Антитела - антагонисты интерлейкина-17 (ил-17) для лечения рака

Антитела - антагонисты интерлейкина-17 (ил-17) для лечения рака

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящее изобретение относится к иммунотерапии, точнее предусматривает применение ИЛ-17-связывающих молекул для лечения пролиферативного заболевания, в частности солидных злокачественных пролиферативных опухолей или гематологических пролиферативных заболеваний.

Интерлейкин-17 (ИЛ-17) - цитокин, образуемый Т-клетками и присутствующий, например, при ревматоидном артрите (РА), действует в качестве провоспалительного цитокина, особенно в сочетании с ИЛ-1 и TNF-α, а блокада ИЛ-1 и ИЛ-17 обладает синергетическим действием в отношении воспаления и деструкции костей in vivo. Несоответствующая или избыточная выработка ИЛ-17 связана с патологией различных заболеваний и расстройств, например с ревматоидным артритом, остеоартритом, расшатыванием костных имплантатов, острым отторжением трансплантата, септицемией, септическим или эндотоксическим шоком, аллергиями, астмой, потерей костной массы, псориазом, ишемией, системным склерозом, ударом и другими воспалительными расстройствами. Антитела к ИЛ-17 предлагали использовать для лечения заболеваний и расстройств, опосредованно связанных с ИЛ-17, см., например, WO 95/18826 и обсуждение, изложенное во введении к этому патенту.

В настоящем изобретении было установлено, что ИЛ-17-связывающие молекулы применимы для подавления роста определенных солидных и гематологических злокачественных заболеваний. В соответствии с первым объектом настоящее изобретение предусматривает применение ИЛ-17-связывающей молекулы для лечения пролиферативного заболевания, например рака, в частности солидных злокачественных заболеваний и гематологических злокачественных пролиферативных заболеваний.

Предпочтительно ИЛ-17-связывающую молекулу применяют согласно описанию в патентной заявке РСТ/ЕР2005/008470, которая включена в настоящее описание в виде ссылки, причем в этой молекуле есть по меньшей мере один антигенсвязывающий сайт, включающий ИЛ-17-связывающую молекулу, которая включает антигенсвязывающий сайт, включающий по меньшей мере один вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V_H), включающий последовательно гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3, причем указанная область CDR1 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: I (N-Y-W-M-N), указанная область CDR2 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2 (A-I-N-Q-D-G-S-E-K-Y-Y-V-G-S-V-K-G) и указанная область CDR3 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 3 (D-Y-Y-D-I-L-T-D-Y-Y-I-H-Y-W-Y-F-D-L), или прямые эквиваленты CDR.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения ИЛ-17-связывающая молекула включает по меньшей мере один вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V_L), который последовательно включает гипервариабельные области CDR1′, CDR2′ и CDR3′, причем указанная область CDR1′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4 (R-A-S-Q-S-V-S-S-S-Y-L-A), указанная область CDR2′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 5 (G-A-S-S-R-A-T) и указанная область CDR3′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 6 (Q-Q-Y-G-S-S-P-C-T), или прямые эквиваленты CDR′.

В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения ИЛ-17-связывающая молекула включает антигенсвязывающий сайт, содержащий по меньшей мере один вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V_H), который последовательно включает гипервариабельные области CDR1-x, CDR2-x и CDR3-x, причем указанная область CDR1-x обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 11 (G-F-T-F-S-N-Y-W-M-N), указанная область CDR2-x обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 12 (A-I-N-Q-D-G-S-E-K-Y-Y) и указанная область CDR3-x обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 13 (C-V-R-D-Y-Y-D-I-L-T-D-Y-Y-I-H-Y-W-Y-F-D-L-W-G), или прямые эквиваленты CDR-х.

Кроме того, в предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения ИЛ-17-связывающая молекула включает вариабельные домены и тяжелой (V_H), и легкой цепи (V_L), причем указанная ИЛ-17-связывающая молекула включает по меньшей мере один антигенсвязывающий сайт, содержащий:

а) вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V_H), который включает последовательно гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3, причем указанная область CDR1 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1, указанная область CDR2 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2 и указанная область CDR3 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:3, или прямые эквиваленты CDR, и

б) вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V_L), который включает последовательно гипервариабельные области CDR1′, CDR2′ и CDR3′, причем указанная область CDR1′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:4, указанная область CDR2′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:5 и указанная область CDR3′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:6, или прямые эквиваленты CDR′.

