Антитела против моноцитарного хемоаттрактантного белка-1 (мср-1) и их применение

Антитела против моноцитарного хемоаттрактантного белка-1 (мср-1) и их применение

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Предшествующий уровень техники

Область, к которой относится изобретение

В описанных здесь вариантах настоящее изобретение относится к антителам против антигена, моноцитарного хемоаттрактанта, белка-1, (МСР-1) и к применению таких антител. В частности, в соответствии со своими вариантами настоящее изобретение относится к полноразмерным человеческим моноклональным антителам против антигена (МСР-1). Настоящее изобретение относится к кодирующим нуклеотидным последовательностям и к аминокислотным последовательностям, содержащим молекулы тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина, а более конкретно к последовательностям, соответствующим смежным последовательностям тяжелой и легкой цепей, охватывающим каркасные области и/или гипервариабельные области (области, определяющие комплементарность, CDR), в частности FR1-FR4 или CDR1-CDR3. Антитела согласно изобретению могут быть использованы для диагностики и лечения заболеваний, ассоциированных со сверхпродуцированием МСР-1. Настоящее изобретение также относится к гибридомам или к другим клеточным линиям, экспрессирующим указанные молекулы иммуноглобулина и моноклональные антитела.

Описание прототипов

Очевидно, что повышенное продуцирование ангиогенных факторов и пониженное продуцирование ингибиторов ангиогенеза раковыми клетками, везикулярными эндотелиальными клетками и другими стромальными клетками, индуцирует ангиогенез опухоли. Строма, состоящая из интерстициальных соединительных тканей, базальной мембраны, клеток крови, кровеносных сосудов и фибробластных клеток, окружает почти все клетки солидной опухоли. Взаимодействие между стромальными и раковыми клетками играет решающую роль в неоваскуляризации опухолей. Кроме того, макрофаги, которые также являются компонентами стромы, играют важную роль в ангиогенезе опухоли. (M. Ono et al., Cancer Chemother. Pharmacol. (1999) 43(Suppl.):S69-S71).

Макрофаги представляют собой крупные клетки стадии терминальной дифференцировки мононуклеарной фагоцитарной системы, а также представляют один из типов ключевых ангиогенных эффекторных клеток, продуцирующих большое число стимуляторов и ингибиторов роста. Известно, что ряд ангиогенных цитокинов продуцируется макрофагами, включая моноцитарный хемоаттрактант, белок-1, (МСР-1).

Известно, что МСР-1 является хемоаттрактантом для Т-лимфоцитов, базофилов и NK-клеток. МСР-1 является одним из наиболее эффективных молекул, обеспечивающих рекрутинг макрофагов. Макрофаги после их рекрутинга в участки воспаления или в опухоли могут генерировать различные ангиогенные цитокины, стимулируя тем самым патологический ангиогенез. Различные исследования выявили взаимосвязь между ангиогенезом, рекрутингом макрофагов и прогнозом для пациентов с различными видами опухолей (G. Fantanini et al., Int. J. Cancer (1996) 67:615; N. Weidner et al., J. Natl. Cancer. Inst. (1992) 84:1875). Leek и др. также продемонстрировали, что локальное увеличение числа макрофагов тесно связано с васкуляризацией и прогнозом тяжести заболевания у пациентов с раком молочной железы (Cancer Res. (1996) 56:4625). R. Huang и др. (Cancer Res. (2002) 62:2806-2812) показали, что коннексин 43 подавляет рост клеток глиобластомы человека путем ингибирования МСР-1, как было обнаружено с использованием технологии матричных массивов белка.

Goede и др. (Int. J. Cancer (1999) 82:765-770) впервые продемонстрировали, что МСР-1 обладает ангиогенной активностью, которая была эквивалентна активности VEGF в тесте, который проводили на кроличьей модели роговицы. В этой модели ангиогенная активность, индуцированная МСР-1, ассоциировалась с интенсивным рекрутингом макрофагов в кроличью роговицу. Salcedo и др. сообщали, что МСР-1 индуцирует хемотаксис человеческих эндотелиальных клеток в наномолярных концентрациях. Этот хемотаксический ответ ингибируется поликлональным антителом против человеческого МСР-1 (R. Salcedo et al., Blood (2000) 96(1):34-40).

