Амидные производные 2,3,4,5-тетрагидробензо [f]-[1,4] оксазепин-5-карбоновой кислоты в качестве ингибиторов гамма-секретазы, предназначенных для лечения болезни альцгеймера

Амидные производные 2,3,4,5-тетрагидробензо [f]-[1,4] оксазепин-5-карбоновой кислоты в качестве ингибиторов гамма-секретазы, предназначенных для лечения болезни альцгеймера

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящее изобретение относится к производным бензоксазепинона формулы

где R¹ представляет собой водород, низший алкокси, галоген или -NR'R'';

n означает 1 или 2;

R', R'' независимо друг от друга представляют собой водород или низший алкил;

R² представляет собой водород, низший алкил, -(СН₂)_m-циклоалкил, -(СН₂)_m-фенил или-(СН₂)_m-O-(низший алкил);

m означает 0, 1 или 2;

R³ представляет собой низший алкил, -(СН₂)_m-С(O)O-(низший алкил), циклоалкил или -(СН₂)_m-фенил, который является незамещенным или замещенным одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена или низшего алкила;

R⁴ представляет собой -(СН₂)_o-фенил, который является незамещенным или замещенным одним или двумя заместителями, которые выбирают из группы, состоящей из галогена, трифторметила, -NR'R'', нитро или -SO₂NH₂, или

представляет собой циклоалкил, незамещенный или замещенный фенилом,

или представляет собой - (CR'R'')_о-гетероциклил, который выбирают из группы, состоящей из тетрагидропиран-4-ила, пиридин-3-ила, индол-3-ила, необязательно замещенного галогеном или группой низший алкокси, или тиофен-2-ил, фуран-2-ил, -NH-пиридин-2-ил, необязательно замещенный группой нитро,

или бензоимидазол-2-ил, 2-оксотетрагидрофуран, 1-бензилпиперидин-4-ил, или бензо[1,3]диоксол-5-ил,

или представляет собой тетрагидронафталин-1-ил,

- CHR'-нафталин-2-ил,

- флуорен-9-ил,

- (СН₂)_o-S-низший алкил,

- (СН₂)_о-S-бензил,

- (CH₂)_o-C(O)NH₂,

- (CH₂)_oNR'R'',

- СН[С(O)NH₂]-(СН₂)_о-фенил,

- (СН₂)_o-CF₃,

- (CH₂)_o-CR'R''-CH_2-NR'R''

и о представляет собой 1 или 2,

и к их фармацевтически приемлемым кислотно-аддитивным солям (солям - продуктам присоединения кислоты), за исключением следующих соединений:

фенэтиламид 4-бензил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо|f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты,

бутиламид 4-бензил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты,

фенэтиламид 4-циклогексил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты,

бутиламид 4-циклогексил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты.

Указанные исключенные соединения описаны, в частности, в J. Org. Chem., 1999, 64, 1074-1076, в связи со способом, в соответствии с которым используют бифункциональные исходные вещества, содержащие функциональные группы альдегида и карбоновой кислоты.

При использовании в тексте настоящей заявки термин "низший алкил" означает насыщенную алкильную группу с линейной или разветвленной цепью, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, например метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, 2-бутил, трет-бутил и подобные группы. Предпочтительными низшими алкильными группами являются группы, содержащие 1-4 атома углерода.

Термин "циклоалкил" означает насыщенную карбоциклическую группу, содержащую 3-7 атомов углерода.

Термин "галоген" означает хлор, иод, фтор и бром.

Термин "низший алкокси" означает группу, в которой алкильные остатки являются такими, как определено выше, и которые присоединяются через атом кислорода.

Термин "фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли" означает соли с неорганическими и органическими кислотами, например, такими как хлороводородная кислота, азотная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, лимонная кислота, муравьиная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, уксусная кислота, янтарная кислота, винная кислота, метансульфоновая кислота, n-толуолсульфоновая кислота и подобные кислоты.

Было обнаружено, что соединения общей формулы I являются ингибиторами γ-секретазы и родственные соединения могут быть использованы для лечения болезни Альцгеймера.

