Применение антагонистов рецептора св1 для получения композиции, пригодной для лечения заболеваний печени

Применение антагонистов рецептора св1 для получения композиции, пригодной для лечения заболеваний печени

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Это изобретение относится к новому применению антагонистов для рецептора СВ1 для получения композиции, пригодной для лечения заболеваний печени.

Уровень техники

Фиброз печени представляет собой общую реакцию на хроническое поражение печени, в конечном счете приводящее к циррозу и его осложнениям, портальной гипертензии, печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциноме. Фиброгенный процесс следует за интенсивной пролиферацией и накоплением печеночных миофибробластов, которые синтезируют фиброзные компоненты и ингибиторы разрушения матрикса (Friedman, S. L., J. Biol. Chem. 275, 2247-50 (2000)).

Гашиш Cannabis Sativa содержит свыше шестидесяти соединений, из которых наиболее активным является (-)Δ⁹-тетрагидроканнабинол (ТГК). Кроме того, были охарактеризованы эндогенные природные каннабиноиды, анандамид и 2-арахидонилглицерин, которые являются липидами - производными арахидоновой кислоты (Piomelli, D. и др., Trends Pharmacol. Sci. 21, 218-24. (2000)). Каннабиноиды связываются с двумя G протеин-сопряженными рецепторами (ПСР), СВ1 и СВ2, которые в равной степени связываются с ТГК (Pertwee, R. G., Curr. Med. Chem. 6, 635-64. (1999)). Таким образом, СВ1 представляет собой один из двух известных клеточных рецепторов для каннабиноидов. Известно, что этот рецептор, будучи G протеин-сопряженным трансмембранным рецептором, экспрессируется в мозгу и кровеносных сосудах (Pertwee, R.G., Curr. Med. Chem. 6, 635-64 (1999)), но не в клетках печени (Guzman, М. & Sanchez, С., Life Sci. 65, 657-64 (1999)). СВ1 является медиатором психотропного действия гашиша. Напротив, рецепторы СВ2 главным образом экспрессируются в иммунной системе и лишены психотропного действия (Friedman, S.L., J. Biol. Chem, 275, 2247-50 (2000)). Кроме психотропного действия каннабиноиды проявляют центральное анальгетическое и противорвотное действие и возбуждают аппетит (Harrold, J.A. & Williams, G. Br. J. Nutr. 90, 729-34 (2003)). Более того, каннабиноиды также проявляют противовоспалительные свойства и релаксируют сосуды (Kumar, R. N., Chambers, W.A. & Pertwee., Anaesthesia 56, 1059-68. (2001)). Кроме того, в некоторых исследованиях предполагается, что каннабиноиды могут быть сильными противоопухолевыми агентами благодаря их способности индуцировать регрессию экспериментальных опухолей различного типа, в том числе глиом или кожных опухолей. Эта противоопухолевая активность главным образом объясняется их антипролиферативными и апоптозными свойствами (Bifuico, М. и др., Faseb. J. 29. 29 (2001); Casanova, M.L. и др., J. din. Invest. 111, 43-50, (2003); Sanchez, С. и др., Cancer Res. 61, 5784-9. (2001)).

Существует только немного данных относительно действия каннабиноидов на печень. Рецепторы СВ1 и СВ2 не экспрессируются в клетках печени (Guzman, М. & Sanchez, С.Life Sci. 65, 657-64 (1999)). Однако рецепторы СВ1 присутствуют в эндотелиальных клетках, выделенных из печеночных артерий, и их экспрессия возрастает в ходе цирроза (Batkai, S. и др. Nat. Med. 7, 827-32. (2001)).

Были выделены две изоформы рецептора СВ1: длинная изоформа (соответствующая SEQ ID №1) и короткая изоформа, укороченная в терминальной части -NH₂ и соответствующая сплетенному варианту (соответствует SEQ ID №2), которые отличаются степенью сродства к своим лигандам (Shire и др., J. Biol. Chem, (1995); Rinaldi-Carmona и др., J. Pharmacol. Exp.Ther. (1996)). Кроме того, существуют 5 отдельных типов нуклеотидного полиморфизма в области кодирования гена рецептора СВ1. Из них только три приводят к отдельным изменениям аминокислот в рецепторе СВ1 (а именно: в SEQ ID №1, замещение фенилаланина (Phe) на лейцин (Leu) в положении 200, замещение изолейцина (II) на валин (Val) в положении 216 и замещение валина на аланин (Ala) в положении 246 и в соответствующих положениях в SEQ ID №2). Существует согласованность 7-доменной последовательности для рецептора СВ1, которая строго сохраняется у позвоночных животных, но не появляется в других каннабиноидных рецепторах (Attwood, Т.К. и Findlay, J.В.С., Protein Eng. 7 (2) 195-203 (1994), Attwood, T.К. и Findlay, J.В.С., 7ТМ, Volume 2, п/ред. G.Vriend и В.Bywater, (1993), Birnbaumer. L., Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 30, 675-705 (1990), Casey, P.J. и Oilman, A.G., J. Biol. Chem. 263 (6) 2577-2580 (1988), 5. Attwood, Т.К. и Findlay, J.В.С, Protein Eng. 6 (2) 167-176 (1993), Watson, S. и Arkinsall. S, в книге «The G Protein-Linked Receptor Factshook», Academic press, 1994, pp.80-83). Эта согласованная аминокислотная последовательность включает в себя 7 протеиновых доменов от SEQ ID №3 до SEQ ID №9.

