Новые циклические пептидные соединения

Новые циклические пептидные соединения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники

Настоящее изобретение касается нового циклического пептидного соединения или его соли, обладающего ингибирующей активностью в отношении репликации РНК репликона вируса гепатита С (далее в данном описании называемый как HCV). В частном случае настоящее изобретение касается нового циклического пептидного соединения или его соли, способа их получения, фармацевтической композиции, содержащей новое пептидное соединение или его соль, и способа предотвращения и/или терапевтического лечения гепатита С человека или животных.

Уровень техники

Примерное число носителей HCV во всем мире составляет 170 миллионов (приблизительно 3%) и приблизительно 1,5 миллиона в Японии. Даже при комбинированной терапии с применением интерферона (далее в данном описании называемый как INF) и рибавирина (Virazole), доступного в качестве первого назначения при лечении, ее эффективность составляет 40% для всех типов HCV. Более того, ее эффективность составляет только 15-20% для IFN-устойчивого вируса (генотип 1b), в частности, обнаруженного в большом количестве в Японии. С другой стороны, комбинированная терапия часто имеет побочные эффекты. Таким образом, трудно полностью избавиться от вируса, используя доступные в настоящее время способы лечения. В случае когда хронический гепатит не может быть вылечен полностью, он будет легко превращаться в циррозный гепатит (30%) или злокачественную гепатому (25%). В Европе и Соединенных Штатах гепатит С был основным показателем для трансплантации печени. Однако повторное развитие HCV часто встречается даже в трансплантированной печени. Вследствие этих причин общество остро нуждается в новых препаратах, которые улучшают как эффективность, так и безопасность, обладающих более сильным противовирусным действием и способностью к ингибированию гепатита С.

HCV является вирусом, имеющим РНК «плюс-цепь», в качестве генома, и классифицируется в семейства Flaviviridae, в соответствии с анализом основной последовательности генома. В соответствии с четвертым изданием Fields Virology fourth edition, D.Knipe et al ed., Philadelphia, Lippincott Williams & Wilkins 2001, 1127-1161, несмотря на то, что существование HCV прогнозировали в 1970-х, открытие HCV было сложным. Многие годы HCV называли вирусом не-А не-В гепатита. В 1989 году, согласно Choo Q-L et al., Science 244, 359-362 (1989), часть гена данного вируса клонировали из сыворотки инфицированного лабораторного животного и его кДНК последовательность идентифицировали и подтвердили, на основании этого вирус назвали «HCV».

Раскрытие изобретения

Циклоспорин А используется в качестве иммуносупрессора при трансплантации органов. M.Thali et al., Nature 372, 363-365 (1994), описали, что циклоспорин А обладал анти-HIV активностью за счет ингибирования взаимодействия между циклоспорином А и частицей вируса, образующей белок вируса иммунодефицита человека тип 1 (HIV-1) (ВИЧ-1). R.M. Wenger et al. описали в WO 00/01715, что их новый циклоспорин обладает анти-HIV активностью. Более того, K. Inoue et al., на 6-ом международном симпозиуме по гепатиту С и родственным вирусам, 3-6 июня (2000) (6^th International Symposium on Hepatitis C и Related Virus, 3-6 June (2000) Bethesda, MD, USA), сделали сообщение, что циклоспорин А обладает анти-HCV активностью, однако до настоящего времени другими группами ученых не была представлена информация, подтверждающая это открытие. HIJIKATA et al. описали в WO 2005/021028, что их модифицированные циклоспорины обладают анти-HCV активностью.

M. Berenguer et al., J. Hepatol 32, 673-684 (2000), описали, что клиническое применение циклоспорина А, служащего в качестве иммуносупрессора, вызывало размножение HCV у пациентов, перенесших трансплантацию.

Следовательно, в силу действия вышеуказанных причин, существует потребность в противогепатитных агентах (против гепатита С), улучшенных в плане активности, переноса в крови, селективности и побочных эффектов, например, по сравнению с циклоспорином А.

Более того, чтобы преобразовать скелет соединений циклоспорина, необходимо соблюдение некоторых жестких условий, таких как высокая температура и высокое давление. С другой стороны, преобразование исходного соединения (FR901459 соединение) в соединения по изобретению с помощью реакции перегруппировки в настоящем изобретении требуется соблюдение мягких кислотных условий вследствие наличия гидроксильной группы в положении 2 исходного соединения.