Болезнь Альцгеймера (AD) является наиболее распространенной причиной деменции в старческом возрасте. С точки зрения патологии болезнь Альцгеймера характеризуется отложением в мозге амилоидов, во внеклеточных бляшках и внутриклеточных нейрофибриллярных узлах. Амилоидные бляшки в основном состоят из амилоидных пептидов (Абета-пептидов), которые возникают из β-амилоидного белка-предшественника (АРР - сокр от англ. Amyloid Precursor Protein) в результате нескольких стадий протеолитического расщепления. Идентифицировано несколько форм АРР, преобладающими из них являются белки, состоящие из 695, 751 и 770 аминокислот. Они все возникают от одного гена посредством дифференциального сплайсинга. Абета-пептиды происходят из того же самого домена АРР, но различаются по своим N- и С-концам, основные представители имеют в длину 40 и 42 аминокислоты.

Абета-пептиды продуцируются из АРР посредством последовательного действия 2 протеолитических ферментов, называемых β- и γ-секретазами. β-Секретаза оказывает расщепляющее действие сначала во внеклеточном домене АРР как раз снаружи транс-мембранного домена (ТМ - сокр от англ. trans-membrane) с продуцированном при этом С-концевого фрагмента АРР, содержащего ТМ-домен и цитоплазматический домен (CTFβ). CTFβ представляет собой субстрат для γ-секретазы, который оказывает расщепляющее действие в нескольких соседних позициях внутри ТМ домена с продуцированном при этом Абета-пептидов и цитоплазматического фрагмента. Большая часть Абета-пептидов имеют длину, соответствующую 40 аминокислотам (Аβ40), незначительное количество таких пептидов содержит дополнительные 2 аминокислоты на С-концах. Последние, как предполагается, являются наиболее патогенными амилоидными пептидами.

β-Секретаза представляет собой типичную аспартилпротеазу. γ-Секретаза обладает протеолитической активностью и состоит из нескольких белков, их точное строение полностью не установлено. Однако пресенилины являются существенными компонентами проявления такой активности и могут представлять собой новую группу атипичных аспартилпротеаз, которые оказывает расщепляющее действие внутри ТМ-доменов их субстратов и которые сами являются политопичными мембранными белками. Другими существенными компонентами γ-секретазы могут быть никастрин (nicastrin) и продукты генов aph1 и pen-2. Подтвержденными субстратами для γ-секретазы являются АРР и белки семейства рецепторов Notch, однако γ-секретаза обладает специфичностью по отношению к петлевому субстрату и может дополнительно расщеплять мембранные белки, не относящиеся к семействам АРР и Notch.

Активность γ-секретазы совершенно необходима для продуцирования Абета-пептидов. Это было показано как генетическими методами, т.е. абляцией пресенилиновых генов, так и ингибированием низкомолекулярными соединениями. Поскольку в соответствии с амилоидной гипотезой болезни Альцгеймера продуцирование и отложение Абета-пептидов является основной причиной заболевания, полагают, что селективные и эффективные ингибиторы γ-секретазы будут полезны для профилактики и лечения болезни Альцгеймера.

Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению будут полезны для лечения болезни Альцгеймера посредством блокирования активности γ-секретазы и снижения или предотвращения образования различных амилоидогенных Абета-пептидов.

Современному состоянию исследований в области ингибирования γ-секретазы посвящено множество публикаций, например, следующие публикации:

Nature Reviews/Neuroscience, Vol.3, April 2002/281,

Biochemical Society Transactions (2002), Vol.30, part 4,

Current Topics in Medicinal Chemistry, 2002, 2, 371-383,

Current Medicinal Chemistry, 2002, Vol.9, No.11, 1087-1106,

Drug Development Research, 56, 211-227, 2002,

Drug Discovery Today, Vol.6, No.9, May 2001, 459-462,

FEBS Letters, 483, (2000), 6-10,

Science, Vol.297, 353-356, July 2002, и

Journ. of Medicinal Chemistry, Vol.44, No.13, 2001, 2039-2060.

Целью настоящего изобретения являются соединения формулы I сами по себе, применение соединений формулы I и их фармацевтически приемлемых солей для получения лекарственных средств, предназначенных для лечения заболеваний, связанных с ингибированием γ-секретазы, получение указанных соединений, лекарственные средства на основе соединения согласно настоящему изобретению и их получение, а также применение соединений формулы I для контроля или профилактики болезни Альцгеймера.

Еще одной целью настоящего изобретения являются все виды оптически чистых энантиомеров, рацематы и диастереомерные смеси соединений формулы I.

Наиболее предпочтительными соединениями являются такие соединения, в которых R² представляет собой низший алкил.