Кроме того, ИЛ-17-связывающая молекула также может включать вариабельные домены и тяжелой (V_H), и легкой цепи (V_L), причем указанная ИЛ-17-связывающая молекула включает по меньшей мере один антигенсвязывающий сайт, содержащий:

а) вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V_H), который включает последовательно гипервариабельные области CDR1-x, CDR2-x и CDR3-x, причем указанная область CDR1-x обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:11, указанная область CDR2-x обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:12 и указанная область CDR3-x обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:13, или прямые эквиваленты CDR-x, и

б) вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V_L), который включает последовательно гипервариабельные области CDR1′, CDR2′ и CDR3′, причем указанная область CDR1′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:4, указанная область CDR2′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:5 и указанная область CDR3′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:6, или прямые эквиваленты CDR′.

Если не указано иначе, у каких-либо полипептидных цепей, описанных в настоящем изобретении, аминокислотная последовательность начинается с N-конца и заканчивается С-концом. Если антигенсвязывающий сайт включает домены и V_H, и V_L, они могут быть локализованы в одной и той же полипептидной молекуле или, предпочтительно, каждый домен может на другой цепи, домен V_H является частью тяжелой цепи иммуноглобулина или ее фрагмента, а V_L является частью легкой цепи иммуноглобулина или ее фрагмента.

Понятие «ИЛ-17-связывающая молекула» означает какую-либо молекулу, которая способна связываться с антигеном ИЛ-17 либо одна, либо в ассоциации с другими молекулами. Реакция связывания может быть установлена стандартными способами (качественными исследованиями), включая, например, изучение связывания, конкурентное исследование или биоисследование для определения подавления связывания ИЛ-17 с его рецептором, или исследования какого-либо типа связывания, которые сопоставляются с отрицательным контрольным тестом, в котором применяют антитело неродственной специфичности, но того же изотипа, например антитело к CD25.

К примерам антигенсвязывающих молекул относятся антитела, продуцируемые В-клетками или гибридомами, и химерные, CDR-пересаженные антитела или антитела человека или какие-либо их фрагментами, например фрагменты F(ab′)₂ и Fab, а также одноцепочечные антитела или антитела с одним доменом.

Одноцепочечное антитело состоит из вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей антитела, ковалентно связанных пептидным линкером, обычно содержащим 10-30 аминокислот, предпочтительно 15-25 аминокислот. Следовательно, такая структура не содержит константной части тяжелой и легкой цепей и, предположительно, низкомолекулярный пептидный спейсер может быть менее антигенным по сравнению с целой константной частью. Понятие «химерное антитело» означает антитело, в котором константные области тяжелой или легкой цепи или обеих цепей происходят от антитела человека, а вариабельные домены и тяжелой, и легкой цепи происходят не от антитела человека (например, от антитела грызуна) или от другого антитела человека. Понятие «CDR-пересаженное антитело» означает антитело, в котором гипервариабельные области (CDR) являются производными донорского антитела, например, не принадлежащего человеку (например, антитела грызуна), или другого антитела человека, хотя все или почти все другие части иммуноглобулина, например константные области и высоко консервативные части вариабельных доменов, т.е. каркасных участков, являются производными акцепторного антитела, например, антитела человека. CDR-пересаженное антитело может, тем не менее, содержать несколько аминокислот донорской последовательности в каркасных участках, например, в частях каркасных участках, соединенных с гипервариабельными областями. Понятие «антитело человека» означает антитело, в котором константная и вариабельная области и тяжелой, и легкой цепи происходят от антитела человека или в значительной степени идентичны последовательностям антител человека, необязательно от того же антитела, и включает антитела, вырабатываемые мышами, у которых гены переменной и константной частей иммуноглобулина грызунов замещены на соответствующие гены человека, например, подобно описанному в общих чертах в ЕР 0546073 B1, USP 5545806, USP 5569825, USP 5625126, USP 5633425, USP 5661016, USP 5770429, ЕР 0 438474 B1 и ЕР 0 463151 B1.