Целевым циклическим пептидным соединением настоящего изобретения является новое соединение, которое может быть представлено следующей общей формулой (I):

где Х означает или ,

где R¹ означает водород или низший алкил;

R² означает водород, арил или низший алкил, необязательно замещенный подходящим заместителем, выбранным из группы, состоящей из: гидрокси, цикло(низшего)алкила, низшего алкокси, арила, арил(низший)алкокси, необязательно замещенного карбамоилокси и необязательно замещенного амино;

и означает N-содержащую гетероциклическую группу;

Y означает или ,

где R³ означает цикло(низший)алкил, арил, необязательно замещенную гетероциклическую группу или низший алкил, необязательно замещенный подходящим заместителем, выбранным из группы, состоящей из: гидрокси, цикло(низшего)алкила, низшего алкокси, арила, арил(низшего)алкокси, низший алкокси(низшего)алкокси, необязательно замещенного амино и -OC(O)NR⁶R⁷ (где R⁶ и R⁷ означают, каждый независимо, водород или низший алкил или, альтернативно, R⁶ и R⁷, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют N-содержащую гетероциклическую группу, необязательно замещенную низшим алкилом); и

R⁴ и R⁵ означают, каждый независимо, водород или низший алкил; и

------ обозначает одинарную связь или двойную связь;

или его соль,

при условии, что, когда R² означает водород, R³ означает цикло(низший)алкил, арил, необязательно замещенную гетероциклическую группу, низший алкоксиметил, арил(низший)алкил, трет-бутил, втор-бутил, цикло(низший)алкил(низший)алкил или этил, замещенный подходящим заместителем, выбранным из группы, состоящей из гидрокси, низшего алкокси, арил(низшего)алкокси, низший алкокси(низшего)алкокси, необязательно замещенного амино и -OC(O)NR⁶R⁷ (где R⁶ и R⁷ являются такими, как определено выше).

Предпочтительные варианты осуществления целевого соединения (I) изложены ниже.

1) Соединение общей формулы (I), где

Х означает ,

где R¹ означает водород или низший алкил; и

R² означает арил или низший алкил, необязательно замещенный подходящим заместителем, выбранным из группы, состоящей из: гидрокси, цикло(низшего)алкила, низшего алкокси, арила, арил(низшего)алкокси, ди(низшего)алкилкарбамоилокси и амино, необязательно замещенный одним или двумя подходящими заместителями, выбранными из группы, состоящей из: низшего алкила, бензилоксикарбонила и трет-бутоксикарбонила; и

Y означает или ,

где R³ означает цикло(низший)алкил, арил или низший алкил, необязательно замещенный подходящим заместителем, выбранным из группы, состоящей из: гидрокси, низшего алкокси и арил(низшего)алкокси,

R⁴ означает водород; и R⁵ означает низший алкил;

или его соль.

2) Соединение по 1), где R¹ означает низший алкил; и

R² означает низший алкил,

Y означает ,

где R³ означает арил или низший алкил, необязательно замещенный гидроксигруппой или низшей алкоксигруппой,

R⁴ означает водород; и

R⁵ означает низший алкил; и

-------- фрагмент обозначает двойную связь;

или его соль.

3) Соединение по 2), где R³ означает низший алкил, необязательно замещенный гидроксигруппой или низшей алкоксигруппой;

или его соль.

4) Соединение общей формулы (I), где

Х означает ,

где R¹ означает низший алкил; и

R² означает водород, и

Y означает или ,

где R³ означает цикло(низший)алкил, арил, гетероциклическую группу, необязательно замещенную низшим алкоксикарбонилом, (низший)алкокси(низшим)алкилом, арил(низшим)алкилом, трет-бутилом, втор-бутилом, цикло(низший)алкил(низшим)алкилом или этилом, замещенным подходящим заместителем, выбранным из группы, состоящей из: гидрокси, низшего алкокси, арил(низшего)алкокси, низший алкокси(низшего)алкокси, -OC(O)NR⁶R⁷ (где R⁶ и R⁷ означают, каждый независимо, водород или низший алкил или, альтернативно, R⁶ и R⁷, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют N-содержащую гетероциклическую группу, необязательно замещенную низшим алкилом) и аминогруппы, которая необязательно замещена одним или двумя подходящими заместителями, выбранными из группы, состоящей из: низшего алкила и бензилоксикарбонила; и

R⁴ и R⁵ означают, каждый независимо, водород или низший алкил;

или его соль.

