Способ оценки качества продуктов убоя животных

Способ оценки качества продуктов убоя животных

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к ветеринарной экспертизе.

Известно определение свободных аминокислот в сыворотке крови при помощи хроматографии на бумаге [см. К.V.Giri еt аl., 1953, F. Bode, 1955. Справочник. Биохимические методы исследования в клинике./ Под редакцией профессора А.А.Покровского. М.: «Медицина», 1969, с.85-91], где метод основан на реакции аминокислот с нингидрином в слабокислой среде с последующим превращением полученного синего производного в стабильное медное производное оранжевого цвета, имеющее максимум поглощения при 530 ммк. Измерение оптической плотности медного производного («дида») позволяет количественно провести определение всех аминокислот, за исключением пролина и оксипролина, иначе реагирующих с нингидрином.

Ход определения включает: 1) получение концентрированного безбелкового экстракта сыворотки крови по методу Буланже и Бизерте, предварительно получают порошок из 2 мл сыворотки крови, высушенной лиофилизацией или в вакуумном эксикаторе; 2) получение одномерных хроматограмм сыворотки крови; 3) количественное определение свободных аминокислот сыворотки крови; 4) построение колибровочного графика. Расчет по содержанию аминокислот проводят по колибровочным графикам, полученным со стандартными растворами аминокислот по формуле:, где А - количество микрограммов аминокислоты, содержащейся в 100 мл сыворотки; а - количество микрограммов аминокислоты в пробе, найденное по графику; с - общее количество экстракта в микрограммах; b - количество микролитров экстракта, взятое для хроматографирования; d - количество микролитров сыворотки, соответствующее общему количеству экстракта.

Наиболее близким по технической сущности является способ определения свободных форм аминокислот в сыворотке крови животных посредством системы капиллярного электрофореза «Капель» (см. Практическое руководство по использованию систем капиллярного электрофореза «Капель». Н.В.Комарова, Я.С.Каменцева, С-П, 2008 г., с.102), включающий дериватизацию биопробы на основе раствора фенилизотиоцианата в изопропиловом спирте, воздействие на нее капиллярным зонным электрофорезом с использованием рабочего буфера на основе β-циклодистрина, обнаружение свободных аминокислот и их качественный и количественный анализы.

Недостатками известных методов являются ограниченные возможности, сложность исследования, длительный процесс определения, отсутствие возможности определения количественного состава свободных аминокислот в вытяжке органов и тканей (длиннейшая мышца спины, сердечная мышца, печень, легкие, селезенка и почки) при метастронгилезе (Metastrongylus elongatus) на качество продуктов убоя свиней, у крупного рогатого скота при дикроцелиозе (Dicrocoelium lanceatum) и эхинококкозе (Echinococcus granulosus) на качество продуктов убоя крупного рогатого скота.

Техническим решением задачи является расширение функциональных и технологических возможностей, сокращение сроков выполнения и повышение точности определения свободных аминокислот при установлении качества и безопасности продуктов убоя животных при метастронгилезе свиней (Metastrongylus elongates); при дикроцелиозе (Dicrocoelium lanceatum) и эхинококкозе (Echinococcus granulosus) крупного рогатого скота.

Поставленная задача достигается тем, что в способе оценки качества продуктов убоя животных, включающем дериватизацию биопробы на основе раствора фенилизотиоцианата в изопропиловом спирте, воздействие на нее капиллярным зонным электрофорезом с использованием рабочего буфера на основе β-циклодистрина, обнаружение свободных аминокислот и их качественный и количественный анализы, согласно изобретению в качестве биопробы используют водную вытяжку органов и тканей животных, предварительно биопробу отбирают в микрососуд в объеме не более 0,05 см³ жидкости, в которую добавляют до 0,1 см³ 0,1 М раствора карбоната натрия, перемешивают, затем добавляют не менее 0,3 см³ раствора фенилизотиоцианата в изопропиловом спирте и оставляют для прохождения реакции до 40 минут, после того, как содержимое высохнет в естественных условиях, добавляют не более 0,5 см³ дистиллированной воды, перемешивают, сливают в пробирку Эппендорфа и центрифугируют для удаления газов и взвесей, затем полученные данные в результате качественного и количественного анализов сравнивают с контрольным результатом концентрации свободных аминокислот клинически здоровых животных и определяют качество продуктов, если концентрация свободных аминокислот по сравнению с контролем повышается, то продукты убоя животных считают зараженными гельминтами.

Новизна заявляемого предложения обусловлена тем, что обеспечивается высокая эффективность разделения компонентов, недоступная при других методах исследования; низкий расход реактивов и растворителей; простота аппаратуры; высокая скорость анализа и высокая воспроизводимость условий реакции; хорошая растворимость производных в водной среде; коммерческая доступность; широкие возможности капиллярного электрофореза при анализе свободных аминокислот. Кроме того, заявляемое предложение является более экономичным, т.к. не требует применения дорогостоящих химических реактивов.

