Антитело против глипикана 3

Антитело против глипикана 3

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Предпосылки создания изобретения

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к антителу против глипикана 3, к ингибитору клеточного роста и к противораковому средству, которые содержат антитело в качестве активного ингредиента.

Описание родственной области

Глипикан 3 (GPC3) является членом глипиканового семейства гепарансульфатпротеогликанов, которые присутствуют на клеточной поверхности. Это позволяет предположить, что GPC3 участвует в клеточном делении при развитии или росте раковых клеток, однако его функция еще не вполне ясна.

Было обнаружено, что определенный тип антител, связывающихся с GPC3, ингибирует клеточный рост посредством антителозависимой клеточноопосредованной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC) (международная патентная заявка WO 2003/000883). Кроме того, полагают, что GPC3 расщепляется in vivo и поступает в кровь в виде секретируемой формы GPC3, следовательно, рак можно диагностировать с помощью антител, способных связываться с секретируемой формой GPC3 (международные патентные заявки WO 2004/022739, WO 03/100429 и WO 2004/018667).

Для разработки противоракового средства на основе цитотоксичной активности антитела предпочтительно, чтобы используемое антитело обладало высокой ADCC-активностью или CDC-активностью. Соответственно, требуется антитело против GPC3, обладающее высокой цитотоксичностью, как антитело, распознающее GPC3.

Целью настоящего изобретения является предоставление антитела против GPC3, которое обладает более высокой ADCC-активностью и CDC-активностью, чем традиционное антитело.

Краткое описание изобретения

Авторам настоящего изобретения удалось получить антитело с более высокой цитотоксичностью, чем у традиционного антитела против глипикана 3. Кроме того, авторы анализировали эпитопы такого антитела, и им удалось определить участки GPC3, распознаваемые антителом с высокой цитотоксической активностью.

В одном аспекте настоящее изобретение предлагает антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий участки CDR 1, 2 и 3 по любому из пунктов (1)-(12):

(1) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 123, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 124, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 125;

(2) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 109, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 110, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 111;

(3) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 106, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 107, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 108;

(4) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 132, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 133, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 134;

(5) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 106, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 135, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 136;

(6) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 126, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 127, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 128;

(7) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 129, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 130, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 131;

(8) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 103, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 104, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 105;

(9) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 118, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 121, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 122;

(10) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 115, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 116, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 117;

(11) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 112, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 113, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 114; или

(12) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 118, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 119, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 120.

В другом аспекте данное изобретение предлагает антитело, включающее в себя вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3 по любому из пунктов (1)-(13):

(1) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 143, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158;

(2) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 143, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 145;

(3) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 140, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 141, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 142;

(4) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 167, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 168, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 169;

(5) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 170, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 171;

(6) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 159, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 160, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 161;

(7) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 162, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 147, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 163;

(8) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 164, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 165, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 166;

(9) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 137, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 138, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 139;

(10) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 155, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 156, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 157;

(11) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 149, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 150, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 151;

(12) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 146, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 147, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 148; или

(13) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 152, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 153, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 154.

Предпочтительно антитело данного изобретения выбрано из группы, состоящей из антител по любому из пунктов (1)-(13):

(1) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 143, 144 и 158, соответственно;

(2) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 109, 110 и 111, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 143, 144 и 145, соответственно;

(3) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 106, 107 и 108, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 140, 141 и 142, соответственно;

(4) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 132, 133 и 134, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 167, 168 и 169, соответственно;

(5) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 106, 135 и 136, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 170, 144 и 171, соответственно;

(6) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 126, 127 и 128, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 159, 160 и 161, соответственно;

(7) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 129, 130 и 131, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 162, 147 и 163, соответственно;

(8) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 129, 130 и 131, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 164, 165 и 166, соответственно;

(9) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 103, 104 и 105, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 137, 138 и 139, соответственно;

(10) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 118, 121 и 122, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 155, 156 и 157, соответственно;

(11) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 115, 116 и 117, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 149, 150 и 151, соответственно;

(12) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 112, 113 и 114, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 146, 147 и 148, соответственно; и

(13) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 118, 119 и 120, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 152, 153 и 154, соответственно.