МСР-1 представляет собой преобладающий цитокин, экспрессируемый в раковых клетках яичника (Negus R.P.M. et al., J. Clin. Investig. (1995) 95:2391-96; Sica A. et al., J. Immunology (2000) 164(2):733-8). Уровни МСР-1 также повышаются при ряде других раковых заболеваний человека, включая рак мочевого пузыря, рак молочной железы, рак легких и глиобластому.

Кроме того, в ряде исследований была выявлена важная роль МСР-1 в воспалении. Так, например, H.J. Anders et al. продемонстрировали экспрессию хемокинов и рецепторов хемокинов в процессе инициации и разложения иммунного комплекса, ассоциированного с гломерулонефритом (J. Am. Soc. Nephrol. (2001) 12:919-2001). Segerer и др. (J. Am. Soc. Nephrol. (2000) 11:2231-2242) также исследовали экспрессию МСР-1 и его рецептор, то есть хемокиновый рецептор 2 у человека с серповидноклеточным гломерулонефритом. J.A. Belperio и др. показали, что хемокин МСР-1/ССR2 играет решающую роль в патогенезе синдрома облитерирующего бронхиолита (J. Clin. Investig. (2001) 108:547-556). N.G. Frangogiannis et al. выявили роль МСР-1 в воспалительном ответе при инфаркте миокарда (Cardiovascular Res. (2002) 53:31-47). Gerard & Rollins (Nature Immunol. (2001) 2:108-115) и Reape & Groot (Atherosclerosis (1999) 147:213-225) также обсуждали роль МСР-1 в патогенезе атеросклероза и других заболеваний. Кроме того, Schmidt и Stern (Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. (2001) 21:297-299) описали взаимодействие МСР-1 при рестенозе.

Человеческий МСР-1, хемокин СС, состоящий из 76 аминокислот и имеющий на N-конце пироглутаминовую кислоту, был впервые выделен из нескольких источников, включая стимулированные фитогемаглютинином человеческие лимфоциты (Yoshimura T. et al., J. Immunol. (1989) 142:1956-62), клеточную линию глиомы человека (Yoshimura T. et al., J. Exp. Med. (1989) 169:1449-59) и миеломоноцитарную клеточную линию человека ТНР-1 (Matsushima K. et al., (1989) J. Exp. Med. (1989) 169:1485-90). МСР-1 был впервые описан как лимфоцитарный хемотаксический фактор (LDCF). Этот белок имеет другие названия, а именно опухолевый хемотаксический фактор (TDCF), происходящий от глиомы моноцитарный хемотаксический фактор (TDCF), происходящий от глиомы моноцитарный хемотаксический фактор (GDCF), хемотаксический фактор, происходящий от клеток гладкой мышцы (SMC-CF), моноцитарный фактор активации хемотаксиса (MCAF) и CCL2. Молекулярное клонирование МСР-1-кодирующей кДНК, (Furutani Y. et al., (1989) Biochem. Biophys. Res. Comm. (1989) 169:249-55; B.J. Rollins et al., Mol. Cell. Biol. (1989) 9:4687-95; Chang H.C. et al., Int. Immunol. (1989) 1:388-97) выявило присутствие открытой рамки считывания, состоящей из 99 аминокислот, включая сигнальный пептид, состоящий из 23 аминокислот. Мышиный гомолог гена МСР-1 был обозначен JE (B.J. Rollins et al., 1989).

В заявке WO 200189565, опубликованной 29 ноября 2001 г., были описаны поликлональные антитела против человеческого МСР-1 и было описано ингибирование роста опухоли у бестимусных ("голых") мышей-моделей благодаря использованию указанных поликлональных антител.