Сущность изобретения поясняется чертежами, где на фиг.1 представлен график концентрации свободных аминокислот в вытяжке легочной ткани у свиней при метастронгилезе; на фиг.2 - график концентрации свободных аминокислот в вытяжке тканей печени у крупного рогатого скота при дикроцелиозе; на фиг.3 - график концентрации свободных аминокислот в вытяжке тканей печени у крупного рогатого скота при эхинококкозе.

Способ определения качества продуктов убоя животных, зараженных гельминтами, осуществляется следующим образом.

В способе определяется концентрация свободных аминокислот в биопробе, в качестве которой используют водную вытяжку органов и тканей (длиннейшая мышца спины, сердечная мышца, печень, легкие, селезенка и почки) при метастронгилезе свиней, дикроцелиозе и эхинококкозе крупного рогатого скота. Биопробу предварительно подвергают дериватизации на основе раствора фенилизотиоцианата в изопропиловом спирте, для этого биопробу отбирают в микрососуд в объеме не более 0,05 см³ жидкости, в которую добавляют до 0,1 см³ 0,1 М раствора карбоната натрия, перемешивают, затем добавляют не менее 0,3 см³ раствора фенилизотиоцианата в изопропиловом спирте и оставляют для прохождения реакции до 40 минут, после того, как содержимое высохнет в естественных условиях, добавляют не более 0,5 см³ дистиллированной воды, перемешивают, сливают в пробирку Эппендорфа и центрифугируют для удаления газов и взвесей, затем воздействуют на нее капиллярным зонным электрофорезом с использованием рабочего буфера на основе β-циклодистрина, далее проводят качественный и количественный анализы на обнаружение свободных аминокислот и полученные данные в результате качественного и количественного анализов сравнивают с контрольным результатом концентрации свободных аминокислот клинически здоровых животных и определяют качество продуктов, если концентрация свободных аминокислот по сравнению с контролем повышается, то продукты убоя животных считаются недоброкачественными.

Использование капиллярного электрофореза для определения массовой концентрации аминокислот основано на разделении анионных форм N-фенилтиокарбамилпроизводных аминокислот под действием электрического поля вследствие их различной электрофоретической подвижности. Для идентификации и количественного определения анализируемых компонентов регистрируют ультрафиолетовое поглощение при длине волны 254 нм в вытяжке органов и тканей (длиннейшая мышца спины, сердечная мышца, печень, легкие, селезенка и почки) при метастронгилезе свиней, дикроцелиозе и эхинококкозе крупного рогатого скота с целью установления влияния продуктов жизнедеятельности Metastrongylus elongates на качество продуктов убоя свиней, Dicrocoelium lanceatum и Echinococcus granulosus - на качество продуктов убоя крупного рогатого скота.

Пример конкретного осуществления способа определения качества продуктов убоя животных, зараженных гельминтами, например, свиней, зараженных метастронгилезом (Metastrongylus elongatus), и крупного рогатого скота, зараженного дикроцелиозом (Dicrocoelium lanceatum) и эхинококкозом (Echinococcus granulosus)

В процессе проведения послеубойной диагностики свиней в количестве 500 животных у 100 животных нами был установлен диагноз на основании обнаружения большого количества гельминтов метастронгилюсов в просвете бронхов. В процессе проведения послеубойной диагностики у крупного рогатого скота в количестве 2500 животных среди них у 557 животных в печени выявлены дикроцелии, у 350 животных - эхинококки в печени и у 150 животных - в легких.

Для определения концентрации свободных аминокислот при метастронгилезе свиней, дикроцелиозе и эхинококкозе крупного рогатого скота используют вытяжку органов и тканей (длиннейшая мышца спины, сердечная мышца, печень, легкие, селезенка и почки). Для этого при каждом заболевании животных берут средние пробы у 10 животных. При этом исследуемых животных разделили на 2 группы по 10 средних проб в каждой. Контрольная группа - клинически здоровые животные (свиньи и крупный рогатый скот), опытные группы - пораженные метастронгилюсами, дикроцелиями и эхинококкоми.

Для определения свободных аминокислот у клинически здоровых животных и при инвазии свиней возбудителем Metastrongylus elongatus, крупного рогатого скота - Dicrocoelium lanceatum, крупного рогатого скота - Echinococcus granulosus берут навеску 1,0 г пробы органов и тканей (длиннейшая мышца спины, сердечная мышца, печень, легкие, селезенка и почки) и заливают 5 см³ дистиллированной воды и настаивают 5-6 ч при периодическом помешивании. Определяют содержание свободных аминокислот через производные с фенилизотиоцианатом методом капиллярного электрофореза.

