры мышиных перитонеальных макрофагов в качестве моделей для изучения клеток мононуклеарной фагоцитарной системы организма и их применение под влиянием биологически активных веществ // Метод, рекоменд. - Л., 1976]. В реакции фагоцитоза подсчитывали два показателя: активность (процент фагоцитирующих клеток от общего числа сосчитанных макрофагов) и интенсивность (среднее количество микроорганизмов, поглощенное одной клеткой). Подавление функций макрофагов моделировали введением классического иммунодепрессанта азатиоприна в концентрации 500 мкг/мл в культуральную среду. Действие азатиоприна вызывало снижение активности фагоцитоза на 50%, интенсивности фагоцитоза интактных макрофагов - на 48.25%. Липосомы вводили в среду с иммуносупрессированными клетками в концентрации 200 мкг/мл (в пересчете на жир нерпы). Анализ полученных данных показал, что введение в данном опыте липосом, полученных предложенным способом, на фоне предварительного воздействия азатиоприном достоверно превышало оба показателя и восстанавливало их до уровня интактных (см. табл.4).

Таблица 4Показатели фагоцитоза Staphylococcus aureus перитонеальными макрофагами мышей in vitro при воздействии липосомальных средств, полученных на основе фосфолипидов печени нерпы
Группы животных	Активность фагоцитоза	Интенсивность фагоцитоза
Контроль (интактные клетки)	64.16±5.36	12.58±1.08
Азатиоприн, 500 мкг/мл	35.29±1.12*	6.51±0.32*
Азатиоприн + липосомы П/Ж (4:6)	63.23±4.18**	12.35±1.09**
Примечания: (см. табл.1).

Согласно этим данным можно сделать вывод о стимулирующем действии полученных липосом на фагоцитарную активность макрофагов in vitro.

Гепатопротекторную активность липосом, полученных предложенным способом, изучали на крысах-самцах линии Wistar с исходной массой 180-200 г. Липосомальные средства на основе фосфолипидов печени нерпы вводили перорально в объеме 0.5 мл/200 г массы крысы 1 раз в сутки в течение 7-и, 14-и и 21-го дня. Соответствующие контрольные группы животных в аналогичных условиях получали дистиллированную воду в эквивалентном объеме. Действие липосомальных средств на основе фосфолипидов печени нерпы было изучено на животных с токсическим гепатитом. Токсический гепатит вызывали подкожным введением крысам 50%-ного масляного (V/V) раствора тетрахлорметана (CCl₄) в объеме 0,4 мл на 100 г веса, 1 раз в сутки, в течение четырех дней. В качестве препарата сравнения был использован «Холосас», рекомендуемый при заболеваниях гепатобилиарной системы в качестве желчегонного средства [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 15-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: ООО «Изд-во Новая волна», 2005. - 1200 с.]. «Холосас» вводили крысам с CCl₄ -гепатитом в объеме 0,1 мл на 100 г массы. Желчь для исследования получали в условиях острых опытов под наркозом (0,1 мл внутрибрюшинно 25% водного раствора тиопентала-натрия).

Оценку желчевыделительной функции печени проводили по скорости секреции желчи [Скакун Н.П., Олейник А.Н. Сравнительное действие атропина и метацина на внешнесекреторную функцию печени // Фармакология и токсикология. - 1967. - Т.30. - №3. - С.334-337] (см. табл.5).

Таблица 5Влияние липосом на основе фосфолипидов печени байкальской нерпы на скорость секреции желчи у белых крыс при токсическом гепатите, вызванном тетрахлорметаном (ТХМ)
Условия опыта	Скорость секреции желчи в течение 4-х часов, мг/мин на 100 г
	1 ч	2 ч	3 ч	4 ч
Интактные животные	6.6±0.1	6.4±0.2	5.7±0.08	5.3±0.5
7 сутки
Контроль (ТХМ)	5.4±0.1	5.1±0.2	5.1±0.05	3.3±0.0
ТХМ + Холосас	5.6±0.4	6.3±0.6*	5.9+0.4*	4.1±0.4*
ТХМ + Липосомы	6.5±0.2*, **	6.9±0.2*	6.6±0.4*	6.0±0.4*, **
14 сутки
Контроль (ТХМ)	4.4±0.03	4.0±0.03	3.3±0.0	3.3±0.3
ТХМ + Холосас	7.1±0.1*	6.5±0.1*	5.1+0.3*	4.8±0.3*
ТХМ + Липосомы	7.4±0.1*	6.6±0.08*	6.0±0.1*, **	5.3±0.1*, **
21 сутки
Контроль (ТХМ)	5.7±0.2	5.4±0.4	5.0±0.3	4.6±0.3
ТХМ + Холосас	6.0±0.3	5.6±0.2	5.4±0.4	4.7±0.2
ТХМ + Липосомы	7.6±0.6*, **	6.9±0.4*, **	5.4±0.2	5.0±0.3
Примечание (к табл. 5 и 6): * - достоверное отклонение значения относительно контрольного значения в соответствующие сроки эксперимента;** - достоверное отклонение значения относительно значения в группе животных, получавших «Холосас», в соответствующие сроки эксперимента.

