Модуляторы активатора фактора роста гепатоцитов

Модуляторы активатора фактора роста гепатоцитов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Эта заявка не является предварительной, зарегистрированной на основании раздела 1.53(b)(1) главы 37 Свода Федеральных Нормативных Актов, и притязает на приоритет на основании параграфа 119(е) раздела 35 Свода Законов США на предварительную заявку номер 60/615657, зарегистрированную 4 октября 2004 года, содержание которой полностью включено здесь посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение в целом относится к области молекулярной биологии и регуляции факторов роста. Более конкретно, изобретение касается модуляторов действия активатора фактора роста гепатоцитов и применения указанных модуляторов.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Фактор роста гепатоцитов (HGF) стимулирует пролиферацию клеток, миграцию, ангиогенез, выживание и морфогенез посредством активации рецепторной тирозинкиназы Met [описана в обзорах 8,9]. В дополнение к его важности в нормальной физиологии сигнальный путь HGF/Met вовлечен в инвазивный рост опухолей и метастазирование опухолей [8]. HGF обладает высоким сходством с сериновой протеазой плазминогеном и состоит из α-цепи, включающей в себя N-домен и четыре Крингл-домена, и β-цепи, гомологичной химотрипсиноподобным протеазам. Он секретируется во внеклеточный матрикс в виде неактивного одноцепочечного предшественника (pro-HGF) и для активации требует расщепления между Arg494-Val495, образуя биологически активный, связанный дисульфидными мостиками α/β-гетеродимер [10-13]. Этот шаг опосредуют pro-HGF, преобразующие сериновые протеазы, такие как активатор фактора роста гепатоцитов (HGFA) [14]. HGFA ингибируется с помощью экспрессируемых на клеточной поверхности ингибиторов Кунитца, таких как два сплайсинговых варианта ингибитора активатора фактора роста гепатоцитов HAI-1 [16-17] и HAI-1В [15], и с помощью HAI-2 [18]. HAI-2 (известный так же как плацентарный бикунин) [19] также является сильным ингибитором фактора ХIа и калликреина плазмы [20], тогда как HAI-1В имеет низкую ингибиторную активность или вовсе таковой не имеет [15]. Поэтому биологическая доступность пула pro-HGF во внеклеточном матриксе регулируется активностью pro-HGF конвертаз, таких как HGFА и их ингибиторов.

Так как активация pro-HGF требует расщепления конвертазой, такой как HGFА, изменение функции HGFА и/или его взаимодействия с субстратом могло бы оказаться эффективным терапевтическим подходом. В этом отношении существует ясная необходимость идентифицировать клинически значимые факторы, способные к модулированию и/или специфичному взаимодействию с HGFА. Изобретение осуществляет эту необходимость и обеспечивает другие эффекты.

Все ссылки, цитируемые здесь, включающие патентные заявки и публикации, полностью включены посредством ссылки.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение связано со способами, композициями, наборами и изделиями для модулирования функции активатора фактора роста гепатоцитов (HGFА), таким образом модулируя физиологические эффекты действия HGFА. Модулирование функции HGFА может быть осуществлено посредством применения антител, как описано здесь.

В изобретении предоставлены молекулы-модуляторы, пригодные к применению для модулирования функции HGFА. В одном варианте осуществления изобретения действие HGFА изменяют путем ингибирования активности HGFА (например, протеолитической активности). В общем, молекулы-модуляторы включают в себя антитело, как описано здесь. Молекулы-модуляторы способны к осуществлению модулирования или прямым образом (например, посредством связывания с HGFА и препятствования протеолитической активности HGFА), или опосредованно (например, посредством нацеливания/направления действующего агента по отношению к HGFА в ткань или клетку, где действующий агент способен препятствовать протеолитической активности HGFА). В одном варианте осуществления изобретения предоставлена молекула-антагонист, содержащая антитело, которое связывается с HGFА. В одном варианте осуществления изобретения связывание антагониста с HGFА препятствует протеолитической активности HGFА. В одном осуществлении изобретения связывание антагониста с HGFА препятствует активации HGF с помощью HGFА. В одном варианте осуществления изобретения антитело связывается с активным участком HGFА. В одном варианте осуществления изобретения антитело связывается с HGFА в месте, отличном от активного участка HGFA (например, на внешнем участке). В одном варианте осуществления изобретения связывание антитела с HGFА на участке, отличном от активного участка HGFА, ингибирует взаимодействие HGFА с молекулой его субстрата. В одном варианте осуществления изобретения связывание антитела и HGFА на участке, отличном от активного участка HGFА, ингибирует протеолитическую активность HGFА.