Отбирают пипеткой в микрососуд (стаканчик, бюкс и т.д.) 0,05 см³ жидкости, добавляют 0,1 см³ 0,1 М раствора карбоната натрия, перемешивают, затем добавляют 0,3 см³ раствора фенилизотиоцианата в изопропиловом спирте (0,2 см³ ФИТЦ в 12 см³ изопропилового спирта) и оставляют для прохождения реакции на 40 минут. После того, как содержимое высохнет в естественных условиях, добавляют 0,5 см³ дистиллированной воды, перемешивают, сливают в пробирку Эппендорфа и центрифугируют для удаления газов и взвесей. Разбавление в данном случае равно 6. Далее проводят анализ.

Для анализа используют прибор капиллярного электрофореза «Капель-103 Р», который оборудован ультрафиолетовым детектором с длиной волны детектора 254 нм (например, фиг.1, фиг.2 и фиг.3), где используется кварцевый капилляр длиной 0,5 м до детектора, внутренним диаметром 75×10^-6 м; регулируемый источник высокого напряжения положительной полярности 3-25 кВ; гидростатический ввод пробы под давлением 30 мбар в течение 5 сек; буферный рабочий раствор на основе β-циклодекстрина (54 мг в 12,5 см³ буферного раствора дигидрофосфата и гидрофосфата натрия); напряжение «плюс 10 кВ»; время анализа проходит в течение 40 мин; принудительное воздушное охлаждение капилляра до комнатной температуры; вывод и обработка результатов на компьютере.

Метод капиллярного электрофореза для определения массовой концентрации аминокислот основан на разделении анионных форм N-фенилтиокарбамилпроизводных аминокислот под действием электрического поля вследствие их различной электрофоретической подвижности. Для идентификации и количественного определения анализируемых компонентов регистрируют ультрафиолетовое поглощение при длине волны 254 нм.

Альфа-аминокислоты при взаимодействии с фенилизотиоцианатом в щелочной среде дают N-фенилтиокарбамильные (ФТК) производные, которые представляют собой кислоты, в щелочных условиях существующие в форме анионов. Благодаря наличию в структуре полученных соединений бензольного кольца, фенилкарбамильные производные имеют полосу поглощения при 254 нм. Содержание свободных аминокислот определяют через его производные с фенилизотиоцианатом методом капиллярного электрофореза.

В процессе проведения анализа установлен порядок и время выхода свободных аминокислот в органах и тканях у клинически здоровых животных и при гельминтозах (табл.1, табл.2, табл.3, табл.4 и табл.5).

Таблица 1
Порядок и время выхода свободных аминокислот в вытяжке в различных органах и тканях клинически здоровых свиней
№	Компонент	Время выхода, мин
Мышцы	Сердце	Печень	Легкие	Селезенка	Почки
1	Аргинин	15,20	16,07	15,25	15,40	16,48	16,15
2	Лизин	-	21,15	21,22	-	22,25	20,34
3	Тирозин	-	-	-	-	-	-
4	Фенилаланин	20,49		22,41	21,22	24,56	-
5	Гистидин	21,52	23,36	22,48	22,35	25,21	-
6	Лейцин	26,29	26,23	27,27	26,43	30,15	27,38
7	Метионин	26,34	-	27,34	27,32	31,18	-
8	Валин	27,12	29,01	28,16	28,10	32,05	-
9	Пролин	27,32	30,00	28,28	28,14	32,18	-
10	Треонин	28,44	30,50	29,25	29,04	33,56	-
11	Триптофан	28,57	31,15	29,14		34,05	-
12	Серин	30,00	32,31	30,32	30,08	35,18	-
13	α-Аланин	30,41	33,52	31,36	30,12	36,34	-
14	Глицин	32,35	35,32	33,28	32,31	39,28	-

Таблица 2
Порядок и время выхода свободных аминокислот в вытяжке в различных органах и тканях у свиней при метастронгилезе
№	Компонент	Время выхода, мин
Мышцы	Сердце	Печень	Легкие	Селезенка	Почки
1	Аргинин	14,04	14,37	14,29	14,37	15,37	15,20
2	Лизин	-	-	-	18,26	18,42	20,32
3	Тирозин	19,06	-	-	-	-	20,39
4	Фенилаланин	19,43	19,12	19,32	20,43	20,39	21,34
5	Гистидин	20,06	19,46	20,37	21,08	21,21	21,48
6	Лейцин	21,19	21,38	23,40	25,02	22,46	26,09
7	Метионин	21,37	22,17	23,57	25,42	22,54	26,55
8	Валин	22,34	22,38	24,36	25,49	23,15	27,25
9	Пролин	23,00	23,27	24,43	26,05	23,48	27,49
10	Треонин	23,32	23,57	25,27	26,12	24,53	28,10
11	Триптофан	23,51	24,18	25,36	26,35	25,32	-
12	Серин	24,39	24,44	26,49	27,56	26,57	29,13
13	α-Аланин	24,44	25,34	26,54	28,23	27,47	29,26
14	Глицин	26,57	26,38	28,39	29,27	28,35	31,41