Особенно предпочтительны соединения этой группы, в которых R³ представляет собой циклоалкил и R⁴ представляет собой -(СН₂)_о-фенил, замещенный группой дигалоген или -NR'R'', или означает тетрагидропиран-4-ил, или означает тетрагидронафталин-1-ил, или означает -(CH₂)_о-пиридин-3-ил.

К этой группе относятся следующие конкретные соединения:

циклогексиламид 7-бром-4-(2,6-дифторбензил)-2-изопропил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты,

циклогексиламид 7-хлор-4-(4-хлор-2-фторбензил)-2-изопропил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты,

циклогексиламид 7-бром-4-(4-хлор-2-фторбензил)-2-изопропил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты и

циклогексиламид 7-бром-4-(4-диметиламинобензил)-2-изопропил-9-метокси-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты, или

циклогексиламид 7-хлор-2-этил-3-оксо-4-(тетрагидропиран-4-ил)-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты, или

циклогексиламид 7-хлор-2-изопропил-3-оксо-4-(1,2,3,4-тетрагидронафталин-1-ил)-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты и

циклогексиламид 8-диэтиламино-2-изопропил-3-оксо-4-(1,2,3,4-тетрагидронафталин-1-ил)-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты, или

циклогексиламид 7-хлор-2-изопропил-3-оксо-4-пиридин-3-илметил-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты.

Другими предпочтительными соединениями являются такие соединения, в которых R² означает низший алкил, где R³ представляет собой низший алкил и R⁴ представляет собой -(СН₂)_о-фенил, замещенный группой дигалоген или NR'R'', или

- (CR'R'')_оиндол-3-ил, замещенный низшим алкокси, или

- циклоалкил, или

- (СН₂)_о-бензо[1,3]диоксол-5-ил, или

- 1-бензилпиперидин-4-ил.

К этой группе относятся следующие конкретные соединения:

трет-бутиламид 7-хлор-4-(2,6-дифторбензил)-2-этил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты,

бутиламид 4-(4-диметиламинобензил)-2-изопропил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты,

бутиламид 7-хлор-4-(4-диметиламинобензил)-2-изопропил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты,

бутиламид 4-(4-диметиламинобензил)-2-изопропил-8-метокси-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты,

трет-бутиламил 7-бром-4-(4-диметиламинобензил)-2-изопропил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты,

трет-бутиламид 9-этокси-2-изопропил-4-[2-(5-метокси-1Н-индол-3-ил)этил]-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты,

трет-бутиламид 7-хлор-4-циклопентил-2-этил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты,

трет-бутиламид 4-бензо[1,3]диоксол-5-илметил-8-диэтиламино-2-изопропил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты,

трет-бутиламид 4-(1-бензилпиперидин-4-ил)-2-изопропил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты.

Кроме того, предпочтительными являются такие соединения, в которых R² представляет собой низший алкил, где R³ означает -(CH₂)_m-фвнил и R⁴ означает циклоалкил.

К этой группе относится следующее конкретное соединение:

бензиламид 7-хлор-4-циклогексил-2-изопропил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты.

Кроме того, предпочтительными являются такие соединения, в которых R² представляет собой низший алкил, где R³ означает -(СН₂)_m-С(O)O-низший алкил и R⁴ означает -(CH₂)_о-фенил, замещенный группой CF₃ или галогеном.

К этой группе относятся следующие конкретные соединения:

трет-бутиловый эфир {[7-хлор-2-изопропил-3-оксо-4-(3-трифторметилбензил)-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбонил]амино}уксусной кислоты и

трет-бутиловый эфир {[7-бром-4-(2-хлорбензил)-2-изопропил-9-метокси-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбонил]амино}уксусной кислоты.

Соединения формулы I согласно настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые соли могут быть получены с использованием методов, известных из предшествующего уровня техники, например в соответствии со способами, описанными ниже, такие способы включают:

а) взаимодействие соединения формулы

с соединением формулы

и с соединением формулы

с получением при этом соединения формулы

и если необходимо, превращение полученных соединений в фармацевтически приемлемые соли с кислотами (соли - продукты присоединения кислоты).

Соединения формулы I могут быть получены в соответствии со следующей схемой 1.

Схема 1

На этой схеме R¹-R⁴ являются такими, как описано выше.

