Способ получения стерилизованного порошкообразного панкреатина

Способ получения стерилизованного порошкообразного панкреатина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящее изобретение относится к способу получения и применения панкреатина, в котором концентрацию одного или более биологических, прежде всего вирусных, примесей снижают при нагревании панкреатина.

Панкреатин, который получают из поджелудочной железы млекопитающих, включает различные пищеварительные ферменты, такие как липазы, амилазы и протеазы. Панкреатин используется для лечения внешнесекреторной недостаточности поджелудочной железы, которая часто возникает при кистозном фиброзе, хроническом панкреатите, после панкреатэктомии, после операции шунтирования желудочно-кишечного тракта (например, гастроэнтероктомии Бильрота II) и непроходимости протоков при новообразовании (например, поджелудочной железы или общего желчного протока). При использовании панкреатина в составе фармацевтических продуктов предпочтительно поддерживать высокий уровень активности различных пищеварительных ферментов. Однако эти ферменты разлагаются, например, при хранении, и чрезвычайно чувствительны к повышенным температурам. Таким образом, при использовании панкреатина требуются строго контролируемые условия для его переработки, обработки и хранения.

Поскольку панкреатин является продуктом животного происхождения, он также включает другие компоненты, присутствие которых нежелательно, например одну или более биологических примесей, например вирусы. В течение более 100 лет коммерческого использования фармацевтических продуктов, включающих панкреатин, не было зарегистрировано ни одного случая заражения пациентов панкреатином, содержащим вирус. Однако в настоящее время фирмы, выпускающие фармацевтические продукты из биологических тканей и/или жидкостей, подвергаются усиленному давлению со стороны административных органов, требующих увеличения степени безопасности выпускаемых продуктов и уменьшения всех видов примесей до минимально возможного уровня, независимо от патогенности любой примеси для человека или отсутствия патогенности. Следовательно, для применения панкреатина в составе фармакологических продуктов требуется свести к минимуму концентрацию биологических примесей до уровня общепринятых пределов детектирования.

Таким образом, при производстве, переработке и хранении панкреатина возникают трудности при разработке этих процессов с целью поддержания активности различных пищеварительных ферментов на высоком уровне и одновременно сведения к минимуму концентрации одной или более биологических примесей.

Оказалось, что используемые в настоящий момент способы получения панкреатина не обеспечивают эффективной инактивации всех биологических примесей, прежде всего определенных вирусов, до уровня чувствительности современных методов детектирования.

Известны различные подходы к снижению концентрации вирусов и бактерий в ферментативных композициях. Такие способы включают нагревание, фильтрацию, добавление химических ингибиторов или сенсибилизаторов, обработку излучением и продолжительное нагревание. Эти способы описаны в данном контексте ниже.

Нагревание означает нагревание продукта до 60°С в течение 70 ч, что приводит к деградации некоторых чувствительных соединений. В некоторых случаях нагревание приводит к разрушению значительной части ферментативной активности продукта.

Фильтрация включает фильтрование продукта для физического удаления примесей. К сожалению, данный способ приводит также к удалению высокомолекулярных продуктов. Более того, в определенных случаях, небольшие вирусы, примеси аналогичного размера и патогенные соединения не удаляются при фильтровании.

Способ добавления химических сенсибилизаторов включает добавление токсичных агентов, связывающихся с ДНК/РНК вируса и активирующихся под действием УФ или других видов излучения. Излучение приводит к образованию реакционноспособных промежуточных соединений и/или свободных радикалов, которые связываются с ДНК/РНК вируса, разрывают химические связи в цепи ДНК/РНК и/или образуют поперечные связи с ДНК/РНК или образуют комплекс, и таким образом репликация вируса не происходит. Данный способ требует отмывки продуктов от несвязанного сенсибилизатора, поскольку сенсибилизаторы проявляют токсичность, даже если они не являются мутагенными или канцерогенными, и такие сенсибилизаторы нельзя вводить пациенту.

В патенте US №3956483 (Lewis) описан способ получения панкреатина, проявляющего пригодную амилолитическую, протеолитическую и липолитическую активность, и удаления вредных бактерий при сохранении указанной активности. Указанный способ включает нагревание панкреатина до достаточно высокой температуры от 120°F до 180°F (приблизительно 49-82°С). Однако в патенте не описан способ снижения концентрации вирусов до установленного в настоящее время предела детектирования.