Таблица 3
Порядок и время выхода свободных аминокислот в вытяжке в различных органах и тканях клинически здорового крупного рогатого скота
№	Компонент	Время выхода, мин
Мышцы	Сердце	Печень	Легкие	Селезенка	Почки
1	Аргинин	14,22	14,04	-	-	14,35	6,43
2	Лизин	-	-	19,02	-	-	-
3	Тирозин	-	-	-	15,48	-	-
4	Фенилаланин	-	19,50	19,12	16,51	-	13,24
5	Гистидин	20,09	19,27	19,35	20,25	21,39	13,44
6	Лейцин	23,12	23,15	22,21	23,35	25,29	17,46
7	Метионин	23,47	24,41	23,52	23,43	25,48	18,23
8	Валин	24,25	24,56	24,01	24,41	26,52	18,52
9	Пролин	24,49	25,19	24,40	24,53	27,11	19,37
10	Треонин	25,08	25,50	24,55	-	-	19,49
11	Триптофан	25,48	-	-	-	-	20,30
12	Серин	26,15	26,42	25,45	26,41	29,02	21,38
13	α-Аланин	26,37	26,49	26,37	26,55	29,56	21,47
14	Глицин	28,07	28,25	28,34	28,40	-	23,56

Таблица 4
Порядок и время выхода свободных аминокислот в вытяжке в различных органах и тканях при дикроцелиозе крупного рогатого скота
№	Компонент	Время выхода, мин
Мышцы	Сердце	Печень	Легкие	Селезенка	Почки
1	Аргинин	15,48	15,37	15,42	15,10	15,32	15,41
2	Лизин	21,33	21,44	20,46	21,15	21,46	20,37
3	Тирозин	22,18	-	21,19	22,17	21,57	21,45
4	Фенилаланин	22,31	22,24	22,33	22,37	22,55	21,54
5	Гистидин	22,44	23,10	22,38	23,21	23,09	22,41
6	Лейцин	23,38	27,14	26,54	28,35	27,10	26,40
7	Метионин	27,47	27,37	27,57	29,33	27,23	27,24
8	Валин	28,34	28,39	28,13	30,10	28,46	27,36
9	Пролин	28,54	29,25	28,52	31,17	29,14	28,49
10	Треонин	29,20	29,29	29,42	31,82	29,43	29,30
11	Триптофан	29,34	30,26	29,48	32,19	30,05	29,37
12	Серин	31,06	31,28	30,57	33,29	31,24	30,45
13	α-Аланин	31,48	32,08	31,54	34,48	31,49	31,33
14	Глицин	34,45	34,38	34,40	38,23	34,21	34,27

Таблица 5
Порядок и время выхода свободных аминокислот в вытяжке в различных органах и тканях у крупного рогатого скота при эхинококкозе
№	Компонент	Время выхода, мин
Мышцы	Сердце	Печень	Легкие	Селезенка	Почки
1	Аргинин	15,44	15,56	17,45	16,15	16,27	15,53
2	Лизин	17,48	20,43	23,39	19,25	18,36	19,23
3	Тирозин	19,53	-	26,08	22,21	-	-
4	Фенилаланин	20,05	22,35	26,35	23,37	25,39	23.02
5	Гистидин	20,57	26,40	26,53	24,34	26,58	23,57
6	Лейцин	24,52	27,10	34,47	29,55	33,11	28,52
7	Метионин	25,48	28,05	35,49	30,21	33,45	29,02
8	Валин	26,36	28,05	37,09	30,27	34,38	29,33
9	Пролин	26,39	28,41	38,09	31,13	35,21	29,54
10	Треонин	27,24	28,52	38,53	31,49	36,43	30,51
11	Триптофан	27,53	29,42	39,47	-	-	31,09
12	Серин	28,47	30,44	40,54	33,26	38,06	32,12
13	α-Аланин	28,53	31,01	41,48	34,21	38,46	32,52
14	Глицин	30,42	33,00	45,47	36,37	42,20	34,49

В результате проведенных исследований установлено, что при инвазии свиней метастронгилюсами концентрация свободных аминокислот в вытяжке длиннейшей мышцы спины была в 8 раз выше серина, в 6 раз - пролина и треонина, в 4 раза - лейцина, в 3 раза - триптофана, в 2 раза - α-аланина, глицина и фенилаланина, в 1,2 раза - метионина, в 1,1 раза - аргинина и, напротив, была ниже в 3,5 раза - гистидина, в 5 раз - валина относительно клинически здоровых животных (табл.6).

При инвазии свиней метастронгилюсами концентрация свободных аминокислот в вытяжке сердечной мышцы была выше в 4,5 раза лейцина, в 2 раза - гистидина, треонина и триптофана, в 1,1 раза - α-аланина и, напротив, ниже в 1,1 раза - аргинина и глицина, в 1,3 раза - пролина, в 2 раза - серина относительно клинически здоровых животных (табл.6).

