Фармацевтически приемлемые соли (s)-n-[4-(1-адамантил)бензоил]- -аминокислот и способ их получения

Фармацевтически приемлемые соли (s)-n-[4-(1-адамантил)бензоил]- -аминокислот и способ их получения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящее изобретение относится к миметикам пептидов, а именно к фармацевтически приемлемым солям (S)-N-[4-(1-адамантил)бензоил]-α-аминокислот, обладающим противовоспалительными, противоболевыми, противопаркинсоническими, антигипоксическими, актопротекторными и иммуномодулирующими свойствами, маловыраженным ульцерогенным действием, низкой токсичностью и не вызывающих лекарственной зависимости, а также к их способу получения.

В настоящее время миметики пептидов достаточно хорошо известны в фармакологии, благодаря чему используются в клинической практике в качестве диагностических, профилактических и терапевтических средств. Несмотря на это продолжаются исследования в области поиска миметиков, обладающих новыми свойствами при низкой токсичности, низких побочных эффектах и являющихся легко доступными с точки зрения синтеза.

Миметик пептида - это химически синтезированное соединение, которое является «функциональным эквивалентом» по отношению к пептиду и имитирует его структуру, но обладает измененными свойствами. Одним из подходов к созданию структуры миметика является введение в известный пептид или аминокислоту какого-либо липофильного фрагмента, в результате чего увеличивается способность соединения проникать через клеточные мембраны и накапливаться в определенных тканях и органах.

Одним из таких липофильных фрагментов является адамантановый фрагмент, который имеет жесткую, пространственно определенную структуру и обладает способностью эффективно адсорбироваться на клеточных мембранах. Однако на различных примерах было показано, что в результате введения в молекулу адамантана измененяется не только ее липофильность. При этом также наблюдается пролонгирование фармакологических эффектов соединений [1], повышается их устойчивость к метаболическим превращениям в организме и меняется характер взаимодействия соединений с рецепторами мембран [2-4]. Таким образом, введение адамантанового фрагмента в молекулу может приводить к появлению новых видов биологической активности.

Данный подход к синтезу миметиков был применен и описан на примере эндогенного пептида энкефалина и его аналогов, обладающих противоболевой активностью [5]. В структуру энкефалина, содержащего пять аминокислотных остатков, и его аналогов вводили фрагмент адамантана, в результате чего получали миметики с улучшенной проницаемостью через гемато-энцефалический барьер и повышенной устойчивостью к метаболическим превращениям. Основной недостаток указанных соединений заключается в том, что по механизму действия они являются агонистами-антагонистами опиатных рецепторов, что обуславливает наличие выраженных побочных эффектов, одними из которых могут быть лекарственная зависимость и развитие депрессивного состояния. К недостаткам можно также отнести сложность строения миметиков энкефалина.

Кроме этого, известны N-адамантилзамещенные амиды тетрапептидов и их соли, обладающие противоболевой активностью [6]. Данные соединения, как и в приведенном выше примере, являются аналогами энкефалина и, следовательно, могут иметь аналогичные побочные эффекты.

Задачей настоящего изобретения является получение новых эффективных миметиков пептидов, обладающих высокой способностью проникать через клеточные мембраны и низкой токсичностью, а также не проявляющих побочных эффектов и не вызывающих лекарственной зависимости.

В настоящем изобретении поставленная задача была решена с помощью новых соединений, описываемых общей формулой (1)

где А⁺ представляет собой ион щелочного металла, аммония и N⁺(C_1-4алкил)₄;

R² при условии, что R¹ представляет собой атом водорода, представляет собой атом водорода, радикалы -СН₃, -СН(СН₃)₂, -CH₂CH(СН₃)₂, -СН(СН₃)СН₂СН₃, , , -CH₂-CH₂-SH, -CH₂-CH₂-S-CH₃, , ;

R¹ и R² вместе представляют собой бирадикал -СН₂-СН₂-СН₂-, замкнутый в пирролидиновый цикл.

Способ получения соединений формулы (1) в литературе не описан.

В соответствии с настоящим изобретением способ получения соединений по п.1 заключается в превращении 4-(1-адамантил)бензойной кислоты в соответствующий хлорангидрид, дальнейшей реакции ацилирования (S)-α-аминокислоты в присутствии растворителя, представляющего собой смесь воды и 1,4-диоксана, выделении (S)-N-[4-(1-адамантил)бензоил]-α-аминокислоты и ее нейтрализации водным раствором основания в присутствии этилового спирта с образованием соли.

