Иммуномодулятор для выращивания бройлеров и способ его применения

Иммуномодулятор для выращивания бройлеров и способ его применения

Реферат

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к способам получения и применения биологически активных тканевых препаратов, обладающих иммунокорректирующим профилактическим и терапевтическим действием для лечения и профилактики заболеваний различной этиологии сельскохозяйственной птицы, в частности бройлеров.

Известно применение в птицеводстве высокоактивного тканевого препарата ПДЭ (плацента денатурированная эмульгированная), изготовляемого из плаценты человека.

Для цыплят бройлеров препарат рекомендуется применять с кормом или питьем при расходе 0,05 г на 1 кг живого веса за одно кормление при курсе 15 кормлений по схеме: 3 дня кормлений 3 дня перерыва (см. Рекомендации по применению «Высокоактивный тканевый препарат ПДЭ. Разработан по Госпрограмме для сельского хозяйства. Фирма «Регонда ВЕТ.» Регистрационный №ПВР2.01.0126-96. ТУ9358-001-03434058-96).

При высокой эффективности ограничением в применении является стоимость препарата ПДЭ, связанная с дефицитом сырья для его массового производства.

Известно также применение в птицеводстве тканевого препарата иммуномодулятора широкого спектра действия АСД-2Ф. Бройлерам препарат используют с питьевой водой при расходе 0,35 мл на 1 л воды первые 7 дней, повторно за 2 дня до и через 2 дня после вакцинации (см. И.Околева и др. Эффективность применения АСД-2Ф при выпойке бройлерам // Птицеводство, №10, 2008, с.49-50).

При хороших результатах, полученных авторами, ограничением в применении АСД-2Ф в птицеводстве является сложная технология приготовления препаратов методом сухой перегонки сырья животного происхождения, влияющим на его стоимость.

Известен также «Способ приготовления биостимулятора эмбрионального» (см. Патент РФ №2197251, A61K 35/12. Опубл. 27.01.2003. Бюл. №3). В качестве биологически активного сырья в стимуляторе используют инкубированные в течение 9 суток куриные яйца, облученные на 5; 6; 7 сутки лазером в течение 30 секунд при мощности излучения 9 мВт. Обработанные таким образом яйца гомогенезируют, охлаждают в течение 6-7 суток при 2-4 °C, с использованием в качестве разбавителя физиологического раствора в соотношении 1:10 с добавлением 5% раствора фенола до концентрации 0,3%.

При доступности и стабильном составе биологического сырья для производства такого биостимулятора, применение которого возможно в птицеводстве, некоторым недостатком его является наличие фенола до 3% в стимуляторе, что нежелательно при введении его птице, и использование в процессе инкубации лазерного облучения яиц, равномерность которого трудно обеспечить при массовом производстве биостимулятора, что может сказываться на стабильности и качестве препарата.

Задачей изобретения является разработка препарата для расширения ассортимента иммуностимулирующих препаратов, применяемых при выращивании птицы, получаемых из тканевого сырья животного происхождения, при упрощении сбора и подработки исходного животного сырья с гарантированным качеством и стабильным составом при массовом производстве, применение которого позволит повысить сохранность и продуктивность птицы при снижении общих затрат на выращивание бройлеров.

Задача решается тем, что в качестве исходного сырья для получения иммуномодулирующего тканевого препарата используют фабрициеву бурсу цыплят бройлеров в возрасте 35-42 дня жизни, взятую в процессе убоя и разделки цыплят в убойном цехе, на птицефабрике, в период технологического цикла выращивания, причем при выращивании бройлеров иммуномодулятор цыплятам применяют в жидком виде перорально вместе с питьевой водой курсами в три этапа - с 1 по 7 день, с 11 по 17 и с 21 по 27 день жизни бройлеров включительно из расчета от 0,15 до 0,1 г препарата иммуномодулятора на 1 кг живой массы бройлеров, при этом препарат из фабрициевой бурсы цыплят готовят посредством измельчения сырья, его гомогенизации в водно-солевом растворе, экстрагирования, нагревания экстракта, удаления термолабильной фракции, последовательного отделения вещества на мембране, задерживающей вещества с молекулярной массой более 10,0 Кд, разделения веществ на мембране, задерживающей вещества с молекулярной массой более 1,0 Кд, с добавлением стерилизующей фильтрацией раствора, с последующим розливом раствора во флаконы и его стерилизацией и автоклавированием при 1,5 атм, в течение 1 часа, причем полученный препарат содержит комплекс белков с молекулярной массой от 10,0 до 1,0 Кд и обладает иммуномодулирующими свойствами в отношении В - системы иммунитета.