Концентрация свободных аминокислот при инвазии свиней метастронгилюсами в вытяжке из тканей печени была в 12 раз выше лейцина, в 4 раза - гистидина, в 3 раза - валина, пролина, треонина, триптофана и фенилаланина, в 2 раза - глицина, метионина и серина, в 1,2 раза - α-аланина, и, напротив, ниже в 1,1 раза - аргинина относительно клинически здоровых животных (табл.7).

При инвазии свиней метастронгилюсами концентрация свободных аминокислот в вытяжке легочной ткани была в 4 раза выше гистидина и фенилаланина, в 3 раза - метионина, валина и пролина, в 2 раза - α-аланина, лейцина, серина, треонина и триптофана, в 1,2 раза - аргинина и глицина относительно клинически здоровых животных (табл.7).

Концентрация свободных аминокислот при инвазии свиней метастронгилюсами в вытяжке селезенки была в 2 раза выше лейцина, в 1,5 раза - аргинина, гистидина, метионина, пролина, серина и триптофана, в 1,2 раза - α-аланина, валина, глицина, лизина, треонина и фенилаланина относительно клинически здоровых животных (табл.8).

При инвазии свиней метастронгилюсами концентрация свободных аминокислот в вытяжке почечной ткани была в 14 раз выше лейцина, в 2 раза - лизина, в 1,5 раза - аргинина относительно клинически здоровых животных (табл.8).

Общая концентрация свободных аминокислот в вытяжке длиннейшей мышцы спины при метастронгилезе свиней составила 3316,83 мг/кг фарша, в сердечной мышце - 4488,56 мг/кг фарша, в печени - 7216,61 мг/кг фарша, в легких - 5609,94 мг/кг фарша, в селезенке - 8269,00 мг/кг фарша, в почках - 11439,93 мг/кг фарша. Наибольшее содержание свободных аминокислот отмечено в почечной ткани и было выше, чем в вытяжке 3 раза, чем длиннейшей мышцы спины и сердечной мышцы, в 2 раза - легочной ткани, в 1,6 раза - печени и в 1,4 раза - в селезенке.

Таким образом, при инвазии гельминтами Metastrongylus elongatus происходило снижение содержания связанных аминокислот и распад их на свободные аминокислоты и изменение концентрации в зависимости как от функциональных особенностей органа, так и от места локализации (легкие) половозрелых гельминтов Metastrongylus elongatus. При инвазии свиней метастронгилюсами установлено, что в легочной ткани в 2,3 раза происходило повышение концентрации следующих свободных аминокислот: гистидина, фенилаланина, метионина, валина, пролина, α-аланина, лейцина, серина, треонина, триптофана, аргинина, глицина и лизина относительно клинически здоровых животных. В сердечной мышце также происходило повышение концентрации свободных аминокислот в 1,2 раза: лейцина, гистидина, треонина, триптофана, и, напротив, снижение аргинина и глицина, пролина, серина относительно клинически здоровых животных. В печени в 2 раза происходило повышение концентрации следующих свободных аминокислот: лейцина, гистидина, валина, пролина, треонина, триптофана, фенилаланина, глицина, метионина, серина, α-аланина, и, напротив, было ниже аргинина относительно клинически здоровых животных. В тканях селезенки в 1,4 раза повышалась концентрация следующих свободных аминокислот: лейцина, аргинина, гистидина, метионина, пролина, серина, триптофана, α-аланина, валина, глицина, лизина, треонина, фенилаланина, относительно клинически здоровых животных. В почечной ткани происходило повышение концентрации свободных аминокислот в 1,4 раза: лейцина, лизина, аргинина относительно клинически здоровых животных. Общая концентрации свободных аминокислот в длиннейшей мышце спины, напротив, была ниже в 1,1 раза, чем у клинически здоровых животных, однако происходил распад аминокислоты тирозина и повышение концентрации свободных аминокислот: серина, пролина, треонина, лейцина, триптофана, α-аланина, глицина, фенилаланина, метионина, аргинина и, напротив, снижение гистидина и валина относительно клинически здоровых животных.

Необходимо отметить, что у клинически здоровых животных не выявлены свободные аминокислоты в длиннейшей мышце спины и в легочной ткани - лизин и тирозин; в сердечной мышце - тирозин, метионин и фенилаланин; в тканях печени и селезенки - тирозин, в почечной ткани - тирозин, фенилаланин, гистидин, лейцин, метионин, валин, пролин, треонин, триптофан, серин, α-аланин и глицин. Такое явление, по всей видимости, связано с функциональными особенностями тканей и органов в почечной ткани.