Антагонисты рецептора СВ1, которые включают в себя возвратные или инверсные агонисты, были описаны ранее. Они включают в себя замещенные амиды, описанные в документе WO 03/077847, замещенные ариламиды, описанные в документе WO 03/087037, замещенные имидазолы, описанные в документе W003/063781, бициклические амиды, описанные в документе WO 03/086288, терфенильные производные, описанные в документе WO 03/084943, N-пиперидоно-3-пиразолкарбоксамид и N-пиперидино-5-(4-хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-метилпиразол-3-карбоксамид, описанные в документе ЕР-В-656354, арилбензо[b]тиофеновые и бензо[b]фурановые соединения, описанные соответственно в патентах США №№5596106 и 5747524, азетидиновые производные, описанные в патенте FR 2805817, 3-аминоазетидин, описанный в FR 2805810, или производные 3-замещенных или 3,3-дизамещенных 1-(ди-((гетеро)арил)метил)азетидинов, описанные в FR 2805818. Эти документы включены в изобретение как ссылки. Другие антагонисты имеются в продаже, такие как N-(пиперидин-1-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-5-(4-иодфенил)-4-метил-1H-пиразол-3-карбоксамид, известный на рынке как АМ251 и соединение, известное под названием LY-320135.

Известно применение этих антагонистов рецепторов СВ1 для лечения сексуальной дисфункции (заявка на патент WO 03/082256), или диареи (заявка на патент WO 01/85092), или нейровоспалительных заболеваний, или осложнений от неправильного употребления лекарства, ожирения, астмы, запора (заявка на патент WO 03/077847).

В документах US 5939429, WO 03/077847, WO 03/084930, WO 03/084943, WO 03/063781 и WO 03/087037 раскрыто, что антагонисты СВ1 могут обращать системные гемодинамические изменения у крыс с цирротической портальной гипертензией.

Раскрытие изобретения

Однако в указанных выше документах нигде не описано, что антагонисты СВ1 могут ослабить фиброгенез при печеночных заболеваниях любого происхождения (алкогольные, вирусные, токсические). Более того, отсутствуют известные вовлечения рецепторов СВ1 или эффектов антагонистов СВ1 в неалкогольный стеатогепатит и печеночный карциногенез.

В этом изобретении авторы неожиданно обнаружили, что антагонисты СВ1 обладают сильной антифиброзной активностью в печени, которая может быть использована для лечения печеночных заболеваний и предпочтительно печеночных заболеваний, которые вызывают печеночный фиброз.

Соответственно, настоящее изобретение на основе открытия, что подавление активности рецепторов СВ1 может ослабить печеночный фиброгенез, связанный с поражением или заболеванием печени, обеспечивает множество способов и композиций для лечения печеночных заболеваний и предпочтительно печеночных заболеваний, которые приводят к печеночному фиброзу.

Таким образом, это изобретение относится к:

1. Применению антагониста рецептора СВ1 при получении композиции для лечения печеночных заболеваний.

2. Применению в соответствии с пунктом 1, где антагонист рецептора СВ1 представляет собой специфический антагонист рецептора СВ1.

3. Применению в соответствии с пунктами 1 или 2, где печеночное заболевание приводит к печеночному фиброзу.

4. Применению в соответствии с пунктами 1-3, где печеночным заболеванием является алкогольный цирроз печени.

5. Применению в соответствии с пунктами 1-3, где печеночным заболеванием является хронический вирусный гепатит.

6. Применению в соответствии с пунктами 1-3, где печеночным заболеванием является неалкогольный стеатогепатит.

7. Применению в соответствии с пунктами 1-3, где печеночным заболеванием является первичный рак печени.