В одном аспекте изобретение связано с антагонистами, которые разрушают сигнальный путь HGF/с-met. Например, изобретение связано с молекулой, которая ингибирует расщепление proHGF с помощью HGFА (например, расщепление по положению R494-V495). Молекула может проявлять ингибиторное действие любым количеством путей, включая, без ограничения, связывание с HGFА на активном участке и/или участке, отличном от активного участка (например, внешнем участке), таком, что расщепление proHGF с помощью HGFА ингибируется. Молекула может связывать HGFА в составе комплекса или нет. Молекула может проявлять ингибиторное действие. также препятствуя одной или нескольким стадиям процесса активации HGF. Например, в одном варианте осуществления изобретения молекула-антагонист согласно изобретению связывает комплекс HGFА-proHGF, так, что ингибируется расщепление proHGF. В одном варианте осуществления изобретения связывание молекулы с proHGF или HGFА (отдельно или в составе комплекса) ингибирует высвобождение HGF после расщепления под действием HGFА. В одном варианте осуществления изобретения молекула-антагонист согласно изобретению не ингибирует связывание HGF с с-met. Например, в одном варианте осуществления изобретения молекула-антагонист согласно изобретению не является антителом или его фрагментом, имея похожую ингибиторную и/или связывающую способность, как антитело, произведенное гибридомной линией клеток, помещенной под номером доступа Американской коллекции клеточных культур ATCC HB-11894 (гибридома 1А3.3.13) или HB-11895 (гибридома 5D5.11.6). В одном варианте осуществления изобретения молекула-антагонист согласно изобретению ингибирует биологические функции, связанные с активацией HGF/с-met.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим участок CDR-H1 (CDR-участок, определяющий комплементарность), содержащий последовательность с идентификационным номером последовательности SEQ ID NO: 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 или 42. В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим участок CDR-H2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40 или 43. В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим участок CDR-H3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41 или 44. В одном варианте осуществления изобретение связано с антителом, содержащим участок CDR-H1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 или 42, и участок CDR-H2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40 или 43. В одном варианте осуществления изобретение связано с антителом, содержащим участок CDR-H1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 или 42, и участок CDR-H3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41 или 44. В одном варианте осуществления изобретение связано с антителом, содержащим участок CDR-H2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40 или 43, и участок CDR-H3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41 или 44. В одном варианте осуществления изобретение связано с антителом, содержащим участок CDR-H1, содержащий последовательность SEQ ID NO: 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 или 42, участок CDR-H2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40 или 43, и участок CDR-H3, содержащий последовательность SEQ ID NO: 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41 или 44.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности из следующих:

(i) последовательность CDR-H1, содержащую последовательность SEQ ID NO: 3;

(ii) последовательность CDR-H2, содержащую последовательность SEQ ID NO: 4;

(iii) последовательность CDR-H3, содержащую последовательность SEQ ID NO: 5.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три из следующих последовательностей:

(i) последовательность CDR-H1, содержащую последовательность SEQ ID NO: 6;

(ii) последовательность CDR-H2, содержащую последовательность SEQ ID NO: 7;

(iii) последовательность CDR-H3, содержащую последовательность SEQ ID NO: 8.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три из следующих последовательностей:

(i) последовательность CDR-H1, содержащую последовательность SEQ ID NO: 9;

(ii) последовательность CDR-H2, содержащую последовательность SEQ ID NO: 10;

(iii) последовательность CDR-H3, содержащую последовательность SEQ ID NO: 11.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три из следующих последовательностей:

(i) последовательность CDR-H1, содержащую последовательность SEQ ID NO: 12;

(ii) последовательность CDR-H2, содержащую последовательность SEQ ID NO: 13;