Приготовление иммуномодулятора осуществляют следующим образом. Фабрициеву бурсу цыплят бройлеров, взятую в первые часы после убоя птицы, замораживают до температуры - 20°C в морозильной камере на 6-7 дней, затем производят дефростацию до температуры +4°C в лаборатории при температуре 20-22°C в течение двух часов (до появления сока), кусочки бурсы дефростируются, находясь в стерильной емкости, в которой находится термометр, для контроля температурного режима. Затем фабрициеву бурсу измельчают до состояния фарша с помощью блендера и заливают физиологическим раствором, из расчета 5-6 литров на 1 кг фарша. Полученную массу помещают в холодильник для экстрагирования. Через сутки массу процеживают, фильтрат кипятят 9-10 минут. Остывшую взвесь центрифугируют в течение 30 минут при 2000 об/мин.

Удаление термолабильной фракции, последовательного отделения вещества проводят сначала с помощью центрифугирования 30 мин, 2000 оборотов в 1 мин. Жировую пленку, образовавшуюся на фугате, удаляют, коагулят декантируют, а полученный материал пропускали через ватно-марлевый фильтр и повторно через тканевый фильтр (последовательное отделения вещества на мембране, задерживающей вещества с молекулярной массой более 10,0 Кд, разделение веществ на мембране, задерживающей вещества с молекулярной массой более 1,0 Кд, с добавлением стерилизующей фильтрацией раствора, с последующим разливом полученного раствора во флаконы, стерилизацией и автоклавированием при 1,5 атм, в течение 1 часа. Полученный препарат иммуномодулятор условно назван «Бурсанатал».

Фабрициева бурса-сумка (bursa Fabricii) - центральный лимфоидный орган, ответственный за созревание клеток-продуцентов (B-лимфоцитов). Образование B-клеток у птицы, так же как и у млекопитающих, начинается в эмбриональной печени, а затем перемещается в фабрициеву бурсу. Фабрициева сумка была открыта Гликом в 1956 году, и она обнаружена только у птиц (см. Алиев А.И., 1986). Фабрициева бурса - полостной орган, представляет собой округлый или овальный дивертикул дорсальной стенки массой 2-4 грамма, ранее как медицинское сырье не использовался и шел как отход производства при переработке бройлеров.

Эффект действия полученного препарата - тканевого иммуномодулятора «Бурсанатал» - изучали в лабораторных опытах и после отработки дозировки с учетом аналогов и схемы введения проводили исследования в производственных условиях на птицефабриках Свердловской области.

В задачу исследований на Среднеуральской птицефабрике входила оценка эффективности тканевого иммуномодулятора «Бурсанатал» и способа его применения в птицеводстве с ростостимулирующей, с профилактической и лечебной целью.

Работа выполнена на Среднеуральской птицефабрике на двух группах цыплят-бройлеров кросса «Ломан Белый» по 200 голов в каждой. Опыт продолжался в течение технологического цикла выращивания (40 дней) по схеме, представленной в таблице 1. Цыплятам опытной группы тканевый иммуномодулятор давали перорально вместе с питьевой водой в поилки, из расчета 0,15-0,1 г на 1 кг живой массы бройлеров в группе, в три этапа с 1-7 день жизни включительно, с 11-17 день жизни включительно и с 21 по 27 день жизни включительно. Состав готовили ежедневно, разливали в поилки при клеточном содержании и контролировали выпивание.

Таблица 1
Схема производственного опыта
Группа	Характеристика кормления
1я - контрольная	Основной рацион (ОР), сбалансированный по питательности с добавкой физраствора по схеме опыта.
2я - опытная	ОР+выпойка «Бурсанатал» в 3 этапа: с 1 по 7, с 11 по 17, с 21 по 27 день жизни.