8. Применению в соответствии с пунктами 1-7, где антагонист представляет собой соединение формулы II или одной из фармацевтически приемлемых солей этого соединения, где g₂, g₃, g₄, g₅ и g₆ и W₂, W₃, W₄, W₅ и W₆ являются одинаковыми или различными и независимо представляют собой атом водорода, хлора или брома, (C₁-С₃)алкил, (С₁-С₃)алкокси, трифторметил или нитро-группу и g₄ необязательно является фенильной группой; R₄ представляет собой водород или (С₁-С₃)алкил; Х представляет собой или простую связь или группу -(СН₂)_x-N(R₃)-, в которой R₃ представляет собой водород или (С₁-С₃)алкил и x означает нуль или единицу; R представляет собой: группу -N(R₁R₂), в которой R01₁ и R₂ независимо означают (С₁-С₆)алкил; неароматический (С₃-C₁₅) карбоциклический радикал, который необязательно является замещенным, причем указанный заместитель (заместители) отличается от замещенного карбонила; амино(С₁-С₄)алкильную группу, в которой амин необязательно является дизамещенным (C₁-С₃)алкилом; циклоалкил(С₁-С₃)алкил, в котором циклоалкил означает С₃-С₁₂; фенил, который является незамещенным, или монозамещенным, или полизамещенным атомом галогена, (С₁-С₅)алкилом или (С₁-С₅)алкокси-группой; фенил(С₁-С₃)алкил; дифенил(С₁-С₃)алкил; нафтил; антраценил; насыщенный 5-8-членный гетероциклический радикал, который является незамещенным или замещенным (С₁-С₃)алкилом, гидроксилом или бензилом; 1-адамантилметил; ароматический гетероцикл, который является незамещенным, или монозамещенным, или полизамещенным атомом галогена, (С₁-С₅)алкилом или (С₁-С₅)алкокси-группой; (С₁-С₃)алкил, который является замещенным ароматическим гетероциклом, который является незамещенным, или монозамещенным, или полизамещенным атомом галогена, (С₁-С₅)алкилом или (С₁-С₅)алкокси-группой; или еще R₁ означает водород и R₂ является таким, как определено выше; или еще R₁ и R₂ образуют насыщенный 5-8-членный гетероциклический радикал с атомом азота, с которым они связаны, причем указанный гетероциклический радикал отличается от морфолина, когда все w₂, w₃, w₄, w₅, w₆, g₂, g₃, g₄, g₅ и g₆ означают атом водорода; группа R₂ такая, как определено выше, когда Х означает -(CH₂)_XN(R₃)-; группа R₅, когда Х означает простую связь, R₅ означает (С₁-С₃)алкил; (С₃-С₁₂)циклоалкил, который является незамещенным или замещенным (С₁-С₅)алкилом; фенил(С₁-С₃)алкил, который является незамещенным или замещенным атомом галогена или (С₁-С₅)алкилом; циклоалкил(С₁-С₃)алкил, в котором циклоалкил означает С₃-С₁₂ и является незамещенным или замещенным (С₁-С₅)алкилом; или 2-норборнилметил

9. Применению в соответствии с пунктами 1-7, где антагонист представляет собой N-пиперидоно-3-пиразолкарбоксамид или одну из его фармацевтически приемлемых солей.

10. Применению в соответствии с пунктами 1-7, где антагонист представляет собой N-пиперидино-5-(4-бромфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-этилпиразол-3-карбоксамидили одну из его фармацевтически приемлемых солей.

11. Применению в соответствии с пунктами 1-7, где антагонист представляет собой N-пиперидино-5-(4-хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-метилпиразол-3-карбоксамид или одну из его фармацевтически приемлемых солей.

12. Применению по любому из предшествующих пунктов, где рецептор СВ1 выбирают из группы, состоящей из:

a) протеина, имеющего аминокислотную последовательность (SEQ), которая включает в себя SEQ ID №1 или часть SEQ ID №1, имеющего биологическую функцию G протеин-сопряженного клеточного рецептора, способного связывать ТГК и преобразовывать клеточный сигнал;

b) протеина, имеющего аминокислотную последовательность, которая включает в себя SEQ ID №2 или часть SEQ ID №2, имеющего биологическую функцию G протеин-сопряженного клеточного рецептора, способного связывать ТГК и преобразовывать клеточный сигнал;

c) аллели протеина, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID №1 или SEQ ID №2, имеющего биологическую функцию G протеин-сопряженного клеточного рецептора, способного связывать ТГК и преобразовывать клеточный сигнал;

d) протеина, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID №1 с замещением фенилаланина на лейцин в положении 200; и/или замещением изолейцина на валин в положении 216; и/или замещением валина на аланин в положении 246;

e) протеина, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID №2 с замещением фенилаланина на лейцин в положении 139; и/или замещением изолейцина на валин в положении 155; и/или замещением валина на аланин в положении 185; и

f) протеина, который включает в себя аминокислотные последовательности SEQ ID №3, SEQ ID №4, SEQ ID №5, SEQ ID №6, SEQ ID №7, SEQ ID №8 и SEQ ID №9 или аминокислотные последовательности на 80% гомологичные приведенным, причем указанный протеин имеет биологическую функцию G протеин-сопряженного клеточного рецептора, способного связывать ТГК и преобразовывать клеточный сигнал.