В патенте US 6749851 (Mann) описана обработка композиций, включающих пищеварительные ферменты, при стабилизации композиций на первой стадии при (а) снижении температуры или (б) уменьшении количества растворителей или (в) добавлении в композицию стабилизатора, с последующим облучением композиции на второй стадии.

В статье Braeuniger и др., Int. J.Hyg. Environ. Health 203, с.71-75, 2000 описано использование нагревания для ингибирования бычьего парвовируса. Было установлено, что ингибирование бычьего парвовируса зависит от времени обработки и влажности. Высокое содержание влаги позволяет снизить продолжительность нагревания, которое обеспечивает такую же степень ингибирования, как и при низком содержании влаги и высокой продолжительности обработки. Однако в указанной статье не упоминается об эффекте, который оказывает нагревание на ферменты, такие как липазы, амилазы и протеазы, входящие в состав панкреатина животного происхождения. Таким образом, в настоящее время существует необходимость в способе, который обеспечивает получение панкреатина с высоким уровнем ферментативной активности при одновременном сниженном содержании биологических примесей.

Было установлено, что при получении панкреатина можно использовать определенные условия, при которых концентрация одного или более биологических примесей снижается, а активность ферментов поддерживается на приемлемом уровне. Прежде всего, было установлено, что способ по настоящему изобретению можно использовать для снижения концентрации вирусных примесей в панкреатине. Более того, способ по настоящему изобретению удовлетворяет стандартным рекомендациям в отношении удаления вирусов из биологических продуктов (например, рекомендации "Note For Guidance on Virus Validation Studies: The Design, Contribution and Interpretation of Studies Validating the Inactivation and Removal of Viruses", изд. комитета по контролю непатентованных лекарственных средств (Committee For Proprietary Medicinal Products) (упоминаемое в данном контексте как "CPMP/BWP/268/95")) и в то же время позволяет поддерживать ферментативную активность (например, липазы, протеазы и амилазы) на приемлемом уровне.

Другим преимуществом описанного в данном контексте способа и полученного панкреатина, а также фармацевтических композиций, включающих панкреатин, полученный согласно способу по настоящему изобретению, является его применимость в лабораторном, полупрепаративном и производственном масштабах.

Соответственно, один из вариантов осуществления настоящего изобретения включает способ получения панкреатина, который позволяет снизить концентрацию одной или более биологических примесей, прежде всего вирусов, при нагревании диспергированной формы панкреатина, содержащей один или более растворителей при температуре по крайней мере 85°С, причем общее содержание растворителей в диспергированной форме панкреатина составляет по крайней мере до 9 мас.% в любой момент в процессе вышеупомянутого нагревания. В результате получают панкреатин с приемлемым уровнем ферментативной активности, в котором концентрация одной или более биологических примесей, прежде всего одной или более вирусных примесей, снижена.

В другом варианте настоящего изобретения описан способ получения панкреатина, включающий следующие стадии:

(а) предварительное нагревание диспергированной формы панкреатина, содержащего один или более растворителей до температуры по крайней мере 85°С и

(б) дальнейшее нагревание диспергированной формы панкреатина при температуре по крайней мере 85°С в течение периода до 48 ч, при этом общее содержание растворителей в диспергированной форме панкреатина составляет по крайней мере 9 мас.% в любой момент в процессе стадии (б).

Еще один вариант настоящего изобретения включает панкреатин, полученный, как указано выше.

Другой вариант включает способ получения фармацевтической композиции, содержащей панкреатин согласно описанному в данном контексте способу, причем указанную фармацевтическую композицию получают в виде лекарственной формы, пригодной для перорального введения с немедленным и/или модифицированным высвобождением, которую выбирают из группы, включающей таблетки, микротаблетки, пеллеты, микропеллеты, гранулы, грануляты, порошки, суспензии, эмульсии, дисперсии, капсулы, пакетики, а также другие лекарственные формы.

Еще один вариант настоящего изобретения включает фармацевтическую композицию, содержащую

(1) фармакологически эффективное количество панкреатина, причем указанный панкреатин нагревают по крайней мере до 85°С в виде диспергированной формы панкреатина, содержащей один или более растворителей, при этом общее содержание растворителей в панкреатине составляет менее 9 мас.% в любой момент в процессе нагревания, причем титр вирусной примеси в панкреатине после нагревания по крайней мере в 1000 раз меньше, чем титр вирусной примеси в панкреатине до нагревания,

(2) один или более фармацевтически приемлемых экципиентов.