Способ получения соединений формулы (1) осуществляют следующим образом.

4-(1-Адамантил)бензойную кислоту при взаимодействии с избытком хлористого тионила и каталитических количеств N,N-диметилформамида превращают в соответствующий хлорангидрид, после чего избыточный хлористый тионил отгоняют. Хлорангидрид 4-(1-адамантил)бензойной кислоты может быть также получен при взаимодействии с пятихлористым фосфором или другим хлорирующим агентом.

Последующую реакцию ацилирования проводят добавлением раствора хлорангидрида 4-(1-адамантил)бензойной кислоты в 1,4-диоксане к раствору (S)-α-аминокислоты, представляющему собой смесь воды и 1,4-диоксана в объемном соотношении 1:(0,5-5), при рН, равном 8-10 единиц, и при комнатной температуре. При этом соотношение исходной (S)-α-аминокислоты и общего количества растворителя составляет 1:(10-30) по массе. В рассматриваемом процессе на стадии ацилирования (S)-α-аминокислоты образуются продукты, плохо растворимые в воде, что затрудняет течение реакции. Использование смеси растворителей воды и 1,4-диоксана позволяет предотвратить это явление.

Выделение (S)-N-[4-(1-адамантил)бензоил]-α-аминокислоты осуществляют путем добавления к реакционной смеси охлажденной воды и подкислением до рН, равного 3-4 единицы, после чего выпавший осадок отфильтровывают и переосаждают.

На последней стадии растворяют (S)-N-[4-(1-адамантил)бензоил]-α-аминокислоту при комнатной температуре в этиловом спирте в качестве растворителя и нейтрализуют водным раствором основания или соли, после чего отфильтровывают выпавший осадок соединения формулы (1).

Ниже приводятся примеры получения соединений, заявленных в настоящем изобретении. Для подтверждения структуры указанных соединений снимались ¹Н-ЯМР спектры в диметилсульфоксиде на приборе Bruker DRX 500 с рабочей частотой 500 МГц.

Пример 1

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]этановая кислота

К 5,0 г (0,02 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты добавляют 19,7 мл (0,10 моль) хлористого тионила и 2-3 капли N,N-диметилформамида. Полученную смесь кипятят в течение 3 ч, после чего отгоняют под вакуумом избыток хлористого тионила. Получают 5,1 г хлорангидрида 4-(1-адамантил)бензойной кислоты, который используют без предварительной очистки в реакции ацилирования.

Для проведения реакции ацилирования 1,5 г (0,02 моль) глицина растворяют в 10,0 мл (0,02 моль) 2 н. NaOH и добавляют 5,0 мл 1,4-диоксана. В полученный раствор при перемешивании вносят порциями раствор полученного ранее 5,1 г (0,02 моль) хлорангидрида 4-(1-адамантил)бензойной кислоты в 30,0 мл 1,4-диоксана. По мере протекания реакции для поддержания первоначального значения рН 9-10 в смесь добавляют 4 н. водный раствор NaOH. Время добавления хлорангидрида 1 ч. После этого продолжают перемешивание еще 1 ч при 20°С, а затем реакционную смесь разбавляют в 2 раза водой и подкисляют HCl до рН, равного 3. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой до нейтрального значения рН. Очистка проводится переосаждением через натриевую соль, после чего продукт высушивают и получают 4,9 г (85%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]этановой кислоты с т.пл. 245-246°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,15 (д, 1Н, J=6,4 Гц), 7,80 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,38 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,60 (м, 2Н), 2,12 (м, 3Н), 1,93 (м, 6Н), 1,79 (м, 6Н).

4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а)

1,0 г (3,2·10^-3 моль) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]этановой кислоты растворяют в 10 мл этилового спирта и добавляют 0,8 мл (3,2·10^-3 моль) 4 н. NaOH. Выпавшую в осадок соль отфильтровывают и промывают на фильтре этиловым спиртом. Получают 0,96 г (90%) (4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидоацетата натрия. Т.пл. 208-210°С. Рассчитано для C₁₉H₂₂NO₃Na, %: С 68,12; Н 6,57; N 4,18. Найдено, %: С 68,00; Н 6,41; N 4,10.