Цыплята контрольной группы в период выращивания получали физиологический раствор по технологической схеме в тех же объемах.

Определение живой массы бройлеров проводили через 5 дней до убоя. Убой цыплят был осуществлен в возрасте 40 дней. В результате проведенных исследований установлено положительное влияние выпивания тканевого иммуномодулятора по предложенной схеме на интенсивность роста цыплят (таблица 2).

Таблица 2
Изменение живой массы цыплят-бройлеров
Возраст бройлеров, дней	Контрольная группа, г (100%)	Опытная группа
г	%
1	35,0±0,2	35,0±0,3	100
5	122,5±4,5	127,4±22,7	104
15	275,8±7,5	291,9±31,4	105,8
20	582,4±40,9	611,6±17,8	105
25	891,8±46,7	939,2±36,0	105,3
35	1266,3±63,6	1341,0±38,2	105,9
40	1695,3±79,2	1840,7±98,9	108,6

Результаты исследований показали, что цыплята опытной группы отреагировали на получении тканевого иммунокорректора большей скоростью роста по сравнению с цыплятами-аналогами контрольной группы.

Полученные данные свидетельствуют о том, что в период с 1-го по 5-й день опыта увеличение средней массы цыплят опытной группы по сравнению с контрольной группой было больше на 4%. В период с 5-го по 15-й день опыта средняя масса цыплят возросла в опытной группе на 5,8% по сравнению с контрольной.

В период с 15-го по 20-й день опыта средняя масса бройлеров опытной группы увеличилась по сравнению с контролем на 5,0%. В период с 20-го по 25-й день опыта средняя масса цыплят в опытной группе по сравнению с контрольной увеличилась на 5,3%.

В следующий период (25-й-35-й день опыта) средняя масса цыплят в опытной группе повысилась на 5,9% по сравнению с контрольной группой. В период с 35-го по 40-й день средняя масса цыплят, получавших тканевый иммунокорректор, по сравнению с контрольной группой увеличилась на 8,6%.

Таким образом, максимальный прирост живой массы у цыплят опытной группы относительно аналогов из контроля приходится на заключительные недели выращивания, что значительно повышает выход конечной продукции.

В таблице 3 приведены данные расчета скорости роста цыплят в опытной и контрольной группах.

Как видно из таблицы 3, динамика скорости роста цыплят соответствовала увеличению их массы.

Среднесуточный прирост цыплят опытной группы по сравнению с аналогами контроля был постоянно выше на протяжении всего опыта. Наиболее высокая разница в приросте была в период с 25-го по 35-й день опыта (8,3%) и в период с 35-го по 40-й день (16,4%).

За весь период опыта (с 1-го по 40-й день) скорость роста цыплят, получавших тканевый иммуномодулятор, на 8,6% превышала соответствующий показатель контрольной группы.

Таблица 3
Динамика среднесуточного прироста цыплят-бройлеров
Возраст, дней	Контрольная группа, г	Опытная группа, г
1-5	12,5±0,5	13,2±0,4
5-15	21,9±0,5	23,5±0,5
15-20	43,8±0,7	45,7±0,4
20-25	44,2±0,8	46,8±0,7
25-35	53,0±2,02	57,4±2,5
35-40	71,5±1,3	83,2±1,6
Суммарное значение 1-40	40,5±1,3	44,0±1,8

В опыте также изучали иммунологические показатели крови цыплят-бройлеров при применении тканевого иммуномодулятора. У цыплят-бройлеров при применении тканевого иммуномодулятора отмечены изменения морфологических показателей крови, при этом изученные морфологические показатели изменяются в пределах физиологических норм. Данные таблицы 4 указывают, что на 20-й день опыта количество эозинофилов у цыплят опытной группы уменьшилось по сравнению с контрольной группой на 3,2%. Количество псевдоэозинофилов у цыплят, получавших тканевый иммунокорректор, увеличилось на 2,3%, количество лимфоцитов - на 9,6% по сравнению с контрольной группой.

Выявлена и возрастная динамика колебания данных показателей. Так, в опытной группе на 20-й день опыта количество эозинофилов и псевдоэозинофилов уменьшилось соответственно у опытной группы на 25,2% а у контрольной группы на 22,8%, количество лимфоцитов увеличилось у опытной группы на 71%, а у контрольной на 68% по сравнению с количеством данных клеток в 1-й день опыта.