В описанных здесь вариантах настоящее изобретение относится к полноразмерным человеческим моноклональным антителам против человеческого МСР-1, которые блокируют МСР-1-индуцированный хемотаксис клеток ТНР-1, то есть клеточную линию пациента с острым моноцитарным лейкозом. Эти клетки были использованы в качестве суррогата для оценки миграции нормальных человеческих мононуклеарных клеток в кровоток. Инфильтрация мононуклеарных клеток, стимулированная МСР-1, играет определенную роль в патогенезе ряда воспалительных состояний, включая ревматоидный артрит, гломерулонефрит, атеросклероз, отторжение трансплантата, псориаз, рестеноз и аутоиммунные заболевания, такие как рассеянный склероз. Антитело, блокирующее активность МСР-1 и предотвращающее инфильтрацию моноцитов, может быть использовано для лечения этих и других воспалительных заболеваний.

Описание сущности изобретения

В описанных здесь вариантах настоящее изобретение относится к моноклональным антителам, которые, как было обнаружено, связываются с МСР-1 и влияют на функцию МСР-1. В других своих вариантах настоящее изобретение относится к человеческим анти-МСР-1 антителам и к препаратам, содержащим анти-МСР-1 антитела с нужными свойствами, а именно с перспективными терапевтическими свойствами, включая высокую аффинность связывания с МСР-1, способность нейтрализовать МСР-1 in vitro и способность ингибировать неоваскуляризацию солидных опухолей.

В одном из своих вариантов настоящее изобретение относится к полноразмерному человеческому моноклональному антителу, которое связывается с МСР-1 и имеет аминокислотную последовательность тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 98, 102, 106, 110, 114, 118, 122, 126, 130, 134, 138, 142 и 146. В одном из своих вариантов указанное антитело, кроме того, содержит аминокислотную последовательность легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 52, 56, 60, 64, 68, 72, 76, 80, 84, 88, 92, 96, 100, 104, 108, 112, 116, 120, 124, 128, 132, 136, 140, 144 и 148.

В соответствии с этим в одном из описанных здесь вариантов настоящее изобретение относится к выделенным антителам или к фрагментам этих антител, которые связываются с МСР-1. Как известно специалистам, указанными антителами предпочтительно могут быть, например, моноклональные, химерные и/или человеческие антитела. В описанных здесь вариантах настоящее изобретение также относится к клеткам, продуцирующим эти антитела.

В другом своем варианте настоящее изобретение относится к полноразмерному человеческому антителу, которое связывается с МСР-1 и которое содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи, включающей области CDR, имеющие последовательности, представленные на фиг.7 и 10. Следует отметить, что определение областей CDR может быть легко осуществлено специалистом. В общих чертах CDR представлены в описании настоящего изобретения в соответствии с нумерацией по Кэбату (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest vols. 1-3 (Firth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD, 1991).

В еще одном своем варианте настоящее изобретение относится к полноразмерному человеческому антителу, которое связывается с МСР-1 и содержит аминокислотную последовательность легкой цепи, включающей CDR, имеющие последовательности, представленные на фиг.8 и 9.

В другом своем варианте настоящее изобретение относится к полноразмерному человеческому антителу, которое связывается с МСР-1 и содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи, имеющую области CDR, включающие последовательности, представленные на фиг.7 и 10, и аминокислотную последовательность легкой цепи, имеющую области CDR, включающие последовательности, представленные на фиг.8 и 9.

В другом своем варианте настоящее изобретение относится к полноразмерному человеческому антителу, которое связывается с другими членами семейства МСР-1, включая, но не ограничиваясь ими, МСР-2, МСР-3 и МСР-4. В другом своем варианте настоящее изобретение относится к антителу, которое конкурирует с полноразмерными человеческими антителами согласно изобретению за перекрестное связывание с МСР-1.

Следует отметить, что указанные варианты осуществления настоящего изобретения не ограничиваются любой конкретной формой антитела или способом его генерирования или продуцирования. Так, например, анти-МСР-1 антителом может быть полноразмерное антитело (например, антитело, содержащее интактную человеческую Fc-область) или фрагмент антитела (например, Fab, Fab' или F(ab')₂). Кроме того, такое антитело может быть продуцировано из гибридомы, которая секретирует указанное антитело, или из рекомбинантно продуцированной клетки, которая была трансформирована или трансфецирована геном или генами, кодирующими указанное антитело.