В процессе экспериментальной фармакотерапии токсического гепатита липосомами, приготовленными заявляемым способом, наблюдали ускорение желчевыделительной функции печени крыс (табл.5). На ранних сроках эксперимента (7-й день) у крыс, получавших липосомы, скорость секреции желчи возрастала по сравнению с животными контрольной группы на 20.4%, 35%, 29% и в 2 раза в 1-й, 2-й, 3-й и 4-й часы наблюдения соответственно. На 14-й день опыта под влиянием липосом скорость секреции желчи возрастала в 1.6 раза (после 1-го, 2-го и 4-го часа опыта) и в 1.8 раза (после 3-го часа опыта) по сравнению с контролем. На 21-й день опыта у крыс, получавших испытуемые липосомы, скорость секреции желчи возрастала умеренно. Так, через 1 час после их введения скорость секреции желчи увеличилась на 33%, а через 2 часа - на 27% по сравнению с контролем; тогда как через 3 и 4 часа после введения липосом существенной разницы в скорости выделения желчи у животных не наблюдалось. Необходимо отметить, что в некоторые сроки эксперимента скорость выделения желчи у животных, принимавших липосомы, была достоверно выше таковой у животных, получавших фармакопейное средство «Холосас».

Оценку желчеобразовательной функции печени производили по общему количеству выделенной желчи, концентрации желчных кислот [Карбач Я.И. Количественное определение желчных кислот в желчи и крови с применением хроматографического метода // Биохимия. - 1961. - Т.26. - №2. - С.305-309]. Концентрацию холестерина в желчи определяли по методу [Дроговоз С.М. Нарушение интенсивности желчеотделения и химического состава желчи при дистрофии печени, вызванной четыреххлористым углеродом // Вопросы медицинской химии. - 1971. - Вып.4. - С.397-400], билирубина - по методу [Скакун Н.П. Нейрогуморальный механизм желчегонного действия инсулина. // Проблемы эндокринологии. - 1956. - №6. - С.75-78].

Биохимические показатели секретируемой желчи подопытных животных представлены в табл. 6, из которой следует, что при введении животным липосом общее количество желчи, выделенное за 4 часа (весь период наблюдения), повышалось на 8.3% (после 7-и суток), на 68.7% (после 14-и суток) и на 20.3% (после 21-х суток) по сравнению с контролем в соответствующие сроки эксперимента. Необходимо отметить, что по данному показателю активность липосом была достоверно выше, чем у «Холосаса». Наряду с ускорением холереза под влиянием липосом отмечены позитивные изменения и в химическом составе желчи. Так, концентрация общих желчных кислот в секретируемой желчи повышалась с 7-х суток наблюдения и превышала таковую в контроле на 58% (так же как и на 14-е сутки), а на 21-е сутки - на 72%; содержание билирубина повышалось на 20% (на 7-е и 14-е сутки) и на 85% (на 21-е сутки эксперимента). При этом количество холестерина оставалось на одном и том же уровне на 7-е сутки, на 14-е сутки уменьшалось на 18%, а на 21-е сутки увеличивалось в 4 раза (см. табл.6).

Таблица 6Влияние липосом на основе фосфолипидов печени байкальской нерпы на биохимический состав желчи у белых крыс при токсическом гепатите, вызванном тетрахлорметаном (n=5)
Условия опыта	Общее количество желчи, выделенное за 4 часа	Содержание желчных кислот	Содержание билирубина	Содержание холестерина
1	2	3	4	5
	мг/100 г	Мг %
Интактные животные	1440±54	62.7	20	5.15
7 сутки
Контроль (ТХМ)	1134±24	54.15	5	11.55
ТХМ + Холосас	1314±118*	48.45	6	10.4
ТХМ + Липосомы	1560±148*	85.5	6	12.25
14 сутки
Контроль (ТХМ)	900±19	57	5	9.9
ТХМ + Холосас	1410±51*	85.5	6	9.85
ТХМ + Липосомы	1518±26*, **	85.5	6	8.1
21 сутки
Контроль (ТХМ)	1242±81	62.7	7	0.8
ТХМ + Холосас	1302±76	96.9	18	1.85
ТХМ + Липосомы	1494±94*, **	108.3	13	3.9
Примечания: (см. табл.5).