На 40-й день опыта количество эозинофилов у цыплят опытной группы уменьшилось на 3,4% по сравнению с контрольной группой. Количество псевдоэозинофилов у бройлеров опытной и контрольной групп находилось практически на одном уровне. Количество лимфоцитов у цыплят опытной группы увеличилось по сравнению с контрольной группой на 0,8%.

При анализе возрастной динамики установлено, что в опытной группе на 40-й день опыта количество базофилов, эозинофилов, псевдоэозинофилов и моноцитов уменьшилось соответственно на 26,4%, 19,6%, 44,4% и 16,6%, количество лимфоцитов увеличилось на 61,3% по сравнению с количеством этих клеток на 20-й день опыта.

Таблица 4
Морфологические показатели крови цыплят
Показатель	В начале опыта	На 20-й день опыта	На 40-й день опыта
Контрольная группа	Опытная группа	Контрольная группа	Опытная группа	Контрольная группа	Опытная группа
Базофилы, %	4,16	4,16	4,16	4,16	3,09	3,06
Эозинофи-лы, %	21,13	21,13	16,32	15,8	13,16	12,70
Псевдоэози-нофилы	59,80	59,80	41,06	39,1	22,06	21,73
Лимфоциты	10,0	10,0	31,8	35,2	56,90	57,39
Моноциты	6,15	6,15	6,05	6,05	5,04	5,04

В контрольной группе на 40-й день опыта количество базофилов, эозинофилов, псевдоэозинофилов и моноцитов уменьшилось соответственно на 25,7%, 19,36%, 46,9% и 16,6%, количество лимфоцитов увеличилось на 55,83% по сравнению с их количеством на 20-й день опыта.

Результаты иммунологических исследований крови цыплят представлены в таблице 5.

Проведенные исследования свидетельствуют, что количество эритроцитов и гемоглобина с возрастом повысилось в обеих группах птицы. У цыплят опытной группы эта динамика была более выраженной. Так, количество эритроцитов на 40-й день у опытных бройлеров было выше на 0,56-10 г/л (23,3%), а уровень гемоглобина выше на 16,2%, чем в контрольной группе. Данные показатели свидетельствуют об увеличении кислородной емкости крови и высокой насыщенности эритроцитов гемоглобином.

Для оценки показателей гуморального иммунитета были определены бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови (таблица 5).

Полученные результаты свидетельствуют, что с увеличением возраста повышается уровень бактерицидной активности сыворотки. Так, в опытной группе к 20-му дню бактерицидная активность была выше на 35,7%, а в контрольной - на 40,3% по сравнению с первоначальными показателями. К концу опыта произошло дальнейшее повышение показателя: в опытной группе на 32,03%, в контрольной - на 39,05% по сравнению с 20-дневным возрастом. При этом в опытной группе бактерицидная активность была выше на 3,7% данного показателя в контроле.

К концу опыта произошло повышение лизоцимной активности: в опытной группе в 2,1 раза, в контрольной - в 2,2 раза по сравнению с 20-дневным возрастом. В конце периода выращивания лизоцимная активность сыворотки крови у опытных цыплят была на 10% выше, чем в контрольной группе.

Уровень функциональной активности клеток мононуклеарной фагоцитирующей системы является одним из важнейших показателей неспецифической резистентности макроорганизма, так как они первыми взаимодействуют чужеродными антигенами при развитии инфекции и играют существенную роль в противомикробной защите организма. Подавление фагоцитоза снижает резистентность организма.