Другой вариант настоящего изобретения включает фармацевтическую композицию в форме капсулы или пакетика, при этом капсула или пакетик включают панкреатин, полученный согласно вышеописанному способу.

Еще один вариант включает способ лечения внешнесекреторной недостаточности поджелудочной железы при введении безопасного и эффективного количества панкреатина, полученного согласно вышеописанному способу.

Другие объекты, признаки и преимущества описаны ниже в виде вариантов осуществления настоящего изобретения и частично представляются очевидными при прочтении описания или при применении настоящего изобретения на практике. Эти объекты и преимущества описаны на примере способов и композиций, заявленных в описании и формуле настоящего изобретения.

Краткое описание чертежей

Фиг.1. Активность липазы после нагревания панкреатина при температуре 80°С, 85°С, 90°С, 95°С и 100°С, содержание растворителя составляет 1%. Активность липазы определяли через 2, 4, 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч.

Фиг.2. Активность липазы после нагревания панкреатина при температуре 90°С и 95°С, содержание растворителя составляет 3%. Активность липазы определяли через 2, 4, 8, 15, 24 и 48 ч.

Фиг.3. Активность липазы после нагревания панкреатина при температуре 80°С, содержание растворителя составляет 3%, 6%, 9% и 12%. Активность липазы определяли через 0,5, 1,0 и 3,0 ч.

Фиг.4. Логарифм снижения титра свиного панкреатина, содержащего примесь свиного парвовируса (сокращенно - панкреатин, содержащий PPV) после нагревания при температуре 80°С, 85°С, 90°С, 95°С и 100°С, содержание растворителя составляет 1%. Содержание вируса определяли через 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч.

Фиг.5. Логарифм снижения титра панкреатина, содержащего PPV, при нагревании при температуре 90°С и 95°С, содержание растворителя составляет 1% и 3% в течение 12 ч. Концентрацию вируса определяли через 3, 6 и 12 ч.

Если не указано иное, все технические и специальные термины, использованные в данном контексте, имеют общепринятое в данной области техники значение.

Использованный в данном контексте термин «стерилизовать» означает снижение концентрации по крайней мере одной биологической примеси в панкреатине, прежде всего в панкреатине в диспергированной форме, полученном согласно вышеописанному способу. Более подробно термин «стерилизовать» означает снижение концентрации по крайней мере одной вирусной примеси в панкреатине, прежде всего в панкреатине в диспрегированной форме, полученном согласно вышеописанному процессу.

Использованный в данном контексте термин «панкреатин» означает панкреатин, полученный из поджелудочной железы любого млекопитающего, например бычий и свиной панкреатин. Например, в настоящем изобретении можно использовать панкреатин, полученный, как описано в патенте US №4623624 или по аналогичной методике. Для повышения эффективности снижения содержания биологических примесей в панкреатине предпочтительно использовать диспергированную форму панкреатина, которая совместима с условиями способа, описанного в данном контексте. Диспергированные формы панкреатина включают, например, порошки, пеллеты, микропеллеты, микросферы, гранулы и грануляты. Предпочтительные результаты получают при использовании панкреатина в виде порошка, например порошкообразного панкреатита, полученного напрямую в процессе получения панкреатина. Панкреатин, использованный в настоящем изобретении, содержит также один или более фармацевтически приемлемых экципиентов, совместимых с условиями способа, описанного в данном контексте, и которые выбирают, например, из фармацевтически приемлемых экципиентов, приведенных ниже.

Использованный в данном контексте термин «биологическая примесь (примеси)» означает примесь, которая в результате прямого или косвенного контактирования с панкреатином оказывает отрицательное воздействие на панкреатин или на пациента, которому вводится панкреатин. Более того, термин «активная биологическая примесь» означает биологическую примесь, которая оказывает отрицательное действие, сама по себе или в комбинации с другим фактором, таким как вторая биологическая примесь, на процесс получения панкреатина или на пациента, которому вводится панкреатин. Такие биологические примеси включают, без ограничения перечисленным, вирусы и/или бактерии. Бактерии включают, без ограничения перечисленным, плесневые грибы и/или дрожжи. Биологическая примесь может являться патогеном для человека.