Общий синтез скелета бензоксазепинонов описан в Zhang et al.: J. Org. Chem. 1999, 64, 1074 ff. Соответствующий о-гидроксибензальдегид (V) подвергают взаимодействию с алкиловым сложным эфиром альфа-бромкарбоновой кислоты (VI) с получением при этом алкилового сложного эфира 2-формилфеноксиуксусной кислоты (VII), который затем омыляют, получая при этом 2-формилфеноксиуксусную кислоту (II). Эту кислоту подвергают взаимодействию с амином (III) и изонитрилом (IV) в соответствии с реакцией типа Уги (Ugi) с получением при этом производного бензоксазепинона формулы I.

Исходные соединения (гидроксибензальдегид V и α-бромзамещенные сложные эфиры VI) являются коммерчески доступными или могут быть получены в соответствии с известными методиками.

Подробное описание можно найти ниже и в примерах 1-196.

Некоторые соединения формулы I могут быть превращены в соответствующие кислотно-аддитивные соли, например соединения, содержащие аминогруппу.

Превращение осуществляют посредством обработки по меньшей мере стехиометрическим количеством подходящей кислоты, например, такой как хлороводородная кислота, бромоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и подобные кислоты, или стехиометрическим количеством органической кислоты, например, такой как уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, яблочная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, коричная (β-фенилакриловая) кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, n-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота и подобные кислоты. Обычно свободное основание растворяют в инертном органическом растворителе, таком как диэтиловый простой эфир, этилацетат, хлороформ, этанол или метанол и подобные растворители, и добавляют кислоту в подобном растворителе. Температуру поддерживают в интервале от 0 до 50°С. Полученная соль выпадает в осадок самопроизвольно или может быть осаждена менее полярным растворителем.

Кислотно-аддитивные соли соединений формулы I могут быть превращены в соответствующие свободные основания посредством обработки по меньшей мере стехиометрическим эквивалентом подходящего основания, например, такого как гидроксид натрия или калия, карбонат калия, бикарбонат натрия, аммиак и подобные основания.

Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые аддитивные соли обладают ценными фармакологическими свойствами. В частности, было обнаружено что соединения согласно настоящему изобретению могут ингибировать γ-секретазу.

Соединения были исследованы в соответствии с методиками, приведенными ниже.

Описание исследования γ-секретазы

Активность тестируемых соединений может быть оценена при проведении исследования, в соответствии с которым количественно оценивают протеолитическое расщепление соответствующих субстратов под действием γ-секретазы. Это могут быть исследования клеток, где, например, субстрат γ-секретазы подвергают слиянию в его цитоплазматическом домене с фактором транскрипции. Клетки трансфектируют со слитым геном и геном-репортером, например, люциферазой жуков-светляков, в качестве усиливающего агента такой экспрессии используют фактор транскрипции. Расщепление слитого субстрата под воздействием γ-секретазы будет приводить к экспрессии гена-репортера, которая может быть подвергнута мониторингу с использованием подходящих методик. Активность γ-секретазы также может быть установлена анализом in vitro без использования клеток, согласно которому, например, клеточный лизат, содержащий комплекс γ-секретазы, инкубируют с подходящим АРР-производным субстратом, который расщепляется с образованием Абета-пептидов. Количество продуцируемых пептидов может быть установлено посредством специального анализа методом ELISA (иммуноферментный твердофазный анализ). Линии клеток нейрональной природы секретируют Абета-пептиды, которые могут быть количественно проанализированы с использованием специального анализа методом ELISA. Обработка соединениями, которые ингибируют γ-секретазы, приводит к снижению количества секретируемых Абета-пптидов, что позволяет осуществить количественную оценку ингибирования.

Исследование in vitro активности γ-секретазы осуществляют с использованием мембранной фракции НЕК293 в качестве источника γ-секретазы и с использованием рекомбинантного субстрата АРР. Последний состоит из С-концевых 100 аминокислот АРР человека, слитых с 6 х гистидиновым "хвостом" для очистки, и экспрессируется в E.coli в регулируемом векторе экспрессии, например, таком как pEt15. Такой рекомбинантный белок соответствует усеченному АРР-фрагменту, который образуется после расщепления γ-секретазой внеклеточного домена и который составляет γ-секретазный субстрат. Принципы, на которых строится исследование, раскрыты в Li Y.M. et al PNAS 97(11), 6138-6143 (2000). Клетки Неk293 механически разрушают и выделяют микросомальную фракцию посредством дифференциального центрифугирования. Мембраны солюбилизируют в детергенте (0,25% CHAPSO) и инкубируют с субстратом АРР. Абета-пептиды, которые продуцируются при расщеплении субстрата под воздействием γ-секретазы, регистрируют с использованием специфического исследования ELISA, как описано в Brockhaus M. et al., Neuroreport 9(7), 1481-1486 (1998).