5) Соединение по 4), где

Y означает ,

где R³ означает цикло(низший)алкил, арил, гетероциклическую группу, необязательно замещенную низшим алкоксикарбонилом, трет-бутилом, втор-бутилом или этилом, замещенным подходящим заместителем, выбранным из группы, состоящей из: гидрокси, низшего алкокси, арил(низшего)алкокси, низший алкокси(низшего)алкокси и -OC(O)NR⁶R⁷ (где R⁶ и R⁷ означают, каждый независимо, водород или низший алкил или, альтернативно, R⁶ и R⁷, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, представляют N-содержащую гетероциклическую группу, необязательно замещенную низшим алкилом);

R⁴ означает водород и

R⁵ означает низший алкил; и

------ фрагмент обозначает двойную связь;

или его соль.

6) Соединение общей формулы (I), где

Х означает

и Y означает ,

где R³ означает низший алкил; и

R⁴ и R⁵ означают, каждый независимо, водород или низший алкил,

или его соль.

7) Соединение по 6), где

Х означает или ;

R⁴ означает водород;

R⁵ означает низший алкил; и

------ фрагмент обозначает двойную связь;

или его соль.

Соединение (I) или его соль в настоящем изобретении можно получить способами, проиллюстрированными следующими схемами реакции.

Способ 1

Способ 2

Способ 3

Способ 4

Исходные соединения или их соль в настоящем изобретении можно получить, например, способами, проиллюстрированными на следующих схемах реакции.

Способ А

Способ В

где X и Y являются такими, как определено выше,

L означает уходящую группу,

Р означает аминозащитную группу,

R' означает метоксигруппу или ,

R'' означает H или и

n в «n раз» означает 2 или 3.

Способы получения целевых соединений и исходных соединений описаны ниже в данном описании.

Способ 1

Целевое соединение (Ia) или его соль можно получить из соединения (IIa) или его соли с помощью следующих способов.

а) Введение защищенной аминокислоты

Данная реакция представляет собой амидирование соединения (IIa) с соединением (V).

Обычно соединение (V) является карбоновой кислотой (L означает ОН) или ее реакционно-способным производным (включая ацилгалогенид (например, карбонилхлорид, карбонилбромид и тому подобное), ангидрид кислоты, активированный сложный эфир (например, виниловый эфир, пропаргиловый эфир, 2,4-динитрофениловый эфир, пентафторфениловый эфир, метансульфонилфениловый эфир, диметилиминометиловый эфир, п-нитрофениловый тиоэфир, активированный эфир с N-гидроксисоединением (таким как N-гидроксисукцинимид, N-гидроксибензотриазол и тому подобное) и тому подобное) или тому подобное).

Когда соединение (V) является свободной карбоновой кислотой, реакцию осуществляют предпочтительно в присутствии конденсирующего агента (включая карбодиимид (например, N,N-диизопропилкарбодиимид, N,N'-дициклогексилкарбодиимид, 1-[3-(диметиламино)пропил]-3-этилкарбодиимид и тому подобное), дифенилфосфиновое азидосоединение, дифенилфосфонийхлорид или тому подобное).

Также данную реакцию в настоящем способе обычно осуществляют в присутствии дополнительного компонента, такого как N-гидроксибензотриазол (HOBt), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (HOAt), бис(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфинийхлорид и тому подобное. Реакция также может быть осуществлена в присутствии органического или неорганического основания, такого как бикарбонат щелочного металла, три(низший)алкиламин, пиридин, N-(низший)алкилморфорин, N,N-ди(низший)алкилбензиламин или тому подобное. Реакцию обычно осуществляют в традиционно использующемся растворителе, таком как вода, ацетон, спирт (например, метанол, этанол, изопропиловый спирт или тому подобное), тетрагидрофуран, диоксан, толуол, метиленхлорид, хлороформ, N,N-диметилформамид или любые другие органические растворители, которые не оказывают на реакцию неблагоприятное действие, или их смесь.