Особенно предпочтительными ИЛ-17-связывающими молекулами настоящего изобретения являются антитела человека, особенно антитело AIN457, описанные в примерах 1 и 2 в РСТ/ЕР2005/008470.

Таким образом, в предпочтительных химерных антителах вариабельные домены и тяжелой, и легкой цепей происходят от антител человека, например от антитела AIN457, которое показано в виде последовательности SEQ ID NO: 10 (=вариабельному домену легкой цепи, т.е. аминокислоты 1-109 последовательности SEQ ID NO: 10) и последовательности SEQ ID NO: 8 (=вариабельному домену тяжелой цепи, т.е. аминокислоты 1-127 последовательности SEQ ID NO: 8). Домены константной области также предпочтительно включают соответствующие домены константных областей антител человека, например, описанных в кн. Kabat E.A. и др.: «Sequences of Proteins of Immunological Interest», Министерство здравоохранения и социальных служб США, Служба здравоохранения, Национальный институт здоровья.

Гипервариабельные области могут быть связаны с каким-либо типом каркасных участков, предпочтительно антитела человека. Соответствующие константные участки описаны Kabat E.A. и др. (см. выше). Предпочтительным каркасным участком является каркасный участок тяжелой цепи антитела человека, например антитела AIN457. Оно последовательно состоит, например, из каркасных участков FR1 (аминокислоты 1-30 последовательности SEQ ID NO: 8), FR2 (аминокислоты 36-49 последовательности SEQ ID NO: 8), FR3 (аминокислоты 67-98 последовательности SEQ ID NO: 8) и FR4 (аминокислоты 117-127 последовательности SEQ ID NO: 8). Учитывая определенные гипервариабельные области AIN457, установленные рентгеноструктурным анализом, другая предпочтительная тяжелая цепь последовательно состоит из каркасных участков FRI-x (аминокислоты 1-25 последовательности SEQ ID NO: 8), FR2-x (аминокислоты 36-49 последовательности SEQ ID NO: 8), FR3-x (аминокислоты 61-95 последовательности SEQ ID NO: 8) и FR4 (аминокислоты 119-127 последовательности SEQ ID NO: 8). Сходным образом каркасный участок легкой цепи последовательно состоит из каркасных участков FR1′ (аминокислоты 1-23 последовательности SEQ ID NO: 10), FR2′ (аминокислоты 36-50 последовательности SEQ ID NO: 10), FR3′ (аминокислоты 58-89 последовательности SEQ ID NO: 10) и FR4′ (аминокислоты 99-109 последовательности SEQ ID NO: 10).

ИЛ-17-связывающая молекула по настоящему изобретению включает по меньшей мере один антигенсвязывающий сайт, включающий либо первый домен, имеющий аминокислотную последовательность, в существенной степени идентичную последовательности SEQ ID NO: 8, начиная с аминокислоты в положении 1 и заканчивая аминокислотой в положении 127, или первый домен, описанный выше, и второй домен с аминокислотной последовательностью, в значительной степени идентичной последовательности SEQ ID NO: 10, начиная с аминокислоты в положении 1 и заканчивая аминокислотой в положении 109.

Моноклональные антитела, возникающие против белков, естественным образом присутствующих у всех людей, обычно вырабатываются в организмах животных, но не людей, например в мышах, и, соответственно, обычно они не являются белками человека. В качестве прямого последствия, ксеногенное антитело, вырабатываемое гибридомой, при введении людям вызывает нежелательный иммунный ответ, который преимущественно опосредуется константной частью ксеногенного иммуноглобулина. Это очевидно ограничивает применение таких антител, поскольку их нельзя вводить длительное время. Таким образом, особенно предпочтительно применять одноцепочечные с одним доменом химерные CDR-пересаженные антитела или особенно антитела человека, которые предположительно не вызовут значительного чужеродного ответа при введении людям.