В других своих вариантах настоящее изобретение относится к выделенным молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим любое из описанных здесь антител; к векторам, содержащим выделенные молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие любое из указанных здесь анти-МСР-1 антител; и к клетке-хозяину, трансформированной любой из указанных молекул нуклеиновой кислоты. Кроме того, в одном из своих вариантов настоящее изобретение относится к способу продуцирования анти-МСР-1 антитела путем культивирования клеток-хозяев в условиях, способствующих экспрессии молекулы нуклеиновой кислоты с продуцированием антитела, с последующим выделением указанного антитела.

В другом своем варианте настоящее изобретение относится к способу продуцирования высокоаффинных антител против МСР-1 путем иммунизации млекопитающего человеческим МСР-1 или его фрагментом и одним или несколькими последовательностями-ортологами или их фрагментами.

В описанных здесь вариантах настоящего изобретения предусматривается генерация и идентификация выделенных антител, которые специфически связываются с МСР-1. При неопластических заболеваниях, таких как опухоли, и при других воспалительных заболеваниях экспрессируются повышенные уровни МСР-1. Ингибирование биологической активности МСР-1 может приводить к предотвращению дальнейшей инфильтрации мононуклеарных клеток в ткани.

В другом своем варианте настоящее изобретение относится к способу диагностики заболеваний или состояний, в которых антитело, полученное в соответствии с настоящим изобретением, используется для детекции уровня МСР-1 в образце, взятом у пациента. В одном из вариантов осуществления изобретения образцом, взятом у пациента, является кровь или сыворотка. В других своих вариантах настоящее изобретение относится к способам идентификации факторов риска, установления диагноза заболевания и стадии заболевания, предусматривающим идентификацию сверхэкспрессии МСР-1 с использованием анти-МСР-1 антител.

В другом своем варианте настоящее изобретение относится к способу диагностики состояния, ассоциированного с экспрессией МСР-1 в клетке, предусматривающему контактирование указанной клетки с анти-МСР-1 антителом и детекцию присутствия МСР-1. Предпочтительными состояниями являются, но не ограничиваются ими, неопластические заболевания, включая, но не ограничиваясь ими, опухоли и раковые заболевания таких органов, как молочная железа, яичник, желудок, матка, слюнная железа, легкие, почки, толстая кишка, толстая и прямая кишка, щитовидная железа, поджелудочная железа, предстательная железа и мочевой пузырь, а также другие воспалительные заболевания, включая, но не ограничиваясь ими, ревматоидный артрит, гломерулонефрит, атеросклероз, псориаз, отторжение трансплантата, рестеноз и аутоиммунные заболевания.

В другом своем варианте настоящее изобретение относится к аналитическому набору для детекции МСР-1 и членов семейства МСР-1 в тканях и клетках млекопитающих и для скрининга на неопластические заболевания или воспалительные состояния, где указанный набор включает антитело, которое связывается с МСР-1, и средство для индикации реакции антитела с антигеном, если он присутствует. Предпочтительным антителом является моноклональное антитело. В одном из вариантов осуществления изобретения указанное антитело, которое связывается с МСР-1, является меченым. В другом варианте изобретения указанным антителом является немеченое "первое" антитело, а средство для индикации реакции включает меченое "второе" антитело, которое представляет собой антитело против иммуноглобулина. При этом предпочтительно указанное антитело мечено маркером, выбранным из группы, состоящей из флуорохрома, фермента, радионуклида и материала, не проницаемого для радиоактивного излучения.

В других своих вариантах настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим эффективное количество антитела согласно изобретению в смеси с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. В других вариантах осуществления изобретения анти-МСР-1 антитело или его фрагмент является конъюгированным с терапевтическим агентом. Указанным терапевтическим агентом может быть токсин или радиоизотоп. Предпочтительно указанные антитела могут быть использованы для лечения заболеваний, таких как, например, опухоли, включая, но не ограничиваясь ими, раковые заболевания таких органов, как молочная железа, яичник, желудок, матка, слюнная железа, легкие, почки, толстая кишка, толстая и прямая кишка, щитовидная железа, поджелудочная железа, предстательная железа и мочевой пузырь, а также воспалительных заболеваний, включая, но не ограничиваясь ими, ревматоидный артрит, гломерулонефрит, атеросклероз, псориаз, отторжение трансплантата, рестеноз и аутоиммунные заболевания.