Температура реакции не ограничивается, и реакцию обычно осуществляют как при охлаждении, так и при нагревании.

b) Снятие защиты

Данная реакция представляет собой реакцию элиминирования аминозащитной группы соединения (IIIa) или его соли. Данная реакция также является превращением фрагмента метилового эфира соединения (IIIa) или его соли в карбоновую кислоту.

Указанные две реакции осуществляются одновременно (например, что касается примеров получения 68 или 161, описанных ниже) или в двух отдельных реакциях (например, что касается примеров получения 7 и 171 или 153 и 169, описанных ниже) в соответствии с субстратом реакции или условиями реакции.

c) Циклизация

Данную циклизацию осуществляют путем амидирования соединения (IVa), то есть данная реакция может быть осуществлена по аналогичной методике указанного выше способа 1-а), и, следовательно, в качестве используемых реагентов и условий (например, растворитель, температура реакции и т.д.) можно сослаться на используемые в способе 1-а).

Способ 2

Целевое соединение (Ib) или его соль можно получить из соединения (IIb) с использованием последовательности реакций, состоящей из введения защищенной аминокислоты, снятия защиты и циклизации, как проиллюстрировано выше. Каждую реакцию также можно осуществить по аналогичной методике указанного выше способа 1, и, следовательно, в качестве используемых реагентов и условий (например, растворитель, температура реакции и т.д.) можно сослаться на используемые в способе 1.

Способ 3

Целевое соединение (Ic) или его соль можно получить из соединения (IIc) с использованием последовательности реакций, состоящей из введения защищенной аминокислоты и снятия защиты, каждого дважды, и циклизации, как проиллюстрировано выше. Каждую реакцию также можно осуществить по аналогичной методике указанного выше способа 1, и, следовательно, в качестве используемых реагентов и условий (например, растворитель, температура реакции и т.д.) можно сослаться на используемые в способе 1.

Способ 4

Целевое соединение (Id) или его соль можно получить, подвергая соединение (Ic) каталитическому гидрированию.

Подходящие катализаторы, которые используются в каталитическом гидрировании, являются традиционными, такими как платиновые катализаторы (например, платиновая пластина, губчатая платина, черная платина, коллоидная платина, оксид платины, платиновая проволока, т.д.), палладиевые катализаторы (например, губчатый палладий, палладий черный, оксид палладия, палладий на угле, гидроксид палладия на угле, коллоидный палладий, палладий на сульфате бария, палладий на карбонате бария и т.д.) и тому подобное.

Гидрирование обычно осуществляют в традиционном растворителе, таком как вода, ацетон, спирт (например, метанол, этанол, изопропиловый спирт или тому подобное), тетрагидрофуран, диоксан, толуол, метиленхлорид, этилендихлорид, хлороформ, N,N-диметилформамид, N,N-диметилацетамид или любые другие органические растворители, которые не оказывают на реакцию неблагоприятное действие, или их смеси.

Температура реакции не ограничивается, и обычно реакцию осуществляют как при охлаждении, так и при нагревании.

Способ А

Соединение (IX) или его соль можно получить из соединения (VII) или его соли следующими способами.

а) Перегруппировка

Данная реакция представляет собой перегруппировку соединения (VII).

Обычно реакцию осуществляют в присутствии кислоты (такой как трифторуксусная кислота, серная кислота, метансульфоновая кислота или тому подобное). Обычно реакцию осуществляют в традиционных растворителях, таких как вода, ацетон, спирт (например, метанол, этанол, изопропиловый спирт или тому подобное), тетрагидрофуран, диоксан, толуол, метиленхлорид, хлороформ, N,N-диметилформамид, или других органических растворителях, которые не оказывают на реакцию неблагоприятное действие, или их смеси.

Температура реакции не ограничивается, и обычно реакцию осуществляют как при охлаждении, так и при нагревании.

Реакция настоящего изобретения, вследствие и по причине субстрата, может быть осуществлена в мягких условиях, таких как слабая кислота (п-толуолсульфоновая кислота) и умеренная температура (от температуры окружающей среды до теплого состояния), для того, чтобы сделать возможным проведение перегруппировки соединения селективно.

b) Аминозащита

Данная реакция представляет собой защиту аминофрагмента, который не участвует в перегруппировке. Реакцию обычно осуществляют в традиционных растворителях, таких как вода, спирт (например, метанол, этанол, изопропиловый спирт или тому подобное), тетрагидрофуран, диоксан, толуол, метиленхлорид, хлороформ, N,N-диметилформамид, или других органических растворителях, которые не оказывают на реакцию неблагоприятное действие, или их смеси.