Пример 2

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]пропионовая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 0,7 г (7,8·10^-3 моль) (S)-аланина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 1,9 г (75%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]пропионовой кислоты с т.пл. 203-205°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,15 (д, 1Н, J=6,4 Гц), 7,80 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,38 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,45 (м, 1Н), 2,12 (м, 3Н), 1,93 (м, 6Н), 1,79 (м, 6Н), 1,43 (д, 3Н, J=8,0 Гц).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]пропионат натрия (1б)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]пропионовой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,9 г (85%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]пропионата натрия. Т.пл. 195-197°С. Рассчитано для C₂₀H₂₄NO₃Na, %: С 68,79; Н 6,87; N 4,01. Найдено, %: С 68,65; Н 6,90; N 4,08.

Пример 3

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутановая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 0,9 г (7,8·10^-3 моль) (S)-валина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,5 г (90%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутановой кислоты с т.пл. 215-218°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 7,80 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,74 (м, 1Н), 7,37 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,40 (дд, 1Н, J=6,7, J=6,4 Гц), 2,22 (м, 1Н), 2,12 (м, 3Н), 1,92 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н), 1,00 (д, 6Н, J=6,0 Гц).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутановой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,9 г (82%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутирата натрия. Т.пл. 169-172°С. Рассчитано для C₂₂H₂₈NO₃Na, %: С 70,05; Н 7,42; N 3,71. Найдено, %: С 70,10; Н 7,53; N 3,69.

Пример 4

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилпентановая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 1,0 г (7,8·10^-3 моль) (S)-лейцина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,3 г (80%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилпентановой кислоты с т.пл. 113-114°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,20 (м, 1Н), 7,82 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,38 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,50 (м, 1Н), 2,12 (м, 3Н), 1,92 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н), 1,75 (м, 2Н), 1,65 (м, 1Н), 0,95 (д, 6Н, J=9,3 Гц).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилпентаноат натрия (1 г)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилпентановой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,8 г (78%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилпентаноата натрия. Т.пл. 151-153°С. Рассчитано для C₂₃H₃₀NO₃Na, %: С 70,61; Н 7,67; N 3,58. Найдено, %: С 70,40; Н 7,73; N 3,51.

Пример 5

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилпентановая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 1,0 г (7,8·10^-3 моль) (S)-изолейцина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,2 г (76%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилпентановой кислоты с т.пл. 154-155°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,20 (м, 1Н), 7,82 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,38 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,50 (м, 1Н), 2,12 (м, 3Н), 1,92 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н), 1,65 (м, 1Н), 1,55 (м, 2Н), 0,95 (д, 3Н, J=9,0 Гц), 0,85 (м, 3Н).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилпентаноат натрия (1д)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилпентановой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,8 г (78%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилпентаноата натрия. Т.пл. 141-142°С. Рассчитано для C₂₃H₃₀NO₃Na, %: С 70,61; Н 7,67; N 3,58. Найдено, %: С 70,49; Н 7,75; N 3,52.

Пример 6

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-фенилпропионовая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 1,3 г (7,8·10^-3 моль) (S)-β-фенилаланина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,5 г (80%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-фенилпропионовой кислоты с т.пл. 108-110°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,12 (м, 1Н), 7,73 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,36 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,23 (м, 2Н), 7,28 (м, 2Н), 7,15 (м, 1Н), 4,65 (м, 1Н), 3,20 (дд, 1Н, J=14,8 Гц, J=4,6 Гц), 3,10 (дд, 1Н, J=14,8 Гц, J=10,0 Гц), 2,12 (м, 3Н), 1,93 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-фенилпропионат натрия (1е)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-фенилпропионовой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,9 г (86%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-фенилпропионата натрия. Т.пл. 205-207°С. Рассчитано для C₂₆H₂₈NO₃Na, %: С 73,43; Н 6,58; N 3,29. Найдено, %: С 73,55; Н 6,63; N 3,31.

Пример 7

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-2-фенилэтановая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 1,2 г (7,8·10^-3 моль) (S)-фенилглицина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,7 г (89%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-2-фенилэтановой кислоты с т.пл. 180-185°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,40 (м, 1Н), 7,86 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,49 (м, 2Н), 7,38 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,33 (м, 2Н), 7,27 (м, 1Н), 5,58 (д, 1Н, J=5,0 Гц), 2,12 (м, 3Н), 1,92 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-2-фенилацетат натрия (1ж)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-2-фенилэтановой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,97 г (92%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-2-фенилацетата натрия. Т.пл. 208-210°С. Рассчитано для C₂₅H₂₆NO₃Na, %: С 73,01; Н 6,32; N 3,40. Найдено, %: С 73,11; Н 6,40; N 3,46.

Пример 8

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-сульфанилбутановая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 0,9 г (7,8·10^-3 моль) (S)-цистеина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,3 г (83%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-сульфанилбутановой кислоты с т.пл. 166-167°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,20 (м, 1Н), 7,80 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,40 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,55 (м, 1Н), 2,56 (м, 2Н), 2,12 (м, 3Н), 2,10 (м, 2Н), 1,92 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-сульфанилбутират натрия (1з)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-сульфанилбутановой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,9 г (86%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-сульфанилбутирата натрия. Т.пл. 201-203°С. Рассчитано для C₂₁H₂₆NO₃SNa, %: С 63,81; Н 6,58; N 3,54. Найдено, %: С 63,70; Н 6,61; N 3,46.

Пример 9

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутановая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 1,2 г (7,8·10^-3 моль) (S)-метионина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,7 г (88%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутановой кислоты с т.пл. 139-140°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,20 (м, 1H), 7,80 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,40 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,55 (м, 1Н), 2,56 (м, 2Н), 2,12 (м, 3Н), 2,10 (м, 2Н), 2,08 (с, 3Н), 1,92 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутановой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,95 г (90%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутирата натрия. Т.пл. 174-177°С. Рассчитано для C₂₂H₂₈NO₃SNa, %: С 64,56; Н 6,84; N 3,42. Найдено, %: С 64,70; Н 6,71; N 3,46.

Пример 10

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-3-индолил)пропионовая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 1,6 г (7,8·10^-3 моль) (S)-триптофана, следуя методике, описанной в примере 1, получают 3,1 г (91%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-3-индолил)пропионовой кислоты с т.пл. 160-162°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 10,60 (с, 1Н), 8,05 (д, 1Н, J=6,4 Гц), 7,74 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,58 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,34 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,30 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 7,13 (д, 1Н, J=1,0 Гц), 7,03 (дд, 1Н, J=8,7 Гц, J=8,4 Гц), 6,95 (дд, 1Н, J=8,7 Гц, J=8,4 Гц), 4,72 (м, 1Н), 3,32 (дд, 1Н, J=14,8 Гц, J=4,6 Гц), 3,22 (дд, 1Н, J=14,8 Гц, J=10,0 Гц), 2,12 (м, 3Н), 1,90 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-3-индолил)пропионат натрия (1к)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-3-индолил)пропионовой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 1,0 г (95%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-3-индолил)пропионата натрия. Т.пл. 210-211°С. Рассчитано для C₂₈H₂₉N₂O₃Na, %: С 72,43; Н 6,25; N 6,03. Найдено, %: С 72,30; Н 6,21; N 6,06.

Пример 11

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-5-имидазолил)пропионовая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 1,2 г (7,8·10^-3 моль) (S)-гистидина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,7 г (88%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-5-имидазолил)пропионовой кислоты с т.пл. 277-279°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 8,60 (с, 1Н), 7,96 (с, 1Н), 7,88 (д, 1Н, J=6,4 Гц), 7,79 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,42 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,00 (с, 1Н), 4,64 (м, 1Н), 3,12 (м, 2Н), 2,12 (м, 3Н), 1,93 (м, 6Н), 1,78 (м, 6Н).

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-5-имидазолил)пропионат натрия (1л)

Исходя из 1,0 г (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-5-имидазолил)пропионовой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 0,9 г (86%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-5-имидазолил)пропионата натрия. Т.пл. 212-214°С. Рассчитано для C₂₃H₂₆N₃O₃Na, %: С 66,52; Н 6,26; N 10,11. Найдено, %: С 66,69; Н 6,21; N 10,16.

Пример 12

1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоновая кислота

Исходя из 2,0 г (7,8·10^-3 моль) 4-(1-адамантил)бензойной кислоты и 0,9 г (7,8·10^-3 моль) (S)-пролина, следуя методике, описанной в примере 1, получают 2,5 г (90%) 1-[4-(1-адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоновой кислоты с т.пл. 222-224°С. ¹Н-ЯМР, δ, м.д.: 12,20 (с, 1Н), 7,45 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 7,38 (д, 2Н, J=7,8 Гц), 4,41…4,30 (м, 1Н), 3,60 (м, 2Н), 2,30 (м, 1Н), 2,12 (м, 3Н), 2,0 (м, 2Н), 1,92 (м, 6Н), 1,85 (м, 1Н), 1,78 (м, 6Н).

1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1 м)

Исходя из 1,0 г 1-[4-(1-адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоновой кислоты, следуя методике, описанной в примере 1, получают 1,05 г (97%) 1-[4-(1-адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилата натрия. Т.пл. 175-178°С. Рассчитано для C₂₂H₂₆NO₃Na, %: С 70,42; Н 6,93; N 3,73. Найдено, %: С 70,42; Н 6,91; N 3,76.

Пример 13

4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат аммония (1н)

1,0 г (3,2·10^-3 моль) (2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]этановой кислоты, полученной согласно примеру 1, растворяют в 10 мл этилового спирта и добавляют 0,26 мл (3,5·10^-3 моль) раствора аммиака с массовой долей 25%. Полученный раствор частично упаривают до образования осадка соли, который отфильтровывают и сушат. Получают 0,85 г (80%) (4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидоацетата аммония. Т.пл. 149-150°С. Рассчитано для C₁₉H₂₆N₂O₃, %: С 69,11; Н 7,87; N 8,48. Найдено, %: С 69,00; Н 7,81; N 8,39.

Пример 14

(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират аммония (1о)

1,0 г (2,8·10^-3 моль) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутановой кислоты, полученной согласно примеру 3, растворяют в 10 мл этилового спирта и добавляют 0,23 мл (3,1·10^-3 моль) раствора аммиака с массовой долей 25%. Полученный раствор частично упаривают до образования осадка соли, который отфильтровывают и сушат. Получают 0,86 г (82%) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутирата аммония. Т.пл. 139-141°С. Рассчитано для C₂₂H₃₂N₂O₃, %: С 70,98; Н 8,60; N 7,52. Найдено, %: С 70,85; Н 8,61; N 7,44.

Пример 15

4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат тетраэтиламмония (1п)

1,0 г (3,2·10^-3 моль) (2S)-[4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидо]этановой кислоты, полученной согласно примеру 1, растворяют в 10 мл этилового спирта и добавляют 2,09 мл (3,2·10^-3 моль) раствора гидроксида тетраэтиламмония с массовой долей 25%. Полученный раствор частично упаривают до образования осадка соли, который отфильтровывают и сушат. Получают 1,06 г (75%) (4-(1-адамантил)фенилкарбоксамидоацетата тетраэтиламмония. Т.пл. 129-131°С. Рассчитано для C₂₇H₄₂N₂O₃, %: С 73,32; Н 9,50; N 6,33. Найдено, %: С 73,18; Н 9,61; N 6,39.

Технический результат заключается в получении новых эффективных миметиков пептидов, обладающих высокой способностью проникать через клеточные мембраны и низкой токсичностью, а также не проявляющих побочных эффектов и не вызывающих лекарственной зависимости.

Согласно настоящему изобретению соединения формулы (1) могут примененяться в качестве эффективных противовоспалительных, противоболевых, противопаркинсонических, антигипоксических, актопротекторных и иммуномодулирующих средств. Преимуществом данных соединений является то, что они обладают более широким фармакологическим профилем по сравнению с приведенными аналогами, а также обладают маловыраженным ульцерогенным действием, низкой токсичностью и не вызывают лекарственной зависимости.

Исследование фармакологической активности соединений, заявляемых в настоящем изобретении, проводилось методом биологического тестирования. В работе использовались 500 белых беспородных крыс-самцов весом 180-200 г и 765 белых беспородных мышей-самцов весом 18-20 грамм.

С лабораторными животными работали в соответствии с действующими "Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных" и "Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных" [7]. Все животные содержались в виварии в одинаковых условиях обитания и кормления (стандартный брикетированный корм). Количество животных в каждой экспериментальной группе в зависимости от модели колебалось в пределах от 10 до 23 особей.

Соединения формулы (1) вводились животным в дозе 20 мг/кг, если это не указано особо. Дозы препаратов сравнения в каждом случае рассчитывались с помощью коэффициента Т.А.Гуськовой, равного 5,9 для крыс и 11,8 для мышей [8]. Животным контрольной группы в эквивалентном объеме вводилась дистиллированная вода (0,5 мл).

Ниже приводятся примеры биологического тестирования соединений формулы (1), иллюстрирующие их фармакологические свойства.

Пример 16

Острая токсичность

Для соединений формулы (1) по методике Тейтнера-Миллера определяли LD₅₀ при тестировании на мышах-самцах [9]. Для этого готовился водный раствор соединения, который затем вводился внутрижелудочно и внутрибрюшинно животному. LD₅₀ рассчитывалась путем оценки смертности животных в течение последующих двух недель. Полученные данные для заявляемых соединений и известного препарата диклофенака натрия, который далее использовался в качестве препарата сравнения при исследовании противовоспалительной и противоболевой активности, приведены в таблице 1.

Таблица 1
LD50 при внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении
Соединение	LD50 при внутрижелудочном введении, мг/кг	LD50 при внутрибрюшинном введении, мг/кг
Диклофенак натрия	350*	74*
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и), аммония (1н), тетраэтиламмония (1п)	1490±285	345±82
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1Н-3-индолил)пропионат натрия (1к)	1870±313	304±64
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в), аммония (1о)	460±137	410±77
1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1 м)	1810±281	375±76
4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а)	1790±340	680±110
* - [12]

Результаты токсикологического исследования свидетельствуют о том, что согласно ГОСТу 12.1.007-76 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности" [10] соединения формулы (1) относятся к третьему классу опасности, то есть являются малоопасными соединениями, так как их среднесмертельные дозы при внутрижелудочном введении входят в интервал от 151 до 5000 мг/кг. При внутрибрюшинном введении заявляемые соединения обладают более низкой токсичностью в 5-9 раз по сравнению с известным противовоспалительным препаратом диклофенаком натрия.

Пример 17

Противовоспалительная активность

Противовоспалительную активность соединений формулы (1) исследовали на моделях острой экссудативной реакции у мышей и формалинового отека у крыс [11]. В качестве препарата сравнения был выбран диклофенак натрия.

Острую экссудативную реакцию (уксуснокислый перитонит) у мышей вызывали внутрибрюшинным введением 1% раствора уксусной кислоты. Раствор уксусной кислоты вводили из расчета 1 мл на 100 г массы тела животного через час после внутрижелудочного введения исследуемого соединения или препарата сравнения. Через 3 ч животных забивали, вскрывали брюшную полость и собирали экссудат. Выраженность антиэкссудативного эффекта соединений определяли по проценту снижения средней массы экссудата по сравнению с контролем.

Результаты экспериментов по определению антиэкссудативной активности заявляемых соединений на модели уксуснокислого перитонита у мышей свидетельствуют о том, что все они обладали антиэкссудативным действием, выраженность которого составляет от 33% до 70% (таблица 2). Наиболее эффективные соединения 1к и 1в достоверно снижали экссудативную реакцию на 55,0% и 69,6% соответственно, превосходя по эффективности препарат сравнения диклофенак натрия, уменьшавший экссудацию на 45,6%.

Таблица 2
Влияние исследуемых соединений на среднее количество экссудата у мышей и средний объем лапы у крыс
Соединение	Среднее количество экссудата, мг	Отечность лап, мл
Контроль	701,67±88,00	0,417±0,025
Диклофенак	381,85±68,33*	0,219±0,065*
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и), аммония (1н), тетраэтиламмония (1п)	383,93±34,81*	0,205±0,032*
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1Н-3-индолил)пропионат натрия (1к)	315,94±82,80*	0,206±0,035*
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в)	213,49±43,85*	0,183±0,045*
1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1м)	470,21±74,82*	0,223±0,107*
4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а)	465,04±70,02*	0,178±0,04*
* - достоверно относительно интактного контроля, Р<0,05

Метод формалинового отека у крыс использовался в качестве дополнительного метода оценки противовоспалительной активности. Формалиновый отек моделировался путем субплантарного введения 0,1 мл 2% раствора формалина. Исследуемые соединения вводились внутрижелудочно за час до проведения эксперимента. В таблице 2 представлены данные по угнетению воспалительной реакции, которое оценивали через 3 ч после индукции воспаления по изменению объема лапы и рассчитывали по формуле (1):

где Jк и Jo - объем лапки крысы в контрольной и опытной группах [12-14].

Результаты тестирования на обеих моделях показали наличие у соединений формулы (1) выраженной противовоспалительной активности, сопоставимой или превосходящей активность диклофенака натрия, при более низкой токсичности в 5-9 раз.

Пример 18

Противоболевая активность

Противоболевую активность соединений формулы (1) оценивали по их способности уменьшать число специфических болевых реакций, «корчей» у мышей при внутрибрюшинном введении 0,75% раствора уксусной кислоты (1 мл на 100 г массы тела животного) [9]. Соединения формулы (1) вводились внутрижелудочно за час до проведения эксперимента. Количество «корчей» подсчитывали в течение последующих 15 минут после инъекции раствора уксусной кислоты для каждого животного. Противоболевую активность оценивали по проценту угнетения болевой реакции по сравнению с контрольной группой [12, 15].

Эксперименты по изучению противоболевой активности обнаружили, что исследуемые соединения обладали примерно одинаковым противоболевым действием, уменьшая «корчи» у мышей на 58,6%-72,6% (таблица 3). Их активность сопоставима с активностью препарата сравнения диклофенака натрия, но заявляемые соединения обладают более низкой токсичностью в 5-9 раз.

Таблица 3
Влияние исследуемых соединений на среднее количество «корчей» у мышей
Соединение	Среднее количество «корчей»,ед.	Изменение среднего количества «корчей» относительно контроля, %
Контроль	49,17±4,49	-
Диклофенак	17,32±3,06*	-64,78
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и)	20,36±1,49*	-58,59
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1Н-3-индолил)пропионат натрия (1к)	19,27±3,17*	-60,81
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в)	17,20±2,99*	-65,02
1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1 м)	13,48±2,34*	-72,58
4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а)	15,34±4,50*	-68,80
* - достоверно относительно интактного контроля, Р<0,05

Анализировалось влияние соединений, заявляемых в настоящем изобретении, на опиатные рецепторы. Для этого на модели уксуснокислых «корчей» оценивалась выраженность их анальгетических свойств на фоне введения животным налоксона - антагониста µ-опиатных рецепторов в дозе 1 мг/кг [16].

На фоне введения налоксона не наблюдалось снижение выраженности анальгетической активности, то есть исследуемые вещества уменьшали среднее количество «корчей» на 54,3%-93,3% по сравнению с интактным контролем (таблица 4). Это свидетельствует об отсутствии активирующего влияния соединений формулы (1) на опиатные рецепторы, а значит они не могут вызывать наркотической зависимости и депрессивных состояний.

Таблица 4
Влияние исследуемых соединений на среднее количество «корчей» у мышей на фоне введения налоксона
Соединение	Среднее количество «корчей», ед.	Изменение среднего количества «корчей» относительно интактного контроля, %
Контроль	49,17±2,4	-
Налоксон	47,66±2,8	-3,07
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и)	22,74±1,8*#	-53,75
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1Н-3-индолил)пропионат натрия (1к)	5,50±1,4*#	-88,81
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в)	12,10±0,8*#	-75,39
1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1м)	13,53±2,0*#	-72,48
4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а)	11,00±4,2*#	-77,63
* - достоверно относительно интактного контроля, Р<0,05 # - достоверно относительно налоксона, Р<0,05

Пример 19

Жаропонижающее действие

Жаропонижающее действие соединений формулы (1) исследовали на модели дрожжевой лихорадки у крыс, которую вызывали путем подкожного введения 20% суспензии пекарских дрожжей одновременно с внутрибрюшинным введением исследуемых соединений [9]. Препаратом сравнения был выбран метамизол натрия. Оценку выраженности жаропонижающего действия проводили, сравнивая изменение температуры на фоне введения исследуемых соединений через 1 и 2 ч после их введения с контрольной, интактной группами и группой препарата сравнения. Далее для веществ, обладающих наиболее выраженным жаропонижающим действием, оценивалась их способность снижать температуру на протяжении 6 ч после введения пирогена, и по этим данным строились температурные кривые.

На модели дрожжевой лихорадки у крыс было установлено, что под воздействием пирогена их температура тела достоверно повышалась во всех группах по сравнению с температурой тела интактных животных - на 0,6°С в течение 1 ч и на 1,11°С в 2 ч эксперимента (таблица 5). Препарат сравнения снижал лихорадочную реакцию крыс на 0,88°С в течение 1 ч и на 1,25°С в течение 2 ч после введения суспензии пекарских дрожжей. Среди исследуемых соединений достоверное выраженное уменьшение ректальной температуры по сравнению с контрольной группой на протяжении 2 ч наблюдалось при введении субстанции 1а, которая угнетала лихорадочную реакцию на 1,28°С в течение 1 ч и на 1,71°С в течение 2 ч.

Таблица 5
Влияние исследуемых соединений на ректальную температуру у крыс через 1 и 2 ч после введения пирогена
Соединение	Изменение температуры через 1 ч	Изменение температуры через 2 ч
Контроль	+0,60±0,27	+1,11±0,47
Метамизол натрия	-0,28±0,21*	-0,15±0,40*
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и)	-0,08±0,19*	+0,45±0,48
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1H-3-индолил)пропионат натрия (1к)	+0,44±0,47	+0,70±0,35
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в)	+0,35±0,27	+0,60±0,42
1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1м)	+0,13±0,65	+0,37±0,47
4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а)	-0,68±0,38*	-0,70±0,46*
* - достоверно относительно интактного контроля Р<0,05

Для соединения 1а, обладающего наиболее выраженной жаропонижающей активностью среди изучаемых веществ, ниже приведена температурная кривая, показывающая его влияние на развитие дрожжевой лихорадки у крыс в течение семи часов после введения суспензии пекарских дрожжей в сравнении с контролем и эталонным препаратом метамизолом натрия (чертеж).

В контрольной группе на фоне введения суспензии пекарских дрожжей ректальная температура крыс поднималась в течение 7 ч. Через 1 ч после введения пирогена она повысилась на 0,72°С, а к 7 ч наблюдения достигла 37,45°С. У животных, которым вводили соединение 1а и метамизол натрия, в течение первых 2 ч после введения суспензии пекарских дрожжей температура тела не превышала измеренной перед введением пирогена температуры (Р<0,05). В течение последующего времени она постепенно поднималась и к концу эксперимента достигла уровня контрольной группы (±0,3°С).

Пример 20

Ульцерогенное действие

Ульцерогенное действие соединений формулы (1) исследовалось на крысах, лишенных пищи за 16 ч до опыта, при однократном внутрижелудочном введении соединений в дозе 0,2 LD₅₀ [9]. Оценку его выраженности проводили через 3 ч после введения опытных субстанций по 4-балльной шкале:

0 - отсутствие повреждений;

0,5 - гиперемия;

1 - единичные незначительные повреждения (1 или 2 точечных кровоизлияния);

2 - множественные повреждения (эрозии, точечные кровоизлияния);

3 - значительные и множественные повреждения слизистой (эрозии, кровоизлияния);

4 - грубые повреждения, охватывающие всю поверхность слизистой (массивные кровоизлияния, эрозии, перфорации).

Препаратами сравнения были выбраны диклофенак натрия и индометацин, которые вводились животным в дозе 0,2 LD₅₀.

При оценке ульцерогенного действия в качестве препаратов сравнения были выбраны индометацин как обладающее сильным ульцерогенным влиянием лекарственное средство (Индекс ингибирования ЦОГ-1/ЦОГ-2=30) и диклофенак натрия, для которого характерно более слабое повреждающее действие (Индекс ингибирования ЦОГ-1/ЦОГ-2=2,2). Результаты исследования показали, что соединения формулы (1) обладают маловыраженным или практически отсутствующим в случае соединений 1и и 1к ульцерогенным действием по сравнению с диклофенаком натрия и индометацином (таблица 6).

Таблица 6
Выраженность ульцерогенного действия у животных на фоне введения им исследуемых соединений
Соединение	Изъязвленность слизистой желудка, баллы
Контроль	0,0±0,0
Индометацин	3,0±0,0*#
Диклофенак	2,0±0,0*^
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-4-метилсульфанилбутират натрия (1и)	0,0±0,0^#
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-(1Н-3-индолил)пропионат натрия (1к)	0,0±0,0^#
(2S)-[4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидо]-3-метилбутират натрия (1в)	0,25±0,2^#
1-[4-(1-Адамантил)бензоил]-(2S)-пирролидинкарбоксилат натрия (1м)	0,17±0,2^#
4-(1-Адамантил)фенилкарбоксамидоацетат натрия (1а)	0,09±0,1^#
* - достоверно относительно интактного контроля, Р<0,05
^ - достоверно относительно индометацина, Р<0,05
# - достоверно относительно диклофенака, Р<0,05

Пример 21

Противопаркинсоническая активность

Противопаркинсоническая активность веществ изучалась по двум методикам: галоперидоловой каталепсии у крыс и амфетаминовой стереотипии у мышей [9].

Галоперидоловую каталепсию у крыс вызывали внутрибрюшинным введением галоперидола в дозе 1 мг/кг. В качестве препаратов сравнения, используемых в опытах по изучению противопаркинсонической активности, были выбраны: леводопа, более эффективная в отношении акинето-ригидной формы паркинсонического синдрома, и циклодол, являющийся холинолитиком центрального действия и преимущественно используемый на ранних стадиях заболевания и в комплексной терапии при ригидно-дрож