В другом аспекте данное изобретение предлагает антитело, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи по любому из пунктов (1)-(7):

(1) вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 84;

(2) вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 85;

(3) вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 86;

(4) вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 87;

(5) вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 88;

(6) вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 89; или

(7) вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 90.

В другом аспекте данное изобретение предлагает антитело, содержащее вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 92.

Предпочтительно антитело данного изобретения выбрано из группы, состоящей из антител по любому из пунктов (1)-(7):

(1) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 84, и вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 92;

(2) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 85, и вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 92;

(3) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 86, и вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 92;

(4) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 87, и вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 92;

(5) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 88, и вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 92;

(6) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 89, и вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 92; и

(7) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 90, и вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 92.

В другом аспекте данное изобретение предлагает антитело, включающее в себя вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3 по любому из пунктов (1)-(15):

(1) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 174, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158;

(2) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 175, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158;

(3) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 176, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158;

(4) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 177, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158;

(5) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 178, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158;

(6) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 179, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158;

(7) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 180, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158;

(8) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 181, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158;

(9) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 182, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158;

(10) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 183, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158;

(11) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 184, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158;

(12) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 185, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158;

(13) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 186, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158;

(14) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 187, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158; или

(15) CDR1, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 188, CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 144, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 158.

В другом аспекте данное изобретение предлагает антитело, выбранное из группы, состоящей из антител пунктов (1)-(15):

(1) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 174, 144 и 158, соответственно;

(2) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 175, 144 и 158, соответственно;

(3) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 176, 144 и 158, соответственно;

(4) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 177, 144 и 158, соответственно;

(5) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 178, 144 и 158, соответственно;

(6) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 179, 144 и 158, соответственно;

(7) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 180, 144 и 158, соответственно;

(8) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 181, 144 и 158, соответственно;

(9) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 182, 144 и 158, соответственно;

(10) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 183, 144 и 158, соответственно;

(11) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 184, 144 и 158, соответственно;

(12) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 185, 144 и 158, соответственно;

(13) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 186, 144 и 158, соответственно;

(14) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 187, 144 и 158, соответственно; и

(15) антитело, включающее в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 188, 144 и 158, соответственно.

В следующем аспекте данное изобретение предлагает антитело, содержащее вариабельный участок легкой цепи, выбранный из вариабельных участков (1)-(15):

(1) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 191;

(2) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 192;

(3) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 193;

(4) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 194;

(5) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 195;

(6) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 196;

(7) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 197;

(8) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 198;

(9) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 199;

(10) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 200;

(11) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 201;

(12) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 202;

(13) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 203;

(14) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 204; и

(15) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 205.

В другом аспекте данное изобретение предлагает антитело, содержащее вариабельный участок легкой цепи, выбранный из группы, состоящей из вариабельных участков (1)-(15):

(1) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 191;

(2) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 192;

(3) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 193;

(4) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 194;

(5) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 195;

(6) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 196;

(7) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 197;

(8) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 198;

(9) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 199;

(10) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 200;

(11) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 201;

(12) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 202;

(13) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 203;

(14) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 204; и

(15) вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 205;

и вариабельный участок тяжелой цепи, выбранный из группы, состоящей из вариабельных участков (1)-(7):

(1) вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 84;

(2) вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 85;

(3) вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 86;

(4) вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 87;

(5) вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 88;

(6) вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 89; и

(7) вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, описанную в SEQ ID NO: 90.

Вариабельный участок тяжелой цепи (H), вариабельный участок легкой цепи (L) и аминокислотная последовательность CDR 1, 2 и 3, а также номера SEQ ID NO приведены в таблице 1.