Температура реакции не ограничивается, и обычно реакцию осуществляют как при охлаждении, так и при нагревании.

Такая последовательность реакций (а) перегруппировка и b) аминозащита) может быть осуществлена способом, описанным в примере получения 156, приведенном ниже, или аналогичными способами.

с) Гидролиз

Соединение (IX) или его соль можно получить из соединения (VIII) или его соли гидролизом.

Гидролиз предпочтительно осуществляют в присутствии основания (включая неорганические основания и органические основания, такие как щелочной металл (например, натрий, калий и т.д.), щелочноземельный металл (например, магний, кальций и т.д.), гидроксид или карбонат, или бикарбонат щелочного металла или щелочноземельного металла, триалкиламин (например, триметиламин и т.д.), гидразин, пиколин, 1,5-диазабицикло[4,3,0]нон-5-ен, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундек-7-ен или тому подобное) или кислоты (включая органическую кислоту (например, муравьиную кислоту, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, трифторуксусную кислоту и т.д.), неорганическую кислоту (например, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, хлористоводородную кислоту и т.д.) и кислоты Льюиса (например, трибромид бора, хлорид алюминия, трихлорид титана и т.д.)).

Реакцию обычно осуществляют в традиционных растворителях, таких как вода, спирт (например, метанол, этанол, изопропиловый спирт или тому подобное), тетрагидрофуран, диоксан, толуол, метиленхлорид, хлороформ, N,N-диметилформамид, или других органических растворителях, которые не оказывают на реакцию неблагоприятное действие, или их смеси.

Жидкое основание или кислота также может использоваться в качестве растворителя.

Температура реакции не ограничивается, и обычно реакцию осуществляют как при охлаждении, так и при нагревании.

Данная реакция может быть осуществлена способом, описанным в примере получения 167, приведенном ниже, или аналогичными способами.

Способ В

Соединение (II) или его соль может быть получено из соединения (IX) или его соли следующими способами.

а) Реакция с соединением (Х)

Данная реакция представляет собой амидирование соединения (IX) соединением (X), то есть данная реакция может быть осуществлена по аналогичной методике указанного выше способа 1-а), и, следовательно, в качестве используемых реагентов и условий реакции (например, растворитель, температура реакции и т.д.) можно сослаться на используемые в способе 1-а).

Данная реакция может быть осуществлена способом, описанным в примере получения 90, приведенном ниже, или аналогичными способами.

b) Снятие защиты

Данная реакция может быть осуществлена по аналогичной методике указанного выше способа 1-b), и, следовательно, в качестве используемых реагентов и условий реакции (например, растворитель, температура реакции и т.д.) можно сослаться на используемые в способе 1-b).

Данная реакция может быть осуществлена способом, описанным в примере получения 152, приведенном ниже, или аналогичными способами.

c) Способ разложения Эдмана (n раз)

Реакцию обычно осуществляют в традиционных растворителях, таких как вода, ацетонитрил, ацетон, спирт (например, метанол, этанол, изопропиловый спирт или тому подобное), тетрагидрофуран, диоксан, толуол, метиленхлорид, хлороформ, этилацетат, N,N-диметилформамид, или других органических растворителях, которые не оказывают на реакцию неблагоприятное действие, или их смеси.

Температура реакции не ограничивается, и обычно реакцию осуществляют как при охлаждении, так и при нагревании.

Реакцию проводят неоднократно до тех пор, пока не будет получено целевое соединение.

Данная реакция может быть осуществлена способом, описанным в примере получения 138, серии 2 и 3, и т.д., приведенном ниже, или аналогичными способами (например, M.K. Eberle et al., J. Org. Chem. 59, 7249-7258 (1994), описавший данный тип способа разложения Эдмана).

Соединение (VII) или его соль (FR901459 соединение) можно получить ферментацией грибка (Stachybotrys chartarum № 19392: регистрационный номер FERM BP-3364), в соответствии со способом, описанным в выложенной заявке на патент Японии Hei 5-271267, например.

Более конкретно, целевое соединение может быть получено способами, описанными в примерах настоящего описания, или аналогичными способами.