Предпочтительные соединения характеризуются значением IC₅₀˜1,0. В приведенной ниже таблице указаны некоторые характеристики ингибирования γ-секретазы

Пример №	IC50 in vitro	Пример №	IC50 in vitro
1	0,28	115	0,97
10	0,97	117	0,89
12	1,05	122	0,96
16	0,89	133	0,31
30	1,10	134	0,18
36	0,77	150	0,67
76	1,16	160	0,46
86	0,83	165	0,88
89	1,04	178	0,81
96	0,62	186	0,52

Соединения формулы I и фармацевтические соли соединений формулы I могут быть использованы в качестве лекарственных средств, например в виде фармацевтических препаратов. Фармацевтические препараты могут быть введены перорально, например, в виде таблеток, таблеток с покрытием, драже, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, эмульсий или суспензий. Кроме того, введение эффективно может быть осуществлено ректально, например, в виде суппозиториев, парентерально, например, в виде растворов для инъекций.

Соединения формулы I могут быть использованы вместе с фармацевтически инертными, неорганическими или органическими носителями для получения фармацевтических композиций. В качестве носителей для таблеток, таблеток с покрытием, драже и твердых желатиновых капсул могут быть использованы, например, лактоза, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновые кислоты или их соли и тому подобные соединения. Подходящие носители для мягких желатиновых капсул представляют собой, например, растительные масла, воски, жиры, полутвердые и жидкие полиолы и тому подобные соединения. Однако в зависимости от природы активного соединения в случае мягких желатиновых капсул носитель может и не использоваться. Подходящие носители для получения растворов и сиропов представляют собой, например, воду, полиолы, глицерин, растительное масло и тому подобные соединения. Подходящие носители для суппозиториев представляют собой, например, природные или отвержденные масла, воски, жиры, полужидкие или жидкие полиолы и тому подобные соединения.

Фармацевтические композиции, кроме того, могут содержать консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, агенты, улучшающие смачиваемость, эмульгаторы, подсластители, подкрашивающие вещества, агенты, улучшающие вкус и запах, соли для регулирования осмотического давления, буферы, маскирующие агенты или антиоксиданты. Также они могут содержать и другие терапевтически значимые соединения.

Лекарственные средства, содержащие соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль и терапевтически инертный носитель, также являются объектом настоящего изобретения, также как и способ их получения, который включает введение одного или более соединения формулы I и/или фармацевтически приемлемой аддитивной соли с кислотой и, если необходимо, одного или более терапевтически значимого вещества в состав лекарственного препарата, вместе с одним или более терапевтически инертным носителем.

В соответствии с настоящим изобретением соединения формулы I, а также их фармацевтически приемлемые соли можно использовать для контроля или профилактики заболеваний, что основывается на ингибировании активности γ-секретазы, например, для контроля или профилактики такого заболевания как болезнь Альцгеймера.

Дозировка может варьироваться в широких пределах и будет, безусловно, регулироваться в зависимости от индивидуальных требований в каждом конкретном случае. В случае перорального введения дозировка для взрослых может варьироваться от приблизительно 0,01 мг до приблизительно 1000 мг в день соединения общей формулы I или соответствующего количества его фармацевтически приемлемой соли. Дневная дозировка может быть введена в виде одной дозы или разделенной на несколько доз и, в дополнение к этому, может быть превышен верхний предел, если обнаружится, что это необходимо по показаниям.

Изготовление таблеток (влажное гранулирование)

Позиция	Ингредиенты	мг/таблетка
		5 мг	25 мг	100 мг	500 мг
1.	Соединение формулы I	5	25	100	500
2.	Безводная лактоза DTG	125	105	30	150
3.	Sta-Rx 1500	6	6	6	30
4.	Микрокристаллическая целлюлоза	30	30	30	150
5.	Стеарат магния	1	1	1	1
Суммарное количество	167	167	167	831

Методика получения

1. Смешивают соединения по позициям 1, 2, 3 и 4 и проводят гранулирование, используя очищенную воду.

2. Высушивают гранулы при 50°С.

3. Пропускают гранулы через подходящее устройство для размола.

4. Добавляют вещество согласно позиции 5 и перемешивают в течение трех минут, затем прессуют, используя подходящий пресс.