Таблица 1
Антитело и вариабельные участки	SEQ ID NO
M3C11	H	22
M13B3	H	23
M1E7	H	24
M3B8	H	25
M11F1	H	26
M19B11	H	27
M6B1	H	28
M18D4	H	29
M5B9	H	30
M10D2	H	31
L9G11	H	32
M3C11	L	44
M13B3	L	45
M1E7	L	46
M3B8	L	47
M11F1	L	48
M19B11	L	49
M6B1	L	50
M18D4	L	51
M5B9	L	52
M10D2	L	53
L9G11	L	54
GC199	H	60
GC202	H	61
GC33	H	62
GC179	H	63
GC194	H	64
GC199	L	71
GC202	L	72
GC33	L	73
GC179	L	74
GC194(1)	L	75
GC194(2)	L	76
GC33.ver.a	H	84
GC33.ver.c	H	85
GC33.ver.f	H	86
GC33.ver.h	H	87
GC33.ver.i	H	88
GC33.ver.j	H	89
GC33.ver.k	H	90
GC33.ver.a	L	92
M13B3(H)	CDR1	103
	CDR2	104
	CDR3	105
M3B8(H)	CDR1	106
	CDR2	107
	CDR3	108
M11F1(H)	CDR1	109
	CDR2	110
	CDR3	111
M5B9(H)	CDR1	112
	CDR2	113
	CDR3	114
M6B1(H)	CDR1	115
	CDR2	116
	CDR3	117
M10D2(H)	CDR1	118
	CDR2	119
	CDR3	120
L9G11(H)	CDR1	118
	CDR2	121
	CDR3	122
GC33(H)	CDR1	123
	CDR2	124
	CDR3	125
GC179(H)	CDR1	126
	CDR2	127
	CDR3	128
GC194(H)	CDR1	129
	CDR2	130
	CDR3	131
GC199(H)	CDR1	132
	CDR2	133
	CDR3	134
GC202(H)	CDR1	106
	CDR2	135
	CDR3	136
M13B3(L)	CDR1	137
	CDR2	138
	CDR3	139
M3B8(L)	CDR1	140
	CDR2	141
	CDR3	142
M11F1(L)	CDR1	143
	CDR2	144
	CDR3	145
M5B9(L)	CDR1	146
	CDR2	147
	CDR3	148
M6B1(L)	CDR1	149
	CDR2	150
	CDR3	151
M10D2(L)	CDR1	152
	CDR2	153
	CDR3	154
L9G11(L)	CDR1	155
	CDR2	156
	CDR3	157
GC33(L)	CDR1	143
	CDR2	144
	CDR3	158
GC179(L)	CDR1	159
	CDR2	160
	CDR3	161
GC194(L)1	CDR1	162
	CDR2	147
	CDR3	163
GC194(L)2	CDR1	164
	CDR2	165
	CDR3	166
GC199(L)	CDR1	167
	CDR2	168
	CDR3	169
GC202(L)	CDR1	170
	CDR2	144
	CDR3	171
GC33(L)	G34A	174
GC33(L)	G34D	175
GC33(L)	G34E	176
GC33(L)	G34F	177
GC33(L)	G34H	178
GC33(L)	G34N	179
GC33(L)	G34P	180
GC33(L)	G34Q	181
GC33(L)	G34I	182
GC33(L)	G34K	183
GC33(L)	G34L	184
GC33(L)	G34V	185
GC33(L)	G34W	186
GC33(L)	G34Y	187
GC33(L)	G34R	188

Кроме того, в данном изобретении описывается антитело, обладающее активностью, эквивалентной активности описанного выше антитела, и имеющее описанную выше аминокислотную последовательность, в которой один или несколько аминокислотных остатков замещены, удалены или добавлены и/или вставлены.

Предпочтительно антитело данного изобретения представляет собой гуманизированное антитело.