Соединения, полученные указанными выше способами 1-4 и А и В, могут быть выделены и очищены традиционными методами, такими как пульверизация, перекристаллизация, колоночная хроматография, высокоэффективная жидкостная хроматография, переосаждение и колоночная хроматография на деминерализованной ионообменной смоле.

Приемлемые соли целевого соединения (I) являются общеизвестными фармацевтически приемлемыми и нетоксичными солями и могут быть солями присоединения основания или кислоты, например соль с неорганическим основанием (таким как соль щелочного металла, например натриевая соль, калиевая соль и т.д., соль щелочноземельного металла, например кальциевая соль, магниевая соль и т.д., соль аммония), соль с органическим основанием (например, органическая аминосоль, например соль триэтиламина, соль диизопропилэтиламина, соль пиридина, соль пиколина, соль этаноламина, соль триэтаноламина, соль дициклогексиламина, соль N'N'-дибензилэтилендиамина и т.д.), соль присоединения неорганической кислоты (такая как гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат и т.д.), соль присоединения органической карбоновой кислоты или сульфоновой кислоты (такая как формиат, ацетат, трифторацетат, малеат, тартрат, глюконат, фумарат, метансульфонат, бензолсульфонат, толуолсульфонат и т.д.), соль с основной или кислотной аминокислотой (такой как аргинин, аспаргиновая кислота, глутаминовая кислота и т.д.) и тому подобное.

В вышеуказанном и последующем описании настоящего изобретения подходящие примеры и иллюстрации разнообразных определений, которые включены в объем изобретения, объясняются подробно следующим образом.

Под термином «низший» подразумевается группа, имеющая 1-6, предпочтительно 1-4 атома углерода, если не указано иное.

Подходящие примеры «низшего алкила» и фрагмента «низшего алкила» могут включать прямой или разветвленный радикал, имеющий 1-6 атомов углерода, такой как метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, трет-пентил, неопентил, гексил, изогексил и тому подобное.

Подходящие примеры «низшего алкилокси» и фрагмента «низшего алкилокси» могут включать прямой или разветвленный радикал, имеющий 1-6 атомов углерода, такой как метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси, изобутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, пентилокси, трет-пентилокси, неопентилокси, гексилокси, изогексилокси и тому подобное.

Подходящие примеры «цикло(низшего)алкила» могут включать циклический алкил, имеющий 3-6 атомов углерода, такой как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и тому подобное.

Подходящие примеры «арила» и фрагмента «арила» могут включать фенил, который может быть замещен низшим алкилом (например, фенилом, мезитилом, толилом и т.д.), нафтил, антрил, тетрагидронафтил, инденил, тетрагидроинденил и тому подобное.

Подходящие примеры «необязательно замещенной аминогруппы» могут включать аминогруппу, необязательно замещенную одним или двумя подходящими заместителями, такими как низший алкил, амино защитная группа (например, бензилоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил (Вос) и тому подобное) и тому подобное.

Подходящие примеры «необязательно замещенной карбамоилоксигруппы» могут включать карбамоилоксигруппу, необязательно замещенную одним или двумя подходящими заместителями, такими как низший алкил, аминозащитная группа (например, бензилоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил (Вос) и тому подобное) и тому подобное.

Подходящие примеры «гетероциклической группы» могут включать:

ненасыщенную 3-8-членную (более предпочтительно 5- или 6-членную) гетеромоноциклическую группу, содержащую 1-4 атома азота, например пирролил, пирролинил, имидазолил, пиразолил, пиридил, дигидропиридил, пиримидинил, пиразинил, триазолил (например, 4Н-1,2,4-триазолил, 1Н-1,2,3-триазолил, 2Н-1,2,3-триазолил и т.д.), тетразолил (например, 1Н-тетразолил, 2Н-тетразолил и т.д.), азепинил и т.д.;

насыщенную 3-8-членную (более предпочтительно 5- или 6-членную) гетеромоноциклическую группу, содержащую 1-4 атома азота, например азиридинил, азетинил, пирролидинил, имидазолидинил, пиперидил, пиперазинил, 2,5-метанопиперазинил, гексагидроазепинил и т.д.;