(iii) последовательность CDR-H3, содержащую последовательность SEQ ID NO: 14.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три из следующих последовательностей:

(i) последовательность CDR-H1, содержащую последовательность SEQ ID NO: 15;

(ii) последовательность CDR-H2, содержащую последовательность SEQ ID NO: 16;

(iii) последовательность CDR-H3, содержащую последовательность SEQ ID NO: 17.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три из следующих последовательностей:

(i) последовательность CDR-H1, содержащую последовательность SEQ ID NO: 18;

(ii) последовательность CDR-H2, содержащую последовательность SEQ ID NO: 19;

(iii) последовательность CDR-H3, содержащую последовательность SEQ ID NO: 20.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три из следующих последовательностей:

(i) последовательность CDR-H1, содержащую последовательность SEQ ID NO: 21;

(ii) последовательность CDR-H2, содержащую последовательность SEQ ID NO: 22;

(iii) последовательность CDR-H3, содержащую последовательность SEQ ID NO: 23.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три из следующих последовательностей:

(i) последовательность CDR-H1, содержащую последовательность SEQ ID NO: 24;

(ii) последовательность CDR-H2, содержащую последовательность SEQ ID NO: 25;

(iii) последовательность CDR-H3, содержащую последовательность SEQ ID NO: 26.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три из следующих последовательностей:

(i) последовательность CDR-H1, содержащую последовательность SEQ ID NO: 27;

(ii) последовательность CDR-H2, содержащую последовательность SEQ ID NO: 28;

(iii) последовательность CDR-H3, содержащую последовательность SEQ ID NO: 29.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три из следующих последовательностей:

(i) последовательность CDR-H1, содержащую последовательность SEQ ID NO: 30;

(ii) последовательность CDR-H2, содержащую последовательность SEQ ID NO: 31;

(iii) последовательность CDR-H3, содержащую последовательность SEQ ID NO: 32.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три из следующих последовательностей:

(i) последовательность CDR-H1, содержащую последовательность SEQ ID NO: 33;

(ii) последовательность CDR-H2, содержащую последовательность SEQ ID NO: 34;

(iii) последовательность CDR-H3, содержащую последовательность SEQ ID NO: 35.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три из следующих последовательностей:

(i) последовательность CDR-H1, содержащую последовательность SEQ ID NO: 36;

(ii) последовательность CDR-H2, содержащую последовательность SEQ ID NO: 37;

(iii) последовательность CDR-H3, содержащую последовательность SEQ ID NO: 38.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три из следующих последовательностей:

(i) последовательность CDR-H1, содержащую последовательность SEQ ID NO: 39;

(ii) последовательность CDR-H2, содержащую последовательность SEQ ID NO: 40;

(iii) последовательность CDR-H3, содержащую последовательность SEQ ID NO: 41.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, содержащим по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три из следующих последовательностей:

(i) последовательность CDR-H1, содержащую последовательность SEQ ID NO: 42;

(ii) последовательность CDR-H2, содержащую последовательность SEQ ID NO: 43;

(iii) последовательность CDR-H3, содержащую последовательность SEQ ID NO: 44.

Аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 3-44 пронумерованы в соответствии с отдельными CDR (то есть Н1, Н2 или Н3), как указано на фиг.1, нумерацией, согласующейся с системой нумерации Kabat, как описано ниже.

В одном варианте осуществления изобретения антитело согласно изобретению содержит CDR-последовательность(и) вариабельного домена тяжелой цепи, содержащую по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности из Н1 (SEQ ID NO: 71-84), Н2 (SEQ ID NO: 85-98) и/или Н3 (SEQ ID NO: 99-112) последовательностей для каждого клона, показанного на фиг. 1B, 1C и 1D.

В одном аспекте изобретение связано с антителами, содержащими CDR-последовательности тяжелой цепи, как показано на фиг. 1А,В,С и D. В некоторых вариантах осуществления изобретения эти антитела дополнительно содержат вариабельный домен легкой цепи гуманизированного антитела 4D5 (huMAb4D5-8) (торговое название HERCEPTIN®, Genentech, Inc., South San Francisco, CA, USA) (также упоминаемого в патенте США № 6407213 и статье Lee et al., J.Mol.Biol. (2004), 340(5):1073-93), как показано в SEQ ID NO:45, ниже.