При метастронгилезе в длиннейшей мышце спины не была зарегистрирована свободная аминокислота лизин, которая, по всей видимости, подверглась процессу декарбоксилирования, в результате чего происходило выделение аминов. В сердечной мышце и в тканях печени при метастронгилезе не были зарегистрированы свободные аминокислоты лизин и тирозин, в легочной ткани и селезенки - тирозин; в почечной ткани - триптофан. Такое явление, по всей видимости, связано с функциональными особенностями тканей и органов, а также влиянием продуктов метаболизма Metastrongylus elongatus на ускорение процессов распада белковых компонентов. Данные процессы способствуют снижению качества мясной продукции.

Таблица 6
Концентрация свободных аминокислот в вытяжке мышечной ткани свиней при метастронгилезе (мг/кг фарша)
Наименование аминокислот	Органы и ткани
Мышцы	Сердце
Контрольная	Опытная	Контрольная	Опытная
Аргинин	196,03±1,43	209,96±1,52***	448,65±2,17	427,36±1,52***
Лизин	0,00±0,00	0,00±0,00	19,69±0,47	0,00±0,00
Тирозин	0,00±0,00	71,24±0,68	0,00±0,00	0,00±0,00
Фенилаланин	41,73±0,69	80,74±0,60***	0,00±0,00	21,63±0,37
Гистидин	2445,41±15,50	704,72±2,97***	114,63±0,42	167,42±0,76***
Лейцин	16,79±0,33	61,05±0,50***	20,36±0,43	91,53±0,59***
Метионин	140,14±0,54	169,66±0,58***	0,00±0,00	459,29±1,19
Валин	137,91±0,95	28,47±0,76	50,59±0,61	62,97±1,05***
Пролин	71,61±0,68	409,16±1,39***	894,15±11,89	681,40±6,73***
Треонин	68,06±0,83	380,76±4,66***	191,34±1,13	384,60±2,31***
Триптофан	29,20±0,59	88,55±1,06***	92,50±0,83	131,80±0,75***
Серин	7,83±0,09	60,19±0,51***	179,15±0,85	91,57±1,51***
α-Аланин	367,72±0,98	859,70±6,94***	1204,78±7,88	1381,35±7,83***
Глицин	125,45±0,93	192,64±1,10***	626,24±1,74	587,64±6,41***
Всего	3647,88	3316,83	3842,08	4488,56
*** P>0,001

Таблица 7
Концентрация свободных аминокислот в вытяжке легочной ткани и печени свиней при метастронгилезе (мг/кг фарша)
Наименование аминокислот	Органы и ткани
Печень	Легкие
Контрольная	Опытная	Контрольная	Опытная
Аргинин	159,80±0,76	135,71±0,96***	241,06±0,56	287,09±2,40***
Лизин	54,23±1,29	0,00±0,00	0,00±0,00	30,19±0,82
Тирозин	0,00±0,00	0,00±0,00	0,00±0,00	0,00±0,00
Фенилаланин	12,86±0,33	39,04±0,53***	17,31±0,35	70,61±0,64***
Гистидин	379,56±3,02	1336,86±11,05***	267,41±3,32	1058,41±5,84***
Лейцин	40,61±0,51	474,56±3,33***	29,45±0,71	59,39±0,99***
Метионин	341,71±2,49	596,76±3,94***	310,74±0,96	1041,50±9,77***
Валин	119,96±0,44	297,46±5,58***	70,80±0,48	220,66±1,97***
Пролин	188,11±1,42	500,56±2,71***	139,29±0,79	364,67±3,55***
Треонин	357,11±3,32	1013,25±4,11***	263,94±2,54	540,81±3,10***
Триптофан	249,39±3,11	520,61±5,26***	130,41±0,70	197,53±1,45***
Серин	124,04±1,02	298,78±1,49***	79,00±0,69	161,91±0,92***
α-Аланин	1413,58±15,01	1589,51±10,24 ***	471,72±4,02	1017,23±5,61***
Глицин	178,09±0,81	413,51±3,58***	465,98±5,74	559,94±13,23***
Всего	3619,05	7216,61	2487,11	5609,94
*** Р>0,001