Учитывая вышеуказанное, более предпочтительной ИЛ-17-связывающей молекулой настоящего изобретения является молекула, выбранная из анти-ИЛ-17 антител человека, включающих, по меньшей мере:

а) тяжелую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, которая включает (i) вариабельный домен, содержащий последовательно гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3 или их прямые эквиваленты, и (ii) константную часть или ее фрагмент тяжелой цепи человека, причем указанная область CDR1 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1, указанная область CDR2 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2 и указанная область CDR3 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:3, и б) легкую цепь иммуноглобулина или ее фрагмент, которая включает (i) вариабельный домен, содержащий последовательно гипервариабельные области, а также необязательно гипервариабельные области CDR1′, CDR2′ и CDR3′ или прямые эквиваленты CDR′ и (ii) константную часть или ее фрагмент легкой цепи иммуноглобулина человека, причем указанная область CDR1′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:4, указанная область CDR2′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:5 и указанная область CDR3′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:6.

В другом варианте ИЛ-17-связывающая молекула по настоящему изобретению может быть выбрана из одноцепочечной связывающей молекулы, которая включает антигенсвязывающий сайт, содержащий:

а) первый домен, последовательно содержащий гипервариабельные области CDR1, CDR2 и CDR3 или прямые эквиваленты CDR, причем указанная область CDR1 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1, указанная область CDR2 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2, и указанная область CDR3 обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 3, и

б) второй домен, включающий гипервариабельные области CDR1′, CDR2′ и CDR3′ или прямые эквиваленты CDR', причем указанная область CDR1′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4, указанная область CDR2′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 5 и указанная область CDR3′ обладает аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 6, и

в) пептидный линкер, связанный либо с N-концом первого домена и с С-концом второго домена, или с С-концом первого домена и с N-концом второго домена.

Известно, что минимальные изменения аминокислотной последовательности, например делеция, добавка или замена одной, нескольких или даже большего числа аминокислот, может привести к аллельной форме исходного белка, которая обладает практически идентичными свойствами.

Таким образом, понятие «эквиваленты, отличающиеся непосредственно по CDR» означает ИЛ-17-связывающие молекулы, включающие последовательно гипервариабельные области CDR1_i CDR2_i и CDR3_i (вместо CDR1, CDR2 и CDR3), в которых

(i) гипервариабельная область CDR1_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR1, показанной в последовательности SEQ ID NO: 1,и

(ii) гипервариабельная область CDR2_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR2, показанной в последовательности SEQ ID NO: 2, и

(iii) гипервариабельная область CDR3_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR3, показанной в последовательности SEQ ID NO: 3, и

(iv) определенная молекула, включающая последовательно гипервариабельные области CDR1_i, CDR2_i, и CDR3_i, способная ингибировать активность 1 нмоля (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительно 20 нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.

Сходным образом понятие «эквиваленты, отличающиеся непосредственно по CDR-x» означает ИЛ-17-связывающие молекулы, включающие последовательно гипервариабельные области CDR1_i-x, CDR2_i-x и CDR3_i-x (вместо CDR1-x, CDR2-x и CDR3-x), в которых

(i) гипервариабельная область CDR1_i-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR1-x, показанной в последовательности SEQ ID NO: 11, и

(ii) гипервариабельная область CDR2_i-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR2-x, показанной в последовательности SEQ ID NO: 12, и

(iii) гипервариабельная область CDR3_i-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR3-x, показанной в последовательности SEQ ID NO: 13, и

(iv) определенная молекула, включающая последовательно гипервариабельные области CDR1_i-x, CDR2_i-x, и CDR3_i-x, способная ингибировать активность 1 нмоля (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительно 20 нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.

Сходным образом понятие «эквиваленты, отличающиеся непосредственно по CDR′» означает домен, включающий последовательно гипервариабельные области CDR1′_i, CDR2′_i, и CDR3′_i, в котором

(i) гипервариабельная область CDR1′_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR1′, показанной в последовательности SEQ ID NO: 4, и

(ii) гипервариабельная область CDR2′_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR2′, показанной в последовательности SEQ ID NO: 5, и

(iii) гипервариабельная область CDR3′_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR3′, показанной в последовательности SEQ ID NO: 6, и

(iv) определенная молекула, включающая последовательно гипервариабельные области CDR1′_i, CDR2′_i, и CDR3′_i, способна ингибировать активность 1 нмоль (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительно 20 нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.