Использованный в данном контексте термин «вирус» или «вирусная примесь (примеси)» означает безоболочечные вирусы. Более подробно термин «вирус» или «вирусная примесь (примеси)» включает так называемые высокорезистентные вирусы, такие как парвовирусы, прежде всего парвовирус свиней, цирковирус, прежде всего цирковирус свиней, и калицивирус, прежде всего калицивирус свиней. Парвовирус свиней (PPV) является общепринятой моделью вируса для всего класса высокорезистентных вирусов, прежде всего для высокорезистентного вируса свиней. Более того, термин «вирус» или «вирусная примесь (примеси)» в данном контексте также означает пикорнавирусы, прежде всего пикорнавирус свиней, реовирусы, прежде всего реовирус свиней, астровирусы, прежде всего астровирус свиней, аденовирусы, прежде всего аденовирус свиней, и вирусы герпеса, прежде всего вирус герпеса свиней.

Использованный в данном контексте термин «растворитель» или «растворители» означает количество или процентное соотношение жидкости, присутствующей в панкреатине, в виде связанной или включенной в комплекс жидкости или в виде несвязанной жидкости. Несвязанная жидкость означает жидкость, присутствующую в нагреваемом панкреатине, которая не связана или не включена в комплекс с панкреатином. Такие жидкости, содержащиеся в панкреатине, обычно включают воду или безвредный для фермента органический растворитель и смеси воды с безвредными для ферментов органическими растворителями. Пригодные безвредные для ферментов органические растворители включают, например, летучие органические растворители, такие как ацетон, хлороформ, дихлорметан или С₁-С₄алканолы с прямой или разветвленной цепью, прежде всего метанол, этанол, 1-пропанол, 2-пропанол, 2-бутанол, трет-бутанол или их смеси. В качестве безвредного для ферментов органического растворителя предпочтительно используют 2-пропанол. Обычно соотношение воды и безвредного для ферментов органического растворителя составляет от 50:1 до 3:1, более предпочтительно от 30:1 до 10:1.

Термин «температурный интервал», например, от 85°С до 100°С, означает любую температуру в пределах указанного интервала, а также температурный профиль, который используют для получения различных температур в пределах указанного интервала, включая границы интервала. Температурный интервал в ходе процесса, описанного в данном контексте, используют в непрерывном или периодическом режиме в течение всех периодов времени, указанных для данного температурного интервала.

Описанный в данном контексте способ включает нагревание диспергированной формы панкреатина, содержащей один или более растворителей, при температуре по крайней мере 85°С и содержащей общее количество растворителя в диспергированной форме панкреатина менее 9 мас.% в любой момент указанного периода нагревания. В одном варианте диспергированную форму панкреатина нагревают в течение 48 ч.

В другом варианте содержание растворителей в панкреатине составляет менее 8 мас.%, более предпочтительно менее 6 мас.%, обычно менее 5 мас.%, наиболее предпочтительно менее 3,5 мас.%, предпочтительно от 0,1 мас.% до 3,5 мас.%, более предпочтительно от 0,1 мас.% до 3 мас.%, наиболее предпочтительно от 0,1 мас.% до 1,6 мас.%. В еще одном варианте содержание растворителя составляет менее 7,5%, 7,0%, 6,5%, 6,0%, 5,5%, 5,0%, 4,5%, 4,0%, 3,5%, 3,0%, 2,5%, 2,0%, 1,5%, 1,0% или 0,5%.