В одном варианте осуществления изобретения последовательность вариабельного домена легкой цепи антитела huMAb4D5-8 изменена в одном или нескольких положениях 30, 66 и 91 (Asn, Arg и His соответственно, как указано полужирным шрифтом/курсивом выше). В одном варианте осуществления изобретения измененная последовательность huMAb4D5-8 содержит Ser в положении 30, Gly в положении 66 и/или Ser в положении 91. Соответственно в одном варианте осуществления изобретения антитело согласно изобретению содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательность, приведенную в SEQ ID NO:54, ниже.

(CDR-остатки подчеркнуты)

Замещенные остатки относительно huMAb4D5-8 указаны выше полужирным шрифтом/курсивом.

Антитела согласно изобретению могут дополнительно содержать любые подходящие последовательности каркасного участка и/или вариабельного домена легкой цепи при условии, что сохраняется способность связывать HGFА. Например, в некоторых вариантах осуществления изобретения антитела дополнительно содержат консенсусную последовательность каркасного участка подгруппы III тяжелой цепи человека. В одном варианте этих антител консенсусная последовательность каркасного участка содержит замены в положениях 71, 73 и/или 78. В некоторых вариантах этих антител в положении 71 находится А, в 73 находится Т и/или 78 является А. В одном варианте осуществления изобретения эти антитела содержат последовательности каркасного участка вариабельного домена тяжелой цепи гуманизированного антитела 4D5 (huMAb4D5-8) (HERCEPTIN®, Genentech, Inc., South San Francisco, CA, USA) (также упоминаемого в патенте США № 6407213 и статье Lee et al., J.Mol.Biol. (2004), 340(5):1073-93). В одном варианте осуществления изобретения гуманизированное 4D5-8-антитело является таким, как описано в патенте США № 6407213. В одном варианте осуществления изобретения эти антитела дополнительно содержат последовательность каркасного участка легкой цепи κI человека. В одном варианте осуществления изобретения эти антитела содержат последовательности вариабельного домена легкой цепи гуманизированного антитела 4D5 (huMAb4D5-8) (SEQ ID NO:45) (HERCEPTIN®, Genentech, Inc., South San Francisco, CA, USA) (также упоминаемого в патенте США № 6407213 и статье Lee et al., J.Mol.Biol. (2004), 340(5):1073-93), или измененный вариант его, как показано в SEQ ID NO: 54.

В одном варианте осуществления изобретения антитело согласно изобретению содержит вариабельный домен тяжелой цепи, где последовательность каркасного участка (FR) содержит последовательности SEQ ID NO: 46, 47, 48 и 49 (FR1, 2, 3 и 4, соответственно) и CDR Н1, Н2 и Н3 последовательности, как показано на фиг.1А, B, C и/или D. В одном варианте осуществления изобретения антитело согласно изобретению содержит вариабельный домен легкой цепи, где последовательность каркасного участка содержит последовательность SEQ ID NO:50, 51, 52 и 53 (FR1, 2, 3 и 4, соответственно) и CDR L1, L2 и L3 последовательности, как показано в SEQ ID NO:54.

В одном варианте осуществления изобретения антитело согласно изобретению содержит вариабельный домен тяжелой цепи, где последовательность каркасного участка содержит последовательность SEQ ID NO: 59, 60, 61 и 62 (FR1, 2, 3 и 4 соответственно) (Фиг. 1E) и CDR Н1, Н2 и Н3, как показано на фиг.1. В одном варианте осуществления изобретения антитело согласно изобретению содержит вариабельный домен легкой цепи, где последовательность каркасного участка содержит последовательность SEQ ID NO: 55, 56, 57 и 58 (FR1, 2, 3 и 4 соответственно) (Фиг. 1E) и CDR L1, L2 и L3 последовательностей, как показано в SEQ ID NO:54.