Получение капсул

Позиция	Ингредиенты	мг/капсула
	5 мг	25 мг	100 мг	500 мг
1. Соединение формулы IA или IB	5	25	100	500
2. Водная лактоза	159	123	148	-
3. Кукурузный крахмал	25	35	40	70
4. Тальк	10	15	10	25
5. Стеарат магния	1	2	2	5
Суммарное количество	200	200	300	600

Методика приготовления

1. Смешивают соединения по позициям 1, 2 и 3 в подходящем смесителе в течение 30 минут.

2. Добавляют соединения согласно позициям 4 и 5 и смешивают в течение 3 минут.

3. Помещают в подходящие капсулы

Приведенные ниже примеры иллюстрируют настоящее изобретение, не ограничивая его. Примеры представляют соединения, которые могут существовать в виде диастереомерных смесей, рацематов или в виде оптически чистых соединений.

Пример 1

Циклогексиламид 7-бром-4-(2,6-дифторбензил)-2-изопропил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

а) 2-(4-Бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляная кислота

К раствору 0,67 г (3,3 ммоль) 5-бромсалицилальдегида в диметилформамиде (6 мл) добавляют небольшими порциями 0,2 г гидрида натрия (60%-ная суспензия в минеральном масле, 5 ммоль) при 0°С. После перемешивания в течение приблизительно получаса медленно добавляют при комнатной температуре 1,05 г этилового эфира 2-бром-3-метилмасляной кислоты (5 ммоль) и перемешивают полученную смесь при 90°С в течение ночи. После охлаждения добавляют ледяную воду (25 мл) и 1н. раствор гидроксида натрия до щелочного значения рН раствора. Полученную смесь экстрагируют три раза этилацетатом, объединенные органические слои высушивают (MgSO₄) и упаривают. После фильтрации на короткой колонке полученного остатка получают сложный эфир, который используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Полученный сложный эфир растворяют в 2 мл метанола и добавляют 2н. водный раствор гидроксида натрия (2 мл). После перемешивания в течение 1 часа при комнатной температуре растворитель удаляют на роторном испарителе. Добавляют воду (3 мл) и 4н. раствор хлороводородной кислоты до достижения рН4. Полученную смесь экстрагируют три раза этилацетатом, объединенные органические слои высушивают (MgSO₄) и упаривают, получая при этом 0,125 г указанного в заголовке соединения в виде бесцветного маслянистого вещества. Масс-спектр, m/e (%): 299,0 (М-Н⁺, 93); 301,0 (М-Н⁺, 100).

б) Циклогексиламид 7-бром-4-(2,6-дифторбензил)-2-изопропил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

К раствору 0,12 г 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кислоты (0,4 ммоль) в диметилсульфоксиде (0,8 мл) добавляют 0,057 г 2,6-дифторбензиламина (0,4 ммоль) и 0,044 г циклогексилизоцианида (0,4 ммоль) и перемешивают полученную смесь в течение ночи. Затем добавляют 10%-ный водный раствор хлорида натрия (5 мл), после чего полученную смесь экстрагируют три раза этилацетатом. Объединенные органические слои высушивают (MgSO₄) и упаривают в вакууме. Полученный остаток очищают, используя колоночную хроматографию со смесью этилацетат/гексан (в соотношении 1:4) в качестве элюента, получая при этом 0,03 г указанного в заголовке соединения в виде светло-желтого вспененного вещества.

Масс-спектр, m/e (%): 535,3 (М+Н⁺, 100); 537,3 (M+H⁺, 95).

Пример 2

3,4-Дихлорбензиламид 7-бром-4-(2,6-дифторбензил)-2-изопропил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

Указанное в заголовке соединение получают с соизмеримым выходом в соответствии с методикой, описанной в примере 1, например, используя 1,2-дихлор-4-изоцианометилбензол вместо циклогексилизоцианида на стадии б).

Масс-спектр, m/e (%): 629 (М+Н₂О+Н⁺, 58); 630 (М+Н₂О+Н⁺, 100).