В другом варианте согласно описанному в данном контексте способу используют диспергированный панкреатин, прежде всего порошкообразный панкреатин, исходное содержанием растворителя в котором составляет 9 мас.% или менее, обычно от 2 до 3,5 мас.%. Панкреатин нагревают до необходимой температуры, которая составляет от 85°С до 100°С, например 90°С. В ходе предварительной стадии нагревания содержание растворителя в панкреатине снижается в зависимости от времени и температуры. Следует понимать, что продолжительность предварительного нагревания зависит от количества материала и его исходной температуры, и продолжительность составляет от приблизительно 15 мин до 10 ч. После стадии предварительного нагревания дисперсию панкреатина продолжают нагревать при температуре по крайней мере 85°С, обычно при температуре от 85°С до 100°С, например при 90°С, в течение требуемого периода времени, т.е. до 48 ч, например в течение 24 ч. При использовании параметров способа, описанных в данном контексте (обычно при атмосферном давлении), содержание растворителя при завершении стадии предварительного нагревания обычно составляет от 0,1 мас.% до 1,6 мас.%. Содержание растворителя от 0,1 мас.% до 1,6 мас.%, наблюдаемое при завершении стадии предварительного нагревания, сохраняется относительно постоянным во всем интервале предпочтительных параметров способа. После завершения описанного в данном контексте способа нагретый панкреатин можно хранить в нормальных условиях (т.е. при комнатной температуре и нормальной влажности). Снижение вирусных примесей в панкреатине, которое обеспечивается согласно описанному в данном контексте способу, также сохраняется в указанных условиях окружающей среды, поскольку любая вирусная примесь, описанная в данном контексте, необратимо дезактивируется в условиях указанного способа.

В другом варианте диспергированный панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С и продолжают нагревать по крайней мере при 85°С в течение от 1 до 36 ч, более предпочтительно в течение от 8 до 30 ч, еще более предпочтительно от 10 до 24 ч. В еще одном варианте диспергированный панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С и продолжают нагревать по крайней мере при 85°С в течение от 1 до 36 ч, например 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 5 ч, 6 ч, 7 ч, 8 ч, 9 ч, 10 ч, 11 ч, 12 ч, 13 ч, 14 ч, 15 ч, 16 ч, 17 ч, 18 ч, 19 ч, 20 ч, 21 ч, 22 ч, 23 ч, 24 ч, 25 ч, 26 ч, 27 ч, 28 ч, 29 ч, 30 ч, 31 ч, 32 ч, 33 ч, 34 ч, 35 ч или 36 ч, в другом варианте диспергированный панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С и продолжают нагревать по крайней мере при 85°С в течение от 10 до 30 ч.

В другом варианте панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С, т.е. до температуры от 85°С до 100°С, и продолжают нагревать при температуре от 85°С до 100°С, более подробно при температуре 85°С, 86°С, 87°С, 88°С, 89°С, 90°С, 91°С, 92°С, 93°С, 94°С, 95°С, 96°С, 97°С, 98°С, 99°С, 100°С или при любой температуре в интервале между указанными целыми значениями температуры. В еще одном варианте панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С, т.е. до температуры от 85°С до 95°С, и продолжают нагревать при температуре от 85°С до 95°С, более подробно при температуре 85°С, 86°С, 87°С, 88°С, 89°С, 90°С, 91°С, 92°С, 93°С, 94°С, 95°С или при любой температуре в интервале между указанными целыми значениями температуры. В другом варианте панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С, т.е. до температуры от 90°С до 100°С, и продолжают нагревать при температуре от 90°С до 100°С, более подробно при температуре 90°С, 91°С, 92°С, 93°С, 94°С, 95°С, 96°С, 97°С, 98°С, 99°С, 100°С или при любой температуре в интервале между указанными целыми значениями температуры. В более предпочтительном варианте панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С, т.е. до температуры от 90°С до 95°С, и продолжают нагревать при температуре от 90°С до 95°С, более подробно при температуре 90°С, 91°С, 92°С, 93°С, 94°С, 95°С или при любой температуре в интервале между указанными целыми значениями температуры.

В еще одном варианте такого способа содержание растворителей в продукте составляет от 0,1 мас.% до 3,5 мас.% и панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С, т.е. до температуры от 85°С до 100°С, и продолжают нагревать в течение от 8 до 30 ч при температуре от 85°С до 100°С.

В другом варианте содержание растворителей составляет от 0,1 мас.% до 3,0 мас.% и панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С, т.е. до температуры от 85°С до 95°С, и продолжают нагревать в течение от 10 до 30 ч при температуре от 85°С до 95°С.

В еще одном варианте содержание растворителей составляет от 0,1 мас.% до 1,6 мас.% и панкреатин предварительно нагревают до температуры по крайней мере 85°С, т.е. до температуры от 85°С до 95°С, и продолжают нагревать в течение от 10 до 30 ч при температуре от 85°С до 95°С.