В одном варианте осуществления изобретения антитело согласно изобретению содержит вариабельный домен тяжелой цепи, где последовательность каркасного участка содержит последовательность SEQ ID NO: 67, 68, 69 и 70 (FR1, 2, 3 и 4 соответственно) (Фиг. 1F) и CDR Н1, Н2 и Н3-последовательности, как показано на Фиг. 1А, B, C и/или D. В одном варианте осуществления изобретения антитело согласно изобретению содержит вариабельный домен легкой цепи, где последовательность каркасного участка содержит последовательность SEQ ID NO: 63, 64, 65 и 66 (FR1, 2, 3 и 4 соответственно) (Фиг. 1F) и CDR L1, L2 и L3 последовательности, как показано в SEQ ID NO: 54.

В одном аспекте изобретение связано с антителом, которое конкурирует с любым из вышеупомянутых антител за связывание с HGFА. В одном аспекте изобретение связано с антителом, которое связывает такой же эпитоп на HGFА, как любое из вышеупомянутых антител. В одном варианте осуществления изобретения антитело согласно изобретению является аффинно созревшим, гуманизированным, химерным или человеческим. В одном варианте осуществления изобретения антитело согласно изобретению является фрагментом антитела (как описано здесь) или в основном полноразмерным антителом. В одном варианте осуществления изобретения антитело согласно изобретению содержит Fc-фрагмент дикого типа или его варианты. В одном варианте осуществления изобретения антитело согласно изобретению является IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgМ, IgЕ или IgD.

В одном аспекте молекула-антагонист согласно изобретению связана с токсином, таким как цитотоксичный агент. Эти молекулы/вещества могут быть составлены или использованы в комбинации с аддитивными/усиливающими агентами, такими как радиация и/или химиотерапевтический агент.

Изобретение также связано со способами и композициями, применимыми для изменения болезненных состояний, связанных с нарушенной регуляцией сигнальной оси HGF/с-met. Таким образом, в одном аспекте изобретение связано со способом модулирования активации с-met у субъекта указанным способом, предусматривающим введение субъекту молекулы-модулятора согласно изобретению, которая ингибирует расщепление proHGF под действием HGFА, на основании чего модулируется активация с-met. В одном аспекте изобретение связано со способом лечения патологического состояния, связанного с активацией с-met у субъекта, указанным способом, предусматривающим введение субъекту молекулы-модулятора согласно изобретению, которая ингибирует расщепление proHGF под действием HGFА, на основании чего ингибируется активация с-met. В одном варианте осуществления изобретения молекула-модулятор согласно изобретению является антителом, которое связывается с HGFА.

Сигнальный путь HGF/с-met вовлечен во множество биологических и физиологический функций, например, стимуляцию клеточного роста (например, клеточную пролиферация, выживаемость клеток, миграцию клеток, клеточный морфогенез) и ангиогенез. Таким образом, в другом аспекте изобретение связано со способом ингибирования с-met-активированного клеточного роста (например, пролиферации и/или выживаемости) указанным способом, включающим в себя контактирование клетки или ткани с антагонистом согласно изобретению, посредством чего ингибируется пролиферация клеток, связанная с активацией с-met. В еще одном аспекте изобретение связано со способом ингибирования ангиогенеза, включающим в себя введение в клетку, ткань и/или организм субъекта с состоянием, связанным с аномальным ангиогенезом, антагониста согласно изобретению, посредством чего ингибируется ангиогенез.

В одном аспекте изобретение связано с применением молекулы-модулятора согласно изобретению при получении лекарственного препарата для терапевтического и/или профилактического лечения болезни, такой как рак, опухоль, нарушение клеточной пролиферации, иммунное (такое как аутоиммунное) нарушение и/или нарушение, связанное с ангиогенезом.

В одном аспекте изобретение связано с применением нуклеиновой кислоты согласно изобретению при получении лекарственного препарата для терапевтического и/или профилактического лечения болезни, такой как рак, опухоль, нарушение клеточной пролиферации, иммунное (такое как аутоиммунное) нарушение и/или нарушение, связанное с ангиогенезом.

В одном аспекте изобретение связано с применением экспрессирующего вектора согласно изобретению при получении лекарственного препарата для терапевтического и/или профилактического лечения болезни, такой как рак, опухоль, нарушение клеточной пролиферации, иммунное (такое как аутоиммунное) нарушение и/или нарушение, связанное с ангиогенезом.