13. Применению в соответствии с пунктами 1-11, где рецептор СВ1 является протеином, обладающим гомологичностью на аминокислотном уровне с SEQ ID №I, по меньшей мере, равной 45%, и имеющим биологическую функцию G протеин-сопряженного клеточного рецептора, способного связывать ТГК и преобразовывать клеточный сигнал.

14. Применению по предшествующему пункту, где гомологичность составляет, по меньшей мере, 60%, предпочтительно 70%, более предпочтительно 80%, еще более предпочтительно 90% и более предпочтительно 95%.

15. Применению по любому из предшествующих пунктов, где суточная доза антагониста рецептора СВ1 составляет от 0,01 мг до 500 мг, предпочтительно от 1 мг до 100 мг.

16. Применению последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей протеин, содержащий SEQ ID №1, или SEQ ID №2, или часть SEQ ID №1, или часть SEQ ID №2, для получения композиции для лечения печеночных заболеваний с помощью понижающей регуляции или подавления СВ1 рецептора.

17. Способу лечения печеночных заболеваний у млекопитающих, заключающийся во введении терапевтически эффективного количества, по меньшей мере, одного антагониста рецептора СВ1 млекопитающему, нуждающемуся в лечении.

18. Способу лечения печеночных заболеваний в соответствии с пунктом 17, где антагонист рецептора СВ1 представляет собой соединение формулы II или одну из его фармацевтически приемлемых солей, в которой g₂, g₃, g₄, g₅ и g₆ и w₂, w₃, w₄, w₅ и w₆ являются одинаковыми или различным и означают независимо водород, атом хлора или брома, (С₁-С₃)алкил, (С₁-С₃)алкокси, трифторметил или нитро-группу и g₄ необязательно представляет собой фенильную группу; R₄ представляет собой водород или (С₁-С₃)алкил; Х представляет собой или простую связь или группу -(СН₂)_x-N(R₃)-, в которой R₃ представляет собой водород или (С₁-С₃)алкил и x означает нуль или единицу; R представляет собой: группу -N(R₁R₂), в которой R₁ и R₂ независимо означают (С₁-С₆)алкил; неароматический (С₃-С₁₅) карбоциклический радикал, который необязательно является замещенным, причем указанный заместитель (заместители) отличается от замещенного карбонила; амино(С₁-С₄)алкильную группу, в которой амин необязательно является дизамещенным (С₁-С₃)алкилом; циклоалкил(С₁-С₃)алкил, в котором циклоалкил означает С₃-C₁₂; фенил, который является незамещенным, или монозамещенным, или полизамещенным атомом галогена, (С₁-С₅)алкилом или (С₁-С₅)алкокси-группой; фенил(С₁-С₃)алкил; дифенил(С₁-С₃)алкил; нафтил; антраценил; насыщенный (5-8)-членный гетероциклический радикал, который является незамещенным или замещенным (С₁-С₃)алкилом, гидроксилом или бензилом; 1-адамантилметил; ароматический гетероцикл, который является незамещенным, или монозамещенным, или полизамещенным атомом галогена, (С₁-С₅)алкилом или (С₁-С₅)алкокси-группой; (С₁-С₃)алкил, который является замещенным ароматическим гетероциклом, который является незамещенным, или монозамещенным, или полизамещенным атомом галогена, (С₁-С₅)алкилом или (C₁-С₅)алкокси-группой; или еще R₁ означает водород и R₂ является таким, как определено выше; или еще R₁ и R₂ образуют насыщенный (5-8)-членный гетероциклический радикал с атомом азота, с которым они связаны, причем указанный гетероциклический радикал отличается от морфолина, когда все w₂, w₃, w₄, w₅, w₆, g₂, g₃, g₄, g₅ и g₆ означают атом водорода; группа R₂ такая, как определено выше, когда Х означает -(CH₂)_XN(R₃)-; группа R₅, когда Х означает простую связь, R₅ означает (С₁-С₃)алкил; (С₃-С₁₂)циклоалкил, который является незамещенным или замещенным (С₁-С₅)алкилом; фенил(С₁-С₃)алкил, который является незамещенным или замещенным атомом галогена или (С₁-С₅)алкилом; циклоалкил(С₁-С₃)алкил, в котором циклоалкил означает С₃-С₁₂ и является незамещенным или замещенным (С₁-С₅)алкилом; или 2-норборнилметил

19. Способу лечения печеночных заболеваний в соответствии с пунктом 17, где антагонист рецептора СВ1 представляет собой N-пиперидоно-3-пиразолкарбоксамид или одну из его фармацевтически приемлемых солей.