ненасыщенную конденсированную гетероциклическую группу, содержащую 1-4 атома азота, например индолил, изоиндолил, индолинил, индолизинил, бензимидазолил, хинолил, изохинолил, индазолил, бензотриазолил, тетрагидрохинолил, тетрагидроизохинолил, тетрагидроиндолил, дигидроиндазолил и т.д.;

ненасыщенную 3-8-членную (более предпочтительно 5- или 6-членную) гетеромоноциклическую группу, содержащую 1 или 2 атома кислорода и 1-3 атома азота, например оксазолил, изоксазолил, оксадиазолил (например, 1,2,4-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил и т.д.) и т.д.;

насыщенную 3-8-членную (более предпочтительно 5- или 6-членную) гетеромоноциклическую группу, содержащую 1 или 2 атома кислорода и 1-3 атома азота, например морфолинил, сиднонил и т.д.;

ненасыщенную конденсированную гетероциклическую группу, содержащую 1 или 2 атома кислорода и 1-3 атома азота, например бензоксазолил, бензоксадиазолил и т.д.;

ненасыщенную 3-8-членную (более предпочтительно 5- или 6-членную) гетеромоноциклическую группу, содержащую 1 или 2 атома серы и 1-3 атома азота, например тиазолил, изотиазолил, тиадиазолил (например, 1,2,3-тиадиазолил, 1,2,4-тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил и т.д.), дигидротиазинил и т.д.;

насыщенную 3-8-членную (более предпочтительно 5- или 6-членную) гетеромоноциклическую группу, содержащую 1 или 2 атома серы и 1-3 атома азота, например тиазолидинил и т.д.;

ненасыщенную 3-8-членную (более предпочтительно 5- или 6-членную) гетеромоноциклическую группу, содержащую 1 или 2 атома серы, например тиенил, дигидродитиинил, дигидродитионил и т.д.;

ненасыщенную конденсирванную гетеромоноциклическую группу, содержащую 1 или 2 атома серы и 1-3 атома азота, например бензотиазолил, бензотиадиазолил, имидазотиадиазолил и т.д.;

ненасыщенную 3-8-членную (более предпочтительно 5- или 6-членную) гетеромоноциклическую группу, содержащую один атом кислорода, например фурил и т.д.;

насыщенную 3-8-членную (более предпочтительно 5- или 6-членную) гетеромоноциклическую группу, содержащую 1 или 2 атома кислорода, например оксиранил, 1,3-диоксоланил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил и т.д.;

ненасыщенную 3-8-членную (более предпочтительно 5- или 6-членную) гетеромоноциклическую группу, содержащую один атом кислорода и 1 или 2 атома серы, например дигидрооксатиинил и т.д.;

ненасыщенную конденсированную гетероциклическую группу, содержащую 1 или 2 атома серы, например бензотиенил, бензодитиинил и т.д.;

ненасыщенную конденсированную гетероциклическую группу, содержащую один атом кислорода и 1 или 2 атома серы, например бензоксадитиинил и т.д.;

насыщенную конденсированную гетеромоноциклическую группу, содержащую 1-3 атома азота, например тетрагидропиридопирролидинил и т.д.; и тому подобное.

В качестве подходящей «N-содержащей гетероциклической группы» можно сослаться на группы, указанные выше, где гетероциклическая группа содержит по меньшей мере один атом азота, такие как пирролидинил, пиперидил, морфолинил, тиазолил, оксазолил и тому подобное.

Подходящая «необязательно замещенная гетероциклическая группа» может включать гетероциклическую группу, как указано выше, которая необязательно замещена подходящим заместителем, таким как низший алкил, низший алкокси, арил, амино, низший алкоксикарбонил и тому подобное.

Термин «галоген» означает фтор, хлор, бром и йод.

V. Lohmann et al., Science 285, 110-113 (1999), сообщили, что они получили клеточные линии гепатомы человека (Huh-7), в которых были введены субгеномные HCV РНК молекулы, и обнаружили, что субгеномная HCV РНК реплицировалась в клеточных линиях с высокой скоростью. Предполагается, что механизм репликации субгеномной HCV РНК в таких клеточных линиях очень похож на репликацию полной длины HCV РНК генома в клетках печени, инфицированных HCV. Следовательно, способ оценки активности соединения (I) при ингибировании РНК репликации в соответствии с настоящим изобретением основан на способе клеточного анализа, который использует Huh-7 клетки, в которые введена субгеномная HCV РНК.