В другом варианте ИЛ-17-связывающая молекула по настоящему изобретению может быть ИЛ-17-связывающей молекулой, которая включает по меньшей мере один сайт связывания антигена, содержащий по меньшей мере один вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V_H), который включает в следующей последовательности:

а) гипервариабельные области CDR1 (SEQ ID NO: 1), CDR2 (SEQ ID NO: 2) и CDR3 (SEQ ID NO: 3), или

б) гипервариабельные области CDR1_i, CDR2_i, CDR3_i, причем указанная гипервариабельная область CDR1_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR1, что показано в последовательности SEQ ID NO: 1, указанная гипервариабельная область CDR2_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR2, что показано в SEQ ID NO: 2, указанная гипервариабельная область CDR3_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR3, что показано в последовательности SEQ ID NO: 3, и указанная ИЛ-17-связывающая молекула, содержащая в следующем порядке гипервариабельные области CDR1_x, CDR2_x, и CDR3_x, способна ингибировать активность 1 нмоля (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительно 20 нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.

Сходным образом ИЛ-17-связывающая молекула по настоящему изобретению может быть ИЛ-17-связывающей молекулой, которая включает по меньшей мере один сайт связывания антигена, включающий по меньшей мере один вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V_H), который включает последовательно:

а) гипервариабельные области CDR1-x (SEQ ID NO: 11), CDR2-x (SEQ ID NO: 12) и CDR3-x (SEQ ID NO: 13), или

б) гипервариабельные области CDR1_i-x, CDR2_i-x, CDR3_i-x, причем указанная гипервариабельная область CDR1_i-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR1-x, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 11, указанная гипервариабельная область CDR2_i-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR2-x, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 12, указанная гипервариабельная область CDR3_i-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR3-x, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 13, и указанная ИЛ-17-связывающая молекула, включающая в следующей последовательности гипервариабельные области CDR1_i-x, CDR2_i-x, и CDR3_i-x, способная ингибировать активность 1 нмоля (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительно 20 нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.

Сходным образом ИЛ-17-связывающая молекула по настоящему изобретению может быть ИЛ-17-связывающей молекулой, которая включает по меньшей мере один сайт связывания антигена, включающий по меньшей мере один вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V_L), который включает в следующей последовательности:

а) гипервариабельные области CDR′1 (SEQ ID NO: 4), CDR′2 (SEQ ID NO:

5) и CDR′3 (SEQ ID NO: 6), или

б) гипервариабельные области CDR1′_i, CDR2′_i, CDR3′_i, причем указанная гипервариабельная область CDR′1_i, отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′1, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 4, указанная гипервариабельная область CDR′2_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′2 показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 5, указанная гипервариабельная область CDR′3_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR'3, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 6, и указанная ИЛ-17-связывающая молекула, включающая последовательно гипервариабельные области CDR′1_i, CDR′2_i, и CDR′3_i, способна ингибировать активность 1 нмоля (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительно 20 нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.

В другом варианте ИЛ-17-связывающей молекулой по настоящему изобретению может быть ИЛ-17-связывающая молекула, включающая вариабельные домены и тяжелой (V_H), и легкой (V_L) цепей, содержащая по меньшей мере один антигенсвязывающий сайт, включающий:

а) вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V_H), который содержит последовательно гипервариабельные области CDR1 (SEQ ID NO: 1), CDR2 (SEQ ID NO: 2) и CDR3 (SEQ ID NO: 3),

и вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V_L), который последовательно содержит гипервариабельные области CDR1′ (SEQ ID NO: 4), CDR2′ (SEQ ID NO: 5) и CDR3′ (SEQ ID NO: 6), или

б) вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V_H), который содержит последовательно гипервариабельные области CDR1_i, CDR2_i, и CDR3_i, указанная гипервариабельная область CDR1i; отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR1, показанной в последовательности SEQ ID NO: 1, указанная гипервариабельная область CDR2_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR2, показанной в последовательности SEQ ID NO: 2, и указанная гипервариабельная область CDR3_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR3, показанной в последовательности SEQ ID NO: 3, и

вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V_L), которая последовательно включает гипервариабельные области CDR1′_i, CDR2′_i, CDR3′_i, указанная гипервариабельная область CDR′1i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′1, показанной в последовательности SEQ ID NO: 4, указанная гипервариабельная область CDR′2_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′2, показанной в последовательности SEQ ID NO: 5, и указанная гипервариабельная область CDR′3_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′3, показанной в последовательности SEQ ID NO: 6, и

указанная ИЛ-17-связывающая молекула, описанная в пункте б), включает последовательно гипервариабельные области CDR1_i, CDR2_i, CDR3_i, CDR′1_i, CDR′2_i, и CDR′3_i способна ингибировать активность 1 нмоля (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительно 20 нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.