В еще одном своем варианте настоящее изобретение относится к способу лечения заболеваний или состояний, ассоциированных с экспрессией МСР-1 у пациента, где указанный способ предусматривает введение пациенту эффективного количества анти-МСР-1 антитела. Такой способ может быть осуществлен in vivo. Указанным пациентом является млекопитающее, а предпочтительно человек. В предпочтительном варианте изобретения указанный способ предусматривает лечение опухолей, включая, но не ограничиваясь ими, раковые заболевания таких органов, как молочная железа, яичник, желудок, матка, слюнная железа, легкие, почки, толстая кишка, толстая и прямая кишка, щитовидная железа, поджелудочная железа, предстательная железа и мочевой пузырь. В другом варианте изобретения указанный способ предусматривает лечение воспалительных заболеваний, включая, но не ограничиваясь ими, ревматоидный артрит, гломерулонефрит, атеросклероз, псориаз, отторжение трансплантата, рестеноз и аутоиммунные заболевания. В других своих вариантах настоящее изобретение относится к способам лечения заболеваний и состояний, ассоциированных к экспрессией МСР-1, где указанные способы могут предусматривать идентификацию млекопитающего, нуждающегося в лечении заболевания, ассоциированного со сверхэкспрессией МСР-1, и введение указанному млекопитающему терапевтически эффективной дозы анти-МСР-1 антител.

В другом своем варианте настоящее изобретение относится к промышленному препарату, включающему контейнер, содержащий композицию, включающую анти-МСР-1 антитело и вкладыш, вложенный в указанную упаковку, или ярлык, прикрепленный к указанной упаковке, где указывается, что композиция может быть использована для лечения опухолевых и воспалительных заболеваний, характеризующихся сверхэкспрессией МСР-1. При этом предпочтительно, чтобы млекопитающему, а более предпочтительно человеку, было введено антитело против МСР-1. В своих предпочтительных вариантах настоящее изобретение относится к способу лечения опухолей, включая, но не ограничиваясь ими, раковые заболевания таких органов, как молочная железа, яичник, желудок, матка, слюнная железа, легкие, почки, толстая кишка, толстая и прямая кишка, щитовидная железа, поджелудочная железа, предстательная железа и мочевой пузырь, а также воспалительных заболеваний, включая, но не ограничиваясь ими, ревматоидный артрит, гломерулонефрит, атеросклероз, псориаз, отторжение трансплантата, рестеноз и аутоиммунные заболевания, такие как рассеянный склероз.

В некоторых вариантах осуществления изобретения после введения анти-МСР-1 антитела вводят клиренсстимулирующий агент для удаления циркулирующего антитела из кровотока.

В некоторых вариантах изобретения анти-МСР-1 антитела могут быть модифицированы в целях усиления их способности фиксировать комплемент и участвовать в вырабатывании комплементзависимой цитотоксичности (CDC). В одном из вариантов изобретения указанное анти-МСР-1 антитело может быть модифицировано, например, путем введения аминокислотных замен для изменения характера клиренса антител. Так, например, некоторые аминокислотные замены могут приводить к усилению клиренса антитела их организма. Альтернативно такие аминокислотные замены могут приводить к замедлению клиренса антитела из организма. В других вариантах изобретения указанное анти-МСР-1 антитело может быть модифицировано так, чтобы оно медленнее удалялось из организма.

В еще одном своем варианте настоящее изобретение относится к применению анти-МСР-1 антитела в целях приготовления лекарственного средства для лечения заболеваний, таких как опухолевые заболевания и воспалительные состояния. В одном из вариантов изобретения указанными опухолевыми заболеваниями являются опухоли и раковые заболевания таких органов, как молочная железа, яичник, желудок, матка, слюнная железа, легкие, почки, толстая кишка, толстая и прямая кишка, щитовидная железа, поджелудочная железа, предстательная железа и мочевой пузырь. В альтернативном варианте изобретения воспалительными состояниями являются, но не ограничиваются ими, ревматоидный артрит, гломерулонефрит, атеросклероз, псориаз, отторжение трансплантата, рестеноз и аутоиммунные заболевания.