В одном аспекте изобретение связано с применением клетки-хозяина согласно изобретению при получении лекарственного препарата для терапевтического и/или профилактического лечения болезни, такой как рак, опухоль, нарушение клеточной пролиферации, иммунное (такое как аутоиммунное) нарушение и/или нарушение, связанное с ангиогенезом.

В одном аспекте изобретение связано с применением изделия согласно изобретению при получении лекарственного препарата для терапевтического и/или профилактического лечения болезни, такой как рак, опухоль, нарушение клеточной пролиферации, иммунное (такое как аутоиммунное) нарушение и/или нарушение, связанное с ангиогенезом.

В одном аспекте изобретение связано с применением набора согласно изобретению при получении лекарственного препарата для терапевтического и/или профилактического лечения болезни, такой как рак, опухоль, нарушение клеточной пролиферации, иммунное (такое как аутоиммунное) нарушение и/или нарушение, связанное с ангиогенезом.

В одном аспекте изобретение связано со способом ингибирования с-met-активированной клеточной пролиферации указанным способом, включающим в себя контактирование клетки или ткани с эффективным количеством молекулы-модулятора согласно изобретению, посредством чего ингибируется пролиферация клеток, связанная с активацией с-met.

В одном аспекте изобретение связано со способом лечения патологического состояния, связанного с нарушенной регуляцией активации с-met у субъекта указанным способом, включающим в себя введение субъекту эффективного количества молекулы-модулятора согласно изобретению, посредством чего указанное состояние излечивается.

В одном аспекте изобретение связано со способом ингибирования роста клетки, которая экспрессирует с-met или фактор роста гепатоцитов, или и то, и другое, включающим в себя приведение указанной клетки в контакт с молекулой-модулятором согласно изобретению, таким образом вызывая ингибирование роста указанной клетки. В одном варианте осуществления изобретения клетка взаимодействует с HGF, экспрессируемым другой клеткой (например, посредством паракринного механизма).

В одном аспекте изобретение связано со способом терапевтического лечения представителя семейства млекопитающих, имеющего раковую опухоль, содержащую клетку, которая экспрессирует с-met или фактор роста гепатоцитов, или же и то, и другое, причем способ включает в себя введение указанному млекопитающему эффективного количества молекулы-модулятора согласно изобретению, таким образом эффективно излечивая указанное млекопитающее. В одном варианте осуществления изобретения клетка взаимодействует с HGF, экспрессируемым другой клеткой (например, посредством паракринного механизма).

В одном аспекте изобретение связано со способом лечения или предотвращения нарушения клеточной пролиферации, связанного с увеличенной экспрессией или активностью HGFА, включающим в себя введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества молекулы-модулятора согласно изобретению, таким образом эффективно излечивая или предотвращая указанное нарушение клеточной пролиферации. В одном варианте осуществления изобретения указанным нарушением пролиферации является рак.

В одном аспекте изобретение связано со способом лечения или предотвращения нарушения клеточной пролиферации, связанной с увеличенной экспрессией или активностью с-met или фактора роста гепатоцитов, или их обоих, включающим в себя введение субъекту, нуждающемся в таком лечении, эффективного количества молекулы-модулятора согласно изобретению, таким образом эффективно излечивая или предотвращая указанное нарушение клеточной пролиферации. В одном из вариантов осуществления изобретения указанным нарушением пролиферации является рак.

В одном аспекте изобретение связано со способом ингибирования роста клетки, где рост указанной клетки, по меньшей мере частично, зависит от потенцирующего действия HGFА на рост, включающим в себя контактирование указанной клетки с эффективным количеством молекулы-модулятора согласно изобретению, таким образом ингибируя рост указанной клетки. В одном варианте осуществления изобретения клетка взаимодействует с HGF, экспрессируемым другой клеткой (например, посредством паракринного механизма).

В одном аспекте изобретение связано со способом ингибирования роста клетки, где рост указанной клетки, по меньшей мере частично, зависит от потенцирующего действия с-met или фактора роста гепатоцитов, или их обоих на рост, включающим в себя контактирование указанной клетки с эффективным количеством молекулы-модулятора согласно изобретению, таким образом ингибируя рост указанной клетки. В одном варианте осуществления изобретения клетка взаимодействует с HGF, экспрессируемым другой клеткой (например, посредством паракринного механизма).