Таблица 8
Концентрация свободных аминокислот в вытяжке тканей селезенки и почек свиней при метастронгилезе (мг/кг фарша)
Наименование аминокислот	Органы и ткани
Селезенка	Почки
Контрольная	Опытная	Контрольная	Опытная
Аргинин	606,75±6,01	883,42±22,16 ***	284,78±2,10	428,75±1,99***
Лизин	65,83±1,03	82,05±0,71***	9,73±0,21	17,68±0,32***
Тирозин	0,00±0,00	0,00±0,00	0,00±0,00	168,45±0,87
Фенилаланин	93,08±0,68	105,57±1,99***	0,00±0,00	82,00±0,59
Гистидин	549,79±4,33	847,07±11,65***	0,00±0,00	2126,67±9,68
Лейцин	306,59±2,73	636,49±8,18***	12,57±0,23	170,93±0,62***
Метионин	467,13±2,55	755,80±12,65***	0,00±0,00	2803,88±11,51
Валин	368,60±1,50	477,45±4,15***	0,00±0,00	503,96±4,01
Пролин	363,70±2,97	498,91±3,38***	0,00±0,00	792,64±4,01
Треонин	647,33±1,76	706,05±3,73***	0,00±0,00	716,88±5,93
Триптофан	467,60±2,78	651,80±7,68***	0,00±0,00	0,00±0,00
Серин	243,16±1,22	386,95±5,72***	0,00±0,00	495,59±3,25
α-Аланин	1105,23±12,00	1380,53±13,52***	0,00±0,00	2653,08±14,46
Глицин	714,78±10,78	856,91±7,97***	0,00±0,00	479,42±4,31
Всего	5999,57	8269,00	307,08	11439,93
*** Р>0,001

В результате проведенных исследований установлено, что при инвазии крупного рогатого скота Echinococcus granulosus концентрация свободных аминокислот в вытяжке длиннейшей мышце спины была в 77 раз выше гистидина, в 2 раза - глицина, метионина и пролина, 1,3 раза - α-аланина, аргинина и серина, 1,2 раза - валина, в 1,1 раза - лейцина и треонина относительно клинически здоровых животных. Свободные аминокислоты триптофан (70,65±0,052 мг/кг) и фенилаланин (76,48±0,63 мг/кг) были зарегистрированы у крупного рогатого скота при эхинококкозе (табл.9).

При инвазии крупного рогатого скота Echinococcus granulosus концентрация свободных аминокислот в вытяжке сердечной мышцы была выше в 57 раз метионина, в 8 раз - глицина, в 3 раза - серина, 5 раз - аргинина и фенилаланина, в 2 раза - α-аланина, валина, гистидина, пролина и треонина, 1,3 раза - лейцина относительно клинически здоровых животных. Свободная аминокислота тирозин не была выявлена как у клинически здоровых животных, так и при эхинококкозе. Свободные аминокислоты лизин (16,94±0,48 мг/кг) и триптофан (141,90±1,04 мг/кг) были зарегистрированы у крупного рогатого скота при эхинококкозе (табл.9).

Концентрация свободных аминокислот при инвазии крупного рогатого скота Echinococcus granulosus в вытяжке печени была в 6 раз выше лизина, в 5 раз - гистидина и фенилаланина, в 3 раза - метионина, 2 раза - глицина и лейцина, в 1,5 раза - треонина, в 1,3 раза - серина, в 1,2 раза - пролина, 1,1 раза - α-аланина относительно клинически здоровых животных. Концентрация свободной аминокислоты валин находилась практически на уровне клинически здоровых животных. Свободные аминокислоты аргинин (324,22±0,90 мг/кг), лизин (85,80±0,68 мг/кг) были зарегистрированы у крупного рогатого скота при эхинококкозе (табл.10). При инвазии крупного рогатого скота Echinococcus granulosus концентрация свободных аминокислот в вытяжке легочной ткани была в 9 раз выше метионина, в 5 раз - гистидина и фенилаланина, в 4 раза - пролина, в 3 раза - α-аланина, в 2 раза - глицина и лейцина, в 1,4 раза - серина, в 1,3 раза - валина относительно клинически здоровых животных. Свободные аминокислоты аргинин (252,48±1,06 мг/кг), лизин (12,56±0,50 мг/кг) и треонин (177,14±2,16 мг/кг) были зарегистрированы у крупного рогатого скота при эхинококкозе. Свободная аминокислота триптофан не была выявлена как у клинически здоровых животных, так и при эхинококкозе (табл.10).

Концентрация свободных аминокислот при инвазии крупного рогатого скота Echinococcus granulosus в вытяжке селезенки была в 16 раз выше метионина, в 13 раз - серина, в 11 раз - гистидина, в 10 раз - валина, в 8 раз - аргинина, в 6 раз - α-аланина, в 4 раза - пролина, в 3 раза - лейцина относительно клинически здоровых животных. Свободные аминокислоты глицин (7,35,84±1,51 мг/кг), лизин (19,30±0,30 мг/кг) и треонин (919,00±1,66 мг/кг) были зарегистрированы у крупного рогатого скота при эхинококкозе. Свободные аминокислоты тирозин и триптофан не были выявлены как у клинически здоровых животных, так и при эхинококкозе (табл.11).

При инвазии крупного рогатого скота Echinococcus granulosus концентрация свободных аминокислот в вытяжке почечной ткани была в 3 раза выше фенилаланина, в 2 раза - аргинина, глицина и метионина, в 1,2 раза - треонина и, напротив, ниже в 3 раза лейцина, в 2 раза - валина и триптофана относительно клинически здоровых животных. Концентрация свободных аминокислот α-аланина, пролина и серина находилась практически на уровне с клинически здоровыми животными. Свободная аминокислота лизин (8,23±0,32 мг/кг) была зарегистрирована у крупного рогатого скота при эхинококкозе. Свободная аминокислота тирозин не была выявлена как у клинически здоровых животных, так и при эхинококкозе (табл.11).