Так, в другом аспекте данное изобретение предлагает гуманизированное антитело, способное связываться с глипиканом 3.

В следующем аспекте данное изобретение предлагает антитело, способное связываться с пептидом, состоящим из последовательности аминокислотных остатков 524-563 глипикана 3.

Предпочтительно антитело данного изобретения способно связываться с пептидом, состоящим из последовательности аминокислотных остатков 537-563 глипикана 3. Более предпочтительно антитело данного изобретения не связывается с пептидом, состоящим из последовательности аминокислотных остатков 550-563 глипикана 3.

Предпочтительно антитело способно связываться с пептидом, состоящим из последовательности аминокислотных остатков 544-553 глипикана 3, или с пептидом, состоящим из последовательности аминокислотных остатков 546-551 глипикана 3.

В следующем аспекте данное изобретение предлагает антитело, способное связываться с эпитопом, с которым может связываться вторичное антитело, где упомянутое вторичное антитело включает в себя вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 123, 124 и 125, соответственно, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDR 1, 2 и 3, имеющие аминокислотные последовательности, описанные в SEQ ID NO: 143, 144 и 158, соответственно. А именно антитело данного изобретения может конкурировать с вторичным антителом за связывание с GPC3.

В предпочтительном воплощении антитело данного изобретения может связываться с глипиканом 3 и обладает высокой CDC-активностью по отношению к клеткам, экспрессирующим глипикан 3, и/или высокой ADCC-активностью по отношению к клеткам, экспрессирующим глипикан 3.

В другом аспекте данное изобретение предлагает полинуклеотид, кодирующий вариабельный участок тяжелой цепи или вариабельный участок легкой цепи антитела данного изобретения.

Предпочтительно полинуклеотид данного изобретения имеет последовательность, описанную в SEQ ID NO: 11-21, 33-43, 55-59, 65-70 и 77-83.

В следующем аспекте данное изобретение предлагает ингибитор клеточного роста и противораковое средство, содержащие в качестве активного ингредиента антитело данного изобретения. Предпочтительно противораковое средство данного изобретения используют для лечения гепатомы.

В следующем аспекте данное изобретение предлагает пептид, содержащий последовательность аминокислотных остатков 524-563 глипикана 3, последовательность аминокислотных остатков 537-563 глипикана 3, последовательность аминокислотных остатков 544-553 глипикана 3 или последовательность аминокислотных остатков 546-551 глипикана 3.

Краткое описание чертежей

На фиг.1 показана связывающая активность антитела против GPC3 в клетке CHO, клетке CHO, экспрессирующей полноразмерные GPC3, HepG2 и HuH-7, измеренная с помощью проточной цитометрии. M1E7 (сплошная линия) и M11F1 (пунктирная линия) используют в концентрации 5 мкг/мл, соответственно.

На фиг.2 приведена таблица, демонстрирующая результаты классификации по эпитопам, полученные с помощью конкурентного анализа ELISA. Степень конкурентного ингибирования связывания биотинилированного антитела против GPC3 приведена в процентах. Эпитопы подразделяют на пять групп, от a до e, в соответствии с характером конкурентного ингибирования.

На фиг.3 приведены результаты вестерн-блоттинга, которые показывают, с каким фрагментом растворимой формы корового белка GPC3 связывается антитело против GPC3: с N-концевым фрагментом размером 40 кДа или с C-концевым фрагментом размером 30 кДа. Было обнаружено, что L9G11 связывается с N-концевым фрагментом, а M3C11 связывается с С-концевым фрагментом.

На фиг.4 показаны результаты детекции секретируемой формы GPC3 в культуральном супернатанте HepG2 с помощью сэндвич-метода ELISA. Секретируемая форма хорошо детектируется при использовании сочетания антител, которые связываются с N-концевым фрагментом, таким как M6B1, M18D4 или M19B11, и плохо детектируется при использовании сочетания антител, которые связываются с С-концевым фрагментом, та