20. Способу лечения печеночных заболеваний в соответствии с пунктом 17, где антагонист рецептора СВ1 представляет собой N-пиперидино-5-(4-бромфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-этилпиразол-3-карбоксамид или одну из его фармацевтически приемлемых солей..

21. Способу лечения печеночных заболеваний в соответствии с пунктом 17, где антагонист рецептора СВ1 представляет собой N-пиперидино-5-(4-хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-метилпиразол-3-карбоксамид или одну из его фармацевтически приемлемых солей..

22. Способу лечения печеночных заболеваний в соответствии с пунктами 17-21, где печеночным заболеванием является фиброз печени.

23. Способу лечения печеночных заболеваний в соответствии с пунктами 17-21, где печеночным заболеванием является алкогольный цирроз печени.

24. Способу лечения печеночных заболеваний в соответствии с пунктами 17-21, где печеночным заболеванием является хронический вирусный гепатит.

25. Способу лечения печеночных заболеваний в соответствии с пунктами 17-21, где печеночным заболеванием является неалкогольный стеатогепатит.

26. Способу лечения печеночных заболеваний в соответствии с пунктами 17-21, где печеночным заболеванием является первичный рак печени.

27. Способу лечения печеночных заболеваний в соответствии с пунктами 17-26, где суточная доза антагониста СВ1 рецептора составляет от 0,01 мг до 500 мг, предпочтительно от 1 мг до 100 мг.

Краткое описание чертежей

Фигура 1. На гистограмме показано содержание печеночного TGFβ-1 (трансформирующего фактора роста) в пикограммах (пг) на 1 мг растворимого протеина (график А) и показана экспрессия альфа актина гладкой мышцы печени в виде процентной доли окрашенной поверхности от площади всего сечения (график В) для типа диких мышей (обозначено как WT), а также для мышей с дефицитом СВ1 (обозначено как СВ1-/-). Обозначение OO относится к группе мышей, получивших только оливковое масло, в то время как обозначение ССl₄ показывает результаты для мышей, отравленных ССl₄.

Измеряют продуцирование печеночного TGFβ-1 (статистическая значимость p<0,05). Для оценки альфа актина гладкой мышцы используют количественное окрашивание на 4-5 срезах ткани печени для каждого животного (статистическая значимость p<0,05).

Фигура 2. На гистограммах показана относительная жизнеспособность печеночных миофибробластов (график А) и активность типа Caspase-3 (график В) как в начале, так и спустя 48 часов после потери сыворотки для мышей дикого типа (обозначено как WT), а также для мышей с дефицитом СВ1 (обозначено как СВ1КО). Апоптоз клеток индуцируется путем потери сыворотки в течение 48 ч. Результаты для жизнеспособности печеночных миофибробластов выражены как средняя доля (в %) выживших клеток ± СКО (среднеквадратичная ошибка) из 6-9 экспериментов, выполненных на клетках, выделенных из печени трех WT и двух СВ1-/- мышей (статистическая значимость p ниже, чем 0,05 для СВ1-/-). Результаты активности типа Caspase-3 выражены в виде кратности активности по сравнению с начальной активностью, измеренной на день 0 (средняя величина ± СКО получена из 6-9 экспериментов, выполненных на клетках, выделенных из печени 3 WT и 3 СВ1-/- мышей).

Статистически p ниже 0,05.

Фигура 3. Показано влияние увеличения количества антагониста SR141716 для СВ1 на синтез ДНК в печеночных миофибробластах человека (график А) и у диких мышей (обозначено как WT) и мышей с дефицитом СВ1 (обозначено как СВ1КО) (график В). Синтез ДНК выражен на графике в виде доли (в %) синтеза ДНК в клетках, обработанных носителем для SR 141716, в зависимости от возрастающей концентрации SR 141716 в наномоль/л (нМ). Клетки печеночных миофибробластов человека стимулируют в течение 30 ч при различных концентрациях антагониста SR 141716 для рецептора СВ1 в присутствии 20 нг/мл PDGF-BB (фактор роста, полученный из тромбоцитов). Внедрение меченного тритием [³H]-тимидина в ДНК измеряют как среднюю величину (±СКО) из 3-6 экспериментов и выражают в процентах от контрольного значения (p ниже чем 0,05). На графике показаны полосы ошибки. Печеночные миофибробласты мышей (данные для диких мышей показаны кругами, а для мышей с дефицитом СВ1 обозначены ромбами) стимулируют в течение 30 ч при различных концентрациях антагониста SR 141716 для рецептора СВ1, в присутствии 20 нг/мл PDGF-BB. Внедрение [³H]-тимидина в ДНК измеряют как среднюю величину (±СКО) из 3-6 экспериментов, выполненных на клетках, выделенных из печени 3 WT и 3 СВ1-/- мышей, и выражены в виде процента от контрольного значения (p меньше чем 0,05). На графиках показаны полосы ошибки.