Пример 3

Циклогексиламид 7-бром-4-(2,6-дифторбензил)-2-этил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

2,6-Дифторбензиламин (51 мг, 0,35 ммоль) и циклогексилизоцианид (39 мг, 0,36 ммоль) добавляют к раствору 2-(4-бром-2-формилфенокси)масляной кислоты (получена по методике, аналогичной методике получения 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кислоты [пример 1], из этилового эфира 2-бром-3-метилмасляной кислоты (100 мг, 0,35 ммоль) в метаноле (0,5 мл). После перемешивания в течение 2 ч при комнатной температуре указанное в заголовке соединение (диастереомер 1 [обладает ингибирующей активностью], время удерживания 2,09 мин, 17,9 мг; диастереомер 2 [обладает ингибирующей активностью], время удерживания 2,28 мин, 7,3 мг, суммарный выход 14%, масс-спектр: m/e=521,1 [М+Н⁺]) выделяют из реакционной смеси обращенно-фазовой, препаративной ЖХВР (жидкостная хроматография высокого разрешения) (колонка YMC CombiPrep С18, 50×20 мм, растворитель - градиент 5-95% СН₂CN в 0,1% ТФУ (водн.) в течение 6,0 мин, λ=230 нм, скорость потока 40 мл/мин.).

Пример 4

Циклогексиламид 7-бром-2-циклогексилметил-4-(2,6-дифторбензил)-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

Указанное в заголовке соединение, масс-спектр: m/e=589,4 [М+Н⁺], получают по методике, аналогичной описанной в примере 3, из 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-циклогексилпропионовой кислоты (получена по методике, аналогичной методике получения 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кислоты [пример 1], из этилового эфира 2-бром-3-циклогексилпропионовой кислоты) в виде смеси диастереомеров.

Пример 5

Циклогексиламид 7-бром-2-бутил-4-(2,6-дифторбензил)-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

Указанное в заголовке соединение, масс-спектр: m/e=549,4 [М+Н⁺], получают по методике, аналогичной описанной в примере 3, из 2-(4-бром-2-формилфенокси)гексановой кислоты (получена по методике, аналогичной методике получения 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кислоты [пример 1], из метил (2-бромкапроата) в виде смеси диастереомеров.

Пример 6

Циклогексиламид 7-хлор-4-циклогексил-2-этил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

Указанное в заголовке соединение, масс-спектр: m/e=433,5 (М+Н⁺), получают по методике, аналогичной описанной в примере 3, из циклогексиламина и 2-(4-хлор-2-формилфенокси)масляной кислоты (получена по методике, аналогичной методике получения 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кислоты [пример 1], из этил 2-бром-н-бутирата и 5-хлорсалицилальдегида) в виде двух разделяемых диастереомеров (оба обладают ингибирующей активностью).

Пример 7

Циклогексиламид 7-хлор-4-(2-хлорбензил)-2-этил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

Указанное в заголовке соединение, масс-спектр: m/e=475,3 (М+Н⁺), получают по методике, аналогичной описанной в примере 3, из 2-хлорбензиламина и 2-(4-хлор-2-формилфенокси)масляной кислоты (получена по методике, аналогичной методике получения 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кислоты [пример 1], из этил-2-бром-н-бутирата и 5-хлорсалицилальдегида) в виде двух разделяемых диастереомеров (оба обладают ингибирующей активностью).

Пример 8

Циклогексиламид 7-хлор-4-циклобутил-2-этил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

Указанное в заголовке соединение, масс-спектр: m/e=405,4 (М+Н⁺), получают по методике, аналогичной описанной в примере 3, из циклобутиламина и 2-(4-хлор-2-формилфенокси)масляной кислоты (получена по методике, аналогичной методике получения 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кислоты [пример 1], из этилового эфира 2-бром-н-масляной кислоты и 5-хлорсалицилальдегида) в виде смеси диастереомеров.

Пример 9

Циклогексиламид 7-хлор-4-циклопентил-2-этил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

Указанное в заголовке соединение, масс-спектр: m/e=419,4 (М+Н⁺), получают по методике, аналогичной описанной в примере 3, из циклопентиламина и 2-(4-хлор-2-формилфенокси)масляной кислоты (получена по методике, аналогичной методике получения 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кислоты [пример 1], из этилового эфира 2-бром-н-масляной кислоты и 5-хлорсалицилальдегида) в виде двух разделяемых диастереомеров (оба обладают ингибирующей активностью).

Пример 10

Циклогексиламид 7-хлор-2-этил-3-оксо-4-(тетрагидропиран-4-ил)-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

Указанное в заголовке соединение, масс-спектр: m/e=435,4 (М+Н⁺), получают по методике, аналогичной описанной в примере 3, из 4-аминотетрагидропирана и 2-(4-хлор-2-формилфенокси)масляной кислоты (получена по методике, аналогичной методике получения 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кислоты [пример 1], из этилового эфира 2-бром-н-масляной кислоты и 5-хлорсалицилальдегида) в виде двух разделяемых диастереомеров (оба обладают ингибирующей активностью).