В одном аспекте изобретение связано со способом терапевтического лечения опухоли у представителя семейства млекопитающих, где рост указанной опухоли, по меньшей мере частично, зависит от потенцирующего действия HGFА на рост, включающим в себя контактирование указанной клетки с эффективным количеством молекулы-модулятора согласно изобретению, таким образом эффективно излечивая указанную опухоль. В одном варианте осуществления изобретения клетка взаимодействует с HGF, экспрессируемым другой клеткой (например, посредством паракринного механизма).

В одном аспекте изобретение связано со способом терапевтического лечения опухоли у представителя семейства млекопитающих, где рост указанной опухоли, по меньшей мере частично, зависит от потенцирующего действия с-met или фактора роста гепатоцитов, или их обоих на рост, включающим в себя контактирование указанной клетки с эффективным количеством молекулы-модулятора согласно изобретению, таким образом эффективно излечивая указанную опухоль. В одном варианте осуществления изобретения клетка взаимодействует с HGF, экспрессируемым другой клеткой (например, посредством паракринного механизма).

Способы согласно изобретению могут быть использованы для воздействия на любое патологическое состояние, например, клеток и/или тканей, ассоциированное с нарушенной регуляцией сигнального пути HGF/с-met, например, через увеличенную активность HGF, связанную с активацией HGF под действием HGFА. В одном варианте осуществления изобретения клетка, которая является мишенью в способе согласно изобретению, представляет собой раковую клетку. Например, раковая клетка может быть выбрана из группы, состоящей из клетки рака молочной железы, клетки рака ободочной и прямой кишки, клетки рака легкого, клетки папиллярной карциномы (например, щитовидной железы), клетки рака прямой кишки, клетки рака поджелудочной железы, клетки рака яичника, клетки рака шейки матки, клетки рака центральной нервной системы, клетки остеогенной саркомы, клетки почечной саркомы, клетки гепатоцитарной карциномы, клетки рака мочевого пузыря, клетки рака предстательной железы, клетки карциномы желудка, клетки плоскоклеточной карциномы головы и шеи, клетки меланомы и лейкозной клетки. В одном варианте осуществления изобретения клетка, которая является мишенью в способе согласно изобретению, представляет собой гиперпролиферативную и/или гиперплазивную клетку. В одном варианте осуществления изобретения клетка, которая является мишенью в способе согласно изобретению, представляет собой диспластическую клетку. В еще одном варианте осуществления изобретения клетка, которая является мишенью в способе согласно изобретению, представляет собой метастатическую клетку.

Способы согласно изобретению могут, кроме того, содержать дополнительные лечебные стадии. Например, в одном варианте осуществления изобретения способ дополнительно содержит стадию, где клетка-мишень и/или ткань-мишень (например, раковая клетка) подвергается радиационному воздействию или действию химиотерапевтического агента.

Как описано здесь, активация HGF/с-met является важным биологическим процессом, нарушение регуляции которого приводит к многочисленным патологическим состояниям. Соответственно в одном варианте способов согласно изобретению клетка, которая является мишенью (например, раковая клетка), представляет собой клетку, в которой активация HGF/с-met усилена по сравнению с нормальной клеткой из той же ткани. В одном варианте осуществления изобретения способ согласно изобретению вызывает смерть клеток-мишеней. Например, контакт с молекулой-модулятором согласно изобретению может приводить к неспособности клетки передавать сигнал через сигнальный путь с-met, что приводит к смерти клетки.