Для того чтобы показать полезность соединения (I) или его соли настоящего изобретения, пример фармакологического теста конкретных соединений в настоящем описании показан следующим образом.

Пример теста

1. Анализ репликона вируса гепатита C с помощью репортера

Ингибирующую активность тестируемых соединений против репликации HCV репликона оценивали с помощью количественного измерения активности люциферазы, продукта репортерного гена, закодированного в системе репликона, описанной Yokota et al., EMBO 4: 602-608 (2003). Ферментативный анализ проводили в соответствии с техническим руководством Steady-Glo(R) системы анализа люциферазы (Promega). Анализ репликона проводили модифицированным способом, предложенным Lohmann et al., Science 285: 110 (1999). Детали описаны более подробно следующим образом.

1) Добавление агента к клеткам

6×10³ клеток с HCV репликоном в D-MEM среде, содержащей 5% фетальную телячью сыворотку, высевали в каждую лунку 96-луночного микротитровального планшета (Corning Inc.). После того как клетки инкубировали при 37°C в течение 16 часов в 5% CO₂, добавляли тестируемое соединение.

2) Метод анализа люциферазы

После культивирования в течение еще двух дней культуральную среду удаляли и добавляли 25 мкл GIo Lysis буфера в каждую лунку и инкубировали в течение 5 минут. Делая возможным лизис, 25 мкл реагента Steady-Glo(R) анализа добавляли в каждую лунку. После инкубации в течение 5 минут люминесценцию измеряли люминометром, Mithouras LB940 (BERTHOLD TECHNOLOGIES GmbH & Co. KГ), следуя инструкциям изготовителя.

3) Результат теста

Значения активности люциферазы в клетках с репликоном, обработанных при каждой концентрации соединения, использовали для вычисления значения EC₅₀ для каждого соединения, которое давало концентрацию соединения, демонстрирующего 50% уровень ферментативной активности по сравнению с контрольным образцом (не лекарственная группа, содержащая только ДМСО).

Тестируемое соединение	Ингибирующая активность репликации HCV репликона: ЕС 50 (мкг/мл)
Целевое соединение из примера 9	<0,5
Целевое соединение из примера 12	<0,5
Целевое соединение из примера 14	<0,5
Целевое соединение из примера 15	<0,5
Целевое соединение из примера 16	<0,5
Целевое соединение из примера 25	<0,5
Целевое соединение из примера 31	<0,5
Целевое соединение из примера 32	<0,5
Целевое соединение из примера 52	<0,5

Из результатов приведенных выше примеров тестирования понятно, что соединение (I) или его соль настоящего изобретения обладает активностью против вируса гепатита С.

Анти-HCV агент в настоящем изобретении, содержащий соединение (I) или его соль в качестве активного ингредиента, может использоваться в виде фармацевтической композиции, например, в твердой, полутвердой или жидкой форме, в смеси с органическим или неорганическим носителем или эксципиентом, приемлемыми для перорального, сублингвального, буккального, назального, респираторного, парентерального (интрадермального, внутриорганного, подкожного, внутрикожного, внутримышечного, внутрисуставного, введения в центральную вену, в печеночную вену, в периферическую вену, в лимфатическую систему, сердечно-сосудистую систему, артериальную, введения в зрительный орган, включая инъекцию вокруг глаза введение или внутривенного прокапывания вокруг глаза) введения; внутривенного прокапывания в глазное яблоко, аугенную структуру или аугенный слой; в слуховой орган, включая слуховой канал, через папиллярную камеру, наружный и внутренний слуховые каналы, через барабанную перепонку, среднее ухо, внутренний слуховой аппарат, включая спиральный улиточный узел, лабиринт и т.д.; интестинального; ректального; вагинального; через мочеточники и везикального введения. Что касается внутриматочных и перинатальных заболеваний адаптации, то парентеральное введение является предпочтительным, поскольку введение выполняется в сосуды материнской крови или в полые органы, такие как материнские органы, включая матку, шейку матки и влагалище; внутриутробный зародыш, плод, новорожденного и комбинированную ткань; и амниотический мешок, пупочный канатик, пупочную артерию и вену; плаценту и тому подобное. Использование таких способов введения изменяется в зависимости от состояния каждого пациента.