Таблица 5
Результаты иммунологических исследований крови цыплят
Показатель	В начале опыта	На 20-й день опыта	На 40-й день опыта
Контрольная группа	Опытная группа	Контрольная группа	Опытная группа	Контрольная группа	Опытная группа
Эритроциты, - 10 г/л	1,80±0,18	1,92±0,27	2,40±0,32	2,54±0,40	2,40±0,12	2,96±0,15*
Гемоглобин, г/л	82,8±7,2	88,0±8,6	78,90±7,2	82,0±8,6	111,2±0,8	129,2±1,02
Лейкоциты, '10 г/л	31,2±1,39	29,8±1,36	28,40±5,4	28,0±2,48	38,00±2,75	38,80±1,35
T-лимфоциты, %	18,8	18,4	28,8	32,9	32,4	39,2*
B-лимфоциты, %	32,4	30,0	29,4	30,0	33,2	36,8
Индекс Т/н	0,58	0,61	0,91	1,05	0,97	1,08
Фагоцитарная активность	30,4	35,2	40,4	45,2	37,6	50,40*
Фагоцитарный индекс	4,62	4,52	4,62	5,52	2,75	3,68
Лизоцимная активность	19,1	17,35	10,4	12,35	23,54	25,89
Бактерицидная активность	25,06	28,3	35,16	38,4	48,89	50,70
* разность с контролем достоверна, P 0,05

Результаты исследований показали, что фагоцитарная активность нейтрофилов стабильно имела более высокие значения у опытных цыплят. Кроме того, данный показатель имел и возрастную динамику: повышение его в опытной группе ко второму исследованию составило 28,4%, к третьему - 11,5%. В конце опыта в опытной группе фагоцитарная активность нейтрофилов составила 50,4% и была достоверно выше (по критерию Фишера), чем в контрольной группе, где равнялась 37,6%.

Также в опытной группе был выше фагоцитарный индекс (3,68), в отличие от контрольной группы, где данный показатель составил 2,75. Это говорит о том, что в опытной группе более высокая поглотительная способность нейтрофилов.

Полученные результаты проведенных гематологических исследований свидетельствуют о том, что цыплята, получавшие тканевый иммуномодулятор, имеют более высокие показатели неспецифической резистентности организма.

Показатели клеточного иммунитета: T-лимфоциты у цыплят в начале опыта в обеих группах были ниже нормы. При этом в опытной группе содержание Т-лимфоцитов было на 0,4% ниже, а В-лимфоцитов - на 2,4% ниже, чем в контрольной группе.

К концу опыта в периферической крови у цыплят опытной группы содержание Т-лимфоцитов достоверно выше (на 6,8%), чем в контроле, где данный показатель остается ниже нормы (таблица 5).

Относительное содержание В-лимфоцитов в периферической крови в конце опытного периода у цыплят, получавших тканевый иммунокорректор, на 3,6% выше, чем в контрольной группе. Это отразилось на соотношении T- и B-клеток в периферической крови. К концу выращивания индекс T- и B-лимфоцитов в опытной группе достигает нормы и составляет 1,08. Это на 11% выше, чем у цыплят контрольной группы, где данный показатель остается ниже нормы.

Проведенный иммунологический анализ крови цыплят-бройлеров свидетельствует о том, что применение тканевого иммуномодулятора стабилизирует физиологические и иммунологические показатели птицы и активирует формирование клеточного и гуморального иммунитета.

Таким образом, с учетом полученных данных можно заключить, то в условиях промышленного производства применение тканевого иммунокорректора способствует улучшению формирования и функционирования иммунной системы цыплят-бройлеров и может быть рекомендовано к промышленному применению.

Проведенный анализ сохранности цыплят-бройлеров за опытный период (без учета убитой по плану исследований птицы) представлен в таблице 6. Данные таблицы 6 указывают, что сохранность цыплят первые две недели в опытной группе выше по сравнению с контрольной группой на 4,0%. Начиная с третьей недели и до конца опытного периода, сохранность опытных цыплят также превышает сохранность птицы в контрольной группе.

Таблица 6
Сохранность цыплят-бройлеров за опытный период
Показатель	Контрольная группа	Опытная группа
Голов	%	Голов	%
в 1 неделю	200	100	200	100
во 2 неделю	192	96	200	100
в 3 неделю	187	93,5	198	99,0
в 4 неделю	181	90,5	198	99,0
в 5 неделю	178	89	198	99,0
в 6 неделю	176	88	197	98,5

Наиболее высокий процент сохранности цыплят в группе, получавшей тканевый иммуномодулятор, отмечался в пятую и шестую недели опыта.

Анализируя полученные результаты, можно сказать, что целом за технологический цикл выращивания сохранность бройлеров составила в опыте 98,5%, в контроле - 88,0%.