Фигура 4. На графике показано влияние SR141716 или его носителя на смертность мышей, вызванную четыреххлористым углеродом. Доля выживших мышей, обработанных ССl₄ или агентом SR141716 (пунктирная линия) или без обработки (сплошной линией показано введение одного носителя без антагониста СВ1), показана относительно времени в сутках. Момент введения CCl₄ показан стрелкой.

Подробное описание вариантов воплощения изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает способы и композиции (такие как фармацевтические композиции) для лечения печеночных заболеваний, которые включают фиброз печени. Кроме того, печеночные заболевания включают в себя (но не ограничиваются) алкогольный цирроз печени, хронический вирусный гепатит, неалкогольный стеатогепатит и первичный рак печени.

Заявители показали, что лечение различных типов фиброза печени заключается в понижающей регуляции рецептора СВ1 и применении антагониста или возвратного агониста рецептора СВ1. Это продемонстрировано в нескольких экспериментах.

Во-первых, изучена роль рецепторов СВ1 в продвижении вперед фиброза печени мышей с крайне низким содержанием рецептора СВ1, созданных в отсутствие экспрессии рецептора СВ1 (СВ1KО, n=15), и у эквивалентных мышей дикого типа (WT, n=12) в модели хронической интоксикации четыреххлористым углеродом, вызывающей фиброз. Фиброз и воспалительный некроз оценивают с помощью количественного показателя полученного METAVIR. Для мышей СВIKО наблюдается уменьшение фиброза по сравнению с животными дикого типа (оценка фиброза: 2,59±0,13 против 3.33±0,13, p<0,05). Соответственно, печеночный коллаген, оцениваемый с помощью гидроксипролина, уменьшается на 40% у мышей СВIКО по сравнению с WT животными (0,46±0,06 против 0,73±0,11 мг/мг ткани, p<0,05). Оценка воспалительного некроза была близкой для обеих групп. Такое подавление активности рецептора СВ1 является фенотипически эквивалентным совершенному антагонистическому блокированию рецептора СВ1 фармацевтическими средствами. Фиброз печени сильно подавляется у мышей с крайне низким содержанием СВ1 по сравнению с контрольными мышами, что подтверждается данными гистологического исследования печени и измерением содержания гидроксипролина - специфического биохимического маркера коллагеновых отложений. Кроме того, показано, что после обработки ССl₄ экспрессия TGF-β1 и α-актина гладкой мышцы снижается для мышей с дефицитом СВ1 по сравнению с мышами дикого типа. В заключение было показано, что инактивация СВ1 увеличивает апоптоз мышиных печеночных миофибробластов. Следовательно, подавление активности рецептора СВ1 снижает печеночный фиброз.

Во-вторых, было проведено иммунное гистохимическое маркирование нормальных из цирротической печени и культивированных печеночных миофибробластов человека. Иммунохимически продемонстрирована слабая экспрессия рецепторов СВ1 в нормальной печени (n=3) в отличие от заметной подрегуляции в цирротических образцах различного происхождения (n=13), главным образом, в непаренхиматозных клетках внутри и с краю фиброзной мембраны. При двойном иммунном гистохимическом анализе идентифицированы миофибробласты как основной источник рецепторов СВ1 и соответственно рецепторы СВ1 также экспрессируются в культивированных печеночных миофибробластах человека. Рецепторы СВ1 слабо экспрессируются внутриполостными клетками в нормальной печени и подвергаются заметной подрегуляции в ходе хронических заболеваний печени. При двойном иммунном гистохимическом анализе выявлены печеночные миофибробласты в качестве заметного типа клеток, экспрессирующих рецепторы СВ1 в цирротической печени. Следовательно, экспрессия рецептора СВ1 и его активность коррелируют с печеночным фиброзом.

В-третьих, были проведены эпидемиологические исследования в группе пациентов с хроническим гепатитом С и было показано, что ежедневное курение гашиша является фактором риска для развития фиброза при хроническом гепатите С, поскольку у таких пациентов скорость фиброза была выше по сравнению с пациентами, не курящими гашиш. Это указывает на участие трансдукции каннабиноидного сигнала в фиброзе печени. Следовательно, проводящий путь каннабиноидной сигнализации вовлечен в печеночный фиброз.