Общая концентрация свободных аминокислот в экстракте длиннейшей мышцы спины при эхинококкозе составила 32403,95 мг/кг фарша, в сердечной мышце - 6718,14 мг/кг фарша, в печени - 11422,98 мг/кг фарша, в легких - 4094,93 мг/кг фарша, в селезенке - 9123,24 мг/кг фарша, в почках - 3341,76 мг/кг фарша. Наибольшее содержание свободных аминокислот отмечено в вытяжке длиннейшей мышцы спины и было выше, чем в вытяжке почек в 9 раз; сердечной мышцы - в 5 раз; печени - в 3 раза, легких - 8 раз, селезенки - 4 раза.

Таким образом, при инвазии крупного рогатого скота Echinococcus granulosus происходило повышение концентрации свободных аминокислот в тканях печени в 2 раза, в длиннейшей мышце спины - в 15 раз, в сердечной мышце и в легочной ткани - в 3,4 раза, тканях селезенки - в 11 раз, в почечной ткани - в 1,1 раза относительно клинически здоровых животных. При инвазии крупного рогатого скота Echinococcus granulosus в сердечной мышце не была зарегистрирована свободная аминокислота тирозин, в легочной ткани - триптофан, в тканях селезенки - тирозин и триптофан.

Необходимо отметить, что у клинически здоровых животных не выявлены свободные аминокислоты: в длиннейшей мышце спины - лизин, триптофан, тирозин и фенилаланин, в сердечной мышце - лизин, триптофан и тирозин, в тканях печени - аргинин, триптофан и тирозин, в легочной ткани - аргинин, лизин, треонин и триптофан, в тканях селезенки - лизин, триптофан, тирозин и фенилаланин, в почечной ткани - тирозин. Такое явление, по всей видимости, связано с функциональными особенностями тканей и органов.

Таблица 9
Концентрация свободных аминокислот в вытяжке мышечной ткани крупного рогатого скота при эхинококкозе (мг/кг фарша)
Наименование аминокислот	Органы и ткани
Мышцы	Сердце
Контрольная	Опытная	Контрольная	Опытная
Аргинин	344,48±0,86	455,92±2,66***	360,52±2,01	564,80±1,83***
Лизин	0,00±0,00	830,75±0,93	0,00±0,00	16,94±0,48
Тирозин	0,00±0,00	36,01±0,52	0,00±0,00	0,00±0,00
Фенилаланин	0,00±0,00	70,65±0,052	9,46±0,23	46,62±0,51***
Гистидин	376,68±1,95	29067,34±264,16***	74,39±0,39	126,21±0,62***
Лейцин	64,56±0,29	71,22±0,61*	61,06±0,44	77,80±0,72***
Метионин	186,69±0,51	299,64±1,99***	513,81±0,62	2947,93±7,45***
Валин	350,47±0,49	435,03±3,22***	36,46±0,32	874,18±4,47***
Пролин	73,80±0,43	40,63±0,51***	166,45±0,66	95,86±0,39***
Треонин	114,03±0,29	102,99±1,38**	66,67±0,48	131,95±0,96***
Триптофан	0,00±0,00	76,48±0,63	0,00±0,00	141,90±1,04
Серин	55,79±0,57	71,64±0,63***	42,28±0,72	130,48±0,80***
α-Аланин	500,15±1,43	668,82±1,25***	633,30±1,18	1232,98±0,99***
Глицин	106,60±0,82	176,83±0,59***	40,15±0,48	330,49±0,73***
Всего	2173,25	32403,95	2004,55	6718,14
* Р<0,05; ** Р>0,01; *** Р>0,001

Таблица 10
Концентрация свободных аминокислот в вытяжке легочной ткани и печени крупного рогатого скота при эхинококкозе (мг/кг фарша)
Наименование аминокислот	Органы и ткани
Печень	Легкие
Контрольная	Опытная	Контрольная	Опытная
Аргинин	0,00±0,00	324,22±0,90	0,00±0,00	252,48±1,06
Лизин	15,27±0,52	85,80±0,68	0,00±0,00	12,56±0,50
Тирозин	0,00±0,00	579,47±2,83	48,20±0,64	53,38±0,55**
Фенилаланин	7,79±0,13	35,30±0,50***	13,12±0,27	60,15±0,51***
Гистидин	215,06±0,38	1043,66±3,73***	136,88±054	669,34±4,84***
Лейцин	176,68±0,31	412,58±2,51***	41,71±0,75	71,81±0,85***
Метионин	561,55±2,21	1711,92±7,11***	64,24±0,60	596,86±2,84***
Вал