На момент убоя в опытной группе количество цыплят было больше на 10,65%, масса одной головы при убое была выше на 145,4 г (таблица 2), общая масса опытной группы больше на 28,6 кг по сравнению с контрольной группой (с учетом убитой по плану исследований птицы).

Дополнительно было изучено качество тушек бройлеров при использовании тканевого иммуномодулятора.

Бактериологическое исследование внутренних органов у пяти голов опытной и контрольной групп на 20-й день было проведено на базе Уральской государственной медицинской академии, на кафедре инфекционных болезней, вирусологии и микробиологии и в специализированной лаборатории ГКБ №40.

Результаты бактериологического исследования внутренних органов, полученных от 20-дневных цыплят, показали, что у трех бройлеров контрольной группы выделена культура Streptococcus faecalis, а из внутренних органов цыплят опытной группы патогенной микрофлоры не выделено.

Исследования качества мяса после убоя бройлеров (40-й день) были проведены на базе аккредитованной испытательной лаборатории по мясу и мясопродуктам Екатеринбургского мясокомбината в соответствии с действующими нормативами на методы исследования. Микробиологические показатели включали определение мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, в том числе сальмонелл. Микробиологические параметры тушек цыплят-бройлеров опытной и контрольной групп отличались. Так, показатель общей микробной обсемененности (мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы) в контрольной группе был на 33,20% выше, чем в опытной.

Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что при применении тканевого иммуномодулятора получен неочевидный эффект, происходит санация опытных цыплят от мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов. Это обусловлено, по-видимому, предупреждением развития феномена транслокации условно-патогенной микрофлоры из желудочно-кишечного тракта в органы и ткани при применении тканевого иммуномодулятора. Иммунологические показатели крови (Т- и B-лимфоциты), лизоцимная и бактерицидная активность сыворотки крови бройлеров свидетельствуют об активации клеточных и гуморальных факторов защиты под действием тканевого иммуномодулятора (таблица 5).

Применение тканевого иммуномодулятора «Бурсанатал» по предложенному способу способствует опережению скорости роста цыплят-бройлеров опытной группы по сравнению с их аналогами из контрольной группы, способствует увеличению среднесуточного прироста живой массы цыплят и сохранности поголовья на 10,5%.

Тканевый иммуномодулятор целесообразно применять для стимуляции роста, развития и повышения сохранности цыплят-бройлеров.

Таким образом, проведенные исследования в условиях птицефабрики показали, что использование тканевого иммуномодулятора в технологическом цикле выращивания цыплят-бройлеров позволяет сохранить и повысить их резистентность в жестких условиях промышленной технологии, а «Бурсанатал» при простоте его изготовления и доступности используемого сырья может широко применяться в промышленном птицеводстве.

1. Способ приготовления иммуномодулятора для выращивания бройлеров, включающий переработку Фабрициевой бурсы птиц путем измельчения, охлаждения, экстракции, очистки и стерилизации полученного состава, отличающийся тем, что в качестве исходного сырья для получения иммуномодулятора используют Фабрициеву бурсу бройлеров в возрасте 35-42 дней жизни, при этом Фабрициеву бурсу однократно замораживают до -20°С, и выдерживают в морозильной камере 6-7 дней, после чего производят дефрастацию до +4°С, измельчают до состояния фарша, заливают физиологическим раствором из расчета 5-6 л на 1 кг фарша, полученную массу помещают в холодильник для экстрагирования, через сутки массу процеживают, фильтрат кипятят 9-10 мин, взвесь центрифугируют 30 мин при 2000 об/мин, жировую пленку, образовавшуюся на фугате, удаляют, коагулят декантируют, полученный материал фильтруют, стерилизуют, разливают во флаконы и автоклавируют.

2. Способ применения иммуномодулятора, полученного по п.1, отличающийся тем, что иммуномодулятор применяют в жидком виде перорально вместе с питьевой водой курсами в три этапа - с 1 по 7 день, с 11 по 17 и с 21 по 27 день жизни бройлеров включительно из расчета от 0,15 до 0,10 г препарата иммуномодулятора на 1 кг живой массы бройлеров.