Краткое описание графического материала

На фиг.1 показаны результаты исследования миграции моноцитов ТНР-1 в ответ на введение МСР-1, МСР-2, МСР-3 и МСР-4.

На фиг.2 показано дозозависимое ингибирование антителом 3.11.2 способности миграции клеток ТНР-1 в ответ на введение МСР-2.

На фиг.3 показано дозозависимое ингибирование антителом 3.11.2 способности миграции клеток ТНР-1 в ответ на введение МСР-3.

На фиг.4 показано влияние анти-МСР-1 антител 1.7.3 на рост клеток Panc-1 опухоли поджелудочной железы.

На фиг.5 представлен трехмерный корреляционный график потока кальция, хемотаксиса и аффинности антител против МСР-1.

На фиг.6 представлен трехмерный корреляционный график потока кальция, хемотаксиса и аффинности анти-МСР-1 антител в другой ориентации.

На фиг.7А проиллюстрировано сравнение с помощью программы Clustal W последовательностей анти-МСР-1 антител с использованием VH1-24, где указаны области CDR1, CDR2 и CDR3, и представлена построенная по этим данным дендрограмма (фиг.7В).

На фиг.8А проиллюстрировано сравнение с помощью программы Clustal W последовательностей анти-МСР-1 антител с использованием VК-В3, где указаны области CDR1, CDR2 и CDR3, и представлена построенная по этим данным дендрограмма (фиг.8В).

На фиг.9А проиллюстрировано сравнение с помощью программы Clustal W последовательностей анти-МСР-1 антител с использованием VК-08, где указаны области CDR1, CDR2 и CDR3, и представлена построенная по этим данным дендрограмма (фиг.9В).

На фиг.10А проиллюстрировано сравнение с помощью программы Clustal W последовательностей анти-МСР-1 антител с использованием VH6-1, где указаны области CDR1, CDR2 и CDR3, и представлена построенная по этим данным дендрограмма (фиг.10В).

Подробное описание предпочтительного варианта осуществления изобретения

В описанных здесь вариантах настоящее изобретение относится к моноклональным антителам, которые связываются с МСР-1. В некоторых вариантах изобретения указанные антитела связываются с МСР-1 и влияют на функцию МСР-1. В других своих вариантах настоящее изобретение относится к человеческим анти-МСР-1 антителам и к препаратам, содержащим анти-МСР-1 антитела с нужными свойствами, а именно с перспективными терапевтическими свойствами, включая высокую аффинность связывания с МСР-1, способность нейтрализовать МСР-1 in vitro и способность ингибировать рост и неоваскуляризацию солидных опухолей in vivo.

В соответствии с описанными здесь вариантами настоящее изобретение относится к выделенным антителам или к фрагментам этих антител, которые связываются с МСР-1. Как известно специалистам, указанными антителами могут быть преимущественно моноклональные, химерные и/или человеческие антитела. В описанных здесь вариантах настоящее изобретение также относится к клеткам, продуцирующим эти антитела.

В некоторых вариантах изобретения описанные здесь антитела обладают терапевтической ценностью. Антитело против МСР-1 может потенциально блокировать или ограничивать степень неоваскуляризации и роста опухоли. Многие раковые клетки, включая раковые клетки, происходящие от клеток глиобластомы и раковых клеток почек, экспрессируют рецептор МСР-1, CCR2. Коэкспрессия лиганда и рецептора в той же самой опухолевой клетке позволяет предположить, что МСР-1 может регулировать петлю аутокринного роста раковых клеток, которые экспрессируют оба этих компонента. Huang и др. (Cancer Res. (2002) 62:2806-2812) недавно сообщили, что МСР-1 может непосредственно влиять на рост и выживание опухолевых клеток, которые экспрессируют рецептор CCR2 для МСР-1. Таким образом, МСР-1 помимо его влияния на ангиогенез может также регулировать рост, миграцию и инвазию опухолевых клеток.