В-четвертых, в искусственных условиях были выполнены исследования влияния рецепторного (СВ1) антагониста, N-пиперидино-5-(4-хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-метилпиразол-3-карбоксамида, известного под торговым названием SR 141716 (или SR 141716А) или римонабант, на культуры человеческих, а также мышиных печеночных миофибробластов, которые продемонстрировали, что антагонист СВ1 может ингибировать рост печеночных миофибробластов. Это соединение и его получение описаны в заявке на европейский патент ЕР656354-А1 и представлено формулой I

Такой антагонист для СВ1 и его фармацевтически приемлемые соли могут быть получены в соответствии с европейской заявкой на патент ЕР 656354, и фармацевтические композиции также могут быть получены в соответствии с описанием указанного патента.

В-пятых, in vivo исследование на мышах продемонстрировало, что антагонист SR141716 для СВ1 может снизить летальность, вызванную введением четыреххлористого углерода, что представляет собой модель индуцированного фиброза печени.

В этом изобретении антагонисты рецептора СВ1 определены как соединения, способные ингибировать активацию или экспрессию рецептора СВ1.

В частности, соединения, способные ингибировать активацию рецептора СВ1, включают те, которые способны взаимодействовать с агонистами рецепторов СВ1, ингибируя связывание указанных агонистов, или ингибируя активацию рецепторов СВ1, являющуюся результатом указанного связывания.

В частности, подходящие антагонисты рецептора СВ1 могут быть специфичными или неспецифичными по отношению к СВ1 и включают в себя возвратные агонисты. Эти антагонисты также включают в себя замещенные амиды, описанные в документе WO 03/077847, замещенные ариламиды, описанные в документе WO 03/087037, замещенные имидазолы, описанные в документе WO 03/063781, бициклические амиды, описанные в документе WO 03/086288, терфенильные производные, описанные в документе WO 03/084943, N-пиперидоно-3-пиразолкарбоксамид и N-пиперидино-5-(4-хлорфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-метилпиразол-3-карбоксамид, описанные в ЕР-В-656354, арилбензо[b]-тиофеновые и бензо[b]фурановые соединения, описанные соответственно в патентах US 5596106 и US 5747524, азетидиновые производные, описанные в патенте FR 2805817, 3-аминоазетидин, описанный в FR 2805810, или 3-замещенные или 3,3-дизамещенные производные 1-(ди-((гетеро)арил)метил)азетидина, описанные в FR 2805818, N-(пиперидин-1-ил)-1-(2,4-дихлорфенил)-5-(4-иодфенил)-4-метил-1Н-пиразол-3-карбоксамид (известен как АМ251) и соединения, известные как LY-320135. Кроме того, подходящие антагонисты СВ включают Н-пиперидино-5-(4-бромфенил)-1-(2,4-дихлорфенил)-4-этилпиразол-3-карбоксамид, описанный в патенте ЕР 1150961.

Другие подходящие антагонисты СВ1, описанные в патенте ЕР576357, включают в себя соединения формулы II, в которой g₂, g₃, g₄, g₅ и g₆ и w₂, w₃, w₄, w₅ и w₆ являются одинаковыми или различными и независимо означают атом водорода, хлора или брома, (С₁-С₃)алкил, (С-С₃)алкокси, трифторметил или нитро-группу и g₄ необязательно представляет собой фенильную группу; R₄ означает водород или (С₁-С₃)алкил; Х означает или простую связь, или группу -(СН₂)_x-N(R₃)-, в которой R₃ означает водород или (C₁-С₃)алкил и x означает нуль или 1; R представляет собой: группу -NR₁R₂, в которой R₁ и R₂ независимо означают (С₁-С₆)-алкил; неароматический (С₃-C₁₅) карбоциклический радикал, который является необязательно замещенным, причем указанный заместитель (заместители) отличаются от замещенного карбонила; амино(С₁-С₄)алкильную группу, в которой амин необязательно является дизамещенным (С₁-С₃)алкилом; циклоалкил(С₁-С₃)-алкилом, в котором циклоалкил означает С₃-C₁₂; фенил, который является незамещенным, или монозамещенным, или полизамещенным атомом галогена, (С₁-С₅)алкилом или (С₁-С₅)алкокси-группой; фенил(С₁-С₃)алкил; дифенил(С₁-С₃)алкил; нафтил; антраценил; насыщенный (5-8)-членный гетероциклический радикал, который является незамещенным или замещенным (С₁-С₃)алкилом, гидроксилом или бензилом; 1-адамантилметил; ароматический гетероцикл, который является незамещенным, или монозамещенным, или полизамещенным атомом галогена, (С₁-С₅)алкилом или (С₁-С₅)алкокси-группой; (C₁-С₃)алкил, который замещен ароматическим гетероциклом, который является незамещенным, или монозамещенным, или полизамещенным атомом галогена, (C₁-С₅)алкилом или (С₁-С₅)алкокси-группой; или еще R₁ означает водород и R₂ является таким, как определено выше; или еще R₁ и R₂ образуют насыщенный (5-8)-членный гетероциклический радикал с атомом азота, с которым они связаны, причем указанный гетероциклический радикал отличается от морфолина, когда все w₂, w₃, w₄, w_u, w₆, g₂, g₃, g₄, g₅ и g₆ означают атом водорода; группа R₂ является такой, как определено выше, когда Х означает -(CH₂)_XN(R₃)-; группа R₅, когда Х является простой связью, причем R₅ представляет собой (С₁-С₃)алкил; (С₃-С₁₂)циклоалкил, который является незамещенным или замещенным (С_t-С₅)алкилом; фенил(С₁-С₃)алкил, который является незамещенным или замещенным атомом галогена или (С₁-С₅)алкилом; циклоалкил(С₁-С₃)алкил, в котором циклоалкил означает С₃-C₁₂ и является незамещенным или замещенным (С₁-С₅)алкилом; или 2-норборнилметил