В другом варианте ИЛ-17-связывающей молекулой по настоящему изобретению может быть ИЛ-17-связывающая молекула, включающая вариабельные домены и тяжелой цепи (V_H), и легкой цепи (V_L), причем указанная ИЛ-17-связывающая молекула включает по меньшей мере один сайт связывания антигена, включающий:

а) вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V_H), который последовательно включает гипервариабельные области CDR1-x (SEQ ID NO: 11), CDR2-x (SEQ ID NO: 12) и CDR3-x (SEQ ID NO: 13), и

вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V_L), который последовательно включает гипервариабельные области CDR1′ (SEQ ID NO: 4), CDR2′ (SEQ ID NO: 5) и CDR3′ (SEQ ID NO: 6), или

б) вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (V_H), который последовательно включает гипервариабельные области CDR1_i-x, CDR2_i-x и CDR3_i-x, указанная гипервариабельная область CDR1_i-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR1-x, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 11, указанная гипервариабельная область CDR2_i-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR2-x, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 12, и указанная гипервариабельная область CDR3_i-x отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR3-x, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 13, и

вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина (V_L), который включает последовательно гипервариабельные области CDR1′_i, CDR2′_i, CDR3′_i, указанная гипервариабельная область CDR′1_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′1, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 4, указанная гипервариабельная область CDR′2_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′2, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 5, и указанная гипервариабельная область CDR′3_i отличается тремя, предпочтительно двумя аминокислотами, более предпочтительно одной аминокислотой, от гипервариабельной области CDR′3, показанной в виде последовательности SEQ ID NO: 6, и

указанная ИЛ-17-связывающая молекула, описанная в пункте б), включает последовательно гипервариабельные области CDR1_i, CDR2_i, CDR3_i, CDR′1_i, CDR′2_i, и CDR′3_i и способна ингибировать активность 1 нмоля (=30 нг/мл) ИЛ-17 человека в концентрации 50 нМ, предпочтительного нМ, более предпочтительно 10 нМ, более предпочтительно 5 нМ указанной молекулы на 50%, причем указанная ингибиторная активность измеряется по выработке ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированной ИЛ-17 человека.

Ингибирование связывания ИЛ-17 с его рецептором может быть исследовано различными методами, включая, например, методы, описанные в РСТ/ЕР2005/008470. Понятие «в той же степени» означает, что контрольная и равноценные молекулы проявляют, на статистической основе, в высокой степени идентичную ИЛ-17-ингибирующую активность в одном из исследований, указанных в настоящем изобретении. Например, ИЛ-17-связывающие молекулы настоящего изобретения обычно обладают величинами IC₅₀ для ингибирования действия ИЛ-17 человека на выработку ИЛ-6, индуцируемую ИЛ-17 человека в фибробластах кожи человека, которые находятся в пределах +/-x5, т.е. ниже 10 нМ, более предпочтительно 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 или 2 нМ, предпочтительно практически равны величине IC₅₀ соответствующей контрольной молекулы, при исследовании согласно описанию, приведенному в примере 1 в РСТ/ЕР2005/008470.

В другом варианте используемым методом исследования может быть исследование конкурентного ингибирования связывания ИЛ-17 растворимыми рецепторами ИЛ-17 (например, конструкциями ИЛ-17 R/Fc примера 1) и ИЛ-17-связывающими молекулами настоящего изобретения.

Наиболее предпочтительно антитело ИЛ-17 человека включает по меньшей мере

а) одну тяжелую цепь, которая включает вариабельный домен, обладающий аминокислотной последовательностью, в существенной степени идентичной последовательности SEQ ID NO: 8, начиная с аминокислоты в положении 1 и заканчивая аминокислотой в положении 127, и константную часть тяжелой цепи человека, и

б) одну легкую цепь, которая включает вариабельный домен, обладающий аминокислотной последовательностью, в существенной степени идентичной последовательности SEQ ID NO: 10, начиная с аминокислоты в положении 1 и заканчивая аминокислотой в положении 109, и константную часть легкой цепи человека.