В каждом отдельном или нескольких вариантах таких способов концентрация одной или более биологических примесей в панкреатине снижается, прежде всего снижается концентрация одного или более вирусов без изменения активности панкреатина. В одном варианте в панкреатине снижается концентрация высокорезистентных вирусов, более предпочтительно снижается концентрация свиного парвовируса.

Настоящее изобретение также включает панкреатин, полученный согласно способу, описанному в данном контексте. Все условия, описанные в данном контексте, также можно применять к панкреатину, полученному указанным способом.

Еще один вариант включает способ получения фармацевтической композиции, содержащей панкреатин, полученный согласно способу, описанному в данном контексте, причем такую фармацевтическую композицию получают в виде лекарственной формы, пригодной для перорального введения. Пероральные формы получают в виде формы с немедленным высвобождением или модулированным высвобождением, такие лекарственные формы включают таблетки, микротаблетки, пеллеты, микропеллеты, микросферы, гранулы, грануляты, порошки, суспензии, эмульсии, дисперсии, капсулы, пакетики, а также другие лекарственные формы.

В другом варианте такого способа для получения фармацевтической композиции панкреатин и/или его лекарственную форму покрывают энтеросолюбильным слоем, устойчивым к кислоте желудочного сока.

В еще одном варианте такого способа для получения фармацевтической композиции панкреатин или лекарственную форму с энтеросолюбильным покрытием необязательно помещают в пакетики и/или в капсулы.

В данном контексте описаны фармацевтические композиции, включающие

(1) фармакологически эффективное количество панкреатина, причем панкреатин нагревают при температуре по крайней мере 85°С в форме диспергированного панкреатина, содержащей один или более растворителей, причем общее содержание растворителя, содержащегося в панкреатине, составляет менее 9 мас.% в любой период нагревания, причем уровень титра вирусной примеси в панкреатине после нагревания по крайней мере в 1000 раз меньше по сравнению с титром до нагревания, и

(2) один или более фармацевтически приемлемых экципиентов.

В еще одном варианте такой фармацевтической композиции панкреатин включен в состав лекарственной формы, пригодной для перорального введения. Пероральная лекарственная форма представляет собой препарат с немедленным высвобождением и/или модулированным высвобождением, причем такие лекарственные формы представляют собой таблетки, микротаблетки, пеллеты микропеллеты, гранулы, грануляты, порошки, суспензии, эмульсии, дисперсии, капсулы, пакетики, а также другие лекарственные формы.

В другом варианте таких фармацевтических композиций панкреатин и/или фармацевтически приемлемые экципиенты покрывают энтеросолюбильным слоем, устойчивым к кислоте желудочного сока.

Настоящее изобретение также включает фармацевтическую композицию в форме капсулы или пакетика, которые содержат описанный в данном контексте панкреатин.

В одном варианте такая фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый экципиент.

В еще одном варианте такая фармацевтическая композиция представляет собой лекарственную форму для перорального введения. Лекарственная форма для перорального введения представляет собой препарат с немедленным высвобождением и/или модулированным высвобождением, причем такие лекарственные формы представляют собой таблетки, микротаблетки, пеллеты, микропеллеты, гранулы, грануляты, порошки, суспензии, эмульсии, дисперсии, капсулы, пакетики, а также другие лекарственные формы.

В другом варианте фармацевтической композиции панкреатин и/или фармацевтически приемлемые экципиенты и/или их лекарственные формы покрывают энтеросолюбильным покрытием, устойчивым к кислоте желудочного сока.

Фармацевтические композиции, описанные в данном контексте, включают фармацевтически приемлемые экципиенты. Фармацевтически приемлемые экципиенты, используемые в вышеописанных композициях, включают сахара, такие как лактоза, сахароза, маннит и сорбит, крахмалы, такие как кукурузный крахмал, крахмал из тапиоки, картофельный крахмал, целлюлоза и ее производные, такие как натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, этилцеллюлоза и метилцеллюлоза, фосфаты кальция, такие как дифосфат кальция и трифосфат кальция, сульфат натрия, сульфат кальция, поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, стеариновая кислота, стеараты щелочноземельных металлов, такие как стеарат магния и кальция, стеариновая кислота, растительные масла, такие как арахисовое, хлопковое, кунжутное, оливковое и кукурузное, неионные, катионные и анионные ПАВ, полимеры этиленгликоля, бетациклодекстрин, жирные спирты, гидролизованные злаки, а также другие нетоксичные совместимые наполнители, связующие, дезинтегрирующие агенты, например тальк, буферные вещества, консерванты, антиоксиданты, замасливатели, вкусовые добавки и другие экципиенты, пригодные для использования в фармацевтических составах.