По результатам исследований активности липосомального средства, полученного предложенным способом, видно, что оно является корректором иммунной и гепатобилиарной систем организма. Это в свою очередь позволяет предполагать эффективность применения полученного средства при состояниях, сопровождающихся угнетением иммунной системы организма и нарушениями желчеотделительной функции печени.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, позволил установить, что заявитель не обнаружил аналогичных технических решений.

Следовательно, заявляемое изобретение соответствует условиям «новизна» и «изобретательский уровень».

Заявляемый способ получения липосом осуществляется следующим образом.

Фосфолипиды по известному способу экстрагируют из печени байкальской нерпы [см. М. Кейтс. Техника липидологии. М.: «Мир», 1975. - 236 с.]. К 6-7 г свежей печени прибавляют 3 мл воды и 30 мл смеси хлороформ-метанол (1:2) и ткань гомогенизируют в гомогенизаторе с ножами [Foss Tecato-2094] в течение 2 мин при комнатной температуре. Гомогенат центрифугируют в течение 10 минут при 3000 об/мин, супернатант декантируют и остаток реэкстрагируют 38 мл смеси хлороформ-метанол-вода (1:2:0.8) в гомогенизаторе [Foss Tecato-2094] в течение 2 мин. Ткань отделяют центрифугированием в течение 10 минут при 3000 об/мин, объединенные супернатанты разбавляют 20 мл хлороформа и 20 мл воды, водно-метанольную и хлороформную фазу разделяют отстаиванием в делительной воронке. Нижний хлороформный слой концентрируют на роторном испарителе [испаритель ротационный ИР-1М2 ТУ 25-1173.102-84] при 30-35°С. Остаток растворяют в 10 мл хлороформа. Далее к раствору суммарных липидов в хлороформе приливают пятикратный объем ацетона и смесь выдерживают 2-3 ч при 0°С, выпавший осадок отделяют центрифугированием в течение 10 минут при 3000 об/мин. С помощью пипетки вносят раствор фосфолипидов печени нерпы, жира байкальской нерпы [ТУ 9281-017-02069473-2001] и антиоксиданта альфа-токоферола [см. М.Д.Машковский. Лекарственные средства: в 2-х томах. Т.2. - 11-е изд. Стер. - М.: Медицина, 1988. - С.37-39] в соотношении 4:6:0.05 (0.1 г смеси) в органическом растворителе (1 мл хлороформа + 1 мл метанола) в толстостенную круглодонную колбу. Испаряют растворитель на роторном испарителе [испаритель ротационный ИР-1М2 ТУ 25-1173.102-84] так, чтобы дать возможность полученной смеси распределиться в виде тонкой пленки по стенке колбы. В колбу добавляют раствор, содержащий 0.25 М сахарозу, 0.01 М трис-буфер; 0.001 М ЭДТА, рН 7.4, встряхивают до получения однородной суспензии на механической качалке [Установка выращивания микроорганизмов, термостатированная УВМТ-12-250] в течение 30 минут. Обрабатывают липидную смесь в течение 7 минут ультразвуком на диспергаторе УЗДН-2Т при водяном охлаждении при частоте 22 кГц. Обработанную смесь центрифугируют в течение 90 минут при 105000 g и отбирают верхние три четверти надосадочной жидкости.

Таким образом, изложенные сведения свидетельствуют о том, что заявляемый способ позволяет получить липосомальное средство, обладающее самостоятельным лечебным - иммунокорригирующим и гепатопротекторным - действием, и расширить сырьевую базу для получения липосом, используя дешевое природное сырье.

Следовательно, заявленное изобретение соответствует условию «промышленная применимость».

Способ получения липосом, обладающих иммунокорригирующим и гепатопротекторным действием, характеризующийся тем, что проводят экстракцию фосфолипидов из печени байкальской нерпы, растворяют смесь полученных фосфолипидов и жир байкальской нерпы в органическом растворителе в соотношении 4:6 с антиоксидантом α-токоферолом, высушивают тонкий слой липидов на роторном испарителе, добавляют буферный раствор, встряхивают смесь до получения однородной суспензии, проводят обработку липидной смеси ультразвуком при водяном охлаждении, далее центрифугируют смесь и отделяют верхние три четверти надосадочной жидкости.