Эти результаты относятся не только к людям и могут быть использованы вообще для всех млекопитающих.

Композиции, содержащие антагонист (антагонисты) СВ1, могут быть использованы для профилактического и/или терапевтического лечения. Активный компонент (например, антагонист (антагонисты) рецептора СВ1) присутствует в фармацевтической композиции в "эффективном количестве». Термин "эффективное количество" фармацевтической композиции означает достаточное, но нетоксичное количество агента, которое обеспечивает желаемый эффект. Этот термин относится к количеству, которое достаточно для лечения субъекта (например, млекопитающего, в том числе человека). Таким образом, выражение "терапевтическое количество" относится к количеству, достаточному для лечения болезненного состояния или симптомов путем предупреждения, препятствования, замедления или обращения развития заболевания или любых других каких бы то ни было нежелательных симптомов. Выражение "профилактически эффективное" количество относится к количеству, введенному пока здоровому субъекту, и таким образом это количество эффективно предупреждает, препятствует или задерживает начало заболевания.

В области терапевтического применения композиции назначаются пациенту, уже страдающему от заболевания, как описано, в количестве, достаточном для излечения или, по меньшей мере, частичного прекращения симптомов заболевания и его осложнений. Подходящая доза фармацевтической композиции легко определяется в соответствии с любым из нескольких хорошо обоснованных протоколов. Например, для определения максимально допустимой дозы биологически активного агента на килограмм веса обычно используют лабораторных животных (например, мышей или крыс). Обычно, по меньшей мере, один вид испытуемых животных относится к млекопитающим. Результаты исследования на животных можно экстраполировать для того, чтобы определить дозы, применяемые для других видов, например, таких как люди. Кроме того, состав эффективной дозы зависит от характера и серьезности заболевания или обстановки и от общего состояния здоровья пациента.

В области профилактического применения композиции, содержащие, например, антагонисты рецептора СВ1, назначаются пациенту, восприимчивому к печеночным заболеваниям или иначе рискующему заболеть. Такое количество определяется как "профилактически эффективное" количество или доза. При таком использовании точное количество зависит от состояния здоровья пациента и его веса.

При терапевтическом, а также профилактическом лечении антагонист, содержащийся в фармацевтической композиции, может быть введен в виде нескольких доз или в виде однократной дозы, пока не будет достигнут желаемый эффект. Обычно ход лечения контролируется, и в случае необходимости могут быть назначены повторные дозы. Соединения изобретения можно принимать в соответствии с установленными режимами дозирования, всякий раз, когда требуется подавление активности рецепторов СВ1.

Суточная доза продуктов для взрослых может изменяться в широком диапазоне от 0,01 до 1000 мг в день. Предпочтительно композиции содержат 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 10,0, 15,0, 25,0, 50,0, 100, 250 и 500 мг активного компонента для симптоматической корректировки дозы лечащемуся пациенту. Обычно лекарственный препарат содержит приблизительно от 0,01 мг до 500 мг активного компонента, предпочтительно от 1 мг до приблизительно 100 мг активного компонента. Эффективное количество лекарственного препарата обычно подают при уровне суточной дозировки приблизительно от 0,0002 мг/кг до 20 мг/кг веса тела, особенно приблизительно от 0,001 мг/кг до 10 мг/кг веса тела, в сутки. Однако следует понимать, что конкретный уровень дозы и частота приема доз могут изменяться для каждого конкретного пациента, и это будет зависеть от множества факторов, в том числе активности конкретного используемого соединения, стабильности в условиях обмена веществ и длительности действия этого соединения, возраста, веса тела, общего состояния здоровья, пола, диеты, режима и времени введения, скорости выведения, сочетания лекарственных препаратов, серьезности конкретного состояния и совокупности видов терапии, которой подвергается пациент.

В фармацевтических композициях настоящего изобретения для перорального, подъязычного, внутрикожного, внутримышечного, внутривенного, трансдермального, местного или ректального введения активный компонент, индивидуально или