Содержание панкреатина в фармацевтических композициях по настоящему изобретению составляет от 0,1% до 100%, например 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%, предпочтительно от 25% до 90%, например 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или 90%, более предпочтительно от 50% до 90%, например 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или 90% (мас.%), причем указанные композиции включают соответствующее количество фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, экципиентов и/или носителей.

В одном варианте фармацевтические композиции включают (а) от 50 мас.% до 90 мас.% панкреатина, полученного согласно вышеописанному способу, и (б) от 10 мас.% до 50 мас.% фармацевтически приемлемого экципиента, например, полимера этиленгликоля, прежде всего этиленгликоль 2000, 3000, 4000, 6000, 8000 и/или 10000, причем общее содержание компонентов (а) и (б) составляет 100 мас.%.

В другом варианте фармацевтические композиции включают (а) от 55 мас.% до 85 мас.% панкреатина, полученного согласно вышеописанному способу, (б) от 5 мас.% до 35 мас.% полимера этиленгликоля, (в) от 1,0 мас.% до 20 мас.% пропан-2-ола и (г) необязательно от 0 мас.% до 10 мас.% вазелинового масла, а суммарное содержание компонентов (а), (б), (в) и (г) в каждом случае составляет 100 мас.%. Другие композиции, включающие панкреатин, описаны, например, в ЕР 0583726 и ЕР 0826375.

Описанный в данном контексте способ проводят при любой температуре, по крайней мере при 85°С, при которой не наблюдается неприемлемый уровень инактивации панкреатина. Согласно описанному в данном контексте способу «приемлемый уровень» инактивации зависит от некоторых признаков конкретного способа, описанного в данном контексте, таких как природа и характеристики конкретного образца панкреатина, и/или предполагаемое назначение нагреваемого панкреатина, причем указанный уровень определяется эмпирически специалистом в данной области техники. «Неприемлемый уровень» инактивации означает такой уровень, который исключает безопасное и эффективное применение нагреваемого панкреатина. Конкретное значение уровня инактивации для данного образца панкреатина определяют с использованием известных методов.

При использовании в составе фармацевтических композиций требуется сохранение ферментативной активности после нагревания на уровне 50% или более, предпочтительно 70% или более, более предпочтительно 85% или более и наиболее предпочтительно 90% от исходной ферментативной активности.

Для определения условий, обеспечивающих минимальный уровень потерь ферментативной активности, проводят ряд экспериментов. В нескольких сериях указанных экспериментов определяли исходную и остаточную ферментативную активность липазы как основного фермента до и после нагревания в определенных экспериментальных условиях, которые подробно описаны ниже.

В аналогичной серии экспериментов определяли снижение концентрации биологических примесей. В таких экспериментах определяли значение титра вируса высокорезистентного парвовируса свиньи как основного вируса до и после нагревания в определенных экспериментальных условиях, которые подробно описаны ниже. В каждом эксперименте использовали образцы свиного панкреатина, в которые добавлен парвовирус свиньи.

Титры вирусов, включая стандартные отклонения для образцов, содержащих PPV, определяли по конечной точке титрования, рассчитывая величину половины максимальной инфицирующей дозы тканевой культуры (TCID₅₀) по формуле Спирмена-Кербера, как описано в статье "Bundesanzeiger" №84, май 4, (1994). Таким образом готовили серийные разбавления (1:3) в среде для клеточных культур и аликвоту каждого разбавления добавляли в лунки 96-луночного микропланшета, содержащие соответствующие клетки-мишени в восьми повторах. Планшет инкубировали в течение от шести до семи сут, затем клетки исследовали под микроскопом на присутствие индуцированного вирусом СРЕ. Титры вируса рассчитывали, как описано выше, и данные представляли в виде значения log₁₀TCI₅₀/мл, причем интервал достоверности составлял 95%. Степень инактивации или удаления вирусов при обработке выражали в виде логарифмического фактора снижения (LRF). Значение LRF рассчитывали, как описано в инструкциях ЕС III/8115/89-EN (в настоящее время инструкции CPMP/BWP/268/95), приложение II, в виде разности титров вируса для контрольного образца и образцов после нагревания.