Кроме того, в некоторых своих вариантах настоящее изобретение относится к применению этих антител для диагностики или лечения заболевания. Так, например, в некоторых своих вариантах настоящее изобретение относится к способам и к антителам для ингибирования экспрессии МСР-1, ассоциированной с опухолями и воспалительными состояниями. Предпочтительно указанные антитела используются для лечения рака таких органов, как молочная железа, яичник, желудок, матка, слюнная железа, легкие, почки, толстая кишка, толстая и прямая кишка, щитовидная железа, поджелудочная железа, предстательная железа и мочевой пузырь, а также других воспалительных состояний, включая, но не ограничиваясь ими, ревматоидный артрит, гломерулонефрит, атеросклероз, псориаз, отторжение трансплантата, рестеноз и аутоиммунные заболевания. Настоящее изобретение относится к промышленным препаратам, предназначенным для такого лечения и содержащим антитела согласно изобретению. Кроме того, в описанных здесь вариантах настоящее изобретение относится к аналитическому набору, содержащему антитела, используемые для скрининга на опухолевые и воспалительные заболевания.

Кроме того, описанные здесь нуклеиновые кислоты и их фрагменты и варианты могут быть использованы (а) в качестве рекомбинантных или гетерологичных продуктов для направленного биосинтеза соответствующих кодируемых белков, полипептидов, фрагментов и вариантов, (b) в качестве зондов для детекции и количественной оценки описанных здесь нуклеиновых кислот, (с) в качестве матричных последовательностей для получения антисмысловых молекул и т.п., и эти их применения не ограничивается вышеуказанными примерами. Такие применения более подробно описаны ниже.

Кроме того, описанные здесь белки и полипептиды, а также их фрагменты и варианты могут быть использованы в способе, предусматривающем (а) их применение в качестве иммуногена для стимуляции анти-МСР-1 антитела, (b) их применение для захвата антигена в иммуногенном анализе на указанное антитело, (с) их применение в качестве мишени для скрининга на вещества, которые связываются с описанным здесь полипептидом МСР-1, и (d) их применение в качестве мишени для МСР-1-специфического антитела, такого как антитело, которое при его использовании в терапии влияет на молекулярную и/или клеточную функцию, опосредованную этой мишенью.

Благодаря сильному действию полипептида МСР-1, направленному на модуляцию клеточного роста, увеличение экспрессии или активности этого полипептида может быть использовано для стимуляции выживания клеток. И наоборот, снижение уровня экспрессии полипептида МСР-1 может быть использовано для индуцирования гибели клеток.

Другие варианты, отличительные признаки и т.п., относящиеся к антителам по изобретению, более подробно описаны ниже.

Список последовательностей

Нуклеотидные и аминокислотные последовательности вариабельной области тяжелой и легкой цепей репрезентативных человеческих анти-МСР-1 антител приводятся в нижеследующем систематизированном списке последовательностей, представленном в таблице 1.

Таблица 1
mAb ID №	Последовательность	SEQ ID NO:
1.1.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	1
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	2
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	3
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	4
1.10.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	5
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	6
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	7
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	8
1.12.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	9
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	10
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	11
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	12
1.13.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	13
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	14
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	15
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	16
1.18.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	17
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	18
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	19
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	20
1.2.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	21
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	22
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	23
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	24
1.3.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	25
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	26
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	27
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	28
1.5.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	29
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	30
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	31
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	32
1.6.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	33
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	34
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	35
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	36
1.7.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	37
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	38
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	39
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	40
1.8.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	41
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	42
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	43
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	44
1.9.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	45
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	46
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	47
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	48
2.3.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	49
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	50
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	51
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	52
2.4.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	53
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	54
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	55
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	56
3.10.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	57
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	58
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	59
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	60
3.11.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	61
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	62
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	63
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	64
3.15.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	65
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	66
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	67
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	68
3.16.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	69
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	70
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	71
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	72
3.2	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	73
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	74
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	75
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	76
3.4.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	77
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	78
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	79
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	80
3.5.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	81
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	82
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	83
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	84
3.6.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	85
	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	86
	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи	87
	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи	88
3.7.1	Нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи	89
	Аминокислотная последовательность ва