Константная часть тяжелой цепи человека может быть типа γ₁, γ₂, γ₃, γ₄, µ, α₁, α₂, δ или ε, предпочтительно типа γ, более предпочтительно типа γ₁, а константная часть легкой цепи человека может быть типа κ или λ (к которому относятся подтипы λ₁, λ₂ и λ₃), но предпочтительно относится к типу κ. Аминокислотные последовательности всех константных частей приведены в работе Kabat и др. (см. выше).

Конъюгаты связывающих молекул настоящего изобретения, например конъюгаты с ферментом, или токсином, или радиоизотопом, также относятся к области охвата настоящего изобретения.

Понятие «полипептид», если в настоящем изобретении не указано иначе, относится к какому-либо пептиду или белку, содержащему аминокислоты, связанные друг с другом пептидными связями, у которых обозначаемые аминокислотные последовательности начинаются с N-конца и заканчиваются на С-конце. Предпочтительно полипептидом настоящего изобретения является моноклональное антитело, более предпочтительно химерное (также называемое V-пересаженным) или гуманизированное (также называемое CDR-пересаженным) моноклональное антитело, наиболее предпочтительно полностью антитело человека, получаемое, например, методом, описанным в примере 1. Гуманизированное (CDR-пересаженное) или полностью принадлежащее человеку моноклональное антитело может включать (или не включать) дополнительные мутации, интродуцированные в последовательности каркасного участка (framework - FR) акцепторного антитела.

К функциональным производным полипептида, применяемого в настоящем изобретении, относится молекула, обладающая качественной биологической активностью вместе с полипептидом настоящего изобретения, т.е. обладающая способностью связываться с ИЛ-17 человека. К функциональному производному относятся фрагменты и пептидные аналоги полипептида настоящего изобретения. Фрагменты включают области с полипептидной последовательностью по настоящему изобретению, например определенной последовательности. Понятие «производное» применяют для определения вариантов аминокислотных последовательностей и ковалентных модификаций полипептида по настоящему изобретению, например, определенной последовательности. Функциональные производные полипептида по настоящему изобретению, например, определенной последовательности, например гипервариабельной области легкой и тяжелой цепи, предпочтительно содержат по меньшей мере примерно 65%, более предпочтительно по меньшей мере примерно 75%, более предпочтительно по меньшей мере примерно 85%, наиболее предпочтительно по меньшей мере примерно 95, 96, 97, 98, 99% полной последовательности, гомологичной с аминокислотной последовательностью полипептида по настоящему изобретению, например определенной последовательностью, в значительной степени сохраняют способность связывать ИЛ-17 человека, или, например, нейтрализовать выработку ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированную ИЛ-17 человека.

Понятие «ковалентная модификация» относится к модификациям полипептида по настоящему изобретению, например, специфической последовательности, или ее фрагмента, органическим дериватизирующим агентом белковой или небелковой природы, гибридам гетерологичных полипептидных последовательностей и посттрансляционным модификациям. Ковалентно модифицированные полипептиды, например, определенной последовательности, сохраняют способность связывать ИЛ-17 человека или, например, нейтрализовать выработку ИЛ-6 в фибробластах кожи человека, индуцированную ИЛ-17 человека, например, сшиванием. Ковалентные модификации обычно производят взаимодействием целевых аминокислотных остатков с органическим дериватизирующим агентом, способным взаимодействовать с выборочными боковыми или концевыми остатками, или путем механизмов пост-трансляционных модификаций, которые функционируют в отдельных рекомбинантных клетках-хозяевах. Определенные посттрансляционные модификации являются результатом воздействия рекомбинантных клеток-хозяев на экспрессируемый полипептид. Остатки глутаминила и аспарагинила наиболее часто посттрансляционно деамидируются в соответствующие глутамиловые и аспартиловые остатки. В другом варианте эти остатки дезаминируют в умеренно кислых условиях. К другим посттрансляционным модификациям относятся гидроксилирование пролина и лизина, фосфорилирование гидроксильных групп остатков серила, тирозина или треонила, метилирование α-аминогрупп боковых цепей лизина, аргини