При использовании в составе фармацевтических композиций требуется снижение концентрации активной биологической примеси, прежде всего снижение концентрации вирусных примесей, т.е. логарифмическое снижение титра составляет по крайней мере 3,0, предпочтительно 3,5, более предпочтительно 4,0, наиболее предпочтительно 4,5 или более. Согласно инструкциям по безопасности в отношении содержания вирусов в биологических продуктах (см., например, CPMP/BWP/268/95), способ, обеспечивающий величину логарифма снижения титра, равную 40, обычно считают надежным и приемлемым в отношении инактивации вирусов.

Логарифмическое снижение титра вирусов означает снижение концентрации вируса в единицах десятичного логарифма (log₁₀), т.е. логарифм снижения титра, равный 3, означает снижение концентрации вируса в 1000-9999 раз, а логарифм снижения, равный 4, означает снижение концентрации вируса в 10000-99999 раз. Способ стерилизации панкреатина является наиболее эффективным, если при использовании такого способа наблюдается удовлетворительное снижение даже высокорезистентных вирусов в панкреатине.

Для определения условий, обеспечивающих наиболее эффективное логарифмическое снижение титра, проводили ряд экспериментов. Из-за технических ограничений в настоящее время можно оценивать снижение концентрации биологических примесей в образцах панкреатина только на уровне титров от 4,5 до 5,0 (предел чувствительности).

В первой серии экспериментов определяли активность липазы после нагревания в течение определенных периодов времени при различной и постоянной температурах. В первом эксперименте определяли активность липазы после нагревания в течение 0, 2, 4, 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч при 80°С при содержании растворителя 1%. Во втором эксперименте определяли активность липазы после нагревания в течение 0, 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч при 8 5°С при содержании растворителя 1%. В третьем эксперименте определяли активность липазы после нагревания в течение 0, 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч при 90°С при содержании растворителя 1%. В четвертом эксперименте определяли активность липазы после нагревания в течение 0, 6, 12, 15, 18, 21, 24 и 30 ч при 95°С при содержании растворителя 1%. В пятом эксперименте определяли активность липазы после нагревания в течение 0, 6, 12, 15, 18, 21 и 24 ч при 100°С при содержании растворителя 1%. Результаты указанной первой серии экспериментов показаны в табл.1 и на фиг.1.

Таблица 1
Нагревание панкреатина при 80°С, 85°С, 90°С, 95°С и 100°С (содержание растворителя 1%). Данные представлены в табл.1 в виде средних значений для двух опытов, н/о - не определено.
Время выдерживания, ч	Остаточная активность липазы, %
Температура	80°С	85°С	90°С	95°С	100°С
0	100,0	100,0	100,0	100,0	100,0
2	99,3	н/о	н/о	н/о	н/о
4	99,0	н/о	н/о	н/о	н/о
6	98,8	98,9	95,0	91,1	84,0
12	97,7	96,2	91,7	86,1	71,4
15	96,5	94,7	90,6	84,2	66,3
18	94,6	93,5	88,6	80,1	60,3
21	93,6	93,5	87,0	77,8	56,0
24	92,5	92,1	85,8	77,8	52,8
30	91,3	90,7	83,7	74,8	н/о

Результаты, представленные в табл.1 и фиг.1, свидетельствуют о том, что при постоянном содержании растворителя 1% активность лампы уменьшается по мере увеличения периода выдерживания при данной температуре. Более того, активность липазы снижается в большей степени при более высокой температуре в течение данного периода выдерживания. Установлено, что при использовании в составе фармацевтических композиций нагревание в течение до 30 ч включительно при температуре до 95°С включительно обеспечивает получение панкреатина, проявляющего приемлемую остаточную ферментативную активность при содержании растворителя 1%. Установлено, что при использовании в составе фармацевтических композиций нагревание в течение до 24 ч включительно при температуре до 100°С включительно обеспечивает получение панкреатина, проявляющего приемлемую остаточную ферментативную активность при содержании растворителя 1%.

Во второй серии экспериментов определяли активность липазы после нагревания при содержании растворителя 3%. В первом эксперименте определяли активность липазы посл