Пример 11

Циклогексиламид 7-хлор-2-этил-3-оксо-4-(3-трифторметилбензил)-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

Указанное в заголовке соединение, масс-спектр: m/e=509,3 (М+Н⁺), получают по методике, аналогичной описанной в примере 3, из 3-трифторбензиламина и 2-(4-хлор-2-формилфенокси)масляной кислоты (получена по методике, аналогичной методике получения 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кислоты [пример 1], из этилового эфира 2-бром-н-масляной кислоты и 5-хлорсалицилальдегида) в виде двух разделяемых диастереомеров (оба обладают ингибирующей активностью).

Пример 12

трет-Бутиламид 7-хлор-4-(2,6-дифторбензил)-2-этил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

Указанное в заголовке соединение, масс-спектр: m/e=451,3 (М+Н⁺), получают по методике, аналогичной описанной в примере 3, из 2,6-дифторбензиламина, трет-бутилизоцианида и 2-(4-хлор-2-формилфенокси)масляной кислоты (получена по методике, аналогичной методике получения 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кислоты [пример 1], из этилового эфира 2-бром-н-масляной кислоты и 5-хлорсалицилальдегида) в виде двух разделяемых диастереомеров (оба обладают ингибирующей активностью).

Пример 13

трет-Бутиламид 7-хлор-4-циклогексил-2-этил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

Указанное в заголовке соединение, масс-спектр: m/e=407,4 (М+Н⁺), получают по методике, аналогичной описанной в примере 3, из циклогексиламина, трет-бутилизоцианида и 2-(4-хлор-2-формилфенокси)масляной кислоты (получена по методике, аналогичной методике получения 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кислоты [пример 1], из этилового эфира 2-бром-н-масляной кислоты и 5-хлорсалицилальдегида) в виде двух разделяемых диастереомеров (оба обладают ингибирующей активностью).

Пример 14

трет-Бутиламид 7-хлор-4-(2-хлорбензил)-2-этил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

Указанное в заголовке соединение, масс-спектр: m/e=449,3 (М+Н⁺), получают по методике, аналогичной описанной в примере 3, из 2-хлорбензиламина, трет-бутилизоцианида и 2-(4-хлор-2-формилфенокси)масляной кислоты (получена по методике, аналогичной методике получения 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кислоты [пример 1], из этилового эфира 2-бром-н-масляной кислоты и 5-хлорсалицилальдегида) в виде двух разделяемых диастереомеров (оба обладают ингибирующей активностью).

Пример 15

трет-Бутиламид 7-хлор-4-циклобутил-2-этил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

Указанное в заголовке соединение, масс-спектр: m/e=379,3 (М+Н⁺), получают по методике, аналогичной описанной в примере 3, из циклобутиламина, трет-бутилизоцианида и 2-(4-хлор-2-формилфенокси)масляной кислоты (получена по методике, аналогичной методике получения 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кислоты [пример 1], из этилового эфира 2-бром-н-масляной кислоты и 5-хлорсалицилальдегида).

Пример 16

трет-Бутиламид 7-хлор-4-циклопентил-2-этил-3-оксо-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

Указанное в заголовке соединение, масс-спектр: m/e=393,3 (М+Н⁺), получают по методике, аналогичной описанной в примере 3 из циклопентиламина, трет-бутилизоцианида и 2-(4-хлор-2-формилфенокси)масляной кислоты (получена по методике, аналогичной методике получения 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кислоты [пример 1], из этилового эфира 2-бром-н-бутирата и 5-хлорсалицилальдегида) в виде двух разделяемых диастереомеров (оба обладают ингибирующей активностью).

Пример 17

трет-Бутиламид 7-хлор-2-этил-3-оксо-4-(тетрагидропиран-4-ил)-2,3,4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-5-карбоновой кислоты

Указанное в заголовке соединение, масс-спектр: m/e=409,3 (М+Н⁺), получают по методике, аналогичной описанной в примере 3, из 4-аминотетрагидропирана, трет-бутилизоцианида и 2-(4-хлор-2-формилфенокси)масляной кислоты (получена по методике, аналогичной методике получения 2-(4-бром-2-формилфенокси)-3-метилмасляной кисл