Нарушенная регуляция активации с-met (и, следовательно, передачи сигнала) может происходить в результате ряда изменений в клетке, включая, например, сверхэкспрессию HGF (лиганд, узнаваемый с-met), и/или HGFА, и/или увеличенную активацию HGF под действием HGFА. Соответственно в некоторых вариантах осуществления изобретения способ согласно изобретению включает в себя нацеливание на ткань, в которой один или несколько факторов из HGFА, с-met и фактора роста гепатоцитов сильнее экспрессируются и/или присутствуют в большем количестве (например, рак) по сравнению с нормальной тканью того же происхождения. Клетки, экспрессирующие HGF или с-met, могут регулироваться HGFА из ряда источников, то есть по автокринному или паракринному пути. Например, в одном варианте способов согласно изобретению клетка-мишень контактирует/связана с фактором роста гепатоцитов, активированным под действием HGFА, экспрессированного другой клеткой (например, посредством паракринного механизма). Указанная другая клетка может принадлежать к тому же или другому типу ткани. В одном варианте осуществления изобретения клетка-мишень контактирует/связана с HGF, активированным под действием HGFА, экспрессированного самой клеткой-мишенью (например, через аутокринный механизм/петлю).

В одном из аспектов изобретение связано с композициями, содержащими одну или несколько молекул-модуляторов согласно изобретению и носитель. В одном варианте осуществления изобретения носитель является фармацевтически приемлемым.

В одном из аспектов изобретение связано с нуклеиновыми кислотами, кодирующими молекулу-модулятор согласно изобретению. В одном варианте осуществления изобретения нуклеиновая кислота согласно изобретению кодирует молекулу-модулятор, которая является или содержит антитело или его фрагмент.

В одном из аспектов изобретение связано с векторами, содержащими нуклеиновую кислоту согласно изобретению.

В одном из аспектов изобретение связано с клетками-хозяевами, содержащими нуклеиновую кислоту или вектор согласно изобретению. Вектор может быть любого типа, например, рекомбинантный вектор, такой как экспрессирующий вектор. Любые из множества клеток-хозяев могут быть использованы. В одном варианте осуществления изобретения клетка-хозяин является прокариотической клеткой, например, Е.coli. В одном варианте осуществления изобретения клетка-хозяин является эукариотической клеткой, например, клеткой млекопитающего, такой как клетка яичников китайского хомячка (CHO).

В одном из аспектов изобретение связано со способами изготовления молекулы-модулятора согласно изобретению. Например, изобретение связано со способом изготовления молекулы-модулятора, которая является или содержит антитело (или его фрагмент), включающим в себя экспрессию в подходящей клетке-хозяине рекомбинантного вектора согласно изобретению, кодирующего указанное антитело (или его фрагмент), и получение указанного антитела.

В одном из аспектов изобретение связано с изделием, содержащим упаковку; и композицией, содержащейся в упаковке, где композиция содержит одну или несколько молекул-модуляторов согласно изобретению. В одном варианте осуществления изобретения композиция содержит нуклеиновую кислоту согласно изобретению. В одном варианте осуществления изобретения композиция, содержащая молекулу-модулятор, дополнительно содержит носитель, который в некоторых вариантах осуществления изобретения является фармацевтически приемлемым. В одном варианте осуществления изобретения изделие согласно изобретению дополнительно содержит инструкции для введения композиции (например, для молекулы-модулятора) субъекту.

В одном аспекте изобретение содержит набор, содержащий первую упаковку, содержащую композицию, содержащую одну или несколько молекул-модуляторов согласно изобретению; и вторую упаковку, содержащую буферный раствор. В одном варианте осуществления изобретения буферный раствор является фармацевтически приемлемым. В одном варианте осуществления изобретения композиция, содержащая молекулу-модулятор, дополнительно содержит носитель, который в некоторых вариантах осуществления изобретения является фармацевтически приемлемым. В одном варианте осуществления изобретения набор дополнительно содержит инструкции по введению композиции (например, молекулы-модулятора) субъекту.

В одном из аспектов изобретение связано со способом диагностики болезни, включающим в себя определение уровня HGFA в испытуемом образце клеток ткани посредством взаимодействия образца с антителом согласно изобретению, и в результате HGFA, связанный с антителом, указывает на присутствие и/или количество HGFA в образце. В другом аспекте изобретение связано со способом определения того, находится ли индивид под угрозой болезни, включающим в себя определение уровня HGFA в испытуемом образце клеток ткани посредством взаимодействия образца с антителом согласно изобретению, и, таким образом, определение количества HGFA, присутствующего в образце, где более высокий уровень HGFA в испытуемом образце по сравнению с контрольным образцом, содержащим нормальную ткань из клеток того же происхождения, что и испытуемый образец